2. 技术
  3. 吡唑并[3,4-b]吡啶化合物及其作为PDE4抑制剂的用途的制作方法

吡唑并[3,4-b]吡啶化合物及其作为PDE4抑制剂的用途的制作方法

xiaoxiao2020-6-23  197

专利名称：：吡唑并[3,4-b]吡啶化合物及其作为PDE4抑制剂的用途的制作方法吡唑并[3，4-6吡咬化合物及其作为PDE4抑制剂的用途本发明涉及吡唑并[3,4-6]吡咬化合物或其盐、其制备过程、可用于这些过程的中间体，并涉及含所述化合物或其盐的药用组合物。本发明还涉及吡唑并[3,4-列吡咬化合物或其盐的治疗用途，例如作为IV型磷酸二酯酶(PDE4)抑制剂和/或治疗和/或预防炎性和/或变应性疾病例如慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、类风湿性关节炎、变应性鼻炎、银屑病或特应性皮炎。本发明特别涉及所述化合物或其盐在治疗和/或预防哺乳动物例如人的特应性皮炎中的局部外用(例如皮肤局部应用)的用途。发明背景US3,979,399、US3,840,546和US3,966,746(E.R.Squibb&Sons)公开吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酰胺的4-M衍生物，其中4-氨基顺3114可以是非环状氨基，其中R3和R4可各自是氢、低级烷基(例如丁基)、苯基等；或者1^3114可以是3-6元杂环基例如吡咯烷基、哌啶子基和旅嗪子基。化合物被公开是用作镇静剂、止痛剂和降压剂的中枢神经系统抑制剂。US3,925,388、US3,856,799、US3,833,594和US3,755,340(E.R.Squibb&Sons)公开吡唑并[3,4-b]吡啶-5-羧酸和酯的4-氨基衍生物。4-MNR3R4可以是非环状氨基，其中Rs和R4可以各自是氢、低级烷基(例如丁基)、苯基等；或者服3114可以是其中存在附加氮的5-6-元杂环基，例如吡咯烷基、哌啶子基、吡唑基、嘧咬基、哒溱基或哌。秦基。化合物被提及是用作镇静剂或镇定剂的中枢神经系统抑制剂，具有抗炎和止痛特性。化合物被提及增加腺苷-3'，5'-环状一磷酸盐的细胞内浓度，用于减轻哮喘症状。H.Hoehn等，JHeterocycl.Chem.,1972,9(2),235-253公开一系列具有4-羟基、4-氯代、4-烷氧基、4-肼基和4-氨基取代基的1/f-吡唑并[3,4-1)]吡啶-5-羧酸衍生物。其中公开了4-(正丁氨基)-l-乙基-lH-吡唑并[3,4-b]-吡啶-5-羧酸乙酯；该化合物是卡它唑酯。已知化合物曲卡唑酯，4-(正丁氨基)-l-乙基-6-甲基-lH-吡唑并[3,4-b]-吡啶-5-羧酸乙酯，是抗焦虑剂(例如见J.B.Patel等，Eur.J.Pharmacol,1982，78,323)。在T.M.Bare等，J.Med.Chem.,1989,32,2561-2"3中公开其它1-取代的4-(NH2或NH-烷基)-lH-吡唑并p,4國b]-吡啶-5-羧酸酯和酰胺作为潜在的抗焦虑剂。CA1003419、CH553799和T.Denzel,ArchivderPharmazie,1974,307(3),177-186公开在1-位未被取代的4,5-二取代的li7-吡唑并[3,4-b]吡咬。在2002年1月23日公布的日4U^开的专利申请JP-2002-2(B86-A(OnoYakuhinKogyoKK)中公开具有下式的吡唑并吡咬化合物其中Ri表示l)基团-OR6、2)基团-SR7、3)C2-8炔基、4)硝基、5)氰基、6)被羟基或CV8烷氧基取代的cl8烷基、7)苯基、8)基团-C(O)R8、9)基团-S02NR9R1。、10)基团-NRHS02R12、11)基团-NR"C(0)R"或12)基团-CENNR15。116和R表示i)氢原子、ii)C^烷基、iii)被Cw烷氧基取代的cl8烷基、iv)三卤代曱基、v)C^环烷基、vi)被苯基取代的&.8烷基或vii)含1-4个氮原子、1-3个氧原子和/或1-3个硫原子的3-15元一-、二-或三环杂环。112表示l)氢原子或2)Cm烷氧基。R3表示1)氬原子或2)cl8烷基。R4表示l)氬原子、2)CwJP-2002-20386-A(Ono)烷基、3)C^环烷基、4)被C3-7环烷基取代的CL8烷基、5)可被1-3个卤原子取代的苯基或6)含1-4个氮原子、1-3个氧原子和/或1-3个硫原子的3-15元一-、二-或三环杂环。Rs表示l)氢原子、2)C^烷基、3)(:3_7环烷基、4)被Cw环烷基取代的C^烷基或5)可被1-3个取代基取代的苯基。在基团RS中，优选氬原子。在基团W中，优选曱基、乙基、环丙基、环丁基或环戊基。JP-2002-20386-A化合物被声明具有PDE4抑制活性并可用于预防和/或治疗炎性疾病及许多其它疾病。来自OnoPharmaceuticalCo的作者将与JP-2002-20386-A公开的化合物类似或相同的具有5-C(0)NH2取代基的1,3-二曱基-4-(芳氨基)-吡唑并[3,4-b]吡咬公开为口服活性的PDE4抑制剂，见H.Ochiai等,Bioorg.Med.Chem.Lett,2004年1月5日出版，14(1)巻,29-32页(在2003年12月4日或之前可在杂志网络版上看到"articlesinpress")。关于这些以及类似化合物作为口服活性PDE4抑制剂的全文是H.Ochiai等，Bioorg.Med.Chem.,2004,12(15),4089-4100(在2004年6月20曰已在网上声明)，和H.Ochiai等，Chem.Pharm.Bull,2004，52(9)，1098-1104(在2004年6月15曰已在网上公开声明)。EP0076035Al(ICIAmericas)公开p比哇并[3,4-b]吡咬衍生物是中枢神经系统抑制剂，用作镇定剂或镇静剂以緩解焦虑和紧张状态。J.W.Daly等，Med.Chem.Res.,1994,4,293-306和D.Shi等，DrugDevelopmentResearch(药物开发_研究)，1997,42,41-56公开一系列4-CtJ0取代的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-羧酸衍生物，包括4-环戊M-l-曱基-lH-吡唑并[3，4-b]吡啶-fl-羧酸乙酯，以及它们对A广和A2A-腺苷受体的亲和力和拮抗活性，并且后一篇文章公开了它们对GABAA-受体途径不同结合位点的亲和力。S.Schenone等，Bioorg.Med.Chem.Lett,2001,11,2529-2531，和F.Bondavalli等，J.Med.Chem.，2002,45巻(22版,2002年10月24日，据说公开于网络09/24/2002)，4875-4887页公开一系列4-氨基-l-(2-氯-2-苯乙基)-lH-吡唑并[3，4-b]吡啶-S羧酸乙酯是A广腺苷受体配体。WO02/060900A2公开MCP-1拮抗剂用于治疗变应性、炎性或自身免疫性病症或疾病，即一系列具有-c(o)-nr、c(o)-nrsr^取代基的二环杂环化合物，包括以-C(0)-NR、C(0)-NRSRe为5-取代基并在l-、3-、4-和/或6-位上被任选取代的异嗨唑并[5，4-b]吡啶和1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(称为吡唑并[5,4-b]吡咬)。据说用-C(0)nh2取代基代替-C(0)-NR、C(0)-NRSRS取代基的二环杂环化合物在WO02/060900中公开，作为合成-C(0)-NR、C(0)-NRSRS取代的化合物的中间体。类似的MCP-1拮抗剂还见WO02/081463Al。WO00/15222(Bristol-MyersSquibb)特别公开吡唑并[3，4-b〗吡啶，该环系统特别在5-位具有C(0)-X!基且在4-位具有E,基。在其它基团中，X!可以是例如-OR9、-N(R9)(R1。:^-N(R5)(-A2-R2)，且E,可以是例如-NH-A广环烷基、-NH-A,-取代的环烷基或-NH-A广杂环；其中A是1至10个碳桥的亚烷基或取代的亚烷基且As可以是例如直键或1至10个碳桥的亚烷基或取代的亚烷基。化合物被公开用作cGMP磷酸二酯酶(特别是V型PDE)抑制剂，治疗多种cGMP-相关疾病例如勃起功能障碍。在WO00/15222中未公开与吡唑并[3,4-b]吡咬环系统4-位上的-NH-直接连接的带环烷基或杂环基的和/或具有PDE4抑制活性的化合物。G.Yu等，J.MedChem.,2001,44,1025-1027公开一些4-[(3-氯-4-曱氧苄基)氨基]-吡唑并吡啶-5-甲酰胺是选择性PDE5抑制剂。H.deMello,A.Echevarria,等，J.Med.Chem.,2004,47(22),5427-5432(相信在2004年9月21日或之前已在网上公开)公开4-苯胺基-lH-吡唑并[3,4-b]吡啶5-羧酸的3-曱基或3-苯基酯是潜在的抗-利什曼原虫药物。同时待审的专利申请PCT/EP2003/014867(在2003年12月19日以GlaxoGroupLimited的名义提交，在2004年7月8日公开为WO2004/056823Al)公开并要求带4->^31^基团(1^优选是氬)且在吡唑并[3,4-b]吡咬的5-位有Het基的吡唑并[3,4-b]吡咬化合物或其盐，其中Het通常是5-元任选取代的杂芳基。PCT/EP2003/014867(WO2004/056823Al)还公开这些化合物是PDE4抑制剂以及治疗和/或预防特别是COPD、哮喘或变应性鼻炎的用途。同时待审的专利申请PCT/EP03/11814(在2003年9月12日以GlaxoGroupLimited的名义提交，在2004年3月25日公开为WO2004/024728A2)公开带有4-NHRS基和5-C(0)-X基的根据该式(I)吡唑并[3,4-b]吡咬化合物或其盐(I)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中R1是CM烷基、Cw氟烷基、-CH2CH2OH或-CH2CH2C02Cw烷基；Fe是氢原子(H)、曱基或q氟烷基；w是任选取代的<33_8环烷基或任选取代的一-不饱和的-<:5-7环烯基或任选取代的亚式(aa)、(bb)或(cc)杂环基；(aa)(bb)(cc)其中i^和nS独立地是l或2;且其中Y是O、S、S02或NR、其中R"是氢原子(H)、C"烷基、q.2氟烷基、CH2C(0)NH2、C(O)NH;C(0)-C^2烷基、C(O)-C,氟烷基或-C(0)-CH20-C卜2烷基；或R3是二环基(dd)或(ee):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>且其中X是NR4R5或OR5a。在PCT/EP03/11814(WO2004/024728A2)中，R4是氬原子(H)、Cw烷基、Cw氟烷基或被一个取代基R11取代的C2.6烷基。在PCT/EP03/11814(WO2004/024728A2)中，R5可以是氬原子(H);Cw烷基；Cw氟烷基；被Cw烷基任选取代的(^3.8环烷基；在-(CH2)n、部分或在(33.8环烷基部分被CL2烷基任选取代的-(CH2)n、<33.8环烷基，其中114是1、2或3;被一个或两个独立的取代基R"取代的<32.6烷基；-(CE^nn-CXO)!^6;-(CH2)nl2-C(0)NR12R13;-CHR19-C(0)NR12R13;-(CH2)n12-C(0)OR16;-(CH2)n12-C(0)OH;-CHR19-C(0)OR16;-CHR19-C(0)OH;-(CH2)n12-S02-NR12R13;_(CH2)n12-S02R"或-(CH2)n"-CN;-(CH2)n13-Het;或任选取代的苯基。或者，在PCT/EP03/11814(WO2004/024728A2)中，RS可具有亚式(x)、(y)、(yl)或(z):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中在亚式(x)中，n=0、l或2;在亚式(y)和(yl)中，m=1或2;且在亚式(z)中，r=0、l或2;且其中在亚式(x)和(y)和(yl)中，A、B、D、E和F中没有或其中一个或两个独立地是氮或氮氧化物(^+-00，前提是A、B、D、E和F中只有一个是氮氧化物，且其余的A、B、D、E和F独立地是CH或CR6;且前提是当亚式(x)中的n是0时，A、B、D、E和F中的一个或两个独立地是氮或氮氧化物OST-O-)且只有一个A、B、D、E和F是氮氧化物；在PCT/EP03/11814(WO2004/024728A2)中，每个R6独立于存在的任何其它R6，是卣原子；C^烷基；CM氟烷基；C"烷氧基；Q.2氟烷氧基；；6环烷氧基；-C(0)R16a;-C(0)OR3°;-S(0)2-R16a;R16a-S(0)2-NR15a-;R7R8-S(0)2-;C卜2烷基-C(0)-R"aN-S(0)2-;C^烷基-S(O)國；Ph-S(O)-;R7R8N-CO-;-NR15-C(0)R16;R7R8N;OH;CM烷氧甲基；C"烷氧乙基；CL2烷基-S(0)2-CIV;R7R8N-S(0)2-CH2-;C"烷基邻)2-NR"a誦CH2-;-CH2-OH;-CH2CH2-OH;-CH2-NR7R8;-CH2-CH2-NR7R8;-CH2-C(0)OR30;-CH2-C(0)-NR7R8;-CH2-NR15a-C(O)腸Cw烷基；-(CH^r^-Het1,其中n"是0或l;絲(CN);Ar5b;或苯基、吡啶基或嘧啶基，其中苯基、他咬基或嘧咬基独立地被一个或两个氟、氯、Cw烷基、C,氟烷基、Cw烷氡基或C!氟烷氧基任选取代；或两个相邻的RS结合在一起可以是-0-(CMe2)-0-或-O(CH2)n14-0-，其中n"是l或2。[3,4-b]吡咬化合物或其盐被公开为IV型磷酸二酯酶(PDE4)抑制剂，并且可用于治疗和/或预防多种疾病/病症，特别是哺乳动物例如人的炎性和/或变应性疾病，例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)(例如慢性支气管炎和/或肺气肿)、特应性皮炎、荨麻疹、变应性鼻炎、变应性结膜炎、春季结膜炎、嗜酸细胞性肉芽肿、4艮屑病、类风湿性关节炎、脓毒性休克、溃疡性结肠炎、Crohn's病、心肌和脑的再灌注损伤、慢性肾小球肾炎、内毒素性休克、成人呼吸窘迫综合征、多发性石更化、认知缺损(例如神经障碍)、抑郁或疼痛。PCT/EP03/11814(WO2004/024728A2)指出式(I)化合物和/或其药用组合物可通过口服、胃肠外、吸入(至肺局部)给药，或鼻内给药。然而，未公开吡唑并[3,4-b]吡咬化合物通过外部局部给药的用途。而且，PCT/EP03/11814(WO2004/0^4728A2)未公开具有4-位NHRS基的任何具体吡唑并[3,4-b]吡吱化合物，其中Rs是亚式(aa)、(bb)或(cc)的任选取代的杂环基且其中Y是NR1、其中R"是C(0)NH2。在ExpertOpin.Ther.Patents,2005(1月版)，15(1),111-114中已回顾WO2004/024728并提及WO2004/056823。发明根据现有测定结果，我们已发现几种新的吡唑并[3,4-6]吡咬化合物,是IV型磷酸二酯酶(PDE4)B亚型(PDE4B)和D亚型(PDE4D)酶的有效抑制剂，在全血(WB)分析中其抑制PDE4，并且似乎抑制PDE4B酶比抑制PDE3或PDE5酶更强。在初步实验中，所述化合物似乎能够通过外部局部给药用于治疗和/或预防特应性皮炎所述化合物(作为游离碱)减轻猪模型的炎症，该炎症诱发炎性皮肤损害,相信这种损害通常类似于在特应性皮炎中出现的损害。因此本发明提供4-([l-(氨M0-4-哌啶基]氨基)-N-[(3，4-二甲基苯基)曱基]-l-乙基-lH-吡唑并[3,4-6]吡啶-5-曱酰胺或其盐，特别是其药学上可接受的盐。本发明化合物或其盐是式(I)化合物或其盐(I)特别是其药学上可接受的盐。式(I)化合物或其盐是式(IA)化合物或其盐(特别是其药学上可接受的盐)其中W是乙基；W是氢原子(H);ie是亚式(bb)的N-氨g-哌咬基，其在环碳上是未被取代的;R4是氬原子(H);且R5是(3,4-二曱基苯基)曱基。或者化合物4-([l-(氨M0-4-哌啶基]氨基卜N-[(3,4-二甲基苯基)曱基]-l-乙基-l/f-吡唑并[3,4-6]吡啶-5-曱酰胺可称为4-{[1-(氨羰基)-4-哌啶基]氨基}-5-{[(3,4-二甲基苯基)曱基]氨羰基}-1-乙基-1//-吡唑并[3,4-6]吡啶。在现有的优选实施方案中，式(I)化合物或其盐包括式(I)化合物(例如，基本上由式(I)化合物组成或是式(I)化合物)。也就是说，式(I)化合物包括(例如，基本上包括或是)"游离碱"形式。因此，在现有的优选实施方案中，本发明提供4-{[1-(氨羰基)-4-哌啶基]^J^-N-[(3，4-二曱基苯基)曱基H-乙基-l/Z-吡唑并[3,4-6]吡啶-5-曱酰胺。这是"游离碱"形式。因为式(I)化合物的盐在医学中的潜在用途，所以它们优选是药学上可接受的。药学上可接受的盐可适当地包括酸加成盐(例如，基本上由酸加成盐组成或是射口成盐)。相信可通过使式(I)化合物与合适的酸(例如无机酸或有机酸)结合形成药学上可接受的酸加成盐，例如与pKa为2或更小的药学上可接受的酸结合，例如与pKa为1.5或更小的药学上可接受的酸结合。例如，相信可通过使式(I)化合物与以下酸结合形成药学上可接受的酸加成盐氢溴酸、盐酸、辟u酸、硝酸、磷酸、对曱苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸或萘磺酸(例如2-萘磺酸)。例如，可在合适溶剂例如有机溶剂或混合的水/有机溶剂中形成药学上可接受的酸加成盐(相信是这样)，通常通过例如结晶和过滤(例如大规^莫)或蒸发(例如小规模)离析而得到盐。例如，相信式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐可包括(例如，可基本上包括或是)氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐或萘磺酸盐(例如2-萘磺酸盐)。盐可特别包括(例如可基本上包括或是)式(I)化合物的盐酸盐(例如一盐酸盐)。因此，在一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其盐酸盐(例如一盐酸盐)。也就是说，在该实施方案中，本发明提供4-{[1-(氨羰基)-4-哌啶基]氨基卜N-[(3,4-二曱基苯基)甲基]-l-乙基-l/f-吡唑并[3,4-/>]吡咬-5-曱酰胺盐酸盐(例如一盐酸盐)。其它非药学上可接受的盐可用于例如本发明化合物的离析中，并包括在本发明的范围内。本发明的范围包括所有可能的式(I)化合物的盐的化学计量形式和非化学计量形式。本发明的范围还包括所有形式的本发明化合物和/或其盐，例如溶剂合物、水合物和/或复合物。本发明包括的某些盐可存在也可不存在异构体。本发明的范围包括所有这样的异构体，包括外消旋体、对映体及其混合物。式(I)化合物或其盐包括的某些组可以以一种或多种互变异构形式存在。本发明的范围包括所有这样的互变异构形式，包括混合物。本发明化合物或盐可以以分离的形式和/或固体形式存在。根据本发明的一个任选实施方案，本发明化合物或盐以结晶形式(例如，至少90%克分子浓度的化合物或盐为结晶形式)存在。式(I)化合物的分子量约为[449至450]。这里分子量是指未溶剂化的"游离碱"化合物的分子量，不包括由任何加成盐、溶剂(例如水)分子等产生的任何分子量。合成方法途径相信以下方法可用于制备为如上文定义的式(IA)化合物的式(I)化合物。自始至终Ri是乙基，RS是H,且RS如上文定义。为形成为式(IA)化合物的式(I)化合物，可将式(II)羧酸转化为式(m)活性化合物，其中X1-可被胺取代的离去基团(如下定义)，接着使活性化合物与式NHR4R5的胺反应例如，活性化合物(式(m)化合物)可以是酰基氯。