吡唑类衍生物及其制备方法与应用
吡唑类衍生物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及吡唑类衍生物及其制备方法与制药用途。
【背景技术】
[0002] 乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B)，简称乙肝(Hepatitis B)，是由乙型 肝炎病毒(HBV)所致的重大传染性疾病，长期发展可导致急慢性病毒性肝炎、重型肝炎、肝 硬化和原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)。据世界卫生组织(WHO)报道，全 球近20亿人曾感染过HBV，其中约3.5亿人为慢性HBV感染者，平均每年约有100万人死于HBV 感染所致的急、慢性肝炎及相关并发症。目前用于预防和治疗慢性乙型肝炎(CHB)的药物主 要有疫苗、干扰素、免疫调节药以及DNA聚合酶抑制剂。但是由于它们存在耐药性、副作用、 停药后反弹和不能彻底的清除乙肝病毒等缺点，因此发现和研究新的安全、高效、低毒和抗 耐药性的非核苷类乙肝病毒抑制剂显得至关重要。
[0003] 杂环化合物是发现药物活性先导物的重要源泉。取代吡唑作为结构独特的一类杂 环"优势结构"，具有广泛的生物活性。它可以作为构成药效团的基本结构母核，以适合药物 特殊作用靶点的空间要求;还可以作为活性取代基或环系的组成部分而产生相应的生物活 性;另外杂环具有较好的体内代谢稳定性及生物相容性，对发现高效广谱、生物利用度好的 新型抗HBV药物具有重要意义。
[0004] 本发明基于噻唑类乙肝病毒抑制剂药效团模型和活性构象，采用分子杂合和电子 等排药物设计策略，设计合成了一系列吡唑类化合物，此类化合物在现有技术中未见相关 报道。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术的不足，本发明提供了吡唑类衍生物及其制备方法。本发明还提供 了上述化合物作为非核苷类HBV抑制剂的活性筛选结果及其应用。
[0006] 本发明的技术方案如下：
[0007] -.吡唑类衍生物
[0008] 本发明涉及的吡唑类衍生物，具有如下通式I所示的结构：
[0010] 其中，
[0011] R1为含取代基的苯环或芳杂环；
[0012] R2为烷基、苄基或不同链长度的酯基；
[0013] X 为NH、S或 CH2;
[0014] R3为羧基、酯基或不同取代基的酰胺。
[0015] 根据本发明优选的，通式I中，R1为不同取代基的苯环或噻唑环;R2为饱和烷基、苄 基或丁酸乙酯;X为〇、NH或CH 2;R3为甲酸、甲酸乙酯、环丙酰胺、不同取代基的苯酰胺、不同取 代基的苄酰胺。
[0016] 进一步优选的，吡唑类衍生物是具有下列结构的化合物之一：
[0017] 表1.化合物1-50的结构式
[0023] 二.吡唑类衍生物的制备方法
[0024] 本发明吡唑类衍生物的制备方法为下列之一：
[0025] 1.吡唑类衍生物的制备方法，步骤如合成路线1:以乙氧甲叉氰乙酸乙酯la为初始 原料，首先在醋酸和水的混合溶液中经过醋酸钠的催化与不同的芳香肼反应得到中间体lb 粗品，然后lb与溴化亚铜、2-甲基-2-硝基丙烷经重氮化反应得到中间体Ic，Ib或Ic与不同 取代基发生亲核取代反应生成不同的目标化合物Id;接着，在碱性条件下发生水解反应生 成中间体Ie，Ie与不同取代的胺发生酰化反应得到目标产物If。
[0026] 合成路线1如下：
[0027]
[0028] 试剂及条件：（i)醋酸钠，醋酸，水，回流；（ii)溴化亚铜，乙腈，50°C;(iii)氢化钠、 碳酸钾或碳酸铯，不同的胺、醇或卤代烷，N，N_二甲基甲酰胺，30_80°C;(iv)氢氧化钠，乙 醇，水，四氢呋喃，50°C;(v)不同的胺，二氯甲烷，1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐 酸盐，1-羟基苯并三唑；
[0029] 其中，
[0030] R1为含取代基的苯环或芳杂环；
[0031] R2为烷基、苄基或不同链长度的酯基；
[0032] X 为 NH或 S;
[0033] R3为不同取代基的酰胺；
[0034] 所述的不同的胺为环丙胺，2，4-二氟苄胺；
[0035] 本发明所述的吡唑类衍生物的制备方法，具体制备步骤如下：
[0036] (1)取25mL圆底烧瓶，将不同取代基的肼盐酸盐Ial.59mmol溶于3mL乙酸中，加入 lmL水，醋酸钠3.49mmol回流4h;反应结束后冷却至室温，加入20mL冰水中；乙酸乙酯萃取三 次，合并有机相，30mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱 硅胶柱分离获取纯品lb;
[0037] (2)取25mL圆底烧瓶，将中间体lb 0.8mmo 1溶于乙腈5mL中，加入溴化亚铜，冷却至 〇°C，缓慢加入亚硝酸叔丁酯2.17mmol，50°C搅拌过夜。反应结束后冷却至室温，加50mL水淬 灭；乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法 上样，快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品Ic;
[0038] (3)取25mL圆底烧瓶，将中间体lb 1.12mmol溶于5mL DMF中，加入碳酸钾、碳酸铯 或者氢化钠，室温搅拌5min;加入不同的卤代烷1.35mmol，室温搅拌过夜。反应结束后加入 50mL水，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗三次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法 上样，快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品Id;
[0039] 取25mL圆底烧瓶，将中间体Ic 0.64mmol溶于5mL DMF中，加入60%NaH 0.77mmol， 室温搅拌5分钟;缓慢加入不同的硫醇等试剂，室温搅拌过夜。反应结束后加入50mL水，乙酸 乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗三次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制 备色谱硅胶柱分离获取纯品Id;
[0040] (4)取25mL圆底烧瓶，将中间体Id 0.74mmo 1溶于2mL乙醇、2mL水和2mL四氢呋喃的 混合溶液中，50°C加热反应过夜。反应结束后用旋转蒸发仪除去四氢呋喃和乙醇，加入30mL 氯化铵水溶液中和反应，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫 酸钠干燥;浓缩，石油醚洗，重结晶得到纯品Ie;
[0041 ] (5)取25mL圆底烧瓶，将中间体Ie 0.19mmo 1溶于5mL二氯甲烷中，然后低温下缓慢 加入1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.25mmol和1-羟基苯并三唑0.25mmol， 搅拌10分钟；加入不同的胺，室温反应过夜。反应结束后加入30mL水，乙酸乙酯萃取三次，合 并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱 分离获取纯品If。
