人参次苷提取物及制备方法
专利名称：人参次苷提取物及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物及其制备，特别涉及人参次苷提取物及其制备。
背景技术：
人参次苷H为人参皂苷类成分经碱催化水解产生的次级皂苷，再经硅胶柱层析精 制所得到的有效部位-H组皂苷，其主要组分为人参皂苷他1、Rh2和他3，其中他2为该药 的主要成分，也是该药的主要抗癌活性成分。药效学研究表明人参皂苷他2对肝癌、黑色 素瘤B16、宫颈癌及肉瘤S180等癌细胞的增殖有显著的特异性的抑制作用。其作用机理为 在癌细胞增殖过程中，经人参皂苷他2作用，使癌细胞停止在一定的增殖期，并促使其逆转 为正常细胞。含有人参皂苷Mil、Mi2和他3的H组皂苷，为“人参次苷H”，体外实验研究发 现人参次苷H对多种人源肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用。现有技术分离人参次苷H的效果不佳，有效成分收率低，副产物多，难以工业化生 产。本发明人在对人参次苷提取物进行研究过程中，采用新的分离技术，试验出一组新的人 参次苷提取物及其制备方法，解决了工业化生产问题。
发明内容
本发明提供一种人参次苷H提取物，其中，含人参总次苷以人参皂苷他2计不少于 80%，其中，含人参皂苷Mi1和人参皂苷Mi2的总和不少于50%。本发明的人参次苷H提取物，其中，含人参皂苷Iih1的范围为1_20%，含人参皂苷 Rh2的范围为20-60% ο优选的，本发明的人参次苷H提取物，含人参总次苷以人参皂苷Mi2计不少于 60%，含人参皂苷Iih1和人参皂苷Mi2的总和不少于35%。优选的本发明的人参次苷H提取物，其中，含人参皂苷Iih1的范围为1_15%，含人 参皂苷Rh2的范围为10-45%。本发明的人参次苷H提取物，是人参皂苷类成分经水解而成的次级苷，其制备方 法包括以下步骤步骤1、含有人参皂苷类成分的药材，用水提取，得提取液，步骤2、提取液通过大孔吸附树脂柱，洗脱，收集洗脱液，步骤3、洗脱液浓缩干燥；得总皂苷，步骤4、总皂苷加碱在溶剂中加热降解，得到降解产物，步骤5、降解产物用硅胶柱层析，洗脱，收集洗脱液，步骤6、浓缩干燥洗脱液；得本发明的人参次苷H提取物；本发明的制备方法，其中，步骤1中所述含有人参皂苷类成分的药材选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、 人参或人参叶或其它含有人参皂苷类成分的药材，优选为西洋参叶。步骤2中所述的大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，优选DlOl型大孔吸附树脂，AB-8大孔吸附树脂。步骤3中所述干燥选自真空干燥、烘干，喷雾干燥。步骤4中所述碱选自氢氧化钠，氢氧化钾，碳酸钠，碳酸氢钠等碱性物质。所述溶剂选自甘油，丙三醇，丙二醇，乙醇，丙醇，异丙醇等，优选甘油，所述加热为将混合液加热到100-400°C ；优选200-300°C，其中总皂苷碱溶剂的投料比为1-2 1-2 3-10，优选1 1 6，步骤5、洗脱剂选自醋酸乙酯，乙醇，甲醇，氯仿，丙酮或他们的混合物，其体积比例 为15-1 1，优选醋酸乙酯，乙醇的混合物，其体积比例为15-5 1，优选9 1，碱降解物 与层析硅胶的比例为1 5-10，优选1 7。步骤6、所述干燥选自真空干燥，烘干，喷雾干燥，冷冻干燥。本发明最优选的制备方法在本发明实施例中。本发明还提供本发明的人参次苷H提取物的质量检测方法，其中包括鉴别，检 查，含量测定等步骤所述鉴别是对本发明的提取物根据其理化性质，用物理或化学方法鉴别其中的活 性成分的存在。鉴别方法包括的步骤如下(1)取本品约IOmg,加冰醋酸0. 5ml使溶解，加醋酐0. 5ml与硫酸0. 5ml,即显红色。(2)取人参次苷H提取物，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为供试品溶液；另 取人参皂苷Mi1、人参皂苷Mi2对照品适量，分别加甲醇制成每Iml含3mg的溶液，作为对照 品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各5 μ 1， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(8 2 0.2)为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。所述检查是对产品中需要限定其含量的有关成分进行检查，以确保产品的质量， 检查包括的步骤如下1、水分，取本品0.5g，60°C减压干燥至恒重，减失重量不得过5.0% (中国药典 2005版一部附录IXH第三法)。2、炽灼残渣，取本品lg，依法检查(中国药典2005版一部附录IXJ)，不得过 0. 5%。3、重金属，取炽灼残渣项下的残渣，依法检查(中国药典2005版一部附录IXE第 二法)，含重金属不得过百万分之十。4、砷盐，取本品lg，加氢氧化钙0. 5g与水anl，搅勻，先用小火炽灼使炭化，再在 500 600°C炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，依法检查(中国药典2005 版一部附录IXF第一法)，含砷量不得过百万分之二。5、特征峰，在含量测定供试品溶液色谱图中，以人参皂苷他2色谱峰作为参照峰， 按其相对保留时间计，含有7个特征峰1(0. 30士0. 04)，2(0. 57士0. 04),3(0. 97士0. 02)， 4 (S) ,5(1. 02 士 0. 02)，6(1. 20 士 0. 05)，7(1. 34 士 0. 05)。所述含量测定是对产品中要求保证含量的主要活性成分进行含量测定，以保证产 品质量，含量测定的步骤如下