可用羧酸(n)例如通过与亚辟u酰氯反应，在有机溶剂例如氯仿中或无溶剂时形成酰基氯。或者，活性化合物(式(m)化合物)可以是活性酯，其中离去基团义是方法AX2=CH或N后者式(m)活性化合物可用羧酸(n)通过以下反应形成(a)通过羧酸与碳化二亚胺例如EDC(l-乙基-3-(3'-二甲氨丙基)碳化二亚胺)、或其盐例如盐酸盐反应，优选接着使生成的产物与1-鋒基苯并三唑(HOBT)反应；反应(a)通常在溶剂(例如无水的)例如二曱基甲酰胺(DMF)或乙腈存在下进行，和/或在碱例如有机叔胺碱(例如二异丙基乙胺(iPr2NEt=DIPEA)存在下，和/或通常在室温(例如约20至约25。C)和/或例如在无水条件下进行；或(b)通过与2-(111-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲镜四氟硼酸盐(TBTU)或0-(7-氮杂苯并三唑-l-基)-N，N，N',N'-四曱基脲镥六氟磷酸盐(HATU)，在碱例如有机叔胺碱例如二异丙基乙胺(iPr2NEt=DIPEA)存在下，并通常在溶剂例如二曱基曱酰胺(DMF)或乙腈中和/或例如在无水条件和/或通常在室温(例如约20至约2^C)下反应。可通过水解式(IV)的酯制备式(II)化合物，其中R〃是烷基例如C"烷基例如曱基或乙基。该程序可包括例如使式(IV)或者(a)与碱例如碱金属氢氧化物(例如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂)，在溶剂例如溶剂水溶液(例如包含水和水可溶混的有机溶剂的混合物的溶剂水溶液)例如乙醇水溶液或二氧六环水溶液中反应，或(b)与酸例如盐酸在溶剂例如溶剂水溶液(例如二氧六环水溶液)中反应(，V)(11》本发明一方面还提供式(n)化合物，男一方面提供如本文定义的式(iv)化合物。可通过使式(IVa)化合物或其盐(例如其盐酸盐)与脲形成剂反应制备式(IV)化合物，该脲形成剂能够将式(IVa)化合物的(4-哌咬基)氨基转化为[(l-氨羰基M-哌咬基]絲脲形成剂可以是异氰酸千酯(稍后接着通过脱苄基反应例如还原性脱节基反应)，或优选脲形成剂是异氰酸三(CM烷基)甲硅基酯例如异氰酸三(CV2烷基)甲硅基酯，优选异氰酸三曱基甲硅基酯。(IVa)化合物或其盐生成(IV)化合物的反应可在例如比(IVa)或盐的摩尔数多1摩尔当量以上的碱例如N,N-二异丙基乙胺CPr2NEt=DIPEA)存在下进行。反应任选在室温或通过加热至回流下进行。(IVa)化合物或其盐生成(IV)化合物的反应可在有机溶剂中进行，溶剂优选不是7jc-有机溶剂系统或混合物。有机溶剂可任选是四氬吹喃(THF)。然而，虽然THF在约4gM^莫(见中间体4,R^乙基，(IVa)的盐酸盐)时的作用似乎令人满意，但在反应M^莫增大至约33.5g(见前半(firsthalf)中间体4A,R7^乙基,(IVa)的盐酸盐)时，似乎产率会下降。(IVa)盐酸盐在THF中的溶解度似乎有限。因此，优选(IVa)化合物或盐生成(IV)化合物的反应在增溶有机溶剂中进行，其包含(例如基本上是或是)能够基本上比THF更大程度地将式(IVa)化合物或其盐(无论用哪一种)溶解的有机溶剂。例如，增溶有机溶剂可以是二氯甲烷(例如在室温或在回流温度)或(可能是)氯仿。用(IVa)化合物的盐酸盐并以约33.5§规才莫(117=乙基)时二氯曱烷的作用似乎令人满意(见例如后半(secondhalf)中间体4A)。(也见中间体4B)。在反应中，(IVa)化合物或其盐优选基本上完全是溶液，而不是至少部分在有机溶剂中的悬浮液。因此(IVa)化合物或其盐可用(IVb)化合物通过氮保护基的脱保护制备，其中Prot是氮保护基例如(叔丁氧基)羰基(Boc)。可通过合适的酸性条件，例如1,4-二氧六环中的氯化氢(例如4M)完成Boc的脱除(IVb)(iVa)化合物(IVb)(其中R7是乙基且Prot是Boc)可根据例如于本文中间体2或2A中描述的方法，通过式(V)化合物(下文说明，其中R7=乙基)与4-M-l-哌啶羧酸l,l-二甲基乙基酯(例如可购自AstaTech,Philadelphia,USA)反应制备。反应任选在碱例如三乙胺或N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)存在下，和/或在有机溶剂例如乙腈中进行。反应可能需要例如加热至约60-100。C(例如约80-90。C)例如约16-18小时(V)(IVb)R7-乙基(在这种情况下，lT是Et,且Prot是Boc)对于其中W是乙基的式(V)化合物的一种制备方法，见例如本文的中间体1,和/或见G.Yu等，J.MedChem.,2001,44,1025-1027的方案1和化合物12。因此，式(V)化合物可通过式(VI)化合物与例如乙氧亚甲基丙二酸二乙基酯(其中R-Et)在加热下反应，然后通过与磷酰氯在再次加热下反应制备(见例如下文的中间体1):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>.根据方法A的一种备选实施方案，式(IV)化合物(其中W是烷基例如Cw烷基例如甲基或乙基)任选根据例如描述于Yu等.，J.MedChem.,2001,44,1025-1027的方案1中的方法，通过式(V)化合物与式R3NH2的胺制备。该反应任选在碱例如三乙胺或N,N-二异丙基乙胺存在下，和/或在有机溶剂例如乙醇、二氧六环或乙腈中进行。该反应可能需要加热至例如约60-100°C,例如约80-90°C:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>在方法A的另一可选实施方案中，式(V)化合物中4-氯代取代基可被溴或碘原子替代，或被可被式R3NH2的胺置换的另一合适的离去基团替代。离去基团可以是例如烷氧基-01135例如-OC"烷基(特别是-OEt)或基团-0-S(0)2-R37,其中R37是CM烷基(例如Cw烷基或2烷基例如曱基)、氟烷基(例如CM氟烷基或Cw氟烷基例如CF3或0^9),或苯基，其中苯基任选独立地被一个或两个Cw烷基、卤素或C^烷氧基取代(例如苯基或4-甲基-苯基)。反应可在溶剂的存在或不存在下进行并且可能需要加热。方法B的胺或其盐(例如盐酸盐)制备。反应优选在碱例如有机叔胺碱(例如三乙胺或N,N-二异丙基乙胺(DIPEA))存在下，和/或在有机溶剂例如乙醇、四氢呋喃(THF)、二氧六环或乙腈中进行。反应可能需要加热至例如约60-100。C或约80-90'C，例如8-72或12-48或24-48小时(见例如本文实施例1A):关于制备式RSNH2胺的盐酸盐(4-M-l-哌啶曱酰胺盐酸盐)的实施例，见本文中间体9和10。式(VII)化合物可通过两个步骤的程序制备(例如见Bare等在J.Med.Chem.1989,32,2561-2573中)。该方法包括，首先使式(VIII)化合物与亚疏酰氯(或另一种适合由羧酸形成酰基氯的试剂)反应，在有机溶剂例如氯仿或THF中或作为纯溶液反应，优选在基本上无水的条件(例如在氮或氩气)下进行。该反应可能需要加热(例如至回流)。如此形成的酰基氯中间体可以分离或不分离。笫二步涉及使生成的酰基氯中间体与式R，SNH的胺，在有机溶剂例如THF或氯仿中反应，并可能还涉及使用碱例如三乙胺或二异丙基乙胺(DIPEA)。见例如本文中间体7和8:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>(VIII)间式(Vin)化合物可根据由Yu等在J.MedChem.，2001,44,1025國1027中描述的方法，通过水解式(V)的酯制备。该步骤优选涉及与碱例如氢氧化钠或氢氧化钾在溶剂例如含水溶剂例如乙醇水溶液或二氧六环水溶液中反应(V)间在方法B的替代性实施方案中，式(VII)化合物的4-氯代取代基可被溴或硤原子替代。方法c或者似乎式(I)=(IA)化合物可通过式(X)化合物或其盐(例如其盐酸盐)与脲形成剂反应制备，该脲形成剂能够将式(X)化合物的(4-哌啶基)M4争化为[(l-氨羰基M-哌^^]M:脲形成剂任选是异氰酸千酯(随后接着经脱千基反应例如还原性脱辛基反应)或三(CM烷基)甲硅烷基异氰酸酯例如三(Cw烷基)甲硅烷基异氰酸酯，优选异氰酸三曱基曱硅烷基酯。任选地，化合物(X)或其盐生成化合物(I)=(IA)的反应在有机叔胺碱例如三乙胺或N,N-二异丙基乙胺(iPr2NEt=DIPEA)存在下进行，例如所用碱的量比(X)或其盐的摩尔数多l摩尔当量。该反应任选在室温或溶剂回流温度进行。任选地，化合物(X)或其盐生成化合物(I)=(IA)的反应在有机溶剂(例如非水-有机溶剂系统或混合物的溶剂)中进行，例如二氯曱烷(例如在回流)或氯仿的有机溶剂。式(X)化合物或其盐任选用式(XI)化合物通过氮保护基的脱保护制备，其中Prot是氮保护基例如(叔丁氧基)氟基(Boc)。可通过合适的酸性条件例如1,4-二氧六环中的盐酸(例如4M)除去Boc:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>(xi)(x)式(XI)化合物(其中Prot是(叔丁氧基)^J^(Boc))任选通过式(Vn)化合物与1,1-二曱基乙基4-氨基-1-哌啶羧酸酯反应制备。该反应任选在DIPEA存在下，和/或在乙腈溶剂和/或在加热至约60-10(TC(例如约80-90。C)下，例如持续约16-18小时进行<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>(VII)(XI)或者，(XI)化合物任选用相应的5-酯((IVb)化合物，上文说明)，例如通过相应的5-羧酸制备。.因此本发明还提供制备式(I)(式(IA))化合物或其盐的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>其中R1、R2、R3、W和RS如本文定义，该方法包括(a)将式(n)化合物转化为式(ni)活性化合物，其中X^可被胺取代的离去基团(VIIA〉其中Hal是氯、溴或碘原子(例如溴原子或优选氯原子)，与式RSNH2的胺或其盐反应；或(c)式(X)化合物或其盐(例如其盐酸盐)(X)与脲形成剂反应，该脲形成剂能够将式(X)化合物中的(4-哌咬基)氨基转化为[(1-氨，0-4-哌啶基]氨基；并且，在(a)、(b)或(c)的情况下，任选将式(I)化合物转化为其盐例如其药学上可接受的盐。本发明还提供(g)制备式(I)化合物的药学上可接受的盐的方法，包括将式(I)化合物或其盐转化为需要的其药学上可接受的盐。(")^(HI)然后式(III)活性化合物与式R4R5NH的胺反应(b)式(VIIA)化合物HalQ本发明还提供通过本文定义的方法制备的式(I)化合物或其盐。在可用于上述合成方法的化合物中，"烷基，，基团或部分可以是直链或支链的。可用的烷基(例如CM烷基或C,.6烷基或CM烷基或C^烷基或C^烷基)包括(^.6烷基或C"烷基或Cw烷基或C^烷基，例如曱基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基或正己基，或其任何分支异构体例如异丙基、叔丁基、仲丁基、异丁基、3-甲基丁-2-基、2-乙基丁-l-基等。将相应的意义用于"烷氧基"、"亚烷基，，等源自烷基的术语。例如，"烷氧基，，例如C"烷氧基或Cw烷氧基或C^烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙M^和上文列出的烷基的氧基衍生物。"烷基磺酰基，，例如Cw烷基磺酰基包括甲基磺酰基(甲磺酰基)、乙磺酰基和其它源自上文列出的烷基的其它基团。"烷基磺酰氧基"例如CM烷基磺酰氧基包括曱磺酰氧基(曱基磺酰tt)、乙磺酰氧基等。"氟烷基，，包括带l、2、3、4、5或更多氟取代基的烷基，例如CM氟烷基或Cw氟烷基或Cw氟烷基例如一氟曱基、二氟曱基、三氟甲基、五氟乙基、2,2,2-三氟乙基(CF3CH2-)、2>二氟乙基(CHF2CH2-)、2-氟乙基(CH2FCH2-)等。"氟烷氧基"包括C^氟烷氧基或Cw氟烷氧基例如三氟曱氧基、五氟乙氧基、一氟曱氧基、二氟甲氧基等。"氟烷基磺酰基"例如CM氟烷基磺酰基包括三氟曱磺酰基、五氟乙磺酰基等。化合物中出现的卣原子("卣代")是指氟、氯、溴或碘原子("氟代"、"氯代"、"溴代"或"碘代")特别是氯代、溴代或碘代。当说明书指出原子或部分A"键合"或"连接"至原子或部分B时，是指原子/部分A通常通过共^H建或双共^H建的方式直接键合至原子/部分B，除了A通过一个或多个中间原子/部分间接键合至B外(例如除了A-C-B外)；除非上下文清楚提示另一种意思。医学用途本发明还提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐作为活性治疗物质用于哺乳动物例如人。该化合物或盐可用于治疗和/或预防本文描述的任何疾病/病症(例如用于治疗和/或预防哺乳动物例如人的炎性和/或变应性疾病；或例如用于治疗和/或预防哺乳动物例如人的认知缺损或抑郁)；和/或可用作磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂。"治疗"可包括治疗和/或预防。本化合物或盐可例如用于治疗和/或预防哺乳动物例如人的炎性和/或变应性皮肤疾病，例如特应性皮炎或4艮屑病。还提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防哺乳动物例如人的本文描述的任何疾病/病症的药物(例如药用组合物)中的用途，例如用于治疗和/或预防哺乳动物例如人的炎性和/或变应性疾病，或例如用于治疗和/或预防哺乳动物认知缺损或抑郁。还提供治疗和/或预防有需要的哺乳动物(例如人)的任何本文描述的疾病/病症的方法，例如治疗和/或预防有需要的哺乳动物(例如人)的炎性和/或变应性疾病、"i人知缺损或抑郁的方法，该方法包括将治疗有效量的本文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐给药于哺乳动物(例如人)。磷酸二酯酶4抑制剂被认为有助于治疗和/或预防哺乳动物例如人的多种疾病/病症，特别是炎性和/或变应性疾病，例如哞喘、慢性阻塞性肺病(COPD)(例如慢性支气管炎和/或肺气肿)、特应性皮炎、荨麻疹、变应性鼻炎、变应性结膜炎、春季结膜炎、嗜酸细胞性肉芽肿、4艮屑病、类风湿性关节炎、脓毒性休克、溃疡性结肠炎、Crohn's病、心肌和脑再灌注损伤、慢性肾小球肾炎、内毒素性休克、成人呼吸窘迫综合征、多发性硬化、认知缺损(例如神经障碍例如阿尔茨海默氏病)、抑郁或疼痛(例如炎性疼痛)。溃疡性结肠炎和/或Crohn's病通常^i来称为炎性肠病。在治疗和/或预防时，炎性和/或变应性疾病优选是哺乳动物(例如人)的慢性阻塞性肺病(COPD)、译喘、类风湿性关节炎、变应性鼻炎、4艮屑病或特应性皮炎。更优选地，治疗和/或预防哺乳动物(例如人)的COPD、4艮屑病或特应性皮炎。最优选地，治疗和/或预防哺乳动物例如人或猪的特应性皮炎，优选人，特别是21岁或以下例如18岁或以下的人。对于治疗和/或预防哺乳动物的特应性皮炎，优选将式(I)化合物或其药学上可接受的盐外部局部给药于哺乳动物(例如局部给药于皮肤例如给药于特应性皮炎受累的皮肤)。对于治疗和/或预防特应性皮炎，通常不适合吸入给药。已有人主张"特应性皮炎"包括两个一般亚类(1)"变应性(外源性)"类型的特应性皮炎，其通常在^1环境变应原致敏的情况下发生和/或其通常伴随提高的血清IgE水平；和(2)"非变应性(内源性)，，类型的特应性皮炎，通常其致敏作用很小或观察不到和/或通常伴随正常或低血清IgE水平(N.Novak等，J.AllergyClin.Immunol,2003,112,252-262;和T.C.Roos等，Drugs,2004,64(23)，2639-2666,见例如2640-2641页)。因此式(I)化合物或其药学上可接受的盐可治疗和/或预防哺乳动物(例如人或猪，优选人)的变应性(外源性)特应性皮炎和/或非变应性(内源性)特应性皮炎。"外部局部"给药是指局部给药于外部身体部分(即除例如肺或口外，但包括嘴唇)，优选除眼外。"外部局部"给药优选是局部给药于皮肤，例如给药于哺乳动物例如人的手臂、手、腿、脚、头(例如脸)、颈和/或躯干皮肤。外部局部给药可以是例如给药于感染特应性皮炎或对特应性皮炎敏感的哺乳动物的皮肤部分。关于PDE4抑制剂在特应性皮炎中的用途，见例如-J.M.Hanifin等，"Type4phosphodiesteraseinhibitorshaveclinicalandinvitroanti-inflammatoryeffectsinatopicdermatitis(4型磷酸二酉旨酶抑制剂对特应性皮炎具有临床和体外抗炎效应)"，J.Invest.Dermatol.,1996，107(1),51-56;其报道用PDE4抑制剂CP80，633(0.5%软膏剂，每天两次局部给药)治疗的特应性皮炎患者中炎性参数的下降；誦C.E.M.Griffiths等，"Randomizedcomparisonofthetype4phosphodiesteraseinhibitorcipamfyllinpcream,creamvehicleandhydrocortisone17-butyratecreamforthetreatmentofatopicdermatitis(4型磷酸二酯酶抑制剂西潘茶碱霜剂、霜剂载体和17丁酸氢化可的松霜剂治疗特应性皮炎的随机比较)",Br.J.Dermatol,2002,147(2)，"9-307,其报道在治疗特应性皮炎患者时，西潘茶碱(0.15%)霜剂明显比溶媒有效，但远不及17丁酸氢化可的松(0.1。/。)霜剂有效；國T.C.Roos等，"Recentadvancesintreatmentstrategiesforatopicdermatitis(特应性皮炎治疗策略的最新进展)"，Drugs,2004,64(23),2639-2666(见例如其中2657页和参考文献201-209);-A.M.Doherty,CurrentOpinionChem.Biol，1999，3(4),466-473(例如见470页)；和画H丄Dyke等，ExpertOpinionInvest.Drugs,2002,11(1),1-13(例如见其中7页和引用的参考文献74、75和76);以及上述参考文献中引用的参考文献。关于PDE4抑制剂SB207499(西洛司特)和AWD12-281在变应型皮炎小鼠模型中的用途，见W.Baumer等，Eur.J.Pharmacol,2002,446,195-200和W.Baumer等，JPharmacyPharmacol,2003,55,1107-1114。PDE4抑制剂被认为有效治疗COPD。例如，见S.L.Wolda,EmergingDrugs,2000,5(3)，309-319;Z.Huang等，CurrentOpinioninChemicalBiology(化学生物学的最新观点),2001,5:432-438;H丄Dyke等，ExpertOpiniononInvestigationalDrugs(研究药物的专家观点)，2002年1月，11(1),1國13;C.Burnouf等，CurrentPharmaceuticalDesign(最新药物设计)，2002,8(14),1255-1296;A.M.Doherty,CurrentOpinionChem.Biol，1999，3(4)，466-473;A.M.Vignola,RespiratoryMedicine(呼吸内科学)，2004,98,495-503;D.Spina，Drugs(药物),2003,63(23),2575-2594;以及上述出版物中引用的参考文献；和G.Krishna等，ExpertOpiniononInvestigationalDrugs(研究药物的专家，见点)，2004,13(3),255-267(特别见其中259-261页和参考文献102-111和201)。