[0042] 2.吡唑类衍生物的制备方法，步骤如合成路线2:以碳酸二乙酯Ila为初始原料，首 先在醋酸和四氢呋喃的混合溶液中经过氢化钠的催化与不同的脂肪酮得到中间体lib粗 品，然后lib与N，N-二甲基甲酰胺缩二甲醇反应得到中间体II C，IIc与不同肼盐酸盐发生成 环反应生成不同的目标化合物lid;接着，在碱性条件下发生水解反应生成中间体lie，lie 与不同取代的胺发生酰化反应得到目标产物Ilf;
[0043] 合成路线2如下：
[0045]试剂及条件：（i)四氢呋喃，氢化钠，60°C ; (i i ) 100°C ; (i i i)乙醇，三乙胺；（iv)氢 氧化钠，乙醇，水，四氢呋喃，50°C; (v)N，N-二甲基甲酰胺，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N '， Ν'-四甲基脲六氟磷酸酯，三乙胺，室温；
[0046] 其中，
[0047] R1为含取代基的苯环或芳杂环；
[0048] R2为烷基；
[0049 ] R3为不同取代的苯基、苄基、苯胺或酚；
[0050]本发明所述的吡唑类衍生物的制备方法，具体制备步骤如下：
[0051 ] (1)取50mL圆底烧瓶，低温下将60%氢化钠11.98mmol溶于15mL四氢呋喃溶液中， 缓慢滴加不同的脂肪酮Ila 1.59_〇1溶于混合溶液中，室温搅拌半小时;低温下继续滴加 碳酸二乙酯14.98mmol于混合溶液中，60°C反应4小时。反应结束后冷却至室温，加入50mL冰 水中，加入1.5mL醋酸中和反应，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，30mL饱和食盐水洗一次， 无水硫酸钠干燥;浓缩得到粗品lib;
[0052] (2)取25mL圆底烧瓶，将中间体lib 5.81mmol溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺缩二甲 醇中100°C搅拌过夜;反应结束后减压蒸馏得到粗品lie;
[0053] (3)取25mL圆底烧瓶，将1.59mmol不同取代基的肼盐酸盐溶于6mL乙醇中，加入 1 · 90mmol中间体lie于混合溶液中，缓慢滴加三乙胺7 · 93mmol，室温搅拌过夜。反应结束后 冷却至室温，减压蒸馏除去部分乙醇，加入50mL水中；乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，30mL 饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品 lid；
[0054] (4)取25mL圆底烧瓶，将中间体lid 0·69mmo 1溶于3mL乙醇、3mL水和3mL四氢呋喃 的混合溶液中，50°C加热反应过夜。反应结束后用旋转蒸发仪除去四氢呋喃和乙醇，加入 30mL氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗一次20mL，无水硫酸钠 干燥;浓缩，石油醚洗，重结晶得到纯品lie;
[0055] (5)取25mL圆底烧瓶，将中间体lie 0.38mmol溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，然后 低温下缓慢加入2-(7-偶氮苯并三氮唑）-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯0.46mmol，搅拌 10分钟；加入不同的胺及三乙胺0.76mmol，室温反应1小时;反应结束后加入30mL水，乙酸乙 酯萃取三次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速 制备色谱硅胶柱分离获取纯品Ilf。
[0056] 三.吡唑类衍生物的应用
[0057]本发明公开了吡唑类衍生物抗HBV活性筛选结果及其作为抗HBV抑制剂的应用。通 过实验证明本发明的吡唑类衍生物可作为经典的HBV非核苷类抑制剂应用。具体地说，可以 作为HBV抑制剂用于制备抗乙肝药物。因此，本发明还提供吡唑类衍生物在制备抗HBV的药 物中的应用。
[0058]四.啦唑类衍生物的抗HBV活性和毒性实验
[0059] 对上述新合成的化合物(化合物的结构式见表1)运用酶联免疫法(ELISA)检测样 品药物达到抑制病毒HBeAg和HBsAg分泌的50%时的浓度数值为IC 5Q;运用MTT法检测样品药 物导致50%细胞毒性死亡的数值浓度为CC5Q值；用聚合酶链反应(PCR)检测药物抑制HBV DNA复制量的50%时的浓度数值IC 5Q，以拉米夫定作为阳性对照药。它们的抗HBV活性和毒性 数据列于表2中。由表2看出新合成的化合物部分呈现出较好抑制病毒HBeAg和HBsAg分泌活 性，大部分细胞毒性较低。
[0060] 本发明的吡唑类衍生物是一类结构新颖的非核苷类HBV抑制剂，可作为抗HBV的先 导化合物。
[0061] 本发明的吡唑类衍生物可作为非核苷类HBV抑制剂应用。具体地说，作为HBV抑制 剂用来制备抗乙肝药物。
[0062] 一种抗HBV药物组合物，包括本发明的吡唑类衍生物和一种或多种药学上可接受 载体或赋形剂。
[0063]本发明公开了吡唑类衍生物、其制备方法、抗HBV活性筛选结果及其作为抗HBV抑 制剂的首次应用。实验证明本发明的吡唑类衍生物可作为HBV抑制剂用于制备抗乙肝药物。
【具体实施方式】
[0064] 通过下述实例有助于理解本发明，但是不能限制本发明的内容，在下列实例中，所 有目标化合物的编号与表1相同。
[0065] 合成路线：
[0067]实施例1.化合物44的制备方法
[0068] 取25mL圆底烧瓶，将3-氟苯肼盐酸盐(5g，30.52mmol)溶于45mL乙酸中，加入15mL 水，醋酸钠(5.68g，33.58mmol)，回流4h。反应结束后冷却至室温，加入200mL冰水中；乙酸乙 酯萃取三次(50mL X 3)，合并有机相，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法 上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯：石油醚=1:20)分离获取淡黄色固体3-氨基-1- (3-氟苯)-1!1-吡唑-4-甲酸乙酯(44)6.938，熔点为130-131°(3，收率为91%。
[0070]化合物44波谱数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 79(s，1H)，7 · 51 ~7 · 45(m，1H)， 7.37~7.30(m，2H)，7.13~7.08(m，lH)，5.36(s，lH)，4.31(q，2H，J = 7.1Hz)，1.37(t，3H，J =7.1Hz);13C-匪R(100MHz，CDC13) :164.47,164.39,161.92,149.15,140.97,139.15， 139.04,131.10,131.01,118.88,188.85,115.11,114.90,111.41,111.17,96.57,59.78， 14.49；EI-MS:250.4[M+H] +.
