一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法
专利名称：一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法
技术领域：
本发明属于中医药技术领域，涉及一种以药材为原料制备高纯度黄芪甲苷的方 法，属于中药制药领域。
背景技术：
黄苗 Radix Astragali 是豆科植物蒙古黄苗 Astraglus membranaceusBre. Var. mongholicuns (Bge. ) Hsia 或膜荚黄苗 Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge.的干燥根。 所含化学成分黄芪皂苷有多种同系物，其中黄芪甲苷(AS-IV)为主要药理活性成分。继 1982年南京医科大学黄芪课题组首次报道黄芪甲苷的药理作用后，本发明涉及的AS-IV可 防治糖尿病肾病(DN)和糖尿病周围神经病变(DNP)的应用(专利号2004100147858，即将 授权，已通知，专利号ZL200510094276，授权公告2007年8月29日)也尚属首次，AS-IV及 其同系物已有文献报道，但其核磁-氢谱及碳谱存在不少混乱，本发明首次准确的归属了 7 种环阿顿烷四环二萜皂苷的1H-NMR和13C-NMR,确定了相对构型(刘玥辉，孙视，张涵庆，张 银娣，夏冰，中国药科大学学报，2008，31 (1) : 15-19.)
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲 苷的制备方法。该方法不仅具有操作简便，产品纯度高、得率高、生产成本低和无污染等优 点，而且操作条件经验证不含对AS-IV(黄芪甲苷)的结构造成影响，从而保证了 AS-IV操 作工艺和药理作用的稳定性。本发明所提供的制备黄芪甲苷的方法包括以下步骤a.黄芪药材(经粉碎60目)用一定浓度的乙醇回流提取、过滤、合并滤液，减压浓 缩至无醇味。该步骤采用正交Lp (34)设计，采用3个水平，4个因素。(1)溶剂浓度65%，80%， 95%； (2)溶剂用量，4、6、8倍量；(3)提取次数1、2、3次(4)提取时间lh、1. 5h、2h。经正交 实验结果表明得出最优提取条件用4倍于药材量的80%乙醇，回流提取4次，每次2h。b.水解条件2水平，3因素(1)碱用量分别2g/kg，5g/kg，8g/kg ； (2)水解温度 20°C、60°C、100°C ； (3)水解时间 4h、8h、12h ；实验结果表明碱水浓度为0.5% _1.5%，温度在60°C _100°C，水解时间在 8h-12h 范围。c.水解液上大孔吸附树脂(D-101，AB_8)，分别用10倍上样量，0. 5%碱水液，30% 乙醇，95%乙醇洗脱。d.收集95%乙醇洗脱液，处理后上硅胶柱(10倍于上样量硅胶，湿法装住)，以乙酸乙酯甲醇(3 1或4 1)进行洗脱。e.收集含黄芪甲苷的洗脱液，处理后上硅胶柱(200-300目，10倍于上样量，湿法装柱)，以乙酸乙酯甲醇=3 1或4 1进行洗脱。f.用甲醇重结晶，的黄芪甲苷白色针晶，其纯度为98%-100%。g.其纯度测定采用HPLC-ELSD法A.色谱条件流动相乙腈水(34 66)，色 谱柱 0DS-C-18(250mmX5mmX46mm)，流速1. Oml/min，柱温30°C，EISD 参数，载气量管温 103 "C。本发明方法制备的黄芪甲苷纯度达98% _100%，方法操作简便，产品纯度高，得 率高，生产成本低和无污染等优点。本发明方法制备的黄芪甲苷及有效成分制备的制剂，可用于治疗糖尿病并发症肾 病，周围神经炎的用途。实例1取黄芪根500g，粉碎成粗粉(60目)，用4倍量80%乙醇在常压热回流提取4次， 每次2h，过滤，滤液合并，减压浓缩至无醇味，残渣(浸膏)以2500ml水混悬，用0.5%氢氧 化钠水溶液，在100°C水解8h，放冷过滤得水解液，上大孔吸附树脂(D-IOl)，用10倍量床体 积水洗涤后，再用0. 05%碱水液(10倍量床体积)充分洗涤，再次用10倍床体积的30%乙 醇洗脱(弃去此洗脱液)，继用15倍量床体积95%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇 味，得粗提物(皂苷)(约O. 05-0. 