PDE4抑制剂西洛司特(ArifloTM)以15mg每天两次口服给药似乎改善了COPD患者1秒钟用力呼气的容积(FEV,)(C.H.Compton等，TheLancet,2001，358巻，265-270),并对COPD患者似乎具有抗炎作用(E.Gamble等，Am.J.Respir.Crit.CareMed.,2003，168，976-982)。关于西洛司特，还见R.D.Border等，Chest,2003,124巻副刊4,170S页(摘要)和J.D.Eddleston等，Am.J.Respir.Crit.CareMed.,2001,163,A277(摘要)。PDE4抑制剂罗氟司特似乎表明稍」徵改善COPD患者的FEV!(见B丄Lipworth,TheLancet,2005,365,167-175,和其中的参考文献49-50)。.COPD的特征是出现由于慢性支气管炎和/或肺气肿引起的气流阻塞(例如见S.L.Wolda,EmergingDrugs(新药物)，2000,5(3),309-319)。PDE4抑制剂被认为有效治疗嗜喘(例如见M.A.Giembycz，Drugs(药物)，2000年2月，59(2),193-212;Z.Huang等，CurrentOpinioninChemicalBiology(化学生物学的最新观点)，2001,5:432-438;H.J.Dyke等，ExpertOpiniononInvestigationalDrugs(研究药物的专家观点)，2002年1月，11(1),1画13;C.Burnouf等，CurrentPharmaceuticalDesign(最新药物设计)，2002,8(14)，1255-1296;A.M.Doherty,CurrentOpinionChem.Biol,1999,3(4),466-473;P丄Barnes,NatureReviews-DrugDiscovery(自然回顾-药物发现)，2004年10月，831-844;以及上述出版物中引用的参考文献)。PDE4抑制剂被认为有效治疗变应性鼻炎(例如见B.M.Schmidt等，J.Allergy&ClinicalImmunology,108(4),2001,530-536)。PDE4抑制剂被认为有效治疗类风湿性关节炎和多发性硬化(例3口见H.J.Dyke等，ExpertOpiniononInvestigationalDrugs(研究药4勿的专家观点)，2002年1月，11(1),1-13;C.Burnouf等，CurrentPharmaceuticalDesign(最新药物设计)，2002,8(14),1255-12%;和A.M.Doherty,CurrentOpinionChem.Biol,1999,3(4),466-473;以及这些出版物中引用的参考文献)。PDE4押制剂已被提出具有止痛特性，因此有效治疗疼痛(A.Kumar等，IndianJ.Exp.Biol,2000,38(1),26-30).在本发明中，可治疗和/或预防认知缺损例如神经障碍的认知缺损例如阿尔茨海默氏病。例如，治疗和/或预防可包括神经障碍中的认知增强。见例如H.T.Zhang等，在Psychopharmacology(精神药理学)，2000年6月，150(3),311-316和Neuropsychopharmacology(神经精神药理学)，2000,23(2),198-204;和T.Egawa等，JapaneseJ.Pharmacol"1997,75(3),275-81。PDE4抑制剂例如咯利普兰已被提出具有抗抑郁特性(例如J.Zhu等,CNSDrugReviews(CNS药物回顾)，2001,7(4),387-398;O'Donnell,ExpertOpiniononInvestigationalDrugs(研究药物的专家，见点)，2000,9(3),621-625;和H.T,Zhang等，Neuropsychopharmacology(神经精神药理学)，2002年10月，27(4),587-595;J.M.O'Donnell和H.墨T.Zhang,TrendsPharmacol.Sci,2004年3月，25(3)，158-163;和T.E.Renau,Curr.OpinionInvestDrugs，2004，5(1)，34-39)。PDE4抑制已被提出用于治疗炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和/或Crohn's病)，见K.H.Banner和M.A.Trevethick,TrendsPharmacol.Sci,2004年8月，25(8),430-436。药用组合物、给药途径和定量用于医学时，本发明化合物或其盐适合作为药用组合物给药。因此本发明在进一步的方面提供药用组合物，该药用组合物包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。药用组合物可用于治疗和/或预防本文描述的任何疾病，特别是哺乳动物例如人的特应性皮炎。本发明还提供制备药用组合物的方法，该药用组合物包含如本文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂，该方法包括将该化合物或盐与一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂混合。本发明还提供用所述方法制备的药用组合物。式(I)化合物和/或药用组合物可通过，例如外部局部(例如皮肤局部)、胃肠外(例如静脉内、皮下或肌内)给予、吸入或鼻内给药。因此，药用组合物可适合(例如适应)外部局部(例如皮肤局部)、胃肠外(例如静脉内、皮下或肌内)、吸入或鼻内给药。药用组合物优选适合吸入给药或更优选适合外部局部(例如皮肤局部)给药，例如给药于哺乳动物例如人。吸入给药包括通过例如气雾剂或干粉组合物局部给药于肺。虽然式(I)化合物或其盐可口服给药，但目前认为口服给药不是优选的给药途径。不打算受该数据的约束，这是因为初步实验显示时，以每kg体重约1mg化合物的剂量水平将式(I)化合物("游离碱"形式)口服给药于大鼠后，全身暴露是低的。药用组合物可任选采用单位剂型。单位剂型可以是例如(a)容纳可吸入干粉药用组合物的可爆石皮或可剥开的密封剂量容器(例如其多数通常排列在合适的吸入装置内)；(b)用于胃肠外给药的管形瓶、安瓿或填充的注射器，例如容纳化合物或药学上可接受的盐在合适载体例如水性载体中的溶液或悬浮液，或例如容纳冷冻干燥的胃肠外药用组合物(管形瓶或安瓿可任选用吹打-填充-密封(blow-fill-seal)方法制备)；或(c)(次优选)用于口服给药例如用于口服给药于人的片剂或胶嚢剂。或者，组合物可采用适合按使用者所需将不同量的组合物给药的形式，例如可分散或可喷雾的外部局部组合物例如霜剂、软膏剂、凝月交剂或液体。适合斧谬局命發^^秀^逸合#本发明的药用组合物优选适合(例如适应)夕卜部局部(例如皮肤局部)给药，例如给药于哺乳动物例如人。更优选地，适合外部局部给药的药用组合物治疗和/或预防哺乳动物例如人的特应性皮炎。"外部局部给药"在上文"医学用途"部分中定义。外部局部给药可以是例如给药于疾病或病症例如特应性皮炎受累或对其易感的皮肤部分，特别是患特应性皮炎或对其易感的哺乳动物(例如人)。外部局部药用组合物(例如皮肤局部药用组合物)可以是，例如软膏剂、霜剂(通常是水包油或油包水药用组合物，通常是乳剂)、水凝胶剂或微乳剂。或者药用组合物可以是含DMSO的溶液例如DMSO/丙酮溶液或DMSO/水溶液(DMSO=二曱基亚砜)；含DMSO的溶液可用于实验动物测试，但通常不希望用于人。在外部局部药用组合物(例如软膏剂或水包油或油包水组合物)中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐占组合物重量(w/w)的0.05%至10%，优选0.1%至5%,更优选0.1%至3%，还更优选0.2%至3%(例如约0.5%或约2.5%)，还更优选0.2%至1.5%(例如约0.5%)。在一个任选实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可任选采用粒度减小的形式，例如通过孩t粉化获得或可通过樣i:粉化获得。这可以用于例如适合(例如适应)外部局部(例如皮肤局部)给药的药用组合物。在可吸入的药用组合物部分中，粒度减小的小节的更多细节见下文。水溶性预筛选是为了通过以下步骤粗略评估化合物的水溶性(作为大概提要)(i)产生约10mM化合物的DMSO溶液，(ii)通过使约19份容积的pH7.4磷酸盐緩冲盐水溶液(PBS)緩冲液与约1份容积的约10mMDMSO溶液混合将一部分该DMSO溶液稀释，(iii)借助离心"过滤"混合物，然后(iv)测定溶于"滤液"中的化合物浓度。虽然在该溶解度筛选"滤液"中存在一些DMSO(约5%体积)，但该预筛选的结果(约60微克化合物(I)/ml)似乎提示通常式(I)化合物("游离碱"形式)在约室温通常具有中等水溶性。亲油性式(I)化合物(游离碱)被认为具有约2.5的clogP(计算的辛醇/水分配系数(P)的对数)，提示中等亲油性。相信式(I)化合物(I)(游离碱)在？11=7.4测定的10￡0(1)=分配系数，其中logD通常是用于校正离子化的logP)约3.4,再次提示适度/中等亲油性。乂f^:;^厶戈^:麽^^遽乂f强W:外部局部药用组合物(例如软膏剂或水包油或油包水霜剂)优选包括式(I)化合物或其盐的皮肤渗透增强剂和/或增溶剂。皮肤渗透增强剂和/或增溶剂可以是例如丙二醇、二乙二醇单乙醚(例如TRANSCUTOL，和/或辛酰己酰聚乙二醇甘油酯(例如LABRASOLtm)，优选丙二醇。增溶剂和/或皮肤渗透增强剂不适合包含DMSO。增溶剂和/或皮肤渗透增强剂优选既是增溶剂又是皮肤渗透增强剂，和/或适当地占组合物重量(w/w)的0.5%至50%，优选5%至50%，更优选7%至30%,还更优选7%至25%，还更优选约10%至约20%(例如约10%或约20%)。皮趺渗透增强剂用于透过皮肤释放式(I)化合物或其盐("活性剂，，或"药物，，)。还帮助药物的增溶。增溶和/或皮肤渗透增强剂应当优选(a)安全和/或可耐受的，(b)具有作为有效皮肤渗透增强剂的尽可能低的皮肤刺激性，和(c)与活性药物成分相容。注意试剂优选既作为增溶剂又作为皮肤渗透增强剂。^面法遂有外部局部药用组合物(例如软膏剂或水包油霜剂或油包水霜剂)优选包含表面活性剂(例如乳化剂)，例如用于达到含两相或多相组合物的乳化。表面活性剂的总含量占组合物重量(w/w)可以是例如0.3%至20%,例如0.5%至15%或0.5%至12%或0.5%至10%或1%至12%或3%至10%。表面活性剂可以例如包括以下一种或多种聚氧乙烯(polyoxyl)C,2.22烷基醚(例如聚氧乙烯C!，烷基醚例如聚氧乙烯十六烷基醚或聚氧乙烯硬脂醚)(例如占0.5%至10%w/w,例如2.5%至10%w/w例如约5%至约8%w/w)、甘油单石更脂酸酯(例如Arlacel165)(例如占0.5%至10%w/w,例如约2%w/w)、脱水山梨醇单硬脂酸酯(例如Span60)(例如占0.05%至10%w/w,例如约1%w/w)、十六醇和/或硬脂醇(例如其中任何十六醇和任何石更脂醇合计占0.1%至15%w/w,例如1%至10%w/w例如约2%至约5%w/w)和十二烷基硫酸钠(SDS)(例如占0.3%至2%w/w例如约1%w/w)。聚氧乙烯硬脂醚(steareth)可以是例如聚氧乙烯2硬脂醚(steareth2)或聚氧乙烯21石^旨醚(steareth21)。舍DMSO溶濕一种可能的外部局部药用组合物是式(I)化合物或其药学上可接受的盐以约0.5%至约2.5。/。w/w存在于含DMSO溶剂中的溶液，例如在DMSO/丙酮或在DMSO/水中；例如该化合物或盐以约0.5%至约2.5。/。w/w存在于DMSO/丙酮(l:l)中的溶液。虽然含DMSO溶液(通常能够高度渗透皮肤)通常是用于动物的极佳实验性临床前制剂，但它们可能的皮肤刺激性通常使它们较不适合用于人例如病人，例如特应性皮炎病人。^豪W和虜^f"和油巧知外部局部药用组合物可以是软膏剂或水包油霜剂或油包水霜剂。软膏剂或霜剂通常包含油相(油性软膏基质)。油相(软膏J^质)通常包含油和/或脂肪，优选具有适合涂布皮肤的粘度。优选地，可用白软石蜡(白矿脂)或含有白软石蜡的油和/或矿物油(例如液状石蜡)。(矿物油还可用作增溶剂和/或软化剂)。白软石蜡(白矿脂)可以具有多种等级，例如(Penreco供应商)PenrecoRegentWhite级、Penreco雪白级或Penreco最白级，特别是高熔点白软石蜡(例如Penreco最白级)。孩i晶蜡或蜂蜡或蜂蜡替代物可用作油相中的油/脂肪。或者或此外，一种或多种脂肪例如直链或支链一-或二-烷基酯(例如肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、己二酸二异丙酯、石更脂酸异十六烷酯、异硬脂酸异硬脂基酯(isostearylisostearate)、油酸癸酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯，或2-乙基己酸与十六醇或硬脂醇混合物(例如称为CrodamolCAP)的混合酯)可用于油相(其中一些也是增溶剂和/或表面活性剂)。根据需要的特性可单独或联合使用这些脂肪。.油相(油性软膏基质)可以例如在软膏剂(例如乳剂或均质单相)中占25至85%w/w(例如50至80%w/w),在油包水霜剂(例如乳剂)中占25至85%w/w(例如35至70%w/w)，或在油包水霜剂(例如乳剂)中占8至55%w/w(例如10至45%w/w)。示例性外部局部药用组合物是包含以下成分的软膏剂-式(I)化合物或其药学上可接受的盐，占0.P/。至5。/。w/w(例如0.1%至3%w/w或0.2%至1.5%w/w);-油相(油性软膏基质)，占25%至99%w/w或25%至85%w/w或50%至80%w/w(例如，油相可包含占25至75。/ow/w或45至75%w/w的白矿脂，并任选还包含2.5%至15%w/w例如4%至12%w/w矿物油(例如作为增溶剂和软化剂))；曙一种或多种表面活性剂(例如聚氧乙烯硬脂醚)，合计占0.5%至10%w/w或3%至10%w/w;和-一种或多种用作皮肤渗透增强剂的试剂(优选既作为增溶剂又作为皮肤渗透增强剂和/或优选亲水剂例如丙二醇)，合计占0.5%至50%w/w，例如5%至50%w/w或7%至30%w/w;和-任选一种或多种抗氧化剂(例如丁幾茴醚)，例如合计占0.001至2%w/w例如0.02至2%w/w;和誦任选一种或多种防腐剂，例如合计占0.01至4%w/w例如0.05至P/ow/w(例如占0.05至2Mw/w的对羟苯甲酸曱酯和/或占0.01至2。/ow/w对羟苯甲酸丙酯)。上述示例性组合物(包括油"相"和渗透增强剂)可任选是均质单相。然而，在上述示例性软膏组合物的一个实施方案中，例如当用丙二醇或另一种亲水增溶剂和渗透增强剂时，油相(油性软膏1^质)与含亲水增溶剂和渗透增强剂的亲水相(例如含丙二醇相)已被乳化形成软膏乳剂。具有两相的软膏组合物可任选用乳化方法制备，其中首先在单独的容器内制备亲7jc相(例如含丙二醇相)和油相。亲水相可任选包含渗透增强剂例如丙二醇，且任选一些或全部式(I)化合物或其盐。油相可任选包含表面活性剂。两相的温度都保持在提高的温度，例如约55-90。C或优选从70以上至90°C,油相温度足够高(例如从70以上至90。C)以熔化油相。在灼热时，边混合(例如用高切混合器)边将一相加入另一相中，以完成乳化作用，优选保持温度在70。C以上例如从70以上至9(TC。任由生成的软膏乳剂冷却，例如至约15-35'C,例如约18-30。C，优选同时继续例如以4交低速度搅拌。然后可任选将软膏乳剂从制备容器中分发填充入初级包装，例如导管或小药嚢内。任选地,软膏剂可包含聚乙二醇基质(例如占25至98。/。w/w例如50至95%w/w),代替油性软膏基质或与其油性软膏基质一起。處浙外部局部药用组合物可以是霜剂，例如油包水霜剂或水包油霜剂。有时霜剂可比软膏剂流动性更大，有时可提供更大湿度，因此在某些情况下可基本上为特应性皮炎患者提供改善的和/或良好效果。油逸水虜浙这些通常比软膏剂的含水量高。优选地，油包水霜剂是油包水膏状乳剂。即，优选地，在油包水霜剂中，油相和水相已被乳化形成油包水膏状乳剂。示例性外部局部药用组合物是油包水霜剂(例如膏状乳剂)，其包含:-式(I)化合物或其药学上可接受的盐，占0.1%至5%/\￥(例如0.1%至3%w/w或0.2%至1.5%w/w);-油相(油性软膏基质)，占25%至85%w/w或35%至70%w/w(例如含25%至75%w/w或30%至65%w/w白矿脂，且还任选包含2.5%至15%w/w或4%至12%w/w矿物油(例如作为增溶剂和软化剂)；國水，占2%至30%w/w，例如5%至25%或10%至22%w/w;-一种或多种表面活性剂(例如聚氧乙烯石更脂醚)，合计占0.5%至12y。w/w，例如3n/。至10。/。w/w;和-一种或多种用作皮肤渗透增强剂的试剂(优选既作为增溶剂又作为皮肤渗透增强剂和/或优选亲水剂例如丙二醇)，合计占0.5%至50%w/w,例如5%至50。/。w/w或7%至30%w/w;和-任选一种或多种抗氧化剂(例如丁羟茴醚)，例如合计占0.001至2Q/。w/w例如0.02至2y。w/w;和-任选一种或多种防腐剂，例如合计占0.01至4。/。w/w例如0.05至1%w/w(例如占0.05至2%w/w对羟苯曱酸曱酯和/或占0.01至2%w/w对羟苯曱酸丙酯)。水逸磁,麻这些通常比軟膏剂和油包水霜剂的含水量高。优选地，水包油霜剂是水包油膏状乳剂。即，优选地，在水包油霜剂中，油相和水相已被乳化形成水包油膏状乳剂。优选水包油霜剂是高度吸收(occlusion)的霜剂，其中，在局部给药于皮肤后，通过充分高度覆盖皮肤和/或通过在涂布部位提供足够阻挡层的方式减少或限制皮肤水分的丢失。优选地，水包油霜剂包含一种或多补软化剂(吸水剂(hydratingagent)),例如聚硅氧烷(例如二曱聚硅氧烷，例如二曱聚硅氧烷360或二曱聚硅氧烷20)、高粘度蜡例如微晶蜡，和/或矿物油。还优选足够高的含水量，例如其中水占15%至60%\￥/\￥、20。/o至50n/ow/w或25%至40%\￥/评。示例性外部局部药用组合物是水包油霜剂(例如膏状乳剂)，其包含-式(I)化合物或其药学上可接受的盐，占0.P/。至5。/。w/w(例如0.10/0至3%w/w或0.2%至1.5%w/w);-含一种或多种能作为软化剂的成分的油相(油性软膏基质)，油优选30%至55%w/w;-水，占12%至75%w/w或15%至75%w/w或15%至60%w/w,优选15%至50%w/w或20%至40%w/w;-一种或多种表面活性剂，合计占0.5%至12%w/w,例如3%至10%w/w;和-一种或多种作为皮肤渗透增强剂的试剂(优选既作为增溶剂又作为皮肤渗透增强剂和/或优选亲水剂例如丙二醇)，合计占0.5%至50%w/w,优选5%至50%w/w或7%至25%w/w;和-任选一种或多种增溶剂(例如肉豆蔻酸异丙酯)，例如占0.5%至20%w/w，例如3至12%w/w;和-任选一种或多种緩沖剂(例如枸橼酸和/或磷酸氢二钠)，例如合计占0.05至5。/ow/w。在上述示例性水包油霜剂组合物中，油相优选包含15%至50%\￥/\￥或20%至45。/。w/w矿物油(例如作为软化剂和增溶剂)，和/或包含5%至25%w/w例如8%至15%w/w高粘度蜡例如微晶蜡(例如作为軟化剂)，和/或包含0.5%至20%例如0.5%至10%或1%至5%w/w聚硅氧烷(例如二曱聚硅氧烷例如二曱聚硅氧烷360或二曱聚硅氧烷20,例如作为软化剂)。在上述示例性水包油霜剂组合物中，一种或多种表面活性剂优选包含0.5%至10。/。w/w单硬脂酸甘油酯，和/或0.05%至10%w/w脱水山梨醇单硬脂酸酯，和/或合计0.1%至15%或1至10%w/wH"六醇和/或^更脂醇]。膏状乳剂例如油包水或水包油膏状乳剂，可通过其中例如在乳化前制备水相的方法制备。水相通常包含水和增溶剂和/或皮肤渗透增强剂例如丙二醇，且任选包含一些或全部式(I)化合物或其盐，和/或任选包含表面活性剂。