三七及其提取物在制备治疗和/或预防ptca术后再狭窄药物的用途的制作方法

专利名称：：三七及其提取物在制备治疗和/或预防ptca术后再狭窄药物的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及三七、三七提取物、三七总皂苷以及三七总皂苷组合物的新用途，特别是在制备治疗和/或预防PTCA术后再狭窄药物方面的新用途。
背景技术：
：自1977年，Gruenzig等首次成功地进行了经皮腔内冠状动脉成形术(percutaneoustransluminalcoronaryangioplasty,PTCA)为冠心病的治疗开辟了新的领域。但术后6个月内再狭窄(RS)发生率却高达30%-50%，成为目前冠心病介入治疗的主要障碍。PTCA术后RS主要是内皮细胞机械性损伤所引发的一系列生理、病理反应。包括三个相对独立又互有联系的环节，即血栓形成、内膜增生及血管重塑。再狭窄发生机制研究认为，血管腔内成形术后早期有球囊损伤导致的内膜撕裂.血小板粘附、聚集，以及血管痉挛或弹性回縮.进一步则有血管平滑肌细胞(VSMC)、纤维细胞增殖及细胞外基质堆积.终致再狭窄形成。在这一过程中.内皮素(ET)、血管紧张索II(AngII)、血小板衍化生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、转移生长因子(TGF)等分泌增加，降钙素基因相关肽(CGRP)、一氧化氯(N0)、心钠素(ANP)等分泌减少，在再狭窄形成中起了重要作用。冠心病PTCA术后引起的RS问题迄今仍是心血管领域研究的重点热点之一。但由于RS形成有多因素参与，现代医学通过抗氧化剂、抗血小板糖蛋白体、抗增生药物、调节血脂药物，以及支架球囊的改进、放射性支架等方法防治再狭窄，但疗效仍然不尽人意。因此，寻求有效的防治药物是研究工作的当务之急。三七是五加科植物，具有活血、散瘀、消炎、镇痛的功效。除上述作用外，还具有降低人体凝血因子的特殊作用。三七总皂苷是从三七植物总提取的有效物质，三七药物植物的化学成分较多，主要由四环三萜达玛烷型原人参二醇组皂苷和四环三萜达玛烷型原人参三醇组皂苷组成。三七总皂苷对高脂血症、高粘血症、高血压、心肌缺血、心律失常、动脉粥样硬化等症状均有一定疗效，而且还具有防止血栓形成、改善微循环、抗心脑缺血、促进造血细胞、抗纤维化、对神经细胞损伤的保护作用。由上所述，使用三七总皂苷为原料做成的三七总皂苷注射制剂是一种独具多功能的注射剂，而且这些功效都具有独立性，集若干重要生物活性，能发挥若干种临床功能于一药。所有的这些功能里，有的功能是相对立的，矛盾的。由于三七总皂苷中成份十分复杂，目前尚未能真正明确具体什么成份起主要治疗作用，成份之间的作用机理也没有人作过全面的研究。本专利发明人对三七总皂苷在防治PTCA术后RS的基础实验研究方面进行了不少有益的探索，并取得了可喜的成绩。三七总皂苷PTCA术后RS已显示了广阔的开发应用前旦足。
发明内容三七提取物的有效成分主要为三七总皂苷，有活血祛瘀、通脉活络之功效，根据我公司对三七总皂苷的临床研究和药效学研究，发现三七总皂苷具有预防和治疗PTCA术后再狭窄症状的明显疗效。冠心病介入治疗后RS的病理过程与中医学的心脉痹阻、心脉不通有类似之处，其病因病机为血管内膜损伤、增厚，形成血栓，导致瘀血阻滞，血脉不通，临床表现为再发性心绞痛，并有胸闷、心悸、舌质暗等血瘀征象。活血化瘀为治疗该症状的基本方法。三七总皂苷具有活血祛瘀，在此基础上，本专利通过对三七总皂苷的有效成分进行有目的提取及含量控制以后，使其用于预防和治疗PTCA术后再狭窄症状效果更显著。本专利药具有扩张冠状动脉，增强冠脉流量，降低心肌耗氧量，改善心肌缺氧状况的作用。可显著降低血清中甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇的水平和纤原含量，而且使髂动脉脂质沉积、中膜萎縮或变性、管腔明显增大、内弹力膜溶解和断裂等病理改变都明显减轻、斑块面积明显减小，有利于血管中的流动及防止血栓的形成和血栓再发。临床研究发现，患者应用本发明专利制剂后，降低了PTCA术后再狭窄发作比例，与对照组治疗后比较差异均有显著性。本发明专利临床应用的安全性较高，在PTCA术后再狭窄的药物治疗中不失为一种好药，其拓宽了中药制剂治疗PTCA术后再狭窄的新方法，在不能开展介入治疗的基层医院尤为适用。因此，申请人提供一种制备治疗和/或预防PTCA术后再狭窄药物方面的新用途。本发明公开了一种制备治疗和/或预防PTCA术后再狭窄药物方面的新用途，其特征在于所述三七总皂苷组合物中含有活性成份，该活性成份由三七提取的三七总皂苷活性成份组成，三七皂苷&含量大于8.0%、人参皂苷Rgl含量大于25%、人参皂苷Rl^含量大于25%、人参皂苷Re含量大于4.0%，且三七皂苷&、人参皂苷Rl^、人参皂苷Rgl与人参皂苷Re的总重量大于活性成份总重量的75%。优选地，Rb!:Rg!为l.O:0.52.0。