1、人参总次苷对照品溶液的制备精密称取经40°C减压干燥M小时的人参皂苷Mi2对照品适量， 加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备精密称取人参次苷H提取物10mg，用50ml正丁醇饱和的水超 声5分钟后转移至分液漏斗，加入2g氯化钠溶解后，用正丁醇乙酸乙酯溶液(水饱和的正 丁醇-乙酸乙酯1 4)萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯层溶液，浓缩至干，残渣 用甲醇溶解，定量转移至50ml量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即得。测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置15ml具塞试管中，水浴 蒸干，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸(1 4)混合溶液anl，摇勻，密塞，置 60°C水浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸IOml，摇勻，以 试剂作空白。照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在550nm的波长处测定吸 收度，计算，即得。本品按干燥品计算，含人参总次苷以人参皂苷Iih2计，不得少于80. 0%。2、人参皂苷Mi1、人参皂苷Mi2照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录 VID)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动相 A，以0. 2%磷酸溶液为流动相B，按下列梯度进行洗脱；检测波长为203nm，理论板数按人参 皂苷Iih2峰计算应不低于7000。
权利要求
1.一种人参次苷H提取物，其特征在于，提取物中含人参总次苷以人参皂苷他2计不少 于80 %，其中，含人参皂苷Iih1和人参皂苷Mi2的总和不少于50 %，含人参皂苷Iih1的范围 为1-20%，含人参皂苷Rh2的范围为20-60%。
2.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，含人参总次苷以人参皂苷Mi2计不 少于60%，含人参皂苷Iih1和人参皂苷Iih2的总和不少于35%，含人参皂苷Iih1的范围为 1-10%，含人参皂苷Rh2的范围为25-45%。
3.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，制备方法如下 步骤1、含有人参皂苷类成分的药材，用水提取，得提取液，步骤2、提取液通过大孔吸附树脂柱，洗脱，收集洗脱液， 步骤3、洗脱液浓缩干燥，得总皂苷， 步骤4、总皂苷加碱在溶剂中加热降解，得到降解产物， 步骤5、降解产物用硅胶柱层析，洗脱，收集洗脱液， 步骤6、浓缩干燥洗脱液，得本发明的人参次苷H提取物。
4.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，制备方法如下 其中，步骤1中所述含有人参皂苷类成分的药材选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参 或人参叶或其它含有人参皂苷类成分的药材，步骤2中所述的大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，步骤3中所述干燥选自真空干燥，烘干，喷雾干燥，步骤4中所述碱选自氢氧化钠，氢氧化钾，碳酸钠，碳酸氢钠等，所述溶剂选自甘油，丙三醇，丙二醇，乙醇，丙醇，异丙醇，所述加热为将混合液加热到100-400°C，其中总皂苷碱溶剂的投料比为1-2 1-2 3-10，步骤5、洗脱剂选自醋酸乙酯，乙醇，甲醇，氯仿，丙酮或他们的混合物，其体积比例为 15-1 1，碱降解物与层析硅胶的比例为1 5-10，步骤6、所述干燥选自真空干燥，烘干，喷雾干燥，冷冻干燥。
5.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，制备方法如下 其中，步骤1中所述含有人参皂苷类成分的药材选自西洋参叶； 步骤2中所述的大孔吸附树脂为DlOl型大孔吸附树脂或AB-8大孔吸附树脂； 步骤4中所述碱选自氢氧化钠；所述溶剂选自甘油；所述加热为将混合液加热到 200-3000C ；其中总皂苷碱溶剂的投料比为1:1:6;步骤5、洗脱剂选自醋酸乙酯，乙醇的混合物，其体积比例为9 1，碱降解物与层析硅 胶的比例为1 7。