油相(例如含白矿脂和/或矿物油，和/或任选包含表面活性剂)可在单独容器内制备。两相温度都保持在提高的温度，例如约55-90。C或优选从70以上至90。C,油相温度足够高(例如从70以上至90。C)以熔化油相。在灼热时，边混合(例如用高切混合器)边将一相加入另一相中，以完成乳化作用，优选保持温度在70。C以上例如从70以上至9(TC。任由生成的乳剂冷却，例如至约15-35。C,例如至约18-30'C，优选同时继续例如以较低速度搅拌。然后可任选将膏状乳剂从制备容器中分发并填充入初级包装，例如导管或小药嚢内。通常，适合外部局部给药的本发明药用组合物可每天一次、每天两次或每天两次以上给药于身体外部，例如在皮肤上例如在患病部位皮肤，例如患特应性皮炎的皮肤。/^秀y^逸合游及在產减小可方便地将适合(或适应)鼻或^v给药的组合物配制成气雾剂、滴剂、凝胶剂或干粉剂。气雾剂制剂(例如用于吸入给药)可包含活性物质在药学上可接受的7jc或非水溶剂中的溶液或纯化的悬浮液。气雾剂制剂可以以单一或多剂量定量无菌形式处于密封容器内，该容器可采用盒式或再填充形式与雾化装置或吸入器一起使用。或者该密封容器可以是单元配药装置例如单次剂量鼻Pil^器或装配有计量阀的气雾剂配药器(定量吸入器)，一旦容器内容物用完即可废弃该装置。在剂型包含气雾剂配药器时，其优选包含压力下的合适推进剂例如压缩空气、二氧化碳，或有机推进剂例如含氯氟烃(CFC)或更优选氢氟烃(HFC)。合适的CFC推进剂包括二氯二氟曱烷、三氯氟曱烷和二氯四氟乙烷。合适的HFC推进剂包括1,1,1,2,3，3,3-七氟丙烷和l,l,l,2-四氟乙烷。气雾剂剂型还可采用泵-喷雾器形式。在產减小对于适合(例如适应)吸入给药的药用组合物，优选式(I)化合物或盐采用粒度减小形式。粒度减小形式可例如通过微粉化或可通过孩t粉化获得。耀:粉化通常涉及在快速流动的滚筒或螺旋/旋涡状气流(通常包括旋风成分)中使化合物/盐接受碰撞和/或磨耗力。粒度减小(例如微粉化)化合物或盐的优选粒度通过Ds。值确定，为约0.5至约IO微米，例如约1至约7微米(例如用激光衍射测定)。例如，优选式(I)化合物或盐具有的粒度定义为D1Q为约0.3至约3孩么米(例如约0.5至约2微米，或约l微米)，和/或05()为约0.5至约IO微米或约1至约7微米(例如约2至约5耀束或约2至约4耀束),和/或D90为约1至约30微米或约2至约20微米或约3至约15微米(例如约5至约15微米或约5至约10微米)；例如用激光衍射测定。在粒度测定中，D90、D50和D10各自表示900/0、50%和10%物质小于指定的孩l米大小。D50是中等粒度。DV90、DV50和DV10各自表示90%、50%和10%体积的物质小于指定的微米大小。DM90、DM50和DM10各自表示90%、50%和10%重量的物质小于指定的微米大小。可用干法(其中化合物/盐在气流中的悬浮液通过激光束)或湿法[其中化合物/盐在液体^:介质(例如异辛烷或(例如如果化合物可溶于异辛烷)0.1%吐温80的水溶液)中的悬浮液通过激光束]对粒度进行激光衍射测定。对于激光衍射，计算粒度优选用Fraunhofer计算；和/或优选用MalvernMastersizer或Sympatic装置测定。例J(口，通过、激光衍射测定和/或分析粒度可用以下任何或全部(优选全部)条件:MalvernMastersizer长床方案，分散介质为0.1%吐温80水溶液，搅拌率为约1500rpm，最后分散和分析前超声处理约3分钟，300RF(反向Fourier)透镜，和/或带Malvern软件的Fraunhofer计算。关于微粉化的小规摸非限制性实施例，见下文的微粉化实施例。"f為^^逸合浙对于适合(例如适应)吸入给药的药用组合物，药用组合物可例如是干粉吸入组合物。这样的组合物可包含粉末基质例如乳糖或淀粉、式(I)化合物或其盐(优选采用粒度减小形式，例如凝:粉化形式)，以及任选三元试剂(ternaryagent)例如L-亮氨酸、甘露醇、海藻糖、^J旨酸4美和/或辛醋酸纤维二糖酯(例如辛醋酸纤维二糖酯(cellobioseoctaacetate)的a-D-异构体，例如可购自Aldrich)。关于辛醋酸纤维二糖酯和贮存稳定性，见WO03/088943。优选地，干粉吸入组合物包含乳糖和式(I)化合物或其盐的干粉混合物。乳糖优选是乳糖水合物例如乳糖一水合物和/或优选是吸入级和/或精制级乳糖。优选地，乳糖粒度少见定为90%或以上(重量或体积)乳糖樹4立直径小于1000微米(微米)(例如10-1000微米例如30-1000微米)，和/或50%或以上乳糖微粒直径小于500微米(例如10-500微米)。更优选地，乳糖粒度规定为90%或以上乳糖樣么粒直径小于300孩t米(例如10-300孩t米例如50-300樣沐)，和/或50%或以上乳糖微粒直径小于100微米。任选地，乳糖粒度规定为90%或以上乳糖#^立直径小于100-200微米，和/或50%或以上乳糖微粒直径小于40-70樣史米。适合的是约3至约30%(例如约10%)(重量或体积)孩t粒直径小于50孩t米或小于20孩l米。例如，非限制性地，合适的吸入级乳糖是E9334乳糖(10%纯度)(BorculoDomoIngredients,Hanzeplein25,8017JDZwolle,Netherlands)。在干粉吸入组合物中，式(I)化合物或其盐可占组合物重量例如约0.1%至约70%(例如约1%至约50%,例如约5%至约40%,例如约20至约30%)。性实例。f為^[A袭f:任选地，特别对于干粉吸入组合物，可将吸入给药的药用组合物加入主要的密封剂量容器(例如含干粉组合物)内，该容器纵向安装在合适的吸入装置内的条状物(strip)或带状物(ribbon)中。根据需要可将容器裂开或剥开，通过装置例如GlaxoSm池Kline销售的DISKUStm装置吸入，可将剂量例如干粉组合物的剂量给药。DISKUStm吸入装置通常大致描述于GB2,242,134A。在这样的装置中，至少一种粉末形式的药用组合物的容器(至少一种容器优选是多个纵向安装在条状物或带状物中的密封剂量容器)被限定在两个彼此可剥离地固定的构件之间；该装置包含使所述至少一个容器处于开放状态的工具；在开放状态将构件剥离以打开容器的工具；以及与打开的容器相通的出口，使用者可通过该出口从打开的容器吸入粉末形式的药用组合物。口麽4'眾/嫁#發^的秀^逸合參适合(例如适应)胃肠外(例如静脉内、皮下或肌内)给药的药用组合物可包含化合物或药学上可接受的盐在无菌胃肠外可接受的水性载体(例如无菌水)或胃肠外可接受的油中的溶液或悬浮液。或者，该溶液可以是冷冻干燥的。在使用时，适合(例如适应)胃肠外给药的冷冻干燥药用组合物可任选用合适溶剂(例如无菌水或无菌胃肠外可接受的水性溶液)在给药前临时重新配制。如上所述，不优选口服给药。然而，口服给药的药用组合物可以是液体或固体；例如其可以是糖浆剂、混悬剂或乳剂、片剂、胶嚢剂或锭剂。液体制剂可任选由化合物或药学上可接受的盐在药学上可接受的液体载体中的悬浮液或溶液组成，液体载体例如是水性溶剂例如水、乙醇或甘油，或非水溶剂例如聚乙二醇或油。制剂还可包含助悬剂、防腐剂、调味剂和/或着色剂。.虽然并非优选，口服给药的片剂药用组合物可包含一种或多种药学上可接受的载体和/或适合制备片剂制剂的赋形剂。例如载体可以是或包括乳糖、纤维素(例如孩i晶纤维素)或甘露醇。片剂也可或改为包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，例如粘合剂例如羟丙甲基纤维素或聚维酮(聚乙烯吡咯烷酮)、润滑剂例如碱土金属硬脂酸盐例如硬月旨酸镁，和/或片剂崩解剂例如乙醇酸淀粉钠、交联羧曱基纤维素钠或交聚维酮(交联聚乙烯吡咯烷酮)。可制备片剂药用组合物的方法包括以下步骤(i)使本文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，与一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂混合，(ii)将生成的混合物(通常是粉末形式)压紧成片剂，和(iii)任选用片剂薄膜包衣材料将片剂包衣。虽然并非优选，口服给药的胶嚢药用组合物可用装胶嚢步骤制备。例如，可用合适的药学上可接受的载体制备含活性成分的小丸或粉末，然后将其填入硬明胶胶嚢内。或者，可用任何合适的药学上可接受的载体例如含水树胶或油制备分散液或悬浮液，然后将分散液或悬浮液填入软明胶胶嚢内。發財黄在适合(例如适应)外部局部给药的药用组合物(例如软膏剂或水包油或油包水组合物).中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可占组合物重量的0.05%至10%,优选0.1%至5%,更优选0.1%至3%，还更优选0.2%至3%(例如约0.5%或约2.5%),还更优选0.2%至1.5%(例如约0.5%)。通常，可将外部局部药用组合物每天一次、每天两次或每天两次以上给药于身体外部，例如给药于皮肤例如患病部位皮肤。给药量通常例如基本上覆盖患病部位皮肤。在药用组合物中，口服或胃肠外给药的剂量单位或每种剂量单位可以包含例如/人0.01至3000mg、例如0.5至1000mg式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以游离碱计算。鼻或吸入给药的剂量单位或每种剂量单位可以包含例如从0.001至50mg、例如0.01至5mg式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以游离碱计算。当用胃肠外或口服组合物时，可任选将本发明药学上可接受的化合物或盐给药于哺乳动物(例如人)，每天口服或胃肠外剂量为每天每公斤体重0.001mg至50mg(mg/kg/天)式(I)化合物或其药学上可接受的盐，例如0.01至20mg/kg/天或0.03至10mg/kg/天或0.1至2mg/kg/天，以游离碱计算。当用吸入或鼻的组合物时，可任选将本发明的药学上可接受的化合物或盐给药于哺乳动物(例如人)，每天用于鼻或吸入的剂量为0.0001至5mg/kg/天或0.0001至1mg/kg/天式(I)化合物或其药学上可接受的盐，例如0.001至1mg/kg/天或0.001至0.3mg/kg/天或0.001至0.1mg/kg/天，或0.005至0.3mg/kg/天，以游离碱计算。可任选将本发明药学上可接受的化合物或盐给药于人，式(I)化合物或其药学上可接受的盐每天剂量(对于成人患者)为，例如口服或胃肠外剂量每天0.01mg至3000mg或每天0.5至1000mg例如每天2至500mg,或鼻的或吸入剂量每天0.001至300mg或每天0.001至50mg或每天0.01至30mg或每天0.01至5mg或每天0.02至2mg，以游离》威计算。絲腐根据本发明的化合物、盐和/或药用组合物也可与另一种治疗活性剂联合使用，例如P2肾上腺素受体激动剂、抗组胺剂、抗过敏剂、抗炎剂、抗感染剂或免疫抑制剂。因此本发明又一方面提供包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐与另一种治疗活性剂一起的药物组合，治疗活性剂有例如卩2-肾上腺素受体激动剂、抗组胺剂、抗过敏剂、抗炎剂、抗感染剂或免疫抑制剂。优选地，p2-肾上腺素受体激动剂是沙美特罗(例如外消旋体或单一对映体例如R-对映体)、沙丁胺醇、福莫特罗、沙甲胺醇、非诺特罗或特布他才木，或其盐(例如其药学上可接受的盐)，例如沙美特罗的昔萘酸盐、沙丁胺醇的硫酸盐或游离碱或福莫特罗的延胡索酸盐。优选长效|32-肾上腺素受体激动剂，特别是那些疗效超过12-24小时的激动剂例如沙美特罗或福莫特罗。优选地，&-肾上腺素受体激动剂用于例如每天一次吸入给药，和/或同时吸入给药；且更优选|32-肾上腺素受体激动剂采用本文定义的粒度减小形式。优选地，卩2-肾上腺素受体激动剂组合用于治疗和/或预防COPD或哮喘。优选将沙美特罗或其药学上可接受的盐(例如沙美特罗昔萘酸盐)给药于人，吸入剂量为25至50孩史克，每天两次(以游离碱测定)。优选的长效02-肾上腺素受体激动剂包括那些描述于WO02/066422A、WO03/024439、WO02/070490和WO02/076933的激动剂。优选的长效|32-肾上腺素受体激动剂包括式(XX)化合物(描述于WO02/066422):。nx/4vr11x:HCH2NHCR"XR18X(CH2)mx~0—(CH2)nx~^》(XX)或其盐或溶剂合物，其中在式(XX)中mx是从2至8的整数；#是从3至11的整数，前提是mx+nx为5至19,Rux是-XS02NR脇R"x，其中X是-(CH2)p、或C^亚烯基；Ri6x和Ri7x独立选自氢、d.s烷基、C^环烷基、C(0)NR18XR19X、苯基和苯基(Cw烷基)-,或R"x和R"x，与它们结合的氮一起，形成5-、6-或7-元含氮环，且R脇和R"x各自任选被一个或两个选自以下的基团取代卣代、Cw烷基、Cw卣代烷基、C^烷氧基、羟基取代的C"烷氧基、-C02R18X、-S02NR18XR19X、-CONR18XR19X、-NR18XC(0)R19X,或5-、6-或7-元杂环；R啦和R股独立选自氢、C^烷基、C^环烷基、苯基和苯基(A.4烷基)誦；且px是从0至6的整数，优选从0至4;R。x和R股独立选自氢、Cw烷基、C,-6烷氧基、卤代、苯基和C"卣代烷基；且Ri収和R"x独立选自氢和cM烷基，前提是R"x和R15X中的碳原子总数不超过4。WO02/066422公开的优选^-肾上腺素受体激动剂包括3-(4-{[6-({(211)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(羟甲基)-苯基]乙基}氨基)己基]氧基}丁基)苯磺酰胺和3-(3-([7-(((2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-羟曱基)苯基]乙基}-絲)庚基]氧基}丙基)苯磺酰胺。WO03/024439公开的优选&-肾上腺素受体激动剂是4-{(1^-2-[(6-{2-[(2,6-二氯苄基)氧基]乙氧基}己基)氨基]-l-羟乙基}-2-(羟曱基)苯酚。可与式(I)化合物或盐联合使用的抗组胺剂可以例如用于口服给药(例如作为复合组合物例如复方片剂)，并可用于治疗和/或预防变应性鼻炎。抗组胺剂的实例包括美沙吡林，或H1拮抗剂例如西替利嗪、氯雷他定(例如Clarityn)、地氯雷他定(例如Clarinextm)或非索非那定(例如Allegra1^)。200580015276.6本发明又一方面还提供含式(I)化合物或其药学上可接受的盐与抗胆碱能化合物在一起的组合药物，抗胆碱能化合物有例如毒蕈碱(M)受体拮抗剂特别是M。M2、]V^/M2或M3受体拮抗剂，更优选M3受体拮抗剂，还更优选对M3受体的选择性拮抗作用超过1V^和/或M2受体(例如拮抗强10倍或10倍以上)的M3受体拮抗剂。关于抗胆碱能化合物/毒蕈碱(M)受体拮抗剂与PDE4抑制剂的组合，见例如WO03/011274A2和WO02/069945A2/US2002/0193393Al和US2002/052312Al,且这些公告中部分或全部给出可与式(I)化合物或盐、和/或合适的药用组合物合用的抗胆碱能化合物/毒蕈碱(M)受体拮抗剂的实例。例如毒蕈碱受体拮抗剂可以包括或是异丙托铵盐(例如异丙托溴铵)、氧托铵盐(例如氧托溴铵)，或优选噻托铵盐(例如瘗托溴铵)；见例如EP418716A1或p塞托溴铵。抗胆碱能化合物或毒蕈碱(M)受体拮抗剂，例如M3受体拮抗剂优选吸入给药，更优选采用粒度减小形式，例如如本文定义。更优选地，毒蕈碱(M)受体拮抗剂与式(I)化合物或其药学上可接受的盐都吸入给药。优选地，抗胆碱能化合物或毒蕈碱受体拮抗剂与式(I)化合物或盐同时给药。毒蕈碱受体拮抗剂組合药物优选用于治疗和/或预防COPD。其它可能的组合药物包括，例如含式(I)化合物或其药学上可接受的盐与以下药物一起的组合药物另一种抗炎剂例如抗炎皮质类固醇；或非类固醇抗炎剂(NSAID)例如白三烯拮抗剂(例如孟鲁司特)、iNOS抑制剂、纤溶酶抑制剂、弹性酶抑制剂、|3-2整联蛋白拮抗剂、腺苦2a激动剂或5-脂氧合酶抑制剂；或抗感染剂(例如抗生素或抗病毒剂)。iNOS抑制剂优选口服给药。合适的iNOS抑制剂(可诱导的一氧化氮合酶抑制剂)包括描述于WO93/13055、WO98/30537、WO02/50021、WO95/34534和WO99/62875中的那些抑制剂。示例性组合药物，特别是用于外部局部给药(例如对特应性皮炎)的组合药物包括例如含式(I)化合物或其药学上可接受的盐与免疫抑制剂一起的组合药物，免疫抑制剂有例如神经储钩蛋白抑制剂例如吡美莫司或他克莫司。免疫抑制剂特别可以是可外用局部给给药的免疫抑制剂例如吡美莫司(例如以约1%w/w浓度存在于局部组合物例如霜剂中的吡美莫司，和/或例如Elidelt"或他克莫司(例如以从约0.03%至约0.1%w/w浓度存在于局部组合物例如软膏剂中的他克莫司，和/或例如ProtopicTM)。可外用局部给给药的免疫抑制剂既可在与本发明化合物或盐分开的外用局部组合物中给药，也可与式(I)化合物或药学上可接受的盐包含在可外部局部给药的组合药物中给予。对于外部局部给药(例如对特应性皮炎)，本发明化合物或盐与抗感染剂的组合药物可包括可外部局部给药的抗菌剂例如莫匹罗星或其盐(例如钾盐)(例如Bactroban),或可外部局部给药的截短侧耳素抗菌剂。或者或另外，可将外部局部给药的抗真菌剂外部局部给药，例如可^吏用clortrimazole、克霉峻或酮康唑。对于外部局部给药(例如对特异性皮炎)，可任选用与止痒剂化合物的组合药物。在含式(I)化合物或其药学上可接受的盐与抗炎皮质类固醇(其可用于例如治疗和/或预防哞喘、COPD、变应性鼻炎或特应性皮炎)一起的组合药物中，抗炎皮质类固醇可以是例如氟替卡松丙酸酯(例如见美国专利4,335,121)、倍氯米松17-丙酸酯、倍氯米松17,21-二丙酸酯、地塞米松或其酯、莫米松或其酯(例如莫米松糠酸酯)、环索奈德、布地奈德、氟尼缩松，或描述于WO02/12266Al中的化合物(例如其中权利要求1至22中任一项要求的)，或上述任一化合物的药学上可接受的盐。如果抗炎皮质类固醇是描述于WO02/12266Al中的化合物，那么优选其中的实例1{其为6a,9a-二氟-17a-[(2-呋喃M0氧基]-l1卩-羟基-1601-甲基-3-氧代-雄甾-1,4-二烯-17|3-硫代羧酸S-氟曱基酯}或其中的实例41{其为6a,9a-二氟-llJ3-羟基-16a-曱基-17a-[(4-甲基-i,3-噻唑-5-^J0氧基H-氧代-雄甾-M-二烯-np-硫代羧酸s-氟曱基酯},或其药学上可接受的盐。抗炎皮质类固醇可外部局部、鼻内或吸入给药。优选氟替卡松丙酸酯，并优选以(a)250微克剂量每天一次或(b)以50至250孩么克剂量每天两次吸入给药于人。.还提供含式(I)化合物或其药学上可接受的盐与p2-肾上腺素受体激动剂和抗炎皮质类固醇一起的组合药物，例如在WO03/030939Al中所述。优选该组合药物用于治疗和/或预防哮喘、COPD或变应性鼻炎。P2-肾上腺素受体激动剂和/或抗炎皮质类固醇可如上文描述和/或如WO03/030939Al描述。最优选地，在这种"三联"组合药物中，&-肾上腺素受体激动剂是沙美特罗或其药学上可接受的盐(例如沙美特罗昔萘酸盐)且抗炎皮质类固醇是氟替卡松丙酸酯。上文提及的组合药物可采用药用组合物的形式使用，因此含上文定义的组合药物与一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂一起的药用组合物代表本发明又一方面。这样组合的各化合物既可先后又可同时与药用组合物分别或联合给药。在一个实施方案中，本文定义的组合药物可同时吸入给药且在组合吸入装置中排列。这样的组合吸入装置是本发明又一方面。这样的组合吸入装置可包含同时吸入给药的联合药用组合物(例如干粉组合物)，该组合物包含组合药物的所有个体化合物，且组合物^皮加入到多个密封剂量容器内，该容器纵向安装在吸入装置内的条带或螺紋中，根据需要可将容器裂开或剥开；例如这样的吸入装置可基本上描述于GB2,242,134A(DISKUS"^)中和/或如上所述。