优选地，所述的有效成分组合物的含量是三七皂苷&含量大于8.0%、人参皂苷Rgi含量大于25X、人参皂苷Rbi含量大于25X、人参皂苷Re含量大于4.0X，且Rbi:Rgl为i.o:i.oi.8;更优选地，所述的有效成分组合物的含量是三七皂苷&含量大于8.0%、人参皂苷R&含量大于25X、人参皂苷Rl^含量大于25X、人参皂苷Re含量大于4.0X，且Rl^:Rgl为1.0:1.41.6;优选地，三七皂苷Rp人参皂苷Rbp人参皂苷R^与人参皂苷Re的总重量大于活性成份总重量的85%;更优选地，三七皂苷Rp人参皂苷Rbp人参皂苷Rgl与人参皂苷Re的总重量大于活性成份总重量的90%;优选地，所述的有效成分组合物的含量是其中三七皂苷Ri含量为8X15%、人参皂苷Rg工含量为35X52X、人参皂苷Re含量为4X10X、人参皂苷Rbi含量为25X40%。本发明三七总皂苷活性成份组合物的剂型可以制成各种剂型，如制成注射液、注射用粉针剂，注射用冻干粉针剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、胶囊剂、滴丸剂制剂，优选制成注射液、注射用冻干粉针剂。以下是本发明中药制剂的药材来源三七为五加科植物的干燥根。申请人:还提供了一种制备所述的三七总皂苷活性成份组合物的方法，它包括如下步骤(1)取三七粉碎成粗粉1000g，加体积比为5-30倍的45-95%的乙醇提取0.5IO小时，收集提取液，过滤；(2)取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.5g生药的溶液；(3)溶液通过D型大孔树脂柱吸附，用乙醇_水的混合液进行梯度洗脱，流速按每小时树脂体积的倍数计为4.5BV/h，洗脱液中乙醇浓度逐步由5%调整至95%，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至在6(TC下相对密度为1.101.20的清膏，低温干燥得三七总皂苷组合物。优选地，步骤(1)中加入7倍的乙醇；加入的乙醇浓度为65%;提取时间为7小时。将三七总皂苷活性成份组合物根据制药领域中的常规方法，制成各种制剂。上述过程获得的三七总皂苷活性成份组合物中各成份含量约为三七皂苷I^含量大于8.0%、人参皂苷Rgl含量大于25%、人参皂苷Rt^含量大于25%、人参皂苷Re含量大于4.0X，且Rbi:Rg工为l.O:0.52.0，且三七皂苷Rp人参皂苷Rbp人参皂苷Rgi与人参皂苷Re的总重量大于活性成份总重量的75%。基于上述三七总皂苷组合物，本发明的目的是提供该组合物的一种新用途，即在制备治疗和/或预防PTCA术后再狭窄药物的应用。它可以制成胶囊、注射剂、片剂、栓剂或口服液等可使用的制剂。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。以下实验结果说明了该组合物的新药效，表明了本发明的有益效果。根据上述三七总皂苷组合物制备的注射液对家兔PTCA术后再狭窄的治疗和/或预防作用实验。1.实验材料1.1.实验药物根据本发明实施例l制备的样品；洛伐他汀片(北京万生药业有限责任公司，国药准字H10970092，批号20070609)。1.2.试齐U血清总胆固醇(totalcholesterol,TC)测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号070471);甘油三酯(triglyceride,TG)测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号072011);低密度脂蛋白(LDL-C)测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号070122);高密度脂蛋白(HDL-C)测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号070121)。甲醛北京市旭东化工厂生产，批号20061201;乙醇北京化工厂生产，批号20070305;二甲苯北京化工厂生产，批号20061023;苏木精北京捷康科贸公司；伊红北京捷康科贸公司；切片石蜡58-6(TC:广东省茂名市顺和特种蜡生产厂；酸性复红，国药集团化学试剂有限公司，批号20060627;丽春红，国药集团化学试剂有限公司，批号F20061109;橘黄G，国药集团化学试剂有限公司，批号F20070126;亮绿，JBN公司，进口分装，批号999/13258;铁苏木素，北京化学试剂公司，批号20060616;三氯化铁，国药集团化学试剂有限公司，批号F20061208;碘化钾，北京化学试剂公司，批号20060606;碘，国药集团化学试剂有限公司，批号20071127。1.3.实验仪器半自动生化仪；显微镜；全自动血液流变仪。切片机(德国Leica)，包埋机(德国Leica)，展片机(德国Leica)，烤片机(德国Leica)，光学显微镜(日本Olympus)，图像分析仪(Image-proPlus6.0)。