6.权利要求1的人参次苷H提取物的检测方法，其特征在于，包括鉴别，检查，含量测 定的步骤其中鉴别方法包括的步骤如下(1)取人参次苷H提取物约10mg，加冰醋酸0. 5ml使溶解，加醋酐0. 5ml与硫酸0. 5ml， 即显红色，(2)取人参次苷H提取物，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为供试品溶液；另取人 参皂苷Mi1、人参皂苷Mi2对照品适量，分别加甲醇制成每Iml含3mg的溶液，作为对照品溶 液，照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各5 μ 1，分别点 于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(8 2 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷 以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应 的位置上，显相同颜色的斑点，其中检查包括的步骤如下/1、水分，取本品0.5g，60°C减压干燥至恒重，减失重量不得过5. 0% (中国药典2005版 一部附录IXH第三法)，/2、炽灼残渣，取本品lg，依法检查(中国药典2005版一部附录IXJ)，不得过0.5%，/3、重金属，取炽灼残渣项下的残渣，依法检查(中国药典2005版一部附录IXE第二 法)，含重金属不得过百万分之十，/4、砷盐，取本品lg，加氢氧化钙0.5g与水anl，搅勻，先用小火炽灼使炭化，再在500 600°C炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，依法检查(中国药典2005版一 部附录IXF第一法)，含砷量不得过百万分之二，/5、特征峰，在含量测定供试品溶液色谱图中，以人参皂苷Iih2色谱峰作为参照峰，按其 相对保留时间计，含有 7 个特征峰1(0. 30 士 0. 04)，2(0. 57 士 0. 04),3(0. 97 士 0. 02), 4 (S)， 5(1. 02士0. 02) ,6(1. 20士0. 05) ,7(1. 34士0. 05)，其中含量测定的步骤如下/1、人参总次苷对照品溶液的制备精密称取经40°C减压干燥M小时的人参皂苷Mi2对照品适量，加甲 醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液，供试品溶液的制备精密称取人参次苷H提取物10mg，用50ml正丁醇饱和的水超声5 分钟后转移至分液漏斗，加入2g氯化钠溶解后，用正丁醇乙酸乙酯溶液(水饱和的正丁 醇-乙酸乙酯1 4)萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯层溶液，浓缩至干，残渣用 甲醇溶解，定量转移至50ml量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即得，测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置15ml具塞试管中，水浴蒸干， 精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸(1 4)混合溶液anl，摇勻，密塞，置60°C水 浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸IOml，摇勻，以试剂作 空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在550nm的波长处测定吸收度，计 算，即得，本品按干燥品计算，含人参总次苷以人参皂苷Mi2计，不得少于80. 0%，/2、人参皂苷Mi1、人参皂苷Mi2照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID) 测定，色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A， 以0. 2%磷酸溶液为流动相B，按下列梯度进行洗脱；检测波长为203nm，理论板数按人参皂 苷Mi2峰计算应不低于7000，
7.含权利要求1的人参次苷H提取物的药物组合物。
8.权利要求7的药物组合物，是滴丸制剂。
9.权利要求8的药物组合物，所述滴丸制剂的配方为人参次苷H提取物2-5g，辅料 0. l-5g, PEG10-40g,制成 1000 粒。
10.权利要求1的人参次苷H提取物和权力要求7的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种中药提取物及其制备，特别涉及人参次苷提取物及其制备。本发明的提取物中含人参总次苷以人参皂苷Rh2计不少于80％，其中含人参皂苷Rh1和人参皂苷Rh2的总和不少于50％，含人参皂苷Rh1的范围为1-20％，含人参皂苷Rh2的范围为20-60％。
文档编号A61K31/704GK102058642SQ200910228458
公开日2011年5月18日 申请日期2009年11月17日 优先权日2009年11月17日
发明者周水平, 宋兆辉, 张兰兰, 朱永宏, 林万里, 蔡楠, 黄芝娟 申请人:天津天士力制药股份有限公司