或者，组合吸入装置可以是这样，以便组合药物的各化合物虽可同时给药但分开j^存(或三联组合药物的全部或部分分开贮存)，例如贮存在分开的药用组合物中，例如描述于2003年1月22日提交的PCT/EP03/00598,公开为WO03/061743(例如在其权利要求中所述，例如权利要求1)。本发明还提供制备如上定义的组合药物的方法，该方法包括(a)制备用于组合药物的各化合物先后或同时给药的单独的药用组合物，或(b)制备用于组合药物的个体化合物同时给药的联合的药用组合物，其中该药用组合物包含与一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂一起的组合药物。本发明还提供通过本文定义的方法制备的本文定义的组合药物。生物学测试方法PDE3、PDE4B、PDE4D、PDE5、PDE6初级测定方法可通过下文显示的测定方法测量本发明化合物或盐的活性。式(I)化合物是选择性PDE4抑制剂(与PDE3和PDE5相比)，即其抑制PDE4B和/或PDE4D明显强于其抑制PDE3和明显强于其抑制PDE5。y潔好尸"e癉源和参者jt人重组PDE4B，特别是其2B剪接变体(HSPDE4B2B),公开于WO94/20079和M.M.McLaughlin等"AlowKm,rolipram-sensitive,cAMP國specificphosphodiesterasefromhumanbrain:cloningandexpressionofcDNA,biochemicalchairacterisationofrecombinantprotein,andtissuedistributionofmRNA(来自人脑的低Km、p各利普兰敏感的cAMP特异性磷酸二酯酶cDNA的克隆和表达、重组蛋白的生化特征以及mRNA的组织分布)"，J.Biol.Chem.,1993,268,6470-6476。例如，在WO94/20079的实施例1中，人重组PDE4B被描述为表达在PDE-缺陷的酵母酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)株GL62，例如在加入150uMCuS04后诱导，100,000xg酵母细胞溶解产物的上清液部分被描述用于收集PDE4B酶。人重组PDE4D(HSPDE4D3A)描述于P.A.Baecker等，"IsolationofacDNAencodingahumanrolipram-sensitivecyclicAMPphoshodiesterase(PDEIVD)(编码人咯利普兰敏感的环磷腺苦磷酸二酯酶的cDNA的分离)",Gene,1994，138,253-256中。人重组PDE5公开于K.Loughney等，"IsolationandcharacterisationofcDNAsencodingPDE5A,ahumancGMP-binding，cGMP-specific3',5'誦cyclicnucleotidephosphodiesterase(编码PDE5A,一种结合人cGMP、cGMP特异性3',5，-环核苷酸磷酸二酯酶的cDNA的分离和鉴定)"，Gene，1998,216,139-147。可从牛主动脉提纯PDE3，例如如H.Coste和P.Grondin在"CharacterisationofanovelpotentandspecificinhibitoroftypeVphosphodiesterase(—种新的V型磷酸二酯酶有效和特异性抑制剂的鉴定)，，,Biochem.Pharmacol,1995,50,1577-1585中所述。可从牛视网膜提纯PDE6，例如描述于P.Catty和P.Deterre,"ActivationandsolubilizationoftheretinalcGMP-specificphosphodiesterasebylimitedproteolysis(通过卩艮制'l"生蛋白7Jc解5舌4b和溶解视网膜cGMP特异性磷酸二酯酶)"，Eur.J.Biochem"1991，199,263-269;A.Tar等"PurificationofbovineretinalcGMPphosphodiesterase(牛视网膜cGMP磷酸二酯酶的纯化)"，MethodsinEnzymology(酶学方法)，1994,238,3-12;和/或D.Srivastava等"EffectsofmagnesiumoncyclicGMPhydrolysisbythebovineretinalrodcyclicGMPphosphodiesterase(镁对由牛视网膜杆环磷鸟苷磷酸二酯酶$1起的环磷鸟苷水解的作用)"，Biochem.J，1995,308，653-658中。户潔3、/>/>￡^、户/>五肌尸潔54'尸""絲絲新..i射'歸尉近为、扭,)化合物抑制PDE4B或4D(人重组体)、PDE3(来自牛主动脉)、PDE5(人重组体)或PDE6(来自牛视网膜)催化活性的能力可任选在96孔格式板中通过闪烁亲近分析法(SPA)测定。在环境温度(室温，例如19-23。C)下使测试化合物(为DMSO溶液，优选约2微升(ul)体积DMSO溶液)与PDE酶在WallacIsoplates(编号1450-514)内，在50mMTris-HCl緩冲液pH7.5、8.3mMMgCl2、1.7mMEGTA、0.05%(w/v)牛血清白蛋白中预培养10-30分钟(通常30分钟)。在培养时，调整酶浓度以便在无化合物的对照孔内出现不超过20%规定的如下限定的底物水解。对于PDE3、PDE4B和PDE4D分才斤，加入3',5，-环石奔酸[5，，8-3H]腺苷(AmershamPharmaciaBiotech,编号TRK.559;或AmershamBiosciencesUKLtd,PollardsWood,ChalfontStGiles,BuckinghamshireHP84SP,UK)，得到每孔0.05uCi和约10nM终浓度。对于PDE5和PDE6分析，加入3，，5，-环磷酸[8-311]鸟苷(AmershamPharmaciaBiotech,编号TRK.392)得到每孔0.05uCi和约36nM终浓度。使含测试混合物的平板(优选约100ul体积测试混合物)在定轨摇床上混合5分钟并在环境温度下培养1小时。加入磷酸二酯酶SPA珠(AmershamPharmaciaBiotech,编号RPNQ0150)(约每孔lmg)以终止分析。将平板密封并振荡，任其保持在环境温度35分钟至l小时(优选35分钟)，以允许珠粒沉降。用WALLACTRILUX1450Microbeta闪烁计数器测定结合的放射性产物。对于抑制曲线，分冲斤每种化合物的10种浓度(例如1.5nM-30uM)。用ActivityBase和XLfit(JDBusinessSolutionsLimited,2OceanCourt,SurreyResearchPark,Guildford,SurreyGU27QB,UnitedKingdom)分析，结果以pIC50值表示。作为上文放射性SPA分析的替代，可用下文荧光偏振(FP)分析测定PDE4B或PDE4D抑制尸2^4B减户D^/D承遂^^斧/r炎^谅^(F"为、奸化合物抑制PDE4B(人重组体)或PDE4D(人重组体)催化活性的Explorer试剂盒，购自MolecularDevicesCorporation,Sunnydale,CA,USA;MolecularDevices编号R8062)测定。IMAPFP分析能测定在均质、非放射性分析格式板中PDE活性。FP分析利用包衣在纳米祸b^(极小的珠)上的固定三价金属阳离子的能力，以结合F1-AMP的磷酸根基团，其由焚光素标记(Fl)环腺苷一-磷酸盐(Fl-cAMP)水解成非环状F1-AMP形式产生。Fl-cAMP基本上不结合。Fl-AMP产物与珠粒(用固定三价阳离子包衣)的结合减慢结合的F1-AMP的旋转，并导致平行于垂直光的荧光偏振率增加。PDE的抑制减少/抑制该信号增加。在环境温度(室温，例如19-23'C)下使测试化合物(小体积，例如约0.5至1孩i升(ul),优选约0.5ul,DMSO溶液)与PDE酶在黑色384孑L微量滴定板(供应商NUNC,编号262260)中，在10mMTris-HCl緩冲液pH7.2、10mMMgCl2、0.1%(w/v)牛血清白蛋白和0.05%NaN3中预培养10-30分钟。通过实验i殳定酶水平，以y使整个培养方法呈线性反应。加入3，,5，-环磷酸荧光素腺苷(来自MolecularDevicesCorporation,MolecularDevices编号R7091)，得到约40nM终浓度(最终分析体积通常约20-40ul,优选约20ul)。使平板在定轨摇床上混合10秒钟并在环境温度下培养40分钟。加入IMAP结合剂(如上所述，来自MolecularDevicesCorporation,MolecularDevices'编号R7207)(60ul稀释液，以1:400稀释在试剂盒贮备液的结合緩冲液中)以终止分析。将平板保持在环境温度l小时。用Analyst读板器(来自MolecularDevicesCorporation)测定平行于垂直光的萸光偏振(FP)率。对于抑制曲线，分析每种化合物的10种浓度(例如1.5nM-30uM)。用ActivityBase和XLfit(IDBusinessSolutionsLimited,2OceanCourt,SurreyResearchPark,Guildford,SurreyGU27QB,UnitedKingdom)分析曲线。结果以pICs。值表示。在FP分析中，通常用Multidrop(购自ThermoLabsystemsOy,Ratastie2,POBox100,Vantaa01620,Finland)配制试剂。对于指定的PDE4抑制剂，用SPA和FP测定的PDE4B(或PDE4D)抑制值可略有不同。然而，在100种测试化合物(不一定是本发明化合物)的回归分析中，已发现对于每个PDE4B和PDE4D,用SPA和FP分析测定的pICs。抑制值通常相符在约0.5对数单位内(线性回归系数PDE4B为0.966和PDE4D为0.971;DavidR.Mobbs等，"ComparisonoftheIMAPFluorescencePolarisationAssay.withtheScintillationProximityAssayforPhosphodiesteraseActivity(IMAP'焚光偏振分析与闪烁亲近分析磷酸二酯酶活性的比较)"，在2003年分子装置英国和欧洲使用者会议上发表,2003年10月2日，DownHall,Harlow，Essex,UnitedKingdom)。以下是实施例1和/或实施例IA(即式(I)化合物)获得的生物学数据(PDE4B和PDE4D抑制活性，通常是一次以上读数的均数)，只根据最新测量结果，并且用上述或类似或相似的方法。获得的PDE3和PDE5抑制活性如下，并且(各自独立)或者用SPA分析或类似或相似的分析法，或适当改良的荧光偏振(FP)分析(s)或上文未具体描述的类似或相似分析法。在每次SPA和FP分析中，测量的绝对精确是不可能的，且给出的读数通常只精确到约土0.5对数单位，取决于读数的次数和均数的量<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>p^at:—些已知的PDE4抑制剂可不同程度导致呕吐和/或恶心，例如在全身暴露后(例如见Z.Huang等，CurrentOpinioninChemicalBiology(化学生物学的最新观点),2001,5:432-438，特别见其中433-434页和引用的文献)。因此，例如在外郜局部、口服或胃肠外(例如外部局部)给药后，如果本发明化合物将只导致有限或可控制的催吐副作用，其将是优选的，但这并非必需。催吐副作用可例如通过将所述化合物或盐给药于雪貂后出现呕吐的可能来判断；例如可判断本化合物或盐口服或胃肠外给药后雪貂呕吐的开始时间、程度、频率和/或持续时间，干呕和/或扭动。见例如下文的体内分析4，一种任选测量雪貂抗炎作用、催吐副作用和治疗指数(TI)的方法。还见例:lt口A_Robichaud等，"Emesisinducedbyinhibitorsof[PDEIV]intheferret(雪貂中由[PDEIV]抑制剂引起的呕吐)"，Neuropharmacology(神经药理学)，1999,38,289-297,神经药理学勘误表，2001,40,465-465。然而，任选地，通过监测本发明化合物或盐给予后大鼠的异食癖行为可方便地判断口服给药于大鼠后的催吐副作用和治疗指数(TI)(见下文体内分析2)。—些已知的PDE4抑制剂可导致其它副作用例如头痛和其它中枢神经系统(CNS-)介导的副作用；和/或胃肠(GI)道紊乱。因此，在一种或多种这些副作用种类中，如果本发明化合物或盐只导致有限或可控制的副作用，其将是优选的，但并非必需。其它任选的体外分析^(T,fl/,好,^这是任选的补充测试，例如用于可能口服给药的PDE4抑制剂。并且，正如分析测量蛋白结合丟失后PDE4抑制剂的作用，其也可与可外用局部给给药的PDE4抑制剂有关，因为在穿过皮肤时化合物的结合蛋白丢失是可能的。将测试化合物制备为约lOmMDMSO贮备液和一组8种连续稀释3倍的DMSO稀释液系列，这些稀释液或者直接用10mM贮备液或者用更多DMSO稀释液制备。用BiomekFx液体操纵自动机将化合物加入分析平板。将取自正常志愿者的肝素化血分配(约IO(HU-约100ul)入微量滴定平板孔内，孔内含约0.5或约l.O]il(ul,樣t升)适当稀释的测试化合物溶液。在约37。C、5%(:02中培养约1小时后，加入约25[il(约25ul)RPMI1640(含1%L-谷氨酰胺和1%青霉素/链霉素)的LPS(月旨多糖)溶液(S.typhosa)(最后约50ng/ml)。使样品在约37°C、5%C02培养约20小时，加入约10(Hil(约100ul)生理盐7jc(0.138。/oNaCl)，在约1300g离心约10分钟后用Platemate或BiomekFX液体操纵自动机收集稀释的血浆。用IGEN技术(见下文)通过电化学发光分析或通过酶联免疫吸附测定(ELISA)(见下文)确定血浆TNFa量。结果用上述或类似分析式(I)化合物在人全血中对TNF-a(TNF-alpha)产生的抑制pIC50=8.13(n=6)。^乂户皿CY,/v^jfe卓裙勿應》、浙(T,fl/兩W粉*这是任选的补充测试，例如用于可能吸入给药的PDE4抑制剂。将测试化合物制备为约10mMDMSOJ^备液和一组8种连续稀释3倍的DMSO系列稀释液，这些稀释液或者直接用10mM贮备液或者用更多DMSO稀释液制备。用BiomekFx液体操纵自动机将化合物加入分析平板。以约1000g在histopaque上将取自正常志愿者的肝素化Ajk离心约30分钟，制备PBMC细胞(外周血单核细胞)。收集界面细胞，离心冲洗(约1300g,约10分钟)并以lxlOS个细^ml再悬浮于测定緩冲液(RPMI1640，含10%胎牛血清、P/。L-谷氨酰胺和1%青霉素/链霉素)中。将约(约50ul)细胞加入含约0.5或约1.0^1(ul)适当稀释的化合物溶液的孩t量滴定孔内。加入约75^1(ul)LPS(最终约1ng/ml)并使样品在37。C、5%C02中培养20小时。除去上清液并用IGEN技术通过电化学发光分析或通过ELISA确定TNF浓度(见下文)。结果用上述或类似分析式(I)化合物在PBMCs中对TNF-a(TNF-alpha)产生的抑制pIC50=8.74(n=9)。将约50^1来自全血或PBMC分析平板的上清液移至96孔聚丙烯平板。各板还包含TNF-a标准曲线(约0至30000pg/ml:R+D系统,210-TA)。将约50nl(ul)抗生蛋白链菌素/生物素化的抗TNF-a抗体混令物、约25pl釕标记的抗TNF-a单克隆和约lOOpl含0.1%牛血清白蛋白的PBS加入各孔，密封平板并振荡约2小时，然后在IGEN仪器上读数。r，-a^XZSL4为、浙可根据制造厂家的说明书，用商业分析试剂盒(AMSBiotechnology,211-90-164-40)分析人TNF國a，但用PharmingenTNF-a(cat.No.555212)制备TNF-a标定曲线。体内生物学分析应将上述体外酶的PDE4B抑制分析或通用类似分析视为生物学活性的基本测试。然而，下文描述一些附加的体内生物学测试，它们是任选的且不是任何活性、有效性或副作用的基本测量标准，并且不一定必须实施。在#^#^:^猪模^^>#命炎^^^合#^;^丝,'发农扃卑^秀炎^W必合浙对二^T差戚多(2WF^)-渗,好禁il^藝超^C^接触性超敏反应的猪DTH(迟发型超敏反应)模型利用猪皮肤中Th2-介导的炎性反应模拟人特应性皮炎的病理学。该模型测定局部用于皮肤的化合物对阉割的雄性约克郡猪中急性DTH(迟发型超敏反应)可能的抗炎作用。通常在分析时，首先通过将约10%(w/v)溶于DMSO:丙酮:橄榄油(约1:5:3)(约40mgDNFB，合计400微升溶液)的二硝基氟苯(DNFB)局部给药于耳部(外部)和腹股沟(内部)使猪(馴养的约克郡猪，致^t时为15-18kg，阉割的雄性)致敏。接着其后12天将约0.6%(w/v)DNFB随意应用在剃刮过的猪背上(约90微克/点；用标记笔〗故出网格对位点进行确认和编号)以激发猪。在激发当天，治疗在激发前约2小时和激发后约6小时进行(对于DMSO/丙酮溶^/悬浮液，以最大暴露于药物)，或在激发后约30分钟和约6小时进行(对于局部软膏剂或霜剂，代表与临床更为相关的治疗方案)。在激发后1天(约24小时)，和再任选在激发后约48小时，通过测量最宽点的反应直径肉眼评估测试点红斑的强度和范围，对每个红斑强度和红斑范围设定0至4的评分。也对硬结(测量隆起)进行0至4的评分。根据以下标准对红斑强度、红斑范围和硬结进行评分ir逾强產0=正常，1=最低限度，几乎看不见，2=轻度，3=中度，4=重度。ir逾态厣(不隆起)0=无浮肿，1=斑点或针头大小，2-扁豆(lentil)大小的斑点，3=融合斑点，4=整个位点弥散。硬结(可触及的)0=正常，1=4十头大小的结节，2=柔软的扁豆大小的结节，3=融合的坚碌_结节，4=弥散的硬的损伤。在约24小时合计的肉目艮评分包括红斑强度、红斑范围和硬结各自的评分；因此各点最大的总分将是12。通常高总分可提示高度炎性反应。肉眼评分可有一些不准确/误差。计算在网格上邻近的对照(空白)与治疗点之间总分的差异。然后将该差值用于确定与对照(空白)点总分相比的抑制百分数。差值负数越大，计算的抑制越强。可计算总分均数的抑制百分数(比较的抑制百分数)。激发后约24小时，也可任选对治疗点的损伤面积进行肉眼评分。箅#^^^设#^^潜果.-将局部应用于皮肤的式(I)化合物("游离碱"形式)对阉割的雄性约克郡猪中急性DTH反应的抗炎作用，与另一种PDE4抑制剂西潘茶碱(BRL-61063)和局部免疫调节剂吡美莫司的抗炎作用进行比较。在上述分析中，式(I)化合物是局部给药的或者(A)在DNFB激发前约2小时和激发后约6小时给药，以约2.5%(w/v)浓度的约10%DMSO/90%丙酮溶液(约50微升或约1.5mg/点)；或(B)在DNFB激发后约30分钟和约6小时给药，以约0.5%(w/w)浓度在含丙二醇(PG)承的软膏剂中(约25mg制剂/点)。(*与式(1)化合物合用或可与之合用的PG软膏剂通常特别包含大致以下组分[%(w/w)]:约69-70%白矿脂、约5%矿物油、约5%聚氧乙烯硬脂醚(例如VolpoS2)和约20%丙二醇。见例如下文用于合适的软膏制剂的组合物实施例C1)。与安慰PG软膏剂相比，PG软膏剂中约0.5%(w/w)式(I)化合物抑制的平均总分为约13-14%(p<0.05，ANOVA)。与单独用溶媒相比，以约2.5。/。(w/v)的DMSO/丙酮溶液中给药的式(I)化合物平均总分减小约21%(p<0.05，ANOVA)。