1.4.实验动物日本大耳白兔40只，雄性，体重约2.5kg。2.实验方法2.1.家兔PTCA术后再狭窄模型的建立动物分笼饲养，自由饮水，适应性喂养l周后，每天喂饲高胆固醇饲料(根据文献资料确定1%胆固醇，10%蛋黄粉，2%猪油，87%基础饲料混合制成)4周，经静脉推注3%戊巴比妥钠溶液(每公斤体重1.0ml)进行麻醉，仰卧固定四肢于手术台，常规手术消毒。沿右股动脉走向切开皮肤，钝性分离股动脉，结扎动脉远心端，于近端动脉下穿以手术线，线拉阻断血流，在两线间作一动脉横切口，逆行插入PTCA球囊导管，插入深度为10cm，同时经耳缘静脉注入肝素150IU/kg，向球囊内注入肝素生理盐水并维持6个大气压，缓慢回拉球囊至切口处，抽出球囊内液体，使压力为零。重复上述过程3次。退出球囊导管，结扎股动脉并缝合伤口，纱布覆盖。模型组局部切开并结扎股动脉，但不放入球囊导管抽拉损伤。手术后动物连续3d每天肌注青霉素40万U以预防感染。术后继续高脂饮食，给药组静脉给药6周。2.2.实验分组剂量设置(1)实施例1:人的临床用药量为300mg/60kg/d，im。家兔用药量为人临床用药量的3倍。故而实验设置3个剂量组高剂量组(临床等效剂量的2倍)30mg/kg/d;中剂量组(临床等效剂量)15mg/kg/d;低剂量组(临床等效剂量的1/2)7.5mg/kg。(2)洛伐他汀片人的临床用法用量为，口服，一次1片(20mg/片)，l次/日。选定人的临床用药量为20mg/60kg/d。家兔用药量为人临床用药量的3倍，故而洛伐他汀片家兔给药量为lmg/kg/d。2.3.实验分组及给药动物经高脂饲料喂养4周后，动物统一标号后耳缘静脉采血，离心取血清，测定血脂指标。随机分为假手术组、模型组、洛伐他汀组、实施例1高剂量组、实施例1中剂量组和实施例1低剂量组，给予相应药物干预如下分组动物数(只)剂量(mg/kg/d)给药途径给药时间(周)假手术组6等体积NSim8模型组等体积NSim8洛伐他汀组1im8实施例1高剂量组615im8实施例1中剂量组830im8实施例1低剂量组660im82.4.血脂各项指标的观察在高脂饲料喂养前以及实验结束时，头一天禁食12小时，采血测定取血清测定总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)，高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)。2.5.血液流变学指标的观察末次给药后lh，耳中央动脉取血，3.8%枸橼酸钠抗凝(1:9)，全自动血液流变仪测定高、中、低切变率下的全血黏度，以及红细胞压积、纤原含量、血浆粘度等血液流变学指标指标。2.6.组织病理学检测实验动物空气栓塞处死后解剖，立即摘取对照侧和干预侧髂动脉，固定于10%甲醛溶液中。组织病理学检查方法固定取髂动脉的一段并修块，梯度酒精脱水，石蜡包埋，切片厚度5um，行HE、Masson、铁苏木素染色。光镜检查髂动脉病理改变情况附显微照相彩色照片，并用图像分析仪测量斑块面积(因为本次实验所用图像分析系统与照相系统不匹配，所以所测结果是未定标下的相对值)。按动脉粥样硬化基本病变分为脂纹期(I期)、纤维斑块期(n期)、粥样斑块期(in期)(复合性病变本实验中未见到)，按照病变程度由轻到重分级为_、±、+、++、+++、++++，对加权数(加权数=分期X分级)进行积分统计；中膜病变按萎縮和变性作积分、弹力膜按溶解和断裂作积分、胶原纤维按增生程度分级(如上)作积分，求出各组积分平均数±标准差(x士s)，经t检验，p<0.05具有统计学意义。3.实验结果3.1.实施例1对PTCA再狭窄模型家兔血脂的影响给药前，各组家兔的血脂水平无明显差异(见表1)。表1造模前各组家兔的血脂情况(x±s)分组给药剂量(mg/kg)CHOTGLDL-CHDL-C模型组—0.95±0.221.13±0.340.56±0.300.84±0.18洛伐他汀组11.15±0.251.40±0.360.82±0.250.93±0.17实施例1高剂量组50.85±0.321.10±0.350.49±0.180.69±0.17实施例1中剂量组100.82±0.301.13±0.290.54±0.340.65±0.23实施例1低剂量组201.03±0.681.29±0.560.66±0.410.78±0.28与模型组比较:*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。手术前，各组家兔的血脂水平无明显差异(见表2)。