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物及其制备，特别涉及人参次苷提取物及其制备。
背景技术：
人参次苷H为人参皂苷类成分经碱催化水解产生的次级皂苷，再经硅胶柱层析精 制所得到的有效部位-H组皂苷，其主要组分为人参皂苷他1、Rh2和他3，其中他2为该药 的主要成分，也是该药的主要抗癌活性成分。药效学研究表明人参皂苷他2对肝癌、黑色 素瘤B16、宫颈癌及肉瘤S180等癌细胞的增殖有显著的特异性的抑制作用。其作用机理为 在癌细胞增殖过程中，经人参皂苷他2作用，使癌细胞停止在一定的增殖期，并促使其逆转 为正常细胞。含有人参皂苷Mil、Mi2和他3的H组皂苷，为“人参次苷H”，体外实验研究发 现人参次苷H对多种人源肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用。现有技术分离人参次苷H的效果不佳，有效成分收率低，副产物多，难以工业化生 产。本发明人在对人参次苷提取物进行研究过程中，采用新的分离技术，试验出一组新的人 参次苷提取物及其制备方法，解决了工业化生产问题。
发明内容
本发明提供一种人参次苷H提取物，其中，含人参总次苷以人参皂苷他2计不少于 80%，其中，含人参皂苷Mi1和人参皂苷Mi2的总和不少于50%。本发明的人参次苷H提取物，其中，含人参皂苷Iih1的范围为1_20%，含人参皂苷 Rh2的范围为20-60% ο优选的，本发明的人参次苷H提取物，含人参总次苷以人参皂苷Mi2计不少于 60%，含人参皂苷Iih1和人参皂苷Mi2的总和不少于35%。优选的本发明的人参次苷H提取物，其中，含人参皂苷Iih1的范围为1_15%，含人 参皂苷Rh2的范围为10-45%。本发明的人参次苷H提取物，是人参皂苷类成分经水解而成的次级苷，其制备方 法包括以下步骤步骤1、含有人参皂苷类成分的药材，用水提取，得提取液，步骤2、提取液通过大孔吸附树脂柱，洗脱，收集洗脱液，步骤3、洗脱液浓缩干燥；得总皂苷，步骤4、总皂苷加碱在溶剂中加热降解，得到降解产物，步骤5、降解产物用硅胶柱层析，洗脱，收集洗脱液，步骤6、浓缩干燥洗脱液；得本发明的人参次苷H提取物；本发明的制备方法，其中，步骤1中所述含有人参皂苷类成分的药材选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、 人参或人参叶或其它含有人参皂苷类成分的药材，优选为西洋参叶。步骤2中所述的大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，优选DlOl型大孔吸附树脂，AB-8大孔吸附树脂。步骤3中所述干燥选自真空干燥、烘干，喷雾干燥。步骤4中所述碱选自氢氧化钠，氢氧化钾，碳酸钠，碳酸氢钠等碱性物质。所述溶剂选自甘油，丙三醇，丙二醇，乙醇，丙醇，异丙醇等，优选甘油，所述加热为将混合液加热到100-400°C ；优选200-300°C，其中总皂苷碱溶剂的投料比为1-2 1-2 3-10，优选1 1 6，步骤5、洗脱剂选自醋酸乙酯，乙醇，甲醇，氯仿，丙酮或他们的混合物，其体积比例 为15-1 1，优选醋酸乙酯，乙醇的混合物，其体积比例为15-5 1，优选9 1，碱降解物 与层析硅胶的比例为1 5-10，优选1 7。步骤6、所述干燥选自真空干燥，烘干，喷雾干燥，冷冻干燥。本发明最优选的制备方法在本发明实施例中。本发明还提供本发明的人参次苷H提取物的质量检测方法，其中包括鉴别，检 查，含量测定等步骤所述鉴别是对本发明的提取物根据其理化性质，用物理或化学方法鉴别其中的活 性成分的存在。鉴别方法包括的步骤如下(1)取本品约IOmg,加冰醋酸0. 5ml使溶解，加醋酐0. 5ml与硫酸0. 5ml,即显红色。(2)取人参次苷H提取物，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为供试品溶液；另 取人参皂苷Mi1、人参皂苷Mi2对照品适量，分别加甲醇制成每Iml含3mg的溶液，作为对照 品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各5 μ 1， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(8 2 0.2)为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。所述检查是对产品中需要限定其含量的有关成分进行检查，以确保产品的质量， 检查包括的步骤如下1、水分，取本品0.5g，60°C减压干燥至恒重，减失重量不得过5.0% (中国药典 2005版一部附录IXH第三法)。2、炽灼残渣，取本品lg，依法检查(中国药典2005版一部附录IXJ)，不得过 0. 5%。3、重金属，取炽灼残渣项下的残渣，依法检查(中国药典2005版一部附录IXE第 二法)，含重金属不得过百万分之十。4、砷盐，取本品lg，加氢氧化钙0. 5g与水anl，搅勻，先用小火炽灼使炭化，再在 500 600°C炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，依法检查(中国药典2005 版一部附录IXF第一法)，含砷量不得过百万分之二。5、特征峰，在含量测定供试品溶液色谱图中，以人参皂苷他2色谱峰作为参照峰， 按其相对保留时间计，含有7个特征峰1(0. 30士0. 04)，2(0. 57士0. 04),3(0. 97士0. 02)， 4 (S) ,5(1. 02 士 0. 02)，6(1. 20 士 0. 05)，7(1. 34 士 0. 05)。所述含量测定是对产品中要求保证含量的主要活性成分进行含量测定，以保证产 品质量，含量测定的步骤如下