在比较中，以约2.5%(w/v)在DMSO/丙酮中的西潘茶碱和以约0.25%(w/w)在软膏剂中的西潘茶石威总分各自减小约8%和约6-7%(作用无统计学意义)，然而以P/o(w/w)霜剂制剂给药的吡美莫司抑制总分达约29n/o(p0.05,ANOVA)。而且，式(I)化合物加入DMSO/丙酮或PG软膏剂中给予皮肤时损伤面积减小(结果存在一些不准确H吴差)。这些结果证明当式(I)化合物以合适制剂局部给药于皮肤时，该化合物("游离碱"形式)在急性猪DTH(迟发型超敏反应)模型中可能的抗炎活性。沐^为、浙丄Z/^-渗寻^义虞单^^在勿^^^症.'PZ)J^弁新浙口應發秀好#>^肺中性粒细胞汇集被认为是肺病家族例如慢性阻塞性肺病(COPD)的重要部分，COPD可包括慢性支气管炎和/或肺气胂(G.F.Filley,ChesL2000;117(5);251s-260s)。这种中性粒细胞增多症模型的目的是研究口服给药的PDE4抑制剂对吸入雾化的脂多糖(LPS)诱发的中性粒细胞增多症可能的抗炎作用，模拟COPD的中性粒细胞炎性成分。见下节科学背景的文献。将重约300-400克的雄性路易鼠(CharlesRiver,Raleigh,NC,USA)用以下化合物之一预处理(a)测试化合物，例如悬浮于约0.5%曱基纤维素水溶液(购自Sigma-Aldrich,StLouis,MO,USA)或(b)只用溶媒，以约10ml/kg剂量体积口服给药。通常，例如可用以下大致剂量的PDE4抑制剂得到剂量反应曲线2.0、0.4、0.08、0.016和0.0032mg/kg。预处理后约30分钟，使大鼠暴露于雾化的LPS(用三氟乙酸提取制备的血清型E.Coli026:B6,购自Sigma-Aldrich,StLouis,MO,USA),其从含约100jxg/mlLPS溶液(约100ug/ml)的雾化器产生。使大鼠以约4L/min的速率暴露于LPS雾化液约20分钟。LPS暴露在闭合的室内进行，该室内部大小大致为45cm长x24cm宽x20cm高。雾化器和暴露室包含在合乎标准的通风橱内。LPS暴露后约4小时，用过量约90mg/kg戊巴比妥通过腹膜内给药使大鼠安乐死。通过进入暴露的气管的14计量圆针进行支气管肺泡灌洗(BAL)。收集5次5ml洗涤液得到合计25mlBAL液。为计算汇集入肺的中性粒细胞，对BAL液进行总细胞计数和白细胞分类。计算各剂量(cf.载体)的中性粒细胞抑制百分数，通常用PrismGraph-Pad得到可变斜率的、S形剂量-反应曲线。将剂量-反应曲线用于计算PDE4抑制剂抑制LPS一秀发的中性粒细胞增多症的ED50值(mg每kg体重)。脊^才法在该步骤的更简单的替代性实施方案中，将单一口服剂量的10mg/kg、或更通常1.0mg/kg或0.3mg/kgPDE4抑制剂(或溶媒)给药于大鼠，计算中性粒细胞抑制百分数并对具体剂量啦支出报告。X妖FilleyG.F.ComparisonofthestructuralandinflammatoryfeaturesofCOPDandasthma(COPD和哮喘结构和炎性特征的比较).Chest.2000;117(5)251s-260s。HowellRE,JenkinsLP,FieldingLE,和GrimesD.Inhibitionofantigen-inducedpulmonaryeosinophiliaandneutrophiliabyselectiveinhibitorsofphosphodiesterasetypes3and4inbrownNorwayrats(通过选择性抑制褐色挪威鼠3和4型磷酸二酯酶抑制抗原寸秀发的'肺嗜酸性粒细胞增多症和中性粒细胞增多症).PulmonaryPharmacology(肺药理学).1995;8:83-89。SpondJ,ChapmanR,FineJ,JonesH,KreutnerW,KungTT,MinnicozziM.ComparisonofPDE4inhibitors,RolipramandSB207499(ArifloTM),inaratmodelofpulmonaryneutrophilia(PDE4抑制剂(p各利普兰和SB207499(ArifloTM))在肺中性粒细胞增多症大鼠模型中的比较).PulmonaryPharmacologyandTherapeutics(肺药理和治疗学).2001;14:157-164。UnderwoodDC,OsbornRR,BochnowiczS,WebbEF,RiemaaDJ，LeeJC,RomanicAM,Adams几，HayDWP,和GriswoldDE.SB239063，ap38MAPKinhibitor,reducesneutrophilia,inflammatorycytokines,MMP-9,andfibrosisinlung(SB239063,—种p38MAPK抑制剂减轻中性粒细胞增多症、炎性细胞因子、MMP-9和肺纤维化).AmJPhysiolLungCellMolPhysiol.2000;279:L895誦L902。^吐^义篇^#;#>#型:选择性PDE4抑制剂被认为通过增加许多免疫细胞(例如淋巴细胞、单核细胞)的细胞内cAMP水平抑制多种体外和体内模型的炎症。然而，一些PDE4抑制剂在一些物种中的副作用是呕吐。因为许多大鼠炎症模型的特征是确定好的，所以可将它们用于步骤(见例如在上文的体内分析1中)中显示PDE4抑制剂的有益的抗炎作用。但是大鼠没有催吐反应(它们没有呕吐反射)，所以在大鼠中难以直接研究PDE4抑制剂有益的抗炎作用与呕吐之间的关系。然而，在1991年，Takeda等(见下节文献)证明在大鼠中异食癖反应类似于呕吐。异食癖是大鼠疾病的行为反应，其中大鼠吃无营养的物质例如土或特别是粘土(例如高岭土)，这可促进吸收毒素。异食癖可通过运动和化学药物(特别是引起人呕吐的化学药物)诱发，并可用抑制人呕吐的药物从药理学上抑制。在体内分析2中，大鼠异食辨模型可确定大鼠对PDE4抑制的异食癣反应水平，该PDE4抑制在相关药理学上平行于在(分离群)大鼠中的体内抗炎分析(例如上文的体内分析l)。在相同物种内一起分析抗炎和异食癖可提供本发明化合物/盐在大鼠中"治疗指数，，(TI)的数椐。大鼠TI可例如计算为以下两者的比率a)分析2中可能催吐的异食癖反应ED50剂量与b)大鼠抗炎ED50剂量(例如通过例如在体内分析1中的大鼠中性粒细胞增多症抑制测定)的比率，TI比率越大可能说明许多抗炎剂量的呕吐越少。这可允许选择无催吐或低催吐药用剂量的具有抗炎作用的本发明化合物或盐。然而要认识到获得低催吐PDE4抑制化合物不是本发明必需的。,凝在实验笫一天，将大鼠分别圏养在没有床层或"富集(enrichment)"的笼内。通过网筛使大鼠不能接触笼底。将含标准大鼠食物和粘土丸的预称重的食物杯放置于笼内。粘土丸(购自LangunaClayCo,CityofIndustry,C入USA)与食物丸的大小和外形相同。使大鼠适应粘土72小时，期间每天用电子天平(能够测量接近0.1克)称量来自笼内的杯和食物和粘土碎屑。在72小时适应期结束时，大鼠通常对粘土丸不感兴趣。在72小时结束时，将大鼠放置于清洁笼内并将食物杯称重。将仍规律食用粘土的大鼠从研究中剔除。在黑暗周期之前(其时动物是活跃的且应当正在进食)，立即将动物分为将本发明化合物/盐以一定剂量(不同剂量用于不同治疗组)口服给药的治疗组或仅用溶媒的口服给予组，剂量容积为约2ml/kg。在这种口服给药中，化合物/盐可例如釆用在约0.5%甲基纤维素(购自Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,USA)水溶液中的悬浮液形式。笫二天将食物和粘土杯和笼子碎屑称重，计算每只个体动物夜间消耗的总粘土和食物量。首先将数据转化为计数反应来计算剂量反应，其中动物对于异食癖反应既有阳性的也有阴性的。如果大鼠消耗粘土比其对照组均数大于或等于0.3克，那么该大鼠是"异食癣阳性的"。通常用Statistica软件统计软件包进行对数回归计算D50值。然后可计算每kg体重异食癖反应ED50值。可将异食癖反应ED50值与将相同化合物口服给药于大鼠的中性粒细胞增多症抑制ED50值(通过上文体内分析1测定)比较，以便这样计算大鼠中的治疗指数(TI):大鼠治疗指数(TI)(50/50)=异食癖反应ED50值大鼠中性粒细胞增多症抑制ED50通常，这样计算的治疗指数(TI)通常基本上不同于在雪貂中计算(见下文体内分析4)的TI(D20/D50),例如可通常基本上更高。或者，例如对于更简单的测试，体内分析2(异食癖)可只用单一口服剂量的测试化合物(例如10mg/kg口服)。X妖BeavoJA,Contini,M.,Heaslip,RJ.Multiplecyclicnucleotidephosphodiesterases(多重环核苦酸磷酸二酯酶).MolPharmacol.1994;46:399-405。SpondJ,ChapmanR,FineJ,JonesH,KreutnerW,KungTT,MinnicozziM.ComparisonofPDE4inhibitors,RolipramandSB207499(Ariflo),inaratmodelofpulmonaryneutrophilia(PDE4水卩制剂(p各利普兰和SB207499(ArifloTM)在肺中性粒细胞增多症大鼠模型中的比專交).PulmonaryPharmacologyandTherapeudtics(肺药理学和治疗学).2001;14:157-164。TakedaN,HasegawaS,MoritaM,和MatsunagaT.Picainratsisanalogoustoemesis:ananimalmodelinemesisresearch(大鼠异食捧类爿似于呕吐p区p土研究的动物才莫型).Pharmacology,BiochemistryandBehavior(药理学、生物化学和行为学).1991;45:817-821。TakedaN,HasegawaS,MoritaM,HoriiA,UnoA,YamatodaniA和.MatsunagaT.Neuropharmacologicalmechanismsofemesis.I.Effectsofantiemeticdrugsonmotion-andapomorphine-inducedpicainrats(p区吐的神经药理学机制.I.大鼠中止吐药对运动和阿朴吗啡诱发的异食癖的作用).MethFindExpClinPharmacol.1995;17(9)589-596。TakedaN,HasegawaS,MoritaM，HoriiA,UnoA,YamatodaniA和MatsunagaT.Neuropharmacologicalmechanismsofemesis.II.Effectsofantiemeticdrugsoncisplatin-inducedpicainrats(p区口土的3申纟至药理学机制.II.大鼠中止吐药对顺铂诱发的异食癖的作用).MethFindExpClinPharmacol.1995;17(9)647-652。琳^为Vf3.义篇尹i:/^谬Jt-^单尹^在勿應晳-症z斧/浙气#^發秀^#>^该分析是肺内炎症-特别是脂多糖(LPS)诱发的中性粒细胞增多症的动物模型，研究通过PDE4抑制剂气管内给药(i丄)对这样的中性粒细胞增多症的假定的抑制(抗炎作用)。PDE4抑制剂优选是干粉或湿悬浮液形式。气管内给药是一种吸入给药模型，以使局部给药至肺。訪參将雄性CD(来自SpragueDawley)大鼠(由CharlesRiver,Raleigh,NC,USA或CharlesRiver,UnitedKingdom提供俦笼5只大鼠分组圈养，分配后规律更换床层/巢层材料使其适应至少5天，用随意给予的丸状食物喂食SDS饮食Rl,每天更换提供的巴氏消毒动物级々大用水。干為V勢秀袭f:给药针和注射器之间用完即弃的3通塞子(tap)。将气管内给药装置(3通无菌塞子，Vycon876.00;或Pe皿Century干粉吸入器，DP-4)称重，然后将药物混合物或吸入级乳糖(媒介物对照)加入塞子，关闭塞子防止药物丟失，将塞子再称重以确定塞子内药物的重量。给药后，将塞子再称重以确定离开塞子的药物重量。给药针是带路厄针座的152mm(6英寸)长19-标准度量的SigmaZ21934-7注射器针,用工具将其切割至约132mm(5.2英寸)，制备圆钝的末端以免它们损伤大鼠气管，在给药前和后都将针称重以确定给药后无药物残留在针内。湿,者孕濕^發秀^^f:这类似于上述给药装置，但使用与针轴稍成角度的前端圆钝给药针，带可屈曲的塑料portex导管插入针内。使脂多糖(LPS)(血清型:0127:B8)溶于磷酸盐緩冲盐水(PBS)。优选使用例如根据本文给出的撰b盼化实施例的大小减小(例如微粉化的)形式的PDE4抑制剂。对于干粉药物的给药，可任选用含药物和吸入级乳糖的本文给出的干粉制剂实施例。可用的一种合适的吸入级乳糖具有10%精细度(通过Malvern粒度测量10%原料低于15um(15微米)粒度)。可通过将需要体积的媒介物加入药物中制备药物的湿悬浮液(水性);所用的媒介物可例如是单一盐水或盐水/吐温(例如0.2%吐温80)混合物。通常在使用前将湿悬浮液超声处理约IO分钟。斜务及^尸D"丼教W發^:通过将大鼠放置于密封的Perspex室内，并使其暴露于异氟烷(4.5%)、氧化亚氮(每分钟3L)和氧气(每分钟1L)的混合气体使动物麻醉。一旦动物被麻醉，即将其放于气管内给药的不锈钢支架台上。它们处于约35。角仰卧位。成角的光线对准咽喉出口以照亮气管。口张开且可见上气道开口。PDE4抑制剂的湿悬浮液和干粉给药的不同步骤如下湿產浮濕给秀通过已谨慎地插入大鼠气管内的圆钝金属给药针将portex导管引入。每个不同药物组都用新的内导管通过给药针将媒介物或PDE4抑制剂气管内给药于动物。用连接给药针的注射器将制剂緩慢(约10秒)给药于气管内。"f痴、發秀将气管内给药装置(三通无菌塞子装置,Vycon876.00;或PennCentury干粉吸入器,DP-4)和针插入大鼠气管上至预纟殳点，该点确定在位于笫一个分叉上约1cm。另一位操作者将针控制在指定位置，同时通过挤压注射器将2x4ml空气(用三通塞子装置)通过三通塞子输入(最好同时动物激发),目的是从塞子排出全部药物量。(或者，用PennCentury干粉吸入器装置输入2x3ml空气)。给药后，从气道移走针和塞子或装置，将塞子关闭以免任何剩余药物漏出塞子。经湿悬浮液或干粉给药后，将动物从台上移走并继续观察直至它们从麻醉效应中恢复。将动物放回原来的笼子并自由给予食物和水；观察它们并记录任何异常行为改变。虞處力丄尸&在媒介物对照或PDE4抑制剂气管内给药后约2小时，将大鼠放于密封的Perspex容器内，并暴露于LPS气雾剂(雾化浓度约150Hg.ml"=约150ug/ml)约15分钟。LPS气雾剂通过雾化器(DeVilbiss,USA)产生并引入Perspex暴露室内。在15分钟的LPS暴露期后，将动物放回原来的笼子并自由给予食物和水。[在替代性实施方案中，气管内给药后可将大鼠暴露于LPS少于2小时(例如约30分钟)。在另一个替代性实施方案中，媒介物或PDE4抑制剂气管内给药后可将大鼠暴露于LPS多于2小时(例如约4至约24小时)，以测试是否PDE4抑制剂具有长作用时间(其不是必需的)。]^气,^"滋渗遂在LPS暴露后约4小时通过过量戊巴比妥钠(i.p.)将动物处死。将聚丙烯管插入气管，用3x5ml肝素化(25单位/ml)磷酸盐緩冲盐水(PBS)灌洗(冲洗)肺。f遂在勿應^凝将支气管肺泡灌洗(BAL)样品以约1300rpm离心约7分钟。弃去上清液并将生成的细胞沉淀物悬浮于约1mlPBS中。通过将约10(Hil(约100ul)悬浮的BAL液》文入细胞离心涂片器，然后以约5000rpm旋转约5分钟，制备悬浮液体的细胞涂片。任由涂片风干，然后用Leishmans染剂染色(约20分钟)，进行分类细胞计数。也对悬浮液的总细胞进行计数。从这两个计数，得到BAL中的中性粒细胞的总数。为测量PDE4抑制剂引起的中性粒细胞增多症的抑制，将^!某介物处理的大鼠与PDE4抑制剂处理的大鼠的中性粒细胞计数进行比较。通过改变用于给药步骤的PDE4抑制剂的剂量(例如从每kg体重0.2或0.1mgPDE4抑制剂降至例如0.01mg/kg)，可产生剂量-效应曲线。傳^》、浙4.^估在，虔,裔尹户"￡^^斧/浙口麽發秀^^^措炎U腐以下原料可用于这些研究通过使PDE4抑制剂溶于固定体积(约1ml)丙酮，然后加入克列莫佛至约20%*积制备用于口服(p.o)的PDE4抑制剂。通过使氮气流吹过溶液使丙酮蒸发。一旦除去丙酮，用蒸馏水将溶液补足至终体积。使LPS溶于磷酸盐緩冲盐水。1.2絲运送雄性雪貂(MustelaPuloriusFuro,重1-2kg)并使其适应不少于7天。饮食包括任意给予SDS饮食C粒化食物，以及每周给予3次Whiskers顶猫食。提供给动物的是每天更换的巴氏消毒的动物级饮用水。1.3微才黄1.3丄给予PDE4抑制剂用约1ml/kg的剂量体积将PDE4抑制剂口服给药(p.o.)。雪貂被禁食过夜但允许随意喝水。用约15cm给药针将溶媒或PDE4抑制剂口服给药于动物，该给药针通过咽喉后部向下进入食管。给药后，动物被放回装备有Perspex门的笼子以便于观察，并可随意喝水。继续观察动物并记录任何催吐事件(干呕和呕吐)或行为改变。口服给药后约60-90分钟允许动物进食。1.3.2雀,fLPS化合物或媒介物对照口服给予后约30分钟，将雪貂放入密封的erspex容器内并暴露于LPS气雾剂(约30pg/ml=约30ug/ml)约10分钟。LPS气雾剂通过雾化器(DeVilbiss,USA)产生并引入Perspex暴露室。IO分钟暴露期后，动物被放回原来的笼子并允许自由喝水，稍后允许其进食。通常对动物的观察在口服给药后至少继续2.5小时的时间段。记录所有催吐事件和行为改变。1.3.3il气f^^遂渗遂和勿應^炎LPS暴露后约6小时，通过腹膜内给予过量戊巴比妥钠将动物处死。然后将聚丙烯管插入气管，并用约20ml肝素化(10单位/ml)磷酸盐緩冲盐7jc(PBS)灌洗肺两次。将支气管肺泡灌洗(BAL)样品以约1300rpm离心约7分钟。弃去上清液并将生成的细胞沉淀物再悬浮于约1mlPBS中。制备再悬浮液体的细胞涂片并用Leishmans染剂染色以进行分类细胞计数。用残留的再悬浮样品进行总细胞计数。通过这样，确定BAL样品中中性粒细胞总数。1.3.4秀放夢絲记录以下参数a)LPS诱发的肺中性粒细胞增多症抑制的。/0，以确定产生50%抑制的PDE4抑制剂的剂量(D50)。b)计算催吐事件-呕吐和干呕的次数，以确定产生20%呕吐发生率的PDE4抑制剂的剂量(D20)。c)然后用以下公式计算使用该分析的每种PDE4抑制剂的治疗指数(TI):雪貂治疗指数(TI)(D20/D50)=D20雪貂呕吐发生率D50雪貂中性粒细胞增多症的抑制注意用这种体内分析4计算的雪貂治疗指数(TI)(D^/DSO)通常基本上不同于用大鼠口炎症和异食癖分析1+2计算的大鼠TI(50/50),例如通常基本上低于后者。本说明书引用的所有出版物，包括但不限于专利和专利申请，都通过引用结合到本文中，正如每一个出版物具体和分别列出而通过引用结合到本文中一样。实施例现在将通过引用以下实施例描述本发明的不同方面。这些实施例只用于说明而不视为对本发明范围的限制。在本节中，"中间体"表示预期用于合成"实施例"化合物的中间体化合物的综合。"实施例，，通常是本发明的示例性化合物或盐，例如式(I)化合物或其盐。"组合物实施例，，是本发明药用組合物的非限制性示例。本文使用的缩写DCM二氯甲烷DIPEA二异丙基乙胺(iPr2NEt)DMF二曱基甲酰胺DMSO二甲基亚砜EDCl-(3-二曱基氨丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐EtOAc乙酸乙酯EtOH乙醇h小时HATU0-(7-氮杂苯并三唑-l-基)-N,N,N，,N，-四曱基脲镜六氟磷酸盐HC1盐酸或氬氯酸HOBT羟苯并三唑=1-羟苯并三唑M摩尔浓度，或每升摩尔数MeCN乙腈MeOH曱醇NaHC03碳酸氬钠NaOH氢氧化钠硫酸钠KOH氬氧化钾THF四氬吹喃HPLC高压液相色镨SPE固相提取NMR核磁共振(其中s-单峰，d-双峰，t-三峰，q-四峰,dd=双重双峰，111=多峰，bF宽峰，H-质子数LCMS液相色镨/质语TLC薄层色谱h小时TRET保留时间(通常来自LCMS)室(环境)温度通常范围是约20至约25匸。