表2手术前各组家兔的血脂情况(x±s)分组给药剂量(mg/kg)CHOTGLDL-CHDL-C模型组—19.40±8.091.85±1.397.77±3.804.07±0.90洛伐他汀组117.76±8.182.10±1.628.12±5.774.13±1.09实施例1高剂量组521.24±9.171.88±1.288.97±4.933.85±0.59实施例1中剂量组1019.22±9.032.89±2.419.27±6.393.68±1.32070]实施例1低剂量组2020.77±8.461.96±1.198.82±4.513.79±0.57与模型组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。给药4周后，各组CHO水平均有所升高；洛伐他汀组、实施例1高剂量组与模型组相比有显著差异，实施例1中剂量组、低剂量组与模型组相比无明显差异。各给药组TG水平均显著低于模型组。各给药组与模型组相比均有极显著差异。阿乐组、实施例1高剂量组与模型组相比有明显差异(见表3)。表3术后4周各组家兔的血脂情况(x士s)分组给药剂量(mg/kg)CHOTGLDL-CHDL-C模型组—34.88±0.708.09±5.7723.76±5.906.90±1.57洛伐他汀组129.04±4.68"1.80土1.34'"10.47土1.54"'5.22士0.75'实施例1高剂量组527.16±5.06.*'2.40±1.36".10.19士1.58'"4.75土0.39"实施例1中剂量组1032.70±2.241.32土0.64'"14.70±2.51*"5.95±0.93实施例1低剂量组2034.04±1.912.08±0.99***16.06±3.93"*5.87±1.89与模型组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。术后8周，各组CH0水平均有所升高；给药各组与模型组相比均有极显著差异。各给药组TG水平均显著低于模型组水平。各给药组LDL-C水平均显著低于模型组。实施例1低剂量组HDL-C水平明显高于模型组，其余各组与模型组相比无明显差异(见表4)。表4术后8周各组家兔的血脂情况(x士s)分组给药剂量(mg/kg)CHOTGLDL-CHDL-C模型组—36.41±4.486.41±1.4728.21±5.202.84±0.45洛伐他汀组114.49±2.88"*2.36±1.20*"11.47土2.55"'2.67±1.16实施例1高剂量组513.75士2.15"'1.55±0.44"*9.97土1.05'"2.98±0.82实施例1中剂量组1027.01±3.18*"3.60士1.17'"17.16士2.24'"3.34±0.53实施例1低剂量组2026.36士4.73"'2.95±1.21'"20.74土3.99"'3.74士1.04'与模型组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。3.2.实施例1对PTCA再狭窄模型家兔血液流变学的影响术后8周，各组的红细胞压积、血浆粘度、低切、中切和高切粘度均无明显差异。各给药组的纤原含量均显著低于模型组水平和假手术组水平(见表5)。表5实施例1对PTCA再狭窄模型家兔血液流变学的影响(x±s)分组给药剂^^n￡l「s红细胞压量^纤原含量积，、(mg/k("(g/L)g)o血浆粘度血浆粘度(mpa's)(mpa's)10s-150s"200s"假手术组—31.06±3.767.15±1.66'"1.63±0.284.50±0.603.32±0.422.79±0.37模型组—26.33±6.245.04土0.60'''1.52±0.173.68±0.662.92±0.332.52±0.30洛伐他汀组2.94士0.46'"'128.00±2.854。1.40±0.193.66±0.392.96±0.222.56±0.18实施例1高剂量3.17±0,27*"'525.92±4.67"1.38±0.193.36±0.622.74±0.402.39±0.32组实施例1中剂量3.62±0.22『1027.90±3.09"1.36±0.123.60±0.312.94±0.212.58±0.18组实施例1低剂量4.26±0.25『2029.33±1.981.46±0.123.86±0.403.13±0.272.76±0.25组与假手术组比较AP〈0.05，AAP<0.01，AAAP<0.001;与模型组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。3.3.实施例1对PTCA再狭窄模型家兔对照侧髂动脉病理改变的影响实验中各组动物对照侧髂动脉很少一部分内皮细胞完好、内弹力膜完整，大部分或有脂纹或/和纤维斑块，但管腔多数已经不规则；内弹力膜可见轻度不连续的溶解和断裂、小段连续溶解或断裂改变偶见；胶原纤维偶有轻度的增生。以上病变各组动物对照侧之间病变积分经t检验比较未见差异。3.4.实施例1对PTCA再狭窄模型家兔同组干预侧与对照侧病变及不同组干预侧之间病变比较3.4.1内膜基本病变和中膜病变干预侧基本病变和中膜病变积分与同组对照侧的病变比较，除假手术组外其它各组均有差异(积分结果见表6)。