[0071]实施例2.化合物1的制备
[0072] 取25mL圆底烧瓶，将化合物44 (280mg，1.12mmo 1)溶于5mL DMF中，加入碳酸钾 (466mg，3 · 36mmol)，室温搅拌5min;加入溴化节（230mg, 1 · 35mmol)，室温搅拌过夜。反应结 束后加入50mL水，乙酸乙酯萃取三次(25mL X 3)，合并有机相，饱和食盐水洗三次(50mL X 3 )，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚=1:30)分离 获取浅黄色油状液体1280mg，收率为73%。
[0074] 化合物1 的波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 81 (s，1H)，7 · 43~7 ·4536 (m，2H)，7.32~7.27(m，lH)，7.25~7.22(m，3H)，7.12~7.07(m，lH)7.04(dd，2H，Jl = 2.0Hz,J2 = 7.6Hz) ,6.52(s,lH) ,4.29(q,2H,J = 7.2Hz) ,4.03(s,lH) ,1.34(t,3H,J = 7.2Hz);1 3C-NMR(100MHz，CDC13):164.72，164.00，161.53，151.71，141.21，140.87，140.77， 137.81,130.42,130.33,128.66,127.66,127.19,120.37,120.34,115.28,115.07,112.51， 112.27,99.11,77.34,77.23,77.03,76.71,59.84,49.79,14.45；EI-MS:340.5[M+H] +.
[0075] 实施例3.化合物2的制备
[0076] 将化合物1 (250mg，0 · 74mmo 1)溶于2mL乙醇、2mL7K和2mL四氢呋喃的混合溶液中， 50°C加热反应过夜。反应结束后用旋转蒸发仪除去四氢呋喃和乙醇，加入30mL水，乙酸乙酯 萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，石油醚 洗，重结晶得到白色固体化合物21 OOmg，收率为32%。
[0078] 化合物2波谱分析数据：1!1-匪1?(4001^，0)(：13)3??111:7.89(8，1!〇,7.45~7.40(111， lH)，7.35~7.33(m，lH)，7.33~7.24(m，4H)，7.14~7.09(m，lH)，7.02(dd，2H，Jl = 2.0Hz， J2 = 7.6Hz) ,6.57(s,lH) ,4.07(s , 1H) ； 13C-NMR( 100MHz ,CDC13): 169.57,163.95,161.48, 152.18,141.89,140.59,140.49,137.58,130.46,130.37,128.74,127.77,127.04,120.76, 120.73,115.65,115.44,112.90,112.66,97.91,77.35,77.23,77.03,76.71,49.50；EI-MS: 312.4[M+H] +.
[0079] 实施例4.化合物3的制备
[0080] 取25mL圆底烧瓶，将化合物3 (60mg，0.19mmo 1)溶于5mL二氯甲烷中，然后低温下缓 慢加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(43mg，0.25mmol)和1-羟基苯并三唑 (39mg，0.25mmol)，搅拌10分钟；加入不同的胺，室温反应过夜。反应结束后加入30mL水，乙 酸乙酯萃取三次（15mL x 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩， 干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚=1:8)分离获取白色固体化合物340mg， 收率为60 %。
[0082] 化合物3波谱分析数据：1!1-匪1?(4001^，0)(：13)5??111:7.58(8，1!〇,7.42~7.36(111， 2H)，7.31~7.29(m，lH)，7.26~7.20(m，3H)，7.11~7.07(m，lH)，7.04(dd，2H，Ji = 2.0Hz，j2 =8.0Hz)，5.87(s，lH)，4.01(s，2H),2.82~2.76(m，lH),0.88~0.82(m，2H),0.62~0.58 (m，2H) ;13C-NMR(100MHz，CDCl3) :163.99,161.52,151.35,140.92,140.82,137.97,137.59， 130.39,130.30,129.17,128.53,127.67,127.44,127.26,120.24,120.21,115.19,114.98， 112.38,112.13,100.82,49.66,29.70,22.39,6.82;EI-MS:351.6[Μ+Η]+·
[0083] 实施例5.化合物4的制备
[0084] 操作同实施例2,所不同的是将溴化苄换成碘乙烷。油状液体，收率72%。
[0086] 化合物4波谱分析数据：1!1-匪1?(4001^，0)(：13)5??111:7.81(8，1!〇,7.46~7.39(111， 2H)，7.38~7.34(m，lH)，7.11~7.06(m，lH)，6.00(s，lH)，4.30(q，2H，J = 7.2Hz)，2.87(q， 2H，J = 7.2Hz)，1.37(t，3H，J = 7.1Hz)，1.08(t，3H，J = 7.1Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13): 164.87.164.00. 161.53.152.33.141.21.141.01.130.38.130.29.120.07.120.04.115.05， 114.84,112.16,111.92,98.58,77.37,77.25,77.05,76.73,59.76,40.92,15.55,14.50; EI-MS :278.2[M+H] + .
[0087] 实施例6.化合物5的制备
[0088] 操作同实施例2,所不同的是将溴化苄换成碘甲烷。油状液体，收率38%。
[0090] 化合物5波谱分析数据咕-匪R(400MHz，CDC13)δρρπι: 7 · 80( s，1H)，7 · 47~7 · 32(m， 3H)，7.12~7.07(m，lH)，4.30(q，2H，J = 7.2Hz)，2.95(s，3H)，1.36(t，3H，J = 7.2Hz);13C-匪R(100MHz，CDC13) :164.88,163.96,153.23,141.10,140.85,130.36,130.27,120.53， 120.50.115.21.115.00. 112.59.112.35.97.75.59.78.32.74.14.49；EI-MS:264.3[M+H]+.