-通用实验细节本文常用的机器方法丄CMS(0^^悉谬/|谬为、郑以阳离子电喷射模式运行的WatersZQ质谱仪，质量范围100-1000amu。UV波长215-330nM柱3.3cmx4.6mmID,3pmABZ+PLUS流速3ml/min注射体积5^il溶剂A:95%乙腈+0.05%曱酸溶剂B:0.P/o曱酸+10mM乙酸铵梯度0%A/0.7min,0-100%A/3.5min,100%A/1.lmin，100-0%A/0.2min应当注意当样品在不同Waters机器上运行时，即使用相同类型柱和同一流速、注射体积、溶剂和梯度，此处举例的保留时间(TRET)也可能略有不同(+/-0.11^11.)。LCMS(0^初逸谬/#奢#浙」以阳离子电喷射模式运行的Agilent1100质谱仪，质量范围100-700amu。UV波长214-254nM柱2.1cmx50mmDO,5|timZorbax流速lml/min注射体积l^il溶剂A:水+0.02%三氟乙酸溶剂B:乙腈+0.018%三氟乙酸梯度10-80%A/3.0min,80%A/1.2min,80-10%A/1.OminUW定W々劍#//尸LC制备柱SupelcosilABZplus(10cmx2.12em)(通常10cmx2.12cmx5拜)UV波长200-320nM流速20ml/min注射体积1ml;或更优选0.5ml溶剂A:0.1°/。曱酸溶剂B:95%乙腈+5%曱酸；或更通常".95%乙腈+0.05%曱酸梯度100%A/lmin,100-80%A/9min，80-1%A/3.5min,1%A/1.4min,l曙100%A/0.1min々錄务G^o"^^/f」D丄Cf^于,滋辦7"制备柱YMCODS-A(50mmx50mm)UV波长215-254nM流速70ml/min注射体积3ml溶剂A:水溶剂B:乙腈梯度35-95%B/5min色谱纯化的手性柱ChiralPakAS可购自ChiralTechnologiesEuropeSari,Illkirch,法国(电话+33(0)388795200;([email protected];www.chiral.fr)。中间体和实施例下文未详细列出的试剂通常购自化学试剂供应商，例如确定的供应商例如Sigma-Aldrich。在下文的中间体和实施例或上文的分析中提及的一些原料供应商，或常用化学试剂供应商的地址和/或具体耳关系方式如下誦Aldrich(产品目录名)，Sigma-AldrichCompanyLtd.,Dorset,UnitedKingdom,电话+441202733114;传真+441202715460;[email protected];或-Aldrich(产品目录名)，Sigma-AldrichCorp.,P.O.Box14508，St.Louis,MO63178-9916,USA;电话314-771-5765;传真314-771-5757;[email protected];或-Aldrich(产品目录名)，Sigma-AldrichChemieGmbH,Munich，Germany;电话+498965130;传真+498965131169;[email protected]，Inc.,8301TorresdaleAve.,19C，Philadelphia,PA19136,USA-FlukaChemieAG,Industriestrasse25,P.O.Box260,CH-9471Buchs,Switzerland-LancasterSynthesisLtd.,Newgate,WhiteLund,Morecambe,LancashireLA33DY,UnitedKingdom-TransWorldChemicals,Inc.,14674SouthlawnLane,Rockville,MD20850,USA中间体列表中间体号名称<table>tableseeoriginaldocumentpage77</column></row><table>中间体l:4-氯-1-乙基-lH-吡唑并3，4-bl吡咬-5-羧酸乙酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage77</formula>在氮气下，将5-氨基-l-乙基吡唑(806g)(例如购自Aldrich)和乙氧基亚曱基丙二酸二乙酯(1621ml)(例如购自Aldrich)的混合物在装配有Dean-Stark装置的5升烧瓶内搅拌并在160。C加热l.5小时。将反应混合物馏出的乙醇(320ml)收集在Dean-Stark装置中。在氮气下，将反应混合物在16(TC再搅拌和加热6小时，冷却至室温后分为2批(1200ml+1000ml:"批l"和"批2")。将第一批(1200ml)("批l")大致分为两等份。每部分都加入磷酰氯(1.85升)。然后将反应混合物在两个5升烧瓶内加热至回流13小时。从两个烧瓶内减压馏出过剩磷酰氯。将残留物冷却至室温，然后将两个烧瓶的内容物緩慢倾倒至一部分(10kg)碎冰上。将混合物搅拌15分钟，然后用乙醚(3x2.5升)提取。用水(2升)和盐水(2x2升)冲洗合并的有机物，用Na2S04干燥。蒸发溶剂得到粗制的中间体l(865g)，为褐色油，其冷却后立即固化。用3.1升磷酰氯通过相同步骤制备来自"批2"的固体，另外710g粗制中间体1,即将合计1575g粗制中间体1离析为固体。边搅拌边加热至50。C使该固体(430g)溶于己烷(4.3升，即10体积)。加入活性炭(64.5g)。将混合物在50。C搅拌1.0小时，然后通过硅藻土床过滤。用己烷(2x430ml)沖洗硅藻土床。将合并的滤液和洗出液浓缩至约950ml并保持在10-15。C过夜。将生成的悬浮液过滤。将残留固体用冷冻己烷(3x215ml淤浆洗剂，加2x400ml置换洗剂)冲洗，干燥得到中间体l(280g),为淡黄色固体。将合并的母液和洗出液浓缩至约300ml,然后冷却并保持在10-15。C过夜，得到另外30g中间体l。LCMS显示MH+=254;TRET=3.09min。中间体2:4-(H[(l，l-二甲基乙基)^Sl絲)-4-旅咬基)絲l-l-乙基-1及-吡唑并[3，4-61吡咬-5-羧酸乙酯将中间体1(0.5g,2mmo1)、4-氨基-l-哌啶羧酸1,1-二曱基乙基酯(0.59g,2.9mmo1)(例如购自AstaTech)和DIPEA(0.87ml,5mmo1,2.5当量)在MeCN(15ml)中的溶液加热至回流18小时。冷却反应混合物。减压除去溶剂，将残留物在DCM(50ml)与饱和NaHC03溶液(40ml)之间分配。通过疏水玻璃料收集有机流分并减压浓缩。使残留物通过100g二氧化硅滤筒纯化，用0%至100%EtOAc的环己烷梯度液作为洗脱液，减压浓缩含产物的流分得到中间体2(0.74g),为固体。LCMS显示MH+=418;TRET=3.43min。夢/七遂任遂合成将中间体1(2.3g)和4-氨基-l-哌啶羧酸l，l-二曱基乙基酯(2g)在MeCN(50ml)和DIPEA(8.6ml)(任选还包括约1.5-2mlEtOH)中的溶液加热，例如在85。C或9(TC加热16小时。减压除去溶剂，将残留物在DCM(例如约65ml)与水(例如约30ml)之间分配。通过疏水玻璃料收集有机流分，减压除去溶剂得到中间体2。中间体3:1-乙基-4-(4-哌咬基^)-lH-吡唑并3，4-b吡咬-5-羧酸乙酯盐酸盐在1,4-二氧六环(30ml)中用4.0M盐酸处理中间体2(4.1g)，将反应混合物在22。C搅拌1小时。除去溶剂得到中间体3(4.0g),为白色固体。LCMS显示Mir-318;TRET-2.1min。中间体4:4-{[1-(氨絲)-4-哌妙絲}-1-乙基-lH-吡唑并[3，4-b吡咬-5-羧酸乙酯将中间体3(4g)在THF(100ml)中的悬浮液先后用DIPEA(2.6ml)和异氰酸三甲基甲硅烷基酯(1.99ml，1.7g)处理，并将溶液在22。C搅拌2小时。减压除去挥发性溶剂，将残留物在DCM(例如50ml)与水(例如25ml)之间分配。分离有机和水层。用DCM(例如50ml)提取水相。合并有机层，使其通过疏水玻璃料从而与水分离，减压浓缩得到中间体4(4g),为固体。1^1^8显示画+=361;1^7=2.45111(11。中间体5:4-{[1-(氨羰基)-4-哌咬基1絲}-1-乙基-lH-吡唑并3，4-W吡咬-S画羧酸将中间体4(4g)的EtOH溶液(50ml)用NaOH(1.77g)的水溶液(20ml)处理，将反应混合物在6(TC加热5小时。除去溶剂，使残留物溶于水(约8ml)，将pH调节至3(2MHCl),将生成的沉淀物过滤收集并在60。C真空干燥。LCMS表明哌啶脲已部分水解为哌啶。因此，使反应沉淀物溶于EtOH(100ml)，用异氰酸三甲基曱硅烷基酯(3ml)和DIPEA(10ml)处理溶液，然后在室温搅拌过夜。除去溶剂，将7jc加入残留物，将pH调节至3(2MHCl)，使混合物冷却至0。C30分钟，将生成的沉淀物过滤收集并干燥，得到中间体5(2.66g),为白色固体。LCMS显示MH+=333;TRET=2.0min。中间体6:4-氯-l-乙基-lfT-吡唑并[3，4-b吡咬-5-羧酸将中间体1(20.0g，78.8mmol)的1,4-二氧六环溶液(100ml)用KOH(18g小片)的水溶液(30ml)处理，将反应混合物在室温搅拌24小时。蒸发溶剂并使残留物酸化至pH3(2M盐酸)。将生成的白色沉淀物过滤收集并真空干燥过夜，得到中间体6(16.9g),为白色固体。LCMS显示MH+=226;T虹t=2.61min。中间体7:4-氯-1-乙基-lH-吡唑并[3，4-b吡咬-5-羰酰氯在氮气下，将中间体6(17.8g,78.8mmol)的亚硫酰氯(SOCl2,100ml)溶液加热至回流3.5小时。任由溶液冷却至室温过夜。真空除去亚硫酰氯，通过与曱苯(约30ml)的共沸蒸馏作用在真空中除去任何剩余的亚磅u酰氯，重复进行以除去亚辟u酰氯，得到中间体7(16.86g)，为米色固体。LCMS(在MeOH中，因此是甲基酉旨)显示MH+=240(曱酯的MH+);TRET=2.88min。中间体8:4-氯-N-[(3，4-二甲基苯基)甲基H-乙基-lH-吡唑并[3，4-b吡咬-5-甲耽胺将中间体7(6g)和DIPEA(3.17g)在THF(60ml)中的溶液搅拌20分钟。将三分之一等份生成的溶液加入3,4-二曱基-苄胺(l.llg)(例如购自TransWorldChemicals)。在室温和氮气下将反应混合物搅拌24小时，同时加入更多THF(20ml)以溶解反应物。真空除去溶剂，将残留物在DCM(50ml)与5。/。枸橼酸溶液(50ml)之间分配。用疏水玻璃料将有机层分离，用0.5MNaHCO3溶液(50ml)沖洗，干燥(Na2S04)、过滤并真空浓缩得到中间体8(2.39g),为白色粉末。LCMS显示MH+=343;1^=3.3411^11。中间体9:[l-(氨n)-4-旅^l氩基甲酸l，l-二甲基乙基酯用异氰酸三甲基曱硅烷基酯(Uml,0.86g)处理1，1-二甲基乙基4-哌啶基氨基甲酸酯(0.35g)(例如购自AstaTech)的DCM(10ml)溶液。在室温将反应混合物搅拌8小时，然后保持在室温l周。将混合物用DCM(10ml)稀释并用饱和NaHCO3溶液(20ml)冲洗。将有机相分离并通过疏水玻璃料收集。用DCM提取水相。合并有机相并蒸发干燥，得到中间体9(0.29g)，为白色泡沫。WNMR(400MHz在CDCl3中，27。C,5ppm)4.45(br.s,3H),3.90(d,2H),3.65(br.m,1H),2.9-3.0(dt,2H),1.95-2.0(br.dd,2H),1.45(s,9H)，1.3-1.4(dq,2H)。中间体10:4-M-l-哌啶曱跣胺盐酸盐用4M盐酸在1，4-二氧六环(5ml)中的溶液处理中间体9(0.29g),并在室温搅拌4小时。将反应混合物蒸发干燥，并与DCM共蒸发得到白色泡沫。将该泡沫用乙醚和小量(几滴)MeOH研磨，将生成的白色固体滤出并抽吸干燥，得到中间体10(0.27g,存在杂质)，为白色固体。WNMR(400MHz在d6-DMSO中，27°C,5ppm)8.1(br.s,2H),3.95(d,2H),3.15(m,IH),2.7(dt,2H),1.85(dd,2H),1.35(m,2H);存在杂质。中间体2A:4-[(1-{(1，1-二甲基乙基)氧基絲}-4-哌^)絲1-1-乙基-l及-吡唑并[3，4-6吡咬-5-羧酸乙酯将中间体1(25g)的MeCN(565ml)溶液用固体4-氨基-l-哌啶羧酸1,l-二曱基乙基酯(21.7g)和DIPEA(93.4ml,69.3g)处理。将反应混合物在9(TC加热16小时。冷却反应混合物后，减压除去溶剂并将残留物在DCM(1100ml)与水(800ml)之间分配。将有机流分干燥(MgS04)、过滤并减压除去溶剂。对残留物进行快速柱色语(3:1己烷/EtOAc)得到中间体2A(39.54g)，为黄色固体。1>0^3显示固+=418;1^7=(s，1H),4.49(q,Hz,2H),4,35(q,/-7.16Hz,2H),3.95-4.11(m,3H)，3.18(t,Hz，2H),2.10-2.20(brd,2H),1.62-1.73(m,2H),1.47-1.53(m，l之H),1.41(t,/=7,07Hz,3.H)，中间体3A:1-乙基-4-(4-旅咬基絲)-l及-吡唑并[3，4-6j吡吱-5-羧酸乙酯盐酸盐将中间体2A(39.54g)用1，4-二氧六环(300ml)中的4MHC1处理，在室温搅拌反应混合物1小时。除去溶剂，使残留物在真空中过夜，得到中间体3A(34.21g,仍存在一些二氧六环；除二氧六环外，NMR理论上为33.5g),为白色固体。LCMS显示MH+=318;TRET=1.90min。1HNMR(400MHz，DMSO^)SPP边9.33(d,>8.08Hz,1H),9.21(brs,1H)，9.10(brs,1H),8.74(s,1H),8.44(s,1H),4,43"声7.20Hz,2H),4.32(q,/=7.093Hz,2H),3.20—3.35(m4H),2.23(4^=11.62Hz,2H),1.76-1.S7(m,2H),1.38(q,>7.20Hz,3H),1.34(q,J-7.09Hz,3H).中间体4A:4-{[1-(氨絲)-4-哌狄1絲}-1-乙基-LRT-吡唑并[3，4-6吡咬-5-羧酸乙酯3.13min。lHNMR(400MHz,氯仿-c/)5ppm9.44(U-ZMHz,1H)，8.89(s,1HI),7.94<formula>formulaseeoriginaldocumentpage83</formula>将中间体3A(除二氧六环外，存在的理论上为33.5g)在THF(880ml)中的悬浮液先后用异氰酸三曱基曱硅烷基酯(17.5ml，14.9g)和DIPEA(22.6ml,16.8g)处理，在室温将溶液搅拌5小时。LCMS表明只形成小量产物，所以加入更多DEPEA(22.6ml),将混合物再搅拌24小时。减压除去THF。使残留物溶于/稀释于DCM(1000ml)中，用盐水(200ml)冲洗，干燥(MgS04)并减压蒸发，得到的残留物LCMS显示含少量产物。使残留物溶于DCM(1000ml),先后用异氰酸三曱基甲硅烷基酯(17.5ml)和DEPEA(22.6ml)处理，在室温将溶液搅拌48小时。再次先后加入异氰酸三曱基曱硅烷基酯(17.5ml，14.9g)和DIPEA(22.6ml,16.8g),在室温将溶液再搅拌48小时。减压除去挥发性溶剂，使残留物溶于DCM(600ml)并用盐水(2x200ml)冲洗。将有机层干燥(MgS04)，过滤并减压浓缩。将固体残留物在乙醚(1000ml)中搅拌2小时直至粉化，过滤收集得到中间体4A(24.56g),为淡黄色固体。LCMS显示MH+=361;TRET=2.19min.熔点=126-127°C。IHNMR(400MHz,氯仿-力(s，1H),4.65(s,2H),4.50(q，>7.24取2H),4.35(q,Hz,2H),4.1—4.2(m,1H),3.87-3.93(m,2H),3.26(ddd>13.58,10.17，3,03Hz,2H),2.16-2.23(m，2H),1.70-1,80(m,2H),1.51(t,/=^7.24Hz,3H),1.41&Hz,3H).中间体4B:4-{[1-(氨羰基)-4-旅咬基]#^}-1-乙基-lH-吡唑并3，4-bl吡咬-5-羧酸乙酯将l-乙基-4-(4-旅吱基氨基)-lH-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-羧酸乙酯盐酸盐(13g,36.77mmo1)(例如中间体3)在DCM(300ml)中的悬浮液先后用异氰酸三甲基曱硅烷基酯(Sg)和DIPEA(10ml)处理，并在22。C搅5ppm9.48(d，>7.83Hz，1H),8.卯(s,1H)，7.95拌3小时。用水稀释混合物，使有机层通过疏水玻璃料使其从水层分离，从有机层除去溶剂得到中间体4B(10g)。LCMS显示MH+=361;Tret=2.6min。中间体5A:4-{1-(氨羰基)-4-哌咬基乙基-l及-吡唑并[3，4-W吡咬-5-羧酸将中间体4A(24.26g)在EtOH(360ml)和水(120ml)中的溶液用氬氧化锂一水合物(llg)处理，在室温将反应混合物搅拌过夜。减压除去EtOH。将lNHCl水溶液(300ml)加入残留物，用水浴将生成的沉淀物冷却l小时，过滤收集，用冷水冲洗，在真空水提取器中干燥过夜，然后减压下在60。C真空干燥箱中再次干燥过夜，得到中间体5A(22.4g),为白色固体。1^]^3显示固+=333;丁]^7=1.23111^1.熔点=204-206。C。1HNMR(400MH:^DMSO-^)8ppm9.50(d,>8.08Hz1H),8.69(s,1H),8,25(s,1H),6.04(brs,2H),4.37"/-7.20取2H),4.14-4.24(叫1H),3.80(d>13.64取2H)，3.15(t，>10.86Hz,2H)，1.96-2.03(叫2H)，1.39-1.47(m,2H),1,37(t,^7,20Hz，3H).实施例实施例1:4画{[1-(氨羰基)-4-哌錄#^}-1\-(3，4-二甲基苯基)甲基-1-乙基-l及-吡唑并[3,4-6吡咬-5-甲StJ^将中间体5(100mg,0.3mmol)在干DMF(例如可为约lml)中的溶液用EDC(63mg,0.33mmol)、HOBT(45mg,0.33mmol)和DIPEA(0.13ml,0.75mmol)处理。IO分钟后，加入3,4-二曱基-千胺(47微升，0.33謹ol)(例如可购自TransWorldChemicalsInc.),使生成的溶液保持在室温过夜。蒸发除去DMF,将残留物在DCM与饱和NaHC03水溶液之间分配。通过疏水玻璃料收集有机层并真空浓缩至干燥。将残留物通过20g二氧化硅SPE滤筒纯化，首先用EtOAc和环己烷的梯度(EtOAc浓度增加)，然后以不连续梯度EtOAc和甲醇为洗脱液。使产物在含4:1EtOAc:MeOH的流分中洗脱。真空除去溶剂得到白色固体(lOlmg)。NMR显示存在EtOAc和DCM,所以将固体在40。C真空干燥得到实施例1(80mg)。LCMS显示MH+=450;TRET=2.80min。!HNMR(400MHz在d6-DMSO中，27°C,5ppm)9.9(d，IH)，8,93(t，1H),8.61(s,1H),8.19(s,1H),about7.08(s，1H),7.07(dIH)，7.021H),5.98(s,2H),4.33-4.39(m,4H)，4.08-4.18(brm,IH)，3.75魄2H)，3.13(t夂3H),2.19(s，3H),2.18(s，3H),1.92-2,00(叫2H),1.33-1.42(m5JH).