表6实施例1对同组髂动脉内膜基本病变和中膜病变积分结果的影响(x±s)组别例数(只)取材彻假手术组对照側干预個模型组对照侧干预彻洛伐他汀组对照侧干预侧实施例1高剂量组对照倜干预倜实施例1中剂量组对照侧干预彻实施例1低剂量组6对照侧干预僩积分结果2.53±2.093.86±3.44**2.14±2.2811.44士1.38※2.00±1.555.31±3.ir1.80±1.605.90±2.97x1.00±1.289.88±1.53*0.83±0.5212.00±2.59《组内干预侧与对照侧比较干预侧与同组对照侧比较，※P<0.05，※※P<0.01;各组干预侧与假手术组干预侧比较#P<0.05，##P<0.01;各组干预侧与模型组干预侧比较*P<0.05，**P<0.01。假手术组干预侧与对照侧病变基本相似，约有80%动物有轻度脂纹或轻到中度的纤维斑块。模型组对照侧有5/7只动物有轻到中度的纤维斑块、3/7只动物有轻微的脂纹样变；干预侧所有动物发生重度纤维斑块、3/7只动物伴有轻度的粥样斑块；干预侧多数动物外膜明显变性、增厚，管腔明显縮小或闭塞。本组干预侧基本病变和中膜病变与假手术组干预侧比较显著加重(p<0.01)。洛伐他汀组对照侧约有半数动物髂动脉有轻度的脂纹或纤维斑块；干预侧6/7只动物有轻到中度的纤维斑块。本组干预侧内膜基本病变和中膜病变与模型组干预侧比较显著减轻(P<0.01)。高剂量组对照侧所有动物髂动脉内膜有轻微的脂纹或纤维斑块；干预侧有轻到中度的纤维斑块。本组干预侧内膜基本病变和中膜病变与模型组干预侧比较显著减轻(P<0.01)。中剂量组对照侧多数动物髂动脉内膜有轻微的脂纹或纤维斑块；干预侧有轻到重度的纤维斑块。本组干预侧内膜基本病变和中膜病变与模型组干预侧比较显著减轻(P<0.01)，但与对照组干预侧比较显著加重(p<0.01)。低剂量组对照侧多数动物髂动脉内膜有轻微的脂纹或纤维斑块；干预侧有中到重度的纤维斑块。本组干预侧内膜基本病变和中膜病变与假手术组干预侧比较明显加重(P<0.01)，与模型组干预侧比较未见差异(p<0.05)。3.4.2内膜斑块面积斑块面积统计结果(见表7)显示模型组干预侧与假手术组干预侧比较显著增大(p<0.01);洛伐他汀组和高剂量组干预侧与模型组比较显著减小(p<0.01);高、中和低剂量组干预侧与假手术组干预侧比较明显增大。表7实施例1对髂动脉斑块面积病理改变的影响(x士s)组另IJ例数(只)斑块面积(xl06)假手术组60.12士0.18"模型组71.04±0.26#s洛伐他汀组70.29±0.42**实施例1高剂量组50.58±0.21#s"实施例1中剂量组80.83±0.48#B实施例l低剂量组60.97±0.75#组内干预侧与对照侧比较干预侧与同组对照侧比较，※P<0.05，※※P<0.01;各组干预侧与假手术组干预侧比较#P<0.05，##P<0.01;各组干预侧与模型组干预侧比较*P<0.05，**P<0.01。[owe]3.4.3内弹力膜病理改变内弹力膜的病理改变主要是溶解和断裂。本实验中内弹力膜病理变化模型组、洛伐他汀组、中剂量组和低剂量组干预侧内弹力膜病理改变与同组对照侧比较明显加重(见表8)。表8实施例1对髂动脉内弹力膜溶解、断裂病变积分结果的影响(x士s)组另IJ例数(只)取材侧积分结果假手术组对照侧0.89±1.756干预侧1.29土0.4广模型组对照侧1.34±1.997干预侧3.75±0W洛伐他汀组对照侧U9±0.397干预侧2.13±lf实施例1高剂量组对照侧0.60±0,825干预侧1.40士0.82""实施例1中剂量组对照侧0.19±0.538干预侧2.88±1.36論*实施例1低剂量组对照侧0.17±0.266千预侧2.92±1.20,*组内干预侧与对照侧比较干预侧与同组对照侧比较，※P<0.05，※※P<0.01;各组干预侧与假手术组干预侧比较#P<0.05，##P<0.01;各组干预侧与模型组干预侧比较*P<0.05，**P<0.01。假手术组干预侧髂动脉内弹力膜可见轻度不连续的溶解和断裂，小段连续溶解或断裂改变偶见。模型组干预侧可见明显成段的溶解和断裂，甚至整圈未见正常的内弹力膜，与假手术组干预侧比较明显加重(P<0.01)。洛伐他汀组、高剂量组干预侧与模型组干预侧比较内弹力膜溶解和断裂等病理改变明显减轻(P<0.01);中、小剂量组干预侧与模型组干预侧比较未见明显改善(P>0.05)。3.4.4胶原纤维病理改变胶原纤维的病理改变主要是增生，增生的胶原纤维主要在斑块表面纤维帽、斑块内和中膜内。本实验中胶原纤维的变化如下干预侧胶原纤维增生与同组对照侧比较假手术组无差异、洛伐他汀组和高剂量组有所加重(P<0.05)、而中及低剂量组均有明显加重(p<0.01)。本实验中髂动脉胶原纤维增生变化描述如下假手术组双侧和其它组对照侧可见轻微增生。模型组干预侧髂动脉胶原纤维明显增生、有的可见很厚的整圈的纤维帽，与假手术组干预侧比较具有显著性差异(P<0.01)。