07kg)，上硅胶柱(200-300目，10倍量硅胶，湿法装柱) 以乙酸乙酯甲醇(3 1)洗脱，得洗脱液，减压浓缩，析出粗结晶，用甲醇重结晶，得白色 结晶，纯度100% (HPLC-ELSD法测定)。实例2取黄芪根500g，粉碎成粗粉(60目)，用4倍量95%乙醇在常压热回流提取3次， 每次1. 5h，过滤，滤液合并，减压浓缩至无醇味，残渣(浸膏)以2500ml水混悬，用0. 05% 氢氧化钠水溶液，在60°C水解8h，放冷过滤得水解液，上大孔吸附树脂(AB-8)，用10倍量床 体积水洗涤后，再用0. 05%碱水液(10倍量床体积)充分洗涤，再次用10倍床体积的30% 乙醇洗脱(弃去此洗脱液)，继用15倍量床体积95%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无 醇味，得粗提物(皂苷)(约0. 05-0. 07kg)，上硅胶柱(200-300目，10倍量硅胶，湿法装柱) 以乙酸乙酯甲醇(4 1)洗脱，得洗脱液，减压浓缩，析出粗结晶，用甲醇重结晶，得白色 结晶，纯度98% (HPLC-ELSD法测定)。
权利要求
一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法，其特征在于利用黄芪根分碎成粗粉，用乙醇常压热回流提取，滤液减压浓缩至无醇味，浸膏以水混悬，用氢氧化钠或氢氧化钾水溶液加温水解，放冷，水解液上大孔树脂用水、碱水、不同浓度的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，处理后上硅胶柱(数倍于上样量的硅胶，湿法装住)，以乙酸乙酯甲醇不同比例洗脱，收集含黄芪甲苷的洗脱液，减压浓缩，析出粗品，用溶剂重结晶后，得到黄芪甲苷白色结晶，纯度98-100％。
2.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于用药材经粉碎60目4倍于量的65-95%乙醇回流提取4次，每次2小 时，根据正交实验设计L9(34)得出。
3.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于采用稀碱水解提取液，即氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠水溶液，且浓度 控制在0. 5-1. 5%,温度控制在60-100°C，时间控制在8-12小时范围内。
4.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于采用大孔吸附树脂的型号为D-101，AB-8, diaionHp20等，其中D-101， AB-8价格较适中。
5.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于采用硅胶柱200-300目层析，以乙酸乙酯-甲醇(3 1) (4 1)进行 洗脱。
6.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于对所得的黄芪甲苷粗品采用甲醇重结晶处理。
7.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于所指的黄芪甲苷的结构如下 <formula>formula see original document page 2</formula>
全文摘要
本发明是一种用于治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法。该单体化合物系从黄芪药材根中得到。黄芪药材原料经乙醇热回流提取，提取液进行碱水解后上大孔树脂，收集一定醇浓度下的洗脱液经过硅胶纯化、重结晶等技术处理后，得到黄芪甲苷纯品。本方法制备的黄芪甲苷纯度达到98％-100％。以本方法制备的黄芪甲苷为有效成分制备的制剂，经药理实验证实，可有效治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎。本发明方法具有操作简便，产品纯度高，得率高，生产成本低和无污染等优点。
文档编号A61P25/02GK101817861SQ20091023220
公开日2010年9月1日 申请日期2009年12月9日 优先权日2009年12月9日
发明者刘玥辉, 印晓星, 夏冰, 孙视, 张敉, 张涵庆, 张银娣, 李孟璇, 沈建平, 陈曼 申请人:江苏省中国科学院植物研究所;南京医科大学