加上一些其它的峰可能是溶剂。类似的替代方法是将中间体5(0.066mmol)在DMF(lml)中的溶液用EDC(0.066mmol)、HOBT(0.066mmol)和DIPEA(0.151mmol)然后用3，4-二曱基节胺(0.066mmol)处理。将反应混合物保持在22°C16小时。蒸发DMF,将残留物在DCM(5ml)与饱和NaHC037jc溶液(2ml)之间分配。通过疏水玻璃料收集有机层并蒸发。将残留物通过质量指定的自制备HPLC纯化得到标题化合物。实施例1A:4-([l-(氨醋)-4-哌咬基絲)-N-l(3，4-二甲基苯基)甲基-l-乙基-Lff-，，比唑并[3,4-61吡咬-5-甲酰胺将中间体8(27mg，0.08mmo1)、中间体10(16mg,0.088腿ol)和DEPEA(35微升，0.2mmol)在MeCN(2ml)中的混合物加热至回流18小时。加入更多中间体10(0.5摩尔当量，约0.04mmo1,约7mg)。将反应混合物再加热至回流24小时，冷却至室温并真空除去溶剂。将残留物在DCM与水之间分配。通过疏水玻璃料收集有机相并蒸发干燥。LCMS表明有两种相同分子量的产物。因此，将残留物通过质量指定的自制备HPLC纯化得到标题化合物，为实施例1A(4.4mg);LCMS显示MH+=450且Tret=2.79min。其它分子量与实施例1A相同的不需要的产物也从质量指定的自制备HPLC离析(0.6mg);对于该化合物LCMS显示MH+=450且Tr^=2.69min。实施例1B:4-{1-(氨絲)-4-哌組1絲}-5-{[(3，4-二甲基苯基)甲基氨絲}-1-乙基-l及-吡唑并[3,4-W吡啶将中间体5A(21.6g)在DMF(300ml)中的溶液用3,4-二曱基千胺(9.71ml,9.23g)、HOBT(9.66g)和DIPEA(25ml,18.5g)处理，然后用EDC(14.1g)处理。在室温将反应混合物搅拌过夜。在40。C减压蒸发DMF，将残留物在EtOAc(300ml)与水(200ml)之间分配。分离有机层，用EtOAc(2x100ml)提取7jc相。将合并的有机提取物用盐水(200ml)沖洗，干燥(MgSO》、过滤并减压蒸发。将残留物通过快速柱色谱在硅胶(1500ml)上纯化，用95:5DCM/MeOH作为洗脱溶剂。将最纯的流分收集并减压蒸发。使残留物溶于EtOAc(500ml),用1NNaOH溶液(100ml)冲洗，干燥(MgS04)、过滤、蒸发，并将残留物在60'C真空干燥箱中干燥过夜，得到标题化合物(12.5g),为淡黄色固体。将快速柱色语的其余流分收集并通过自制备HPLC(Gilson反相HPLC，溶剂A为水，溶剂B为乙腈，详见上文)纯化。将含产物的水-乙腈流分(UV检测)合并，减压除去乙腈溶剂。从残留物倾析剩余的水，将残留物蒸发干燥。收集固体并用乙醚冲洗得到标题化合物(6g),为淡黄色固体。将两批产物合并，使其溶于MeOH并减压蒸发得到标题化合物实施例1B,为淡黄色固体。LCMS显示Mir-450;TRET-2.45min.熔点=152-154。C。1HNMR(400MHz,DMSO-<f6)Sppm10.01(dHz,1H),8.97(t,/-5.81Hz,1H),8.63(s，1H),8.21(s,1H),7.02-7.10(叫3H),6.01(brs,2H),4.34-4,42(叫4H),4.10-4,20(迈，1H),3.71-3.81(m2H),3.14(t,>10.74Hz，2H)，2.20(s,3H),2.18(s,3H),1.92-2.02(叫2H),1.35-1.45(迈,5H).加上乙醚引起的峰。实施例2:4-{[1-(氨羰基)-4-旅妙1絲}-5-{(3，4-二甲基苯基)甲基氨絲)-l-乙基-l及-吡唑并[3，4-W吡啶盐酸盐将实施例IB(15mg)在MeOH(0.5ml)中的溶液用IN盐酸的乙醚(10ml)溶液处理。蒸发混合物得到标题化合物(16mg)，为白色固体。熔点=217-218匸(分解)。1HNMR(400MHz,DMSO-rf6)5ppm10.84(s,1H),9.48(s,1H),8.77(s,1H),8,46(s，1H)，7.05-7.14(m，3H)，about6.0-6.6(brs,2H)，4.53(q>7,12Hz,2H)，4.40(d,>5.56Hz,2H)，4.27(^brs，1H)，3.76(d,/-13.64Hz,2H),3.13-3.23(tJ-10.95Hz,2H)，2.21(s,3H),2.19(s,3H),1.94-2.03(迈,2H)'1.44-1.53(迈,2H),1.40(t，J-7.17Hz,3H).药用组合物实施例和微粉化实施例适合外部局部给药的药用组合物实施例组合物实施例C1、C1A和C1B(软骨剂)适合外部局部给药的示例性软膏剂药用组合物如下:成分(+优选的功能实施例CI:替代性实施例替代性实施例规范*)成分浓度CIA:成分浓CIB:浓度范(%w/w)度(％w/w)围(％w/w)式(I)化合物活性剂PDE4抑0.50.50.1至3%(例("药物")(为游制剂.如0.2至1.5%)离碱)白矿脂(白软蜡傲膏基质69.6569.1625至75%(例石蜡)(例如如45至75%)USP)矿物油(例如增溶剂/软化剂4.9752.5至15%(例USP或BP)如4至12%)聚氧乙烯硬脂表面活性剂4.9750.5至10%(例醚(例如Volpo如3至10%)S-2)丙二醇(例io增溶剂/渗透增19.90200.5至50%(例USP)强剂如5至50%或7至30%)丁幾茴醚(例抗氧化剂00.200%,或0.001如NF或BP)至2%(例如0.02至2%)对幾苯甲酸甲防腐剂00.110%,或0.05酯(例如NF)至2%对幾笨甲酸丙防腐剂00.030%,或0.01酯(例如NF)至2%合计100100*NF=国家配方手册；USP=美国药典；BP=英国药典组合物实施例Cl可通过以卞方法制备将白矿脂(白软石蜡)(140g)、矿物油(10g)和聚氧乙烯石更脂醚(例如VolpoS-2TM)(10g)混合在一起，用热水浴熔化直至所有成分都溶解形成油相。将油相加热至约65-70°C。用热水浴将丙二醇(40g)加热至约65-70。C温度，然后在低匀化搅拌条件(Polytron巨轴)下将其緩慢加入油相。然后增加勾化并将混合物匀化10分钟。将生成的制剂冷却至室温，用冷水浴加速冷却，得到软膏制剂(约200g)。在热水浴中緩慢加热管形瓶内约5g软膏制剂，直至软膏达到约40-45。C温度。将式(I)化合物("药物"，游离碱形式,25.3mg)緩慢加入管形瓶内，用微量匀化器将生成的混合物匀化约IO分钟，得到含药物的软膏剂(组合物实施例Cl)。在软膏剂中药物通常部分在悬浮液中。组合物实施例C1A(和/或替代性组合物实施例C1B)可通过以下方法制备首先通过制备丙二醇相制备软膏制剂。用低切螺旋桨混令器搅拌，将丙二醇与适量药物混合得到起始溶液。抗氧化剂和防腐剂也包括在丙二醇溶液内。将丙二醇溶液的温度保持在约55-65°C。同时，将所有油相成分(白矿脂，聚氧乙烯石^J旨醚和矿物油)加入单独的容器内，加热至约75-85。C以熔化和混合各成分。在保持温度在70°C以上(例如从70。C以上至90'C,例如约75-85。C)的同时，将丙二醇相加入油相内，用高切匀浆器混合最少15分钟(例如15-60分钟或15-30分钟)。乳化方法可在常规局部制备装置中进行，例如LeeKettle或Malt-Mat，该装置允许在乳化各相的同时刮除管形瓶壁上的原料。在至少15分钟的乳化时间后，将产物冷却至约3(TC,形成(半固化)软膏乳剂。在冷却方法中，减慢匀浆器速度，用低速搅拌。产物已经冷却后，生成软膏剂(组合物实施例C1A或C1B)，将其从制备管分配入贮存容器内。然后可按需将其填充入管、药嚢或其它合适的包装成分内。组合物实施例C2和C2A(油包水骨状乳剂)呈油包水膏状乳剂的示例性外用局部药用组合物如下:成分(+优选的规范NF=国家配方手册；USP-美国药典，等)功能实施例C2:成分浓度(％w/w)替代性实施例C2A:浓度范围(％w/w)式(I)化合物(为游离磁)活性0.50.1至3%("药物，，)(例如0.2至1.5%)白矿脂(例如USP)蜡傲膏基质41.3425至75%(例如30至65%)矿物油(例如USP或BP)增溶剂/软化剂102.5至15%(例如4至12%)聚氧乙烯硬脂醚表面活性剂80.5至12%(例如3至10%)丙二醇USP增溶剂/增强剂200.5至50%(例如5至50%)丁羟茴醚(例如NF或抗氧化剂0.020.001至2%BP)(例如0.02至2%)对雍苯甲酸甲S旨(例如防腐剂0.110.05至2%NF)对羟苯甲酸丙酯(例如防腐剂0.030.01至2%NF)纯水(例如USP)载体Qs(20%)2至30%(例如5至25%)合计100组合物实施例C2(和/或替代性实施方案实施例C2A)可例如用类似于组合物实施例Cl描述的方法制备。例如，在一种实施方案方法中，可将水和丙二醇(任选包括表面活性剂、抗氧化剂和防腐剂，且任选包括药物)混合在一起形成水相。在单独容器内.制备含白矿脂和矿物油的油相。水和油相的温度都保持在提高的温度，例如约55-90。C或优选约[从70以上至90]°C,油相温度足够高以便熔化油相，在仍热时将一相加入另一相，同时用高切混合器混合以完成乳化，优选保持温度在70°C以上例如从70以上至90。C。将最后的乳剂冷却至例如约18-35'C例如约3(TC,同时继续低速搅拌。然后可将软膏剂从制备管内分配并填充入初级包装内，例如管或药嚢。组合物实施例C3和C3A(水包油骨状乳剂)呈水包油膏状乳剂、并预期是高度吸收组合物的示例性外用局部药用组合物如下成分(+任选的规范)功能实施例C3:成分浓度(％w/w)替代性实施例C3A:浓度范围(％w/w)式(I)化合物(为游离活性0.50.1至3%(例如0.2碱)("药物")至1.5%)矿物油(例如USP)增溶剂/^M匕剂32.515至50%(例如20至45%)二甲聚硅氧烷软化剂2.50.5至20%(例如1(SiliconeFluid360)(例至5%)如NF)肉豆蔻酸异丙酯(例如增溶剂7.50.5至20%(例如3NF)至12%)单硬脂酸甘油酯(例如表面活性剂20.5至10%她cel165)脱水山梨糖醇单硬脂表面活性剂10.05至10%酸酯(例如Span60)十八醇十六醇混合物表面活性剂20.1至15%(例如1(例如NF)至10%)微晶蜡(Ross)(例如软化剂/基质105至25%(例如8NF)至15%)丙二醇(例如USP)增溶剂/增强剂100.5至50%(例如7至25%)枸橼酸，水合颗粒(例緩冲剂0.050.05至5%如USP)磷酸钠，二元的(例如緩冲液0.060.05至5%USP)咪脲(Germall115防腐剂0.200.05至2%^)(例如NF)纯水(例如USP)载体3215至60°/。(例如20至50%)组合物实施例C3(和/或替代性实施方案实施例C3A)可例如用一般类似于上文组合物实施例C2描述的方法制备。组合物实施例C4(骨状乳剂)<table>tableseeoriginaldocumentpage95</column></row><table>步骤无药物的软骨基质在约60-70。C温度的热水浴中使合并的油相成分熔化还用约60-70。C温度的热水浴将合并的水相成分加热。然后在低匀化条件下将水相緩慢加入油相，然后在水浴低热下以更高速匀化约10分钟。停止加热后，用手持刮勺搅拌制剂，任其冷却至室温，得到膏状乳剂。含药物的霜剂作为上述步骤的改进，在将7jc相加热至约60-70。C之后和加入油相之前，将式(I)化合物以0.1%至3%w/w或0.2%至1.5%w/w(例如0.5。/。w/w)加入预成形的热水相。然后，在低勻化条件下将水相緩慢加入油相，然后在水浴低热下高速勻化约IO分钟。停止加热后，搅拌(例如用手持刮勺)制剂，任其冷却，直至达到约18-35。C或约18-3(TC(例如3(TC或室温)，得到膏状乳剂(组合物实施例C4)。组合物实施例C5、C6、C7、C8、C9、C10和Cll(软骨剂组合物)示例性软骨剂可如下<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table>实施例C7成分任选的成分实施例C8成分任选的成<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage97</column></row><table>任选的批量大小约100g组合物实施例C5、C6、C7、C8、C9、C10和Cll(软骨基质)的步骤在约60-70。C温度热水浴中使油相熔化。也在约60-70。C温度热水浴中将亲水(丙二醇)相加热。在低匀化条件下将亲水相變隄加入油相，然后在水浴低热下高速匀化约IO分钟。停止加热后，用手持刮勺搅拌制剂，任其冷却至室温，得到软膏剂。组合物实施例C5、C6、C7、C8、C9、C10和Cll(含药物的软骨剂)的步骤作为上述步骤的改进，在将亲水(丙二醇)相加热至约60-70。C温度之后和加入油相之前，将式(I)化合物以0.1%至3%w/w或0.2%至1.:5o/ow/w(例如0.5。/()w/w)加入预成形的热亲水相中。然后，在低匀化^f牛下将亲7jc相緩慢加入油相，接着在水浴低热下高速匀化约10分钟。停止加热后，搅拌制剂(例如用手持刮勺)使其冷却至约15-35。C或约18-30。C(例如至约3(TC或室温)，得到软膏剂(组合物实施例C5、C6、C7、C8、C9、ClO和Cll)。微粉化实施例*目的用JetpharmaMCl超微粉粉碎机使例如约600-1000mg的式(I)化合物农i粉化。*用激光衍射和PXRD分析原始(未微粉化的)和微粉化原料的粒度和结晶度。絲和絲i殳备/材料种类和gJetpharmaMCl超微粉粉氮供应带275psi速率管道的压缩空气碎机分析天平顶部装料天平数字测径器将被孩t粉化的原料瓶Sartorius分析MettlerPM400VWR电子测径器式(I)化合物JetpharmaMCl超微粉粉碎机包含一个水平盘状研磨外壳，其具有用于输入未孩i粉化的式(I)化合物或盐在气流中的悬浮物的管状化合物入口(例如与水平线成约30度角，用于气体进入的单独气体入口，用于气体排出的气体出口，以及用于收集孩t粉化原料的收集瓶(微粉容器)。研磨外壳具有两个室(a)与气体入口连接的外側环状气体室，该室用于接收加压气体(例如空气或氮气)，和(b)包含在外室内且与其同轴的盘状内研磨室，用于使输入的化合物/盐微粉化，两个室由环状壁分开。环状壁(环R)上具有大量细芯孔，连接内和外室，并围绕环状壁成圓周状分开。向内室开口的孔是成角定向的(在i文射状与切向之间半途定向(directedpart-way)),用作将加压气体以高速从外室喷向内室的喷嘴，且位于围绕内室(旋风器)的内螺旋状通道(inwardly-spiralpath)(旋涡)内。化合物入口通过切向指向内室的喷嘴与内室进行气体交流，位于环状壁/环R之内或在其附近。在内研磨室中轴上的上和下宽径出口连接于(a)(下出口)无气体出口的收集瓶，和(b)(上出口)气体出口。放置在管状化合物入口内且与其同轴并可在其中纵向移动的是用于气体进入的文丘里入口(V)。化合物入口还具有一个连接于向上的原料入口的分叉，用于输入原料。使用时，优选将文丘里入口(V)的细头放置于原料入口以下且稍微向前，以便当文丘里输送加压气体(例如空气或氮气)时，进料通过化合物入口从原料入口被吸入气流，并以亚声速切向加速进入内研磨室。在研磨室内，原料通过围绕研磨室的环(R)(环状壁)的孑L/喷嘴系统被进一步加速至超声速。使喷嘴稍樣i成角度，以^^、料的加速形式是形成向内的旋涡或旋风。在此方法中研磨室内的原料快速循环和发生孩M立碰撞，使较大孩M立碎裂为较小孩"立。旋涡中"离心"的加速导致较大耀啦保留在内室外周，而越小微粒越靠近中心，直至它们排出研磨室，通常以低压和低速通过低出口。排出研磨室的'樣"立比空气重，通过低出口沉降入收集瓶(孩t粉容器)，而废气上升(与少量微粉化原料的小微粒一起)并以低压和低速排入大气中。,嚴,装配超樣i粉粉碎机。将文丘里入口的细头放置于原料入口下方并稍孩t向前，用孩史测径器测量以确保正确插入。通过调整超孩M分粉碎机压力计上的值，根据实验设计(例如参考下文实验部分)指定的值调整环(R)和文丘里(V)压力。通过观察压力计读数是否有任何波动检查装备有无泄露。注意保持文丘里(V)压力比环(R)压力高至少2bar,以免原料反流，例如从原料入口反流。用校准砝码检查天平性能。用刮勺将指定量原始材料输入超微粉粉碎机的输入容器。将加有原料的输入容器称重。在微粉化方法中监测设备压力。完成微粉化操作后，关闭氮气供应并任由微粉化原料沉降入微粉容器内。将微粉容器(收集管)和旋风器(回收管上方)中的微粉化粉末一起收集入预称重和标记的收集瓶内。记录獨:粉化原料的重量。将输入容器再称重，由差值计算输入原料的量。拆卸超微粉粉碎机，用70/30异丙醇/水沖洗超微粉粉碎机内表面上残留的PDE4化合物，将其收集入烧瓶内。在进行下次操作前将超孩t粉粉碎机在Lancer洗涤机中彻底清洁和干燥。任逸W微錄原始(未微粉化的)材料(步骤1):式(I)化合物天平Sartorius分析天平步騍编号原料输入文丘里压力(vy预期输入进料所需时实际进率量(g)环(R)压力(bar)率间(min+sec)(g/min)1约0.9gV-8至10bar180至200步骤未实R=5.5至6barmg/min施用技术人员的知识可改变上述任选的参数。%产率=[(来自容器的原料+来自旋风器的原料y原料输入量]xioo步骤i包括可能的参数和条件，并尚未实施。可吸入的组合物实施例干粉制剂实施例-干粉乳糖混合制剂用粒度减小例如微粉化形式的式(I)化合物或其盐(例如任选如上述孩M分化实施例中制备)，通过使需要量的化合物/盐(例如10mg,1%w/w)与含10%精细度(例如990mg,99%w/w)的吸入级乳糖在Teflon(聚四氟乙烯)蚶埚内在Mikro-dismembrator球磨机(但不包括滚珠轴承)中以3/4速度(约2000-2500rpm)，以各自混合浓度混合约4小时制备干4分混合4勿。Mikro-dismembrator(购自B.BraunBiotechInternational,SchwarzenbergerWeg73-79,D-34212Melsungen,Germany;www.bbraunbiotech.com)包含具有向上伸出和可向侧面振动的臂的基底，其连接于TeflonW坩埚。臂的振动完成混合。其它混合物10%w/w化合物/盐(50mg)+90%w/w乳糖(450mg,含10%精细度的吸入级乳糖)。系列稀释1%w/w混合物可得到例如0.1%和0.3%w/w混合物。权利要求1.4-{[1-(氨羰基)-4-哌啶基]氨基}-N-[(3，4-二甲基苯基)甲基]-1-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酰胺或其盐。全文摘要本发明提供4-{[1-(氨羰基)-4-哌啶基]氨基}-N-[(3，4-二甲基苯基)甲基]-1-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酰胺，其为式(I)化合物或其盐。本发明还提供所述化合物或其药学上可接受的盐作为IV型磷酸二酯酶(PDE4)抑制剂的用途，例如治疗和/或预防哺乳动物的炎性和/或变应性疾病、认知缺损或抑郁。特别是，本发明提供所述化合物或其药学上可接受的盐在治疗和/或预防哺乳动物的特应性皮炎中的用途，例如通过外部局部给药于哺乳动物例如人。还提供特别适合外部局部给药的含所述化合物或盐的药用组合物。文档编号A61K31/437GK101268078SQ200580015276公开日2008年9月17日申请日期2005年3月15日优先权日2004年3月16日发明者A·P·萨雅尼,C·D·埃德林,C·M·库克,L·特罗特特,M·K·林德瓦尔,M·R·约翰逊,N·特里维迪,P·S·琼斯,S·B·克里斯坦森四世申请人:葛兰素集团有限公司

2010-2011专利技术

最新回复(0)