洛伐他汀组干预侧与模型组干预侧比较胶原纤维增生明显减轻(p<0.01);高剂量组干预侧与模型组干预侧比较增生程度有所减轻但未见差异、与假手术组干预侧病变程度比较也未见差异，中、低剂量组与假手术组干预侧比较胶原纤维增生明显加重(p<0.01)(见表9)。表9实施例1对髂动脉髂动脉胶原纤维增生积分结果(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>组内干预侧与对照侧比较干预侧与同组对照侧比较，※P<0.05，※※P<0.01;各组干预侧与假手术组干预侧比较#P<0.05，##P<0.01;各组干预侧与模型组干预侧比较*P<0.05，**P<0.01。4.结论4.1.假手术组和模型组大耳白兔血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C的水平明显升高。髂动脉内膜有少量脂质沉积，内弹力膜偶见不连续小段溶解和/或断裂；胶原纤维偶有轻度的增生。4.2.PTCA术后再狭窄模型动物的髂动脉内膜、中膜有明显病变和增厚，内弹力膜大部分溶解，管腔明显縮小或闭塞、管壁变硬。4.3.阳性药洛伐他汀血清中TG、TC、LDL-C的水平和纤原含量显著低于模型组；对改善髂动脉脂质沉积、中膜病变、内弹力膜溶解和断裂、胶原纤维增生等病变和减小斑块面积都有明显作用。4.4.在手术后给予实施例1肌肉注射2个月的高、中、低剂量组实施例1高剂量组血清中TG、TC、LDL-C的水平和纤原含量显著低于模型组；与模型组比较髂动脉脂质沉积、中膜萎縮或变性、管腔明显增大、内弹力膜溶解和断裂等病理改变都明显减轻、斑块面积明显减小；提示高剂量组对降低血脂、改善胶原纤维增生有一定作用。实施例1中剂量组和低剂量组血清中TG、TC、LDL-C的水平和纤原含量显著低于模型组；对于髂动脉病理改变有一定的改善作用，但作用效果较实施例1高剂量组差。具体实施例方式下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的百分数是重量百分数(乙醇为体积百分比)，BV/h表示以树脂体积为V计，B为倍数，溶液每小时的洗脱体积为树脂体积BXV。实施例1:取三七粉碎成粗粉1000g，加65%乙醇7000ml提取7小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5%调整至95%，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至相对密度为1.13(60°C)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每lml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。检验结果上述提取物中各成份含量三七皂苷&为12.47%、人参皂苷Rgl为45.12%、人参皂苷Re为6.04%、人参皂苷Rl^为29.94%，以上四成份总量为93.57%，且Rb丄:Rgl为1.0:1.51。实施例2:取三七粉碎成粗粉1000g，加50%乙醇10000ml提取6小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.4g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱(乙醇浓度在5.5小时内由5%调整至95%)，流速5.OBV/h，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至相对密度为1.15(60°C)的清膏，干燥，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每lml含固形物50mg55mg，超滤，灌装，制成实施例1注射液。检验结果上述提取物中各成份含量三七皂苷&为11.54%、人参皂苷Rgl为45.26X、人参皂苷Re为5.06X、人参皂苷R^为31.26%，以上四成份总量为93.12%，且Rb丄:Rgl为1.0:1.45。实施例3:取三七粉碎成粗粉1000g，加75%乙醇7500ml提取8小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.6g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱(乙醇浓度在6.5小时内由5%调整至95%)，流速4.OBV/h，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至相对密度为1.16(60°C)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加针用活性炭0.30%(重量比)，8(TC以下保温搅拌30分钟，滤过，加注射用水调节每1ml含固形物150mg，冷冻干燥，分装，制成实施例1粉针剂。