[0091] 实施例7.化合物7的制备
[0092]操作同实施例2,不同的是将溴化苄换成溴代环丁烷，将碳酸钾换成碳酸铯。油状 液体，收率27 %。
[0094] 化合物7波谱分析数据：1!1-匪1?(4001^，0)(：13)3??111:7.80(8，1!〇,7.46~7.41(111， lH)，7.38~7.30(m，2H)，7.12~7.07(m，lH)，6.29(s，lH)，4.31(q，2H，J = 7.2Hz)，3.49(s， lH)，2.07~1.99(m，2H)，1.89~1.79(m，2H)，1.67~1.59(m，lH)，1.47~1.42(m，lH)，1.37 (t，3H，J = 7 · 2Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13) :164.89,163.94,161.48,150.98,141.17， 141.08,140.98,130.36,130.27,120.08,120.05,115.06,114.85,112.17,111.93,98.32， 59.77,50.93,32.26,14.51,14.19;EI-MS:304.4[M+H]+.
[0095] 实施例8.化合物8的制备
[0096] 操作同实施例2,不同的是将溴化苄换成溴代环戊烷，将碳酸钾换成碳酸铯。油状 液体，收率47 %。
[0098] 化合物8波谱分析数据：1!1-匪1?(4001^，0)(：13)5??111:7.82(8，1!〇,7.45~7.37(111， 3H)，7· 11 ~7·06(ι?，1H)，5.99(s，1H)，4.30(q，2H，J = 7.2Hz)，3.44((1, lH，J = 4.4Hz)，1.67 ~1.59(m，4H)，1.47~1.40(m，4H)，1.36(t，3H, J = 7.2Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13): 164.83,163.98,161.52,151.93,141.20,141.10,130.36,130.27,119.98,119.94,114.98， 114.77,112.06,111.81,99.34,77.35,77.24,77.03,76.72,59.76,56.96,33.49,23.41， 14.48,EI-MS:318.4[M+H] +.
[0099] 实施例9.化合物9的制备
[0100] 操作同实施例2,操作同实施例2,不同的是将溴化苄换成溴代丁酸乙酯，将碳酸钾 换成氢化钠。油状液体，收率44 %。
[0102]化合物9波谱分析数据：1!1-匪1?(4001!^，0)(：13)5??111:7.84(8，1!〇,7.48~7.42(111， lH)，7.38~7.36(m，lH)，7.33~7.29(m，lH)，7.15~7.10(m，lH)，6.44(d，lH，J=10.4Hz)， 4.30(q，2H，J=7.2Hz),4.13~4.03(m，2H)，3.73~3.67(m，lH),1.73~1.62(m，3H),1.38 (t，3H，J = 7.2Hz)，1.17(t，3H，J = 7.2Hz)，0.87(t，3H，J = 7.2Hz);13C-NMR(100MHz，CDC13): 171.87,164.33,164.09,161.62,150.51,141.46,140.51,140.41,130.71,130.62,120.30， 120.27,115.58,115.37,112.46,112.22,99.93,77.35,77.23,77.03,76.71,61.24,59.95, 58.71,26.31,14.46,14.06,9.37,EI-MS:364.5[M+H] +.
[0103] 实施例10.化合物6的制备
[0104] 取25mL圆底烧瓶，将中间体3-氨基-1-(3-氟苯基)-1Η-吡唑-4-碳酸乙酯（200mg， 0.8mmol)溶于5mL乙腈中，加入溴化亚铜，冷却至0°C，缓慢加入亚硝酸叔丁酯（223mg， 2.17mmol)，50°C搅拌过夜。反应结束后冷却至室温，加50mL水淬灭；乙酸乙酯萃取三次 (25mL X 3)，合并有机相，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速 制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚=1:30)分离获取黄色固体3-溴-1-(3-氟苯基)-1Η-吡 唑-4-碳酸乙酯195mg，收率72%。
[0106] 化合物6波谱分析数据:iH-NMRHOOMHz，CDCl3)Sppm: 8 · 14( s，1H)，7 · 52~7 · 4(m, lH)，7.36(dd，lH，Jl = 2.0Hz，J2 = 7.6Hz)，7.32~7.28(m，lH)，7.23~7.18(m，lH)，4.37(q， 2H，J = 7.2Hz)，1.37(t，3H，J = 7.2Hz)，1.40(t，3H，J = 7.2Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13): 163.69,161.62,161.22,143.43,139.60,139.50,130.39,130.31,121.85,121.81,117.78, 116.50,116.29,115.55,113.98,113.73,77.34,77.23,77.03,76.71,60.71,14.33,EI-MS: 313.3[M+H] +.