1、人参总次苷对照品溶液的制备精密称取经40°C减压干燥M小时的人参皂苷Mi2对照品适量， 加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备精密称取人参次苷H提取物10mg，用50ml正丁醇饱和的水超 声5分钟后转移至分液漏斗，加入2g氯化钠溶解后，用正丁醇乙酸乙酯溶液(水饱和的正 丁醇-乙酸乙酯1 4)萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯层溶液，浓缩至干，残渣 用甲醇溶解，定量转移至50ml量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即得。测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置15ml具塞试管中，水浴 蒸干，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸(1 4)混合溶液anl，摇勻，密塞，置 60°C水浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸IOml，摇勻，以 试剂作空白。照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在550nm的波长处测定吸 收度，计算，即得。本品按干燥品计算，含人参总次苷以人参皂苷Iih2计，不得少于80. 0%。2、人参皂苷Mi1、人参皂苷Mi2照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录 VID)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动相 A，以0. 2%磷酸溶液为流动相B，按下列梯度进行洗脱；检测波长为203nm，理论板数按人参 皂苷Iih2峰计算应不低于7000。
权利要求
1.一种人参次苷H提取物，其特征在于，提取物中含人参总次苷以人参皂苷他2计不少 于80 %，其中，含人参皂苷Iih1和人参皂苷Mi2的总和不少于50 %，含人参皂苷Iih1的范围 为1-20%，含人参皂苷Rh2的范围为20-60%。
2.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，含人参总次苷以人参皂苷Mi2计不 少于60%，含人参皂苷Iih1和人参皂苷Iih2的总和不少于35%，含人参皂苷Iih1的范围为 1-10%，含人参皂苷Rh2的范围为25-45%。
3.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，制备方法如下 步骤1、含有人参皂苷类成分的药材，用水提取，得提取液，步骤2、提取液通过大孔吸附树脂柱，洗脱，收集洗脱液， 步骤3、洗脱液浓缩干燥，得总皂苷， 步骤4、总皂苷加碱在溶剂中加热降解，得到降解产物， 步骤5、降解产物用硅胶柱层析，洗脱，收集洗脱液， 步骤6、浓缩干燥洗脱液，得本发明的人参次苷H提取物。
4.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，制备方法如下 其中，步骤1中所述含有人参皂苷类成分的药材选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参 或人参叶或其它含有人参皂苷类成分的药材，步骤2中所述的大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，步骤3中所述干燥选自真空干燥，烘干，喷雾干燥，步骤4中所述碱选自氢氧化钠，氢氧化钾，碳酸钠，碳酸氢钠等，所述溶剂选自甘油，丙三醇，丙二醇，乙醇，丙醇，异丙醇，所述加热为将混合液加热到100-400°C，其中总皂苷碱溶剂的投料比为1-2 1-2 3-10，步骤5、洗脱剂选自醋酸乙酯，乙醇，甲醇，氯仿，丙酮或他们的混合物，其体积比例为 15-1 1，碱降解物与层析硅胶的比例为1 5-10，步骤6、所述干燥选自真空干燥，烘干，喷雾干燥，冷冻干燥。
5.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，制备方法如下 其中，步骤1中所述含有人参皂苷类成分的药材选自西洋参叶； 步骤2中所述的大孔吸附树脂为DlOl型大孔吸附树脂或AB-8大孔吸附树脂； 步骤4中所述碱选自氢氧化钠；所述溶剂选自甘油；所述加热为将混合液加热到 200-3000C ；其中总皂苷碱溶剂的投料比为1:1:6;步骤5、洗脱剂选自醋酸乙酯，乙醇的混合物，其体积比例为9 1，碱降解物与层析硅 胶的比例为1 7。