检验结果上述提取物中各成份含量三七皂苷&为13.3%、人参皂苷Rgl为49.lX、人参皂苷Re为5.lX、人参皂苷Rbi为30.9%，以上四成份总量为98.4%，且Rb丄:Rgl为1.0:1.59。实施例4:取三七粉碎成粗粉1000g，加80%乙醇8000ml提取6小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5%调整至95%，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至相对密度为1.13(60°C)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每lml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。检验结果上述提取物中各成份含量三七皂苷I^为10.1%、人参皂苷Rgl为37.4X、人参皂苷Re为4.7X、人参皂苷Rl^为36.17%，以上四成份总量为88.37%，且Rb丄:Rgl为1.0:1.03。实施例5:取三七粉碎成粗粉1000g，加85%乙醇8000ml提取8小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5%调整至95%，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至相对密度为1.13(60°C)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每lml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。检验结果上述提取物中各成份含量三七皂苷&为10.4%、人参皂苷Rgl为39.6X、人参皂苷Re为5.2X、人参皂苷Rl^为36.0%，以上四成份总量为91.2%，且Rbi:Rgl为1.0:1.10。实施例6:取三七粉碎成粗粉1000g，加75%乙醇8000ml提取7小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5%调整至95%，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至相对密度为1.13(60°C)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每lml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。检验结果上述提取物中各成份含量三七皂苷I^为13.1%、人参皂苷Rgl为41.21%、人参皂苷Re为4.9%、人参皂苷Rl^为34.23%，以上四成份总量为93.44%，且Rbi:Rgl为1.0:1.20。实施例7:取三七粉碎成粗粉1000g，加65%乙醇6000ml提取8小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5%调整至95%，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至相对密度为1.12(60°C)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每lml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。检验结果上述提取物中各成份含量三七皂苷&为9.77%、人参皂苷Rgl为44.89%、人参皂苷Re为4.41%、人参皂苷Rl^为26.01%，以上四成份总量为88.08%，且Rb丄:Rgl为1.0:1.73。实施例8:取三七粉碎成粗粉1000g，加90%乙醇10000ml提取9小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5%调整至95%，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至相对密度为1.12(60°C)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每lml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。检验结果上述提取物中各成份含量三七皂苷&为12.3%、人参皂苷Rgl为23.12X、人参皂苷Re为5.81X、人参皂苷Rbi为34.96%，以上四成份总量为76.19%，且Rbi:Rgl为1.0:0.66。实施例9:取三七粉碎成粗粉1000g，加85X乙醇9000ml提取10小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5%调整至95%，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至相对密度为1.12(60°C)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每lml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例9粉针剂。