[0107] 实施例11.化合物10的制备
[0108] 取25mL圆底烧瓶，将中间体3-溴-1-(3-氟苯基）-1Η-吡唑-4-碳酸乙酯（200mg， 0 · 64mmol)溶于5mL DMF中，加入60%NaH(31mg，0 · 77mmol)，室温搅拌5分钟；缓慢加入不同 的硫醇等试剂，室温搅拌过夜。反应结束后加入50mL水，乙酸乙酯萃取三次（25mL X 3)，合 并有机相，饱和食盐水洗三次(50mL X 3 )，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱 硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚)分离获取油状液体85mg，收率38%。
[0110] 化合物 10 波谱分析数据 jH-NMRGOOMHz^DChWppnKS.lMsJiOjjgwTjSU， 1H) ,7.33~7.27(m，2H) ,7.19~7.15(m，lH)，4.37(q，2H，J = 7.2Hz) ,4.13~4.03(m，2H)， 3.30~3.28(m，lH)，1.73~1.50(m，5H)，1.40(t，3H，J = 7.2Hz)，1.21~1.15(m，5H)，EI-MS: 349·5[Μ+Η]+·
[0111] 实施例12.化合物11的制备
[0112] 取251^圆底烧瓶，将中间体异丁酰乙酸乙酯（1.338,8.39謹〇1)溶于111111^，^二 甲基甲酰胺缩二甲醇中100°c搅拌过夜。反应结束后减压蒸馏得到粗品。将中间体溶于llmL 乙醇，加入1. lmL三乙胺，3-氟苯肼盐酸盐化合物（1.36g，8.39mmol)，室温反应2小时。反应 结束后，加入150mL水，乙酸乙酯萃取三次（50mL x 3)，合并有机相，饱和食盐水洗三次 (50mL X 3)，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚= 30:1)分离获取油状液体832mg，收率36 %。
[0114] 化合物 11 波谱分析数据:1H-NMR(400MHz，CDCl3)Sppm:8.03(s，lH)，7.50~7.45(m， lH)，7.23~7.11(m，3H)，4.33(q，2H，J = 7.2Hz)，3.31~3.24(m，lH)，1.41~1.37(m，9H) ? 13C-NMR(100MHz，CDC13) : 163.86,163.20,161.38,152.90,143.31，140.79,140.69， 130.48,130.39,122.42,122.38,116.41,116.20,114.54,114.30,111.98,77.35,77.24, 77.04,76.72,60.11,26.42,20.09,14.41，EI-MS:277.4[Μ+Η]+·
[0115] 实施例13.化合物12的制备
[0116] 取50mL圆底烧瓶，将中间体碳酸二乙酯（1.77g，14.98mmo 1)溶于15mL THF中，低温 下加入60%NaH(480mg，ll .98mmol)，室温搅拌30分钟；缓慢加4-甲基-2-戊酮（lg， 9.98mmol)，60°C加热反应4h。反应结束后冷却至室温，加入50mL醋酸水溶液猝灭，乙酸乙酯 萃取三次(25mL X 3)，合并有机相，50mL饱和碳酸氢钠水溶液洗一次，50mL饱和食盐水洗一 次，无水硫酸钠干燥;浓缩得粗品4-甲基丁酰乙酸乙酯，直接进行下一步。
[0117] 取25mL圆底烧瓶，将上步得到的粗品4-甲基丁酰乙酸乙酯（1 g，5.8 lmmo 1)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺缩二甲醇中100°C搅拌过夜。反应结束后减压蒸馏得到黄色油状液体。
[0118] 取25mL圆底烧瓶，将上步中间体（3 35mg，1.47mmol)溶于6mL乙醇，加入三乙胺 (622mg，6.14mmol)，3_氟苯肼盐酸盐化合物（200mg，l .23mmol)，室温反应2小时。反应结束 后，减压蒸馏除去部分乙醇，加入50mL水，乙酸乙酯萃取三次(25mL X 3)，合并有机相，50mL 饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯：石 油醚= 30:1)分离获取油状液体135mg，收率38 %。
[0120] 化合物 12 波谱分析数据 jH-NMRGOOMHz^DChWppnKS.OSbJiOj.SO-TjSU， 1H) ,7.21 ~7.14(m，3H)，4.34(q，2H，J = 7.2Hz)，2.94(d，2H，J = 7.6Hz)，1.89~1.78(m， 1H) ,1,38(t,3H,J = 7.2Hz) ,0.76(d,6H,J = 6.8Hz) .13C-NMR(100MHz,CDC13) : 163.90, 163.55,161.43,147.59,142.37,140.70,140.60,130.56,130.47,122.08,122.05,116.13, 115.92,114.21,113.97,113.18,77.35,77.24,77.03,76.71,60.04,33.31,28.85,22.21, 14.40,EI-MS:291.4[M+H]+.
[0121] 实施例14.化合物13的制备
[0122] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为2-氟苯肼盐酸盐。 油状液体，收率58 %。
[0124] 化合物 13 光谱分析数据 jH-NMRGOOMHz^DChWppnKS.OWsJiOj.SS-TjeU， lH)，7.44~7.39(m，lH)，7.31~7.24(m，2H)，4.33(q，2H，J = 7.2Hz)，2.79(d，2H，J = 7·6Ηζ)，1.90~1.80(m, 1H)，1.38(t，3H，J = 7.2Hz)，0.75(d，6H, J = 6.8Hz) .13C-NMR (100MHz，CDC13) : 163.53,158.33,155.82,149.02,142.73,131.29,131.21，129.52， 127.18,127.06,124.77,124.73,116.91,116.72,112.65,77.36,77.24,77.04,76.72, 59.99,33.53,33.51,28.68,22.20,14.40；EI-MS:291.4[M+H] +.
[0125] 实施例15.化合物14的制备
[0126] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为4-氟苯肼盐酸盐。 油状液体，收率56 %。
[0128] 化合物14波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 8 ·03(s，1H)，7 · 38~7 · 35(m， 2H) ,7.21 ~7.17(m，2H)，4.32(q，2H，J = 7.2Hz)，2.88(d，2H，J = 7.2Hz)，1.87~1.80(m， 1H)，1.38( t，3H，J = 7.2Hz)，0.75((1,6H，J = 6.8Hz) .13C-匪 R(100MHz，CDC13) : 163.75， 163.60,161.27,147.65,142.11,135.42,135.39,128.41,128.32,116.37,116.14,112.86, 77.34,77.23,77.02,76.71,59.97,33.34,28.76,22.20,14.39；EI-MS:291.4[M+H] +.