技术领域：
本发明属于中医药技术领域，涉及一种以药材为原料制备高纯度黄芪甲苷的方 法，属于中药制药领域。
背景技术：
黄苗 Radix Astragali 是豆科植物蒙古黄苗 Astraglus membranaceusBre. Var. mongholicuns (Bge. ) Hsia 或膜荚黄苗 Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge.的干燥根。 所含化学成分黄芪皂苷有多种同系物，其中黄芪甲苷(AS-IV)为主要药理活性成分。继 1982年南京医科大学黄芪课题组首次报道黄芪甲苷的药理作用后，本发明涉及的AS-IV可 防治糖尿病肾病(DN)和糖尿病周围神经病变(DNP)的应用(专利号2004100147858，即将 授权，已通知，专利号ZL200510094276，授权公告2007年8月29日)也尚属首次，AS-IV及 其同系物已有文献报道，但其核磁-氢谱及碳谱存在不少混乱，本发明首次准确的归属了 7 种环阿顿烷四环二萜皂苷的1H-NMR和13C-NMR,确定了相对构型(刘玥辉，孙视，张涵庆，张 银娣，夏冰，中国药科大学学报，2008，31 (1) : 15-19.)
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲 苷的制备方法。该方法不仅具有操作简便，产品纯度高、得率高、生产成本低和无污染等优 点，而且操作条件经验证不含对AS-IV(黄芪甲苷)的结构造成影响，从而保证了 AS-IV操 作工艺和药理作用的稳定性。本发明所提供的制备黄芪甲苷的方法包括以下步骤a.黄芪药材(经粉碎60目)用一定浓度的乙醇回流提取、过滤、合并滤液，减压浓 缩至无醇味。该步骤采用正交Lp (34)设计，采用3个水平，4个因素。(1)溶剂浓度65%，80%， 95%； (2)溶剂用量，4、6、8倍量；(3)提取次数1、2、3次(4)提取时间lh、1. 5h、2h。经正交 实验结果表明得出最优提取条件用4倍于药材量的80%乙醇，回流提取4次，每次2h。b.水解条件2水平，3因素(1)碱用量分别2g/kg，5g/kg，8g/kg ； (2)水解温度 20°C、60°C、100°C ； (3)水解时间 4h、8h、12h ；实验结果表明碱水浓度为0.5% _1.5%，温度在60°C _100°C，水解时间在 8h-12h 范围。c.水解液上大孔吸附树脂(D-101，AB_8)，分别用10倍上样量，0. 5%碱水液，30% 乙醇，95%乙醇洗脱。d.收集95%乙醇洗脱液，处理后上硅胶柱(10倍于上样量硅胶，湿法装住)，以乙酸乙酯甲醇(3 1或4 1)进行洗脱。e.收集含黄芪甲苷的洗脱液，处理后上硅胶柱(200-300目，10倍于上样量，湿法装柱)，以乙酸乙酯甲醇=3 1或4 1进行洗脱。f.用甲醇重结晶，的黄芪甲苷白色针晶，其纯度为98%-100%。g.其纯度测定采用HPLC-ELSD法A.色谱条件流动相乙腈水(34 66)，色 谱柱 0DS-C-18(250mmX5mmX46mm)，流速1. Oml/min，柱温30°C，EISD 参数，载气量管温 103 "C。本发明方法制备的黄芪甲苷纯度达98% _100%，方法操作简便，产品纯度高，得 率高，生产成本低和无污染等优点。本发明方法制备的黄芪甲苷及有效成分制备的制剂，可用于治疗糖尿病并发症肾 病，周围神经炎的用途。实例1取黄芪根500g，粉碎成粗粉(60目)，用4倍量80%乙醇在常压热回流提取4次， 每次2h，过滤，滤液合并，减压浓缩至无醇味，残渣(浸膏)以2500ml水混悬，用0.5%氢氧 化钠水溶液，在100°C水解8h，放冷过滤得水解液，上大孔吸附树脂(D-IOl)，用10倍量床体 积水洗涤后，再用0. 05%碱水液(10倍量床体积)充分洗涤，再次用10倍床体积的30%乙 醇洗脱(弃去此洗脱液)，继用15倍量床体积95%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇 味，得粗提物(皂苷)(约O. 05-0. 07kg)，上硅胶柱(200-300目，10倍量硅胶，湿法装柱) 以乙酸乙酯甲醇(3 1)洗脱，得洗脱液，减压浓缩，析出粗结晶，用甲醇重结晶，得白色 结晶，纯度100% (HPLC-ELSD法测定)。