6.权利要求1的人参次苷H提取物的检测方法，其特征在于，包括鉴别，检查，含量测 定的步骤其中鉴别方法包括的步骤如下(1)取人参次苷H提取物约10mg，加冰醋酸0. 5ml使溶解，加醋酐0. 5ml与硫酸0. 5ml， 即显红色，(2)取人参次苷H提取物，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为供试品溶液；另取人 参皂苷Mi1、人参皂苷Mi2对照品适量，分别加甲醇制成每Iml含3mg的溶液，作为对照品溶 液，照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各5 μ 1，分别点 于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(8 2 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷 以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应 的位置上，显相同颜色的斑点，其中检查包括的步骤如下/1、水分，取本品0.5g，60°C减压干燥至恒重，减失重量不得过5. 0% (中国药典2005版 一部附录IXH第三法)，/2、炽灼残渣，取本品lg，依法检查(中国药典2005版一部附录IXJ)，不得过0.5%，/3、重金属，取炽灼残渣项下的残渣，依法检查(中国药典2005版一部附录IXE第二 法)，含重金属不得过百万分之十，/4、砷盐，取本品lg，加氢氧化钙0.5g与水anl，搅勻，先用小火炽灼使炭化，再在500 600°C炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，依法检查(中国药典2005版一 部附录IXF第一法)，含砷量不得过百万分之二，/5、特征峰，在含量测定供试品溶液色谱图中，以人参皂苷Iih2色谱峰作为参照峰，按其 相对保留时间计，含有 7 个特征峰1(0. 30 士 0. 04)，2(0. 57 士 0. 04),3(0. 97 士 0. 02), 4 (S)， 5(1. 02士0. 02) ,6(1. 20士0. 05) ,7(1. 34士0. 05)，其中含量测定的步骤如下/1、人参总次苷对照品溶液的制备精密称取经40°C减压干燥M小时的人参皂苷Mi2对照品适量，加甲 醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液，供试品溶液的制备精密称取人参次苷H提取物10mg，用50ml正丁醇饱和的水超声5 分钟后转移至分液漏斗，加入2g氯化钠溶解后，用正丁醇乙酸乙酯溶液(水饱和的正丁 醇-乙酸乙酯1 4)萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯层溶液，浓缩至干，残渣用 甲醇溶解，定量转移至50ml量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即得，测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置15ml具塞试管中，水浴蒸干， 精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸(1 4)混合溶液anl，摇勻，密塞，置60°C水 浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸IOml，摇勻，以试剂作 空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在550nm的波长处测定吸收度，计 算，即得，本品按干燥品计算，含人参总次苷以人参皂苷Mi2计，不得少于80. 0%，/2、人参皂苷Mi1、人参皂苷Mi2照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID) 测定，色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A， 以0. 2%磷酸溶液为流动相B，按下列梯度进行洗脱；检测波长为203nm，理论板数按人参皂 苷Mi2峰计算应不低于7000，
7.含权利要求1的人参次苷H提取物的药物组合物。
8.权利要求7的药物组合物，是滴丸制剂。
9.权利要求8的药物组合物，所述滴丸制剂的配方为人参次苷H提取物2-5g，辅料 0. l-5g, PEG10-40g,制成 1000 粒。
10.权利要求1的人参次苷H提取物和权力要求7的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种中药提取物及其制备，特别涉及人参次苷提取物及其制备。本发明的提取物中含人参总次苷以人参皂苷Rh2计不少于80％，其中含人参皂苷Rh1和人参皂苷Rh2的总和不少于50％，含人参皂苷Rh1的范围为1-20％，含人参皂苷Rh2的范围为20-60％。
文档编号A61K31/704GK102058642SQ200910228458
公开日2011年5月18日 申请日期2009年11月17日 优先权日2009年11月17日
发明者周水平, 宋兆辉, 张兰兰, 朱永宏, 林万里, 蔡楠, 黄芝娟 申请人:天津天士力制药股份有限公司
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