[0129] 实施例16.化合物15的制备
[0130] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为4-硝基苯肼盐酸 盐。油状液体，收率37 %。
[0132] 化合物 15波谱分析数据：七-匪以400MHz，CDC13) δρρπι: 8 · 39 (dd，2H，Ji = 2 · 0Hz，J2 = 6·8Ηζ)，8.09(s，lH)，7.64(dd，2H，Ji = 2.0Hz，j2 = 6.8Hz)，7.27(s，lH)，4.34(q，2H，J = 7.2Hz)，3.01(d，2H，J = 7.2Hz)，1.85~1.78(m，lH)，1.39(t，3H，J = 7.2Hz)，0.75(d，6H，J = 6 · 8Hz) · 13C-NMR( 100MHz，CDC13): 163 · 28，147 · 78，147 · 34，144 · 53，143 · 15，126 · 68，124 · 82， 114.13,77.35,77.24,77.04,76.72,60.23,33.36,29.09,22.18,14.38；EI-MS:318.5[M+H ] + ·
[0133] 实施例17.化合物16的制备
[0134] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为3-甲氧基苯肼盐酸 盐。油状液体，收率47 %。
[0136] 化合物 16波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 39(t，1H，J = 8 · 4Hz)，7 · 00 (dd,lH, Ji = l .6Hz,J2 = 8.4Hz) ,6.98(dd,lH,Ji = l .6Hz,J2 = 8.4Hz) ,6.92( t, 1H,J = 2.0Hz),4.32(q，2H，J = 7.2Hz) ,3.85(s,3H) ,2.92(d，2H，J = 7.2Hz) ,1.89~1.82(m,lH)， 1.38(t，3H，J = 7.2Hz)，0.76((1,6H，J = 6.8Hz) .13C-NMR(100MHz，CDCl3) :163.69,160.20， 147.55,141.98,140.27,129.92,118.58,114.93,112.81,112.12,77.35,77.24,77.03， 76.72,59.95,55.58,33.38，28·74,22·24,14.41;EI-MS:303.5[M+H]+.
[0137] 实施例18.化合物17的制备
[0138] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为2-硝基苯肼盐酸 盐。油状液体，收率52 %。
[0140] 化合物 17波谱分析数据：七-匪以400MHz，CDC13) δρρπι: 8 · 10 (dd，1H，Ji = 0 · 8Hz，J2 = 8.0Hz) ,8.05(s,lH) ,7.78(dt,lH ,Ji = 1.2Hz j2 = 7.6Hz),7.68(dt,lH ,Ji=1.2Hz ,J2 = 7.6Hz), 7.54 (dd, 1H, Ji = 0.8Hz , J2 = 7.6Hz), 4.33 (q, 2H, J = 7.2Hz) , 2.83 (d , 2H, J = 7.6Hz), 1.89~1.79(m, 1H) , 1.38(t,3H，J = 7.2Hz)，0.81(d，6H, J = 6.8Hz) .13C-NMR (100MHz，CDC13):163.34,148.59,146.03,143.16,133.50,132.53,130.42,129.77, 125.64,113.52,77.36,77.05,76.73,60.08,33.45,28.43,22.23,14.36；EI-MS:318.5[M+ H] + .
[0141] 实施例19.化合物18的制备
[0142] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为4-甲氧基苯肼盐酸 盐。油状液体，收率32 %。
[0144] 化合物 18 波谱分析数据 ^Η-ΝΜΚΗΟΟΜΗζ,ΟΧ^ΜρρπιΑ.?^Ο,Ι?Ο,Υ^Μ?Μ^υι = 2.4Hz ,J2 = 6.8Hz) ,6.99(dd, 2H ,Ji = 2.4Hz ,J2 = 6.8Hz) ,4.32(q, 2H ,J = 7.2Hz) , 3.87(s, 1H)，2.86(d，2H，J = 7.2Hz) ,1.90~1.80(m，lH)，1.37(t，3H，J = 7.2Hz)，0.75(d，6H，J = 6.8Hz),EI-MS:303.5[M+H]+.
[0145] 实施例20.化合物19的制备
[0146]操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为3-羧基苯肼盐酸 盐。白色固体，收率52%。
[0148] 化合物 19波谱分析数据:七-匪以400MHz，CDC13) δρρπι: 9 · 80 (s，1H)，8 · 21 (dd，1H，Ji = 1.6Hz，J2 = 7.2Hz)，8.15(s，lH)，8.10(s，lH)，4.34(q，2H，J = 7.2Hz)，2.94(d，2H，J = 7.6Hz)，1.88~1.81(m,1H)，1.39(t，3H,J=7.2Hz),0.76.13C-匪R(100MHz，CDC13): 170.08,163.55,147.77,142.47,139.57,131.49,130.79,130.52,129.68,127.88,113.25， 77.35,77.24,77.03,76.71,60.12,33.36,28.94,22.23,14.40；EI-MS:317.5[M+H] +.
[0149] 实施例21.化合物20的制备
[0150] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为4-羧基苯肼盐酸 盐。白色固体，收率50%。
[0152] 化合物20波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 9 · 84(s，1H)，8 · 27(d，2H，J = 8·8Ηζ)，8· ll(s，lH)，7.56(d，2H，J = 8.8Hz)，4.34(q，2H，J = 7.2Hz)，2.99(d，2H，J = 7.2Hz)，1.86~1.79(m，lH)，1.39(t，3H，J = 7.2Hz)，0.75(d，6H，J = 6.8Hz);EI-MS:317.5[M +H] + .
[0153] 实施例22.化合物45的制备
[0154] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为3-硝基苯肼盐酸 盐。油状液体，收率45 %。
[0156] 化合物45波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 8 · 35~8 · 33(m，2H)，8 · 09(s， lH),7.80(d,lH ,J = 8.0Hz),7.72(t,lH ,J = 8.0Hz),4.34(q,2H ,J = 7.2Hz),2.98(d,2H ,J = 7.2Hz) ,1.90~1.79(m，lH)，1.39(t，3H，J = 7.2Hz)，0.77(d，6H，J = 6.8Hz) · 13C-匪R (100MHz，CDC13):163.32,148.58,147.76,142.95,140.41,132.02,130.33,123.52， 121.32,113.81,77.35,77.24,77.04,76.72,60.21,33.36,29.09,22.22,14.39；EI-MS: 318.5[M+H] + .
[0157] 实施例23.化合物21的制备
[0158]操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为2-噻唑肼。白色固 体，收率25 %。
[0160] 化合物 21 波谱分析数据 ^H-NMRGOOMHz, CDChWppm: 8.02(s，lH)，7.60((1,1H，J = 3.2Hz)，7.18(d，lH，J = 3.6Hz)，4.33(q，2H，J = 7.2Hz)，3.51(d，2H，J = 7.2Hz)，2.16~2.06 (m，lH)，1.38(t，3H，J = 7.2Hz)，0.94(d，6H，J = 6.8Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl3):163.14， 161.89.148.96.143.46.140.40.117.18.115.17.60.25.33.02.28.89.22.13.14.35 JIMS: 280.3 [M+H]+.