实例2取黄芪根500g，粉碎成粗粉(60目)，用4倍量95%乙醇在常压热回流提取3次， 每次1. 5h，过滤，滤液合并，减压浓缩至无醇味，残渣(浸膏)以2500ml水混悬，用0. 05% 氢氧化钠水溶液，在60°C水解8h，放冷过滤得水解液，上大孔吸附树脂(AB-8)，用10倍量床 体积水洗涤后，再用0. 05%碱水液(10倍量床体积)充分洗涤，再次用10倍床体积的30% 乙醇洗脱(弃去此洗脱液)，继用15倍量床体积95%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无 醇味，得粗提物(皂苷)(约0. 05-0. 07kg)，上硅胶柱(200-300目，10倍量硅胶，湿法装柱) 以乙酸乙酯甲醇(4 1)洗脱，得洗脱液，减压浓缩，析出粗结晶，用甲醇重结晶，得白色 结晶，纯度98% (HPLC-ELSD法测定)。
权利要求
一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法，其特征在于利用黄芪根分碎成粗粉，用乙醇常压热回流提取，滤液减压浓缩至无醇味，浸膏以水混悬，用氢氧化钠或氢氧化钾水溶液加温水解，放冷，水解液上大孔树脂用水、碱水、不同浓度的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，处理后上硅胶柱(数倍于上样量的硅胶，湿法装住)，以乙酸乙酯甲醇不同比例洗脱，收集含黄芪甲苷的洗脱液，减压浓缩，析出粗品，用溶剂重结晶后，得到黄芪甲苷白色结晶，纯度98-100％。
2.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于用药材经粉碎60目4倍于量的65-95%乙醇回流提取4次，每次2小 时，根据正交实验设计L9(34)得出。
3.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于采用稀碱水解提取液，即氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠水溶液，且浓度 控制在0. 5-1. 5%,温度控制在60-100°C，时间控制在8-12小时范围内。
4.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于采用大孔吸附树脂的型号为D-101，AB-8, diaionHp20等，其中D-101， AB-8价格较适中。
5.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于采用硅胶柱200-300目层析，以乙酸乙酯-甲醇(3 1) (4 1)进行 洗脱。
6.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于对所得的黄芪甲苷粗品采用甲醇重结晶处理。
7.根据权利1所述的一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制 备方法，其特征在于所指的黄芪甲苷的结构如下 <formula>formula see original document page 2</formula>
全文摘要
本发明是一种用于治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法。该单体化合物系从黄芪药材根中得到。黄芪药材原料经乙醇热回流提取，提取液进行碱水解后上大孔树脂，收集一定醇浓度下的洗脱液经过硅胶纯化、重结晶等技术处理后，得到黄芪甲苷纯品。本方法制备的黄芪甲苷纯度达到98％-100％。以本方法制备的黄芪甲苷为有效成分制备的制剂，经药理实验证实，可有效治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎。本发明方法具有操作简便，产品纯度高，得率高，生产成本低和无污染等优点。
文档编号A61P25/02GK101817861SQ20091023220
公开日2010年9月1日 申请日期2009年12月9日 优先权日2009年12月9日
发明者刘玥辉, 印晓星, 夏冰, 孙视, 张敉, 张涵庆, 张银娣, 李孟璇, 沈建平, 陈曼 申请人:江苏省中国科学院植物研究所;南京医科大学
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