检验结果上述提取物中各成份含量三七皂苷&为13.6%、人参皂苷Rgl为51.01X、人参皂苷Re为5.lX、人参皂苷Rbi为28.2%，以上四成份总量为97.91%，且Rb丄:Rgl为1.0:1.81。实施例10:取三七粉碎成粗粉1000g，加65%乙醇7500ml提取9小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每lml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5%调整至95%，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至相对密度为1.13(60°C)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每lml含固形物lOOmg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例10粉针剂。检验结果上述提取物中各成份含量三七皂苷Ri为10.12X、人参皂苷Rg,为51.67X、人参皂苷Re为4.4X、人参皂苷Rl^为27.1%，以上四成份总量为93.29%，且Ri^:Rgl为1.0:1.91。权利要求三七植物在制备治疗和/或预防PTCA术后再狭窄药物的应用。2.三七植物提取物在制备治疗和/或预防PTCA术后再狭窄药物的应用。3.三七总皂苷在制备治疗和/或预防PTCA术后再狭窄药物的应用。4.一种三七总皂苷组合物在制备治疗和/或预防PTCA术后再狭窄药物的应用，其特征在于所述三七总皂苷组合物中含有活性成份，该活性成份由三七提取的三七总皂苷活性成份组成，其中三七皂苷&含量大于8.0%、人参皂苷Rgl含量大于25%、人参皂苷Re含量大于4.0%、人参皂苷含量大于25%，且三七皂苷&、人参皂苷Rgl、人参皂苷Re与人参皂苷Rt^的总重量不低于活性成份总重量的75%，所述组合物通过下述方法制备(1)取三七粉碎成粗粉1000g，加体积比为5-30倍的45-95%的乙醇8000ml提取O.5IO小时，收集提取液，过滤；(2)取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液；(3)溶液通过D型大孔树脂柱吸附，用乙醇_水的混合液进行梯度洗脱，流速按每小时树脂体积的倍数计为4.5BV/h，洗脱液中乙醇浓度逐步由5%调整至95%，收集含乙醇浓度在30%以上至70%以下的洗脱液，弃去含乙醇浓度在30%至70%以外的洗脱液，65t:以下减压回收溶剂并浓縮至在6(TC下相对密度为1.101.20的清膏，低温干燥得三七总皂苷组合物。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于R^:R^为1.0:0.52.0。6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于R^:R^为1.0:1.01.8。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于R^:Rgl为1.0:1.41.6。8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于三七皂苷Rp人参皂苷Rgp人参皂苷Re与人参皂苷R^的总重量大于活性成份总重量的85%。9.根据权利要求4所述的应用，其特征在于三七皂苷Rp人参皂苷Rgp人参皂苷Re与人参皂苷R^的总重量大于活性成份总重量的90%。10.根据权利要求4所述的应用，其特征在于其中三七皂苷R1含量为8X15%、人参皂苷Rgl含量为35%52%、人参皂苷Re含量为4%10%、人参皂苷Rbl含量为25%40%11.根据权利要求8所述的应用，其特征在于步骤(1)中加入7倍的乙醇。12.根据权利要求8所述的应用，其特征在于步骤(1)中加入的乙醇浓度为65%。13.根据权利要求8所述的应用，其特征在于步骤(1)中提取时间为7小时。14.根据权利要求4-13所述的应用，其特征在于其中的组合物可被制成注射液、注射用粉针剂、注射用冻干粉针剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、胶囊剂或滴丸剂制剂。全文摘要本发明涉及三七、三七提取物、三七总皂苷以及三七总皂苷组合物的新用途，即在制备治疗和/或预防PTCA术后再狭窄药物方面的新用途。文档编号A61K36/258GK101697990SQ20091022395公开日2010年4月28日申请日期2009年11月20日优先权日2009年11月20日发明者许淑清,赵学伟,陈明申请人:许淑清