[0161] 实施例24.化合物46的制备
[0162] 取25mL圆底烧瓶，将化合物12 (200mg，0 · 69mmo 1)溶于3mL乙醇、3mL水和3mL四氢呋 喃的混合溶液中，加入氢氧化钠（165mg，4.13mmol)，50°C加热反应过夜。反应结束后用旋转 蒸发仪除去四氢呋喃和乙醇，加入30mL氯化铵水溶液中和反应，乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，石油醚洗，重结晶得到白 色固体120mg，收率:66%。
[0164] 化合物 46 波谱分析数据 ^H-NMRGOOMHz, CDChWppm: 8.02(s，lH)，7.60((1,1H，J = 3.2Hz)，7.18(d，lH，J = 3.6Hz)，4.33(q，2H，J = 7.2Hz)，3.51(d，2H，J = 7.2Hz)，2.16~2.06 (m，lH)，1.38(t，3H，J = 7.2Hz)，0.94(d，6H，J = 6.8Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl3):163.14， 161.89.148.96.143.46.140.40.117.18.115.17.60.25.33.02.28.89.22.13.14.35 JIMS: 280.3 [M+H]+.
[0165] 实施例25.化合物22的制备
[0166] 取25mL圆底烧瓶，将化合物46(lOOmg，0.38mmo 1)溶于1 OmL二氯甲烷中，然后低温 下缓慢加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(95mg，0.5mmol)和1-羟基苯并三 唑(67mg，0.5mmol)，搅拌10分钟；室温反应过夜。反应结束后加入30mL水，乙酸乙酯萃取三 次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快 速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚)分离获取白色固体，收率55%。
[0168] 化合物22波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρ??: 8 · 39(s，1H)，8 · 11 (d，1H，J = 8.4Hz),7.60~7.44(m，4H),7.28~7.21(m，3H)，2.96(d，2H，J=7.6Hz)，1.94~1.84(m， lH),0.78(d,6H ,J = 6.8Hz) ；EI-MS:380.4[M+H] + .
[0169] 实施例26.化合物23的制备
[0170] 取25mL圆底烧瓶，将化合物46(lOOmg，0 ·38mmo 1)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中， 然后低温下缓慢加入2-(7-偶氮苯并三氮唑）-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯（174mg， 0·46mmo 1)，搅拌 10分钟；加入4-氟节胺（48mg，0· 38mmo 1)及三乙胺（77mg，0.76mmo 1)，室温 反应1小时。反应结束后加入30mL水），乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱 和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯：石油 醚)分离获取白色固体137mg，收率:97%。
[0172] 化合物23波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，CDC13)δρρπι: : 7 · 79( s，1H)，7 · 49~7 · 44 (m，lH)，7.31(dd，2H，Ji = 5.6Hz，J2 = 8.8Hz)，7.19(dd，2H，Ji = 2.0Hz，j2 = 8.0Hz)，7.15~ 7.12(m，1H)，6.24(s，lH)，4.56((1,2H，J = 6.0Hz)，2.98(d，2H，J = 7.6Hz) ,1.87~1.76(m， 1H)，0.75(d，6H，J = 6.4Hz);13C-匪R(100MHz，CDC13) : 163.91,163.47,163.33,161.44， 161.02,146.43,140.77,140.67,138.42,134.31,134.28,130.56,130.47,129.50,129.42， 121.95,121.91,116.09,115.88,115.73,115.71,115.49,114.08,113.84,77.36,77.25， 77.04,76.73,42.69,33.15,28.78,22.19；EI-MS:370.4[M+H] +.
[0173] 实施例27.化合物24的制备
[0174] 取25mL圆底烧瓶，将化合物46(lOOmg，0 ·38mmo 1)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中， 然后低温下缓慢加入2-(7-偶氮苯并三氮唑）-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯（174mg， 0.46mmol)，搅拌10分钟;加入三乙胺(77mg，0.76mmol)，60°C加热反应5小时。反应结束后加 入30mL水，乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸 钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚)分离获取白色固体40mg， 收率:33%。
[0176] 化合物24波谱分析数据:h-NMRGOOMHz，CDC13)δρρ??: : 7 · 64(s，1H)，7 · 46(dd，1H， Ji = 8.0Hz，J2 = 14.4Hz)，7.22((1, lH，J = 8.4Hz)，7· 18~7.14(m，2H)，3.52(q，4H，J = 7.2Hz)，2.80(d，2H，J = 7.2Hz)，1.74~1.64(m，lH)，1.24(t，6H，J = 7.2Hz)，0.76(d，6H，J = 6·8Hz);13C-NMR(100MHz，CDC13) : 165.25,163.90,161.43,144.25,142.86,141.00， 140.90,138.04,130.45,130.36,121.70,121.66,116.93,115.72,115.51,113.83,113.59， 77.36,77.04,76.73,33.26,28.63,22.17；EI-MS:318.5[M+H] +.
[0177] 实施例28.化合物25的制备
[0178] 操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为苄胺。白色固体80mg，收 率:60%〇
[0180] 化合物25波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，CDC13)δρρπι: : 7 · 79( s，1H)，7 · 79~7 · 44 (m，lH)，7.36~7.27(m，5H)，7.20~7.12(m，3H)，6.21(s，lH)，4.61(d，2H，J = 4.4Hz)，2.99 (d，2H，J = 7.2Hz) ,1.88~1.78(m，lH)，0.75((1,6H，J = 6.4Hz); 13C-匪R(100MHz，CDC13): 163.90,163.27,161.42,146.40,140.74,140.64,138.40,130.55,130.46,128.79,127.85, 127.58,121.96,121.93,116.07,115.86,114.09,113.85,77.35,77.24,77.04,76.72， 43·45，33·15，28·77，22·20;EI-MS:352·5[M+H] + ·
[0181] 实施例29.化合物26的制备
[0182] 操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为4-氟苯胺。白色固体65mg， 收率:48%。
[0184] 化合物26波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13) δρρ??: : 8 · 00(s，1H)，7 · 78(s，1H)， 7.56~7.53(m，2H)，7.51~7.45(m，lH)，7.21(dd，2H，Ji = 2.0Hz，j2 = 8.0Hz)，7.16(dd，lH， Ji = 2.0Hz，j2 = 9.2Hz)，7.04(t，2H，J = 8.4Hz)，2.99(d，2H，J = 7.2Hz)，1.89~1.82(m，lH)， 0.75(d，6H，J=6.8Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl 3):163.91,161.52,161.43,160.73,158.30， 147.24,140.40,140.30,138.37,133.79,133.76,130.66,130.57,122.42,122.34,122.04, 122.00,116.36,116.15,115.96,115.81,115.59,114.17,113.93,77.36,77.24,77.04， 76.72,33.19,28.74,22.21.
[0185] 实施例30.化合物27的制备
[0186] 取25mL圆底烧瓶，将化合物21 (1.5g，5.37mmol)溶于14mL乙醇、14mL水和14mL四氢 呋喃的混合溶液中，加入氢氧化钠（1.29g，32.2mmol)，50°C加热反应过夜。反应结束后用旋 转蒸发仪除去四氢呋喃和乙醇，加入30mL乙酸乙酯和50mL水萃取，取水相，加入30mL稀盐酸 中和反应，乙酸乙酯萃取三次(30mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸 钠干燥;浓缩，石油醚洗，重结晶得到白色固体1.18g，收率:87%。
[0188] 化合物27波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDCl3)Sppm: : 12 · 79(s，1H)，8 · 11 (s，1H)， 7.76(d，lH，J = 3.6Hz)，7.67(d，lH，J = 3.2Hz)，3.45(d，2H，J = 7.2Hz)，2.07~2.00(m，lH)， 0.88(d，6H，J=6.8Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl3):164.30，161.71，148.11，144.06，140.95， 119.37,115.92,32.70,28.69，22.34;EI-MS:252.4[Μ+Η]+·
[0189] 实施例31.化合物28的制备
[0190] 取25mL圆底烧瓶，将化合物27 (70mg，0.28mmol)溶于5mL Ν，Ν-二甲基甲酰胺中，然 后低温下缓慢加入2-(7-偶氮苯并三氮唑）-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯（127mg， 0 · 33mmo 1)，搅拌 10分钟；加入4-氟节胺（35mg，0 · 33mmo 1)及三乙胺（56mg，0 · 56mmo 1)，室温 反应1小时。反应结束后加入30mL水，乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和 食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚） 分离获取白色固体72mg，收率:72%。
[0192]化合物28波谱分析数据:1!1-匪1?(4001抱，0)(：13)3??111::7.80(8，1!〇,7.60((1，1!1，了 = 3.6Hz)，7.32~7.29(m，2H)，7.17(d，lH，J = 3.6Hz)，7.02(t，2H，J = 8.4Hz)，6.29(s，lH)， 4.55(d，2H，J = 5.6Hz)，3.50((1,2H，J = 7.2Hz) ,2.12~2.05(m，lH)，0.92(d，6H，J = 6.8Hz) ;13C-NMR(100MHz，CDC13) : 163.45,162.82,161.74,161.01，147.53,140.43,139.87， 134.12,134.09,133.82,129.55,129.47,117.72,117.17,115.71,115.49,114.43,77.37， 77.05,76.74,42.77,32.92,28.86,22.12；EI-MS:359.4[M+H] +.
[0193] 实施例32.化合物29的制备
[0194] 取25mL圆底烧瓶，将化合物27 (100mg，0.4mmol)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，然 后低温下缓慢加入2-(7-偶氮苯并三氮唑）-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯（182mg， 0.48mmol)，搅拌10分钟；加入三乙胺（81mg，0.8mmol)，室温反应1小时。反应结束后加入 30mL水，乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠 干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚)分离获取白色固体60mg，收 率:40%。
[0196] 化合物29波谱分析数据:h-NMRHOOMHz，CDC13) δρρπι: 8 · 75(dd，1H，J1 = 0 · 8Hz，J2 = 4.4Hz) ,8.47(dd,lH,Jl = 1.2Hz ,J2 = 8.4Hz) ,7.28(d,lH,J = 3.6Hz) ,3.55(d,2H ,J = 7.2Hz)，2.22~2.16(m，lH)，0.96(d，6H，J = 6.8Hz);13C-MlR(100MHz，CDCl3):161.05， 158.58,152.21,151.84,143.11,140.89,140.67,135.05,129.55,120.89,118.11,108.90, 77·35，77·23，77·03，76·71，33·41，28·98，22·12;EI-MS:370·3[M+H] + ·
[0197] 实施例33.化合物30的制备
[0198] 操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为4-甲氧基苄氧胺。白色固 体，收率:48%。
[0200]化合物30波谱分析数据:iH-NMRHOOMHz，CDC13)δρρπι: 8 · 67(s，1H)，7 · 74( s，1H)， 7.48~7.43(m，lH)，7.35(d，2H，J = 8.8Hz)，7.19~7.10(m，lH)，6.90(d，2H，J = 8.4Hz)， 4.92(s，2H)，3.81(s，3H)，2.93(d，2H，J = 7.6Hz)，1.82~1.75(m，lH)，0.74(d，6H，J = 6 · 4Hz); 13C-NMR( 100MHz，CDC13): 163 · 88，161 · 40，160 · 07，146 · 97，140 · 59，140 · 49，138 · 74， 131.04,130.56,130.47,127.40,121.92,121.89,116.12,115.91,114.04,114.01,113.80， 112·79，78·19，77·38，77·06，76·74，55·29，33·17，28·71，22·17;EI-MS:398·4[M+H] + ·
[0201 ]实施例34.化合物31的制备
[0202]操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为4-氟苯肼盐酸盐，三乙胺 为3个当量。白色固体，收率:45%。
[0204] 化合物31 波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，DMS0)δρρπι: 10 · 〇8(s，1H)，8 · 27(s，1H)， 7.87(s,lH) ,7.61(q,lH,J = 6.8Hz) ,7.48(d,lH,J = 9.6Hz) ,7.38(t,2H,J = 8.0Hz) ,7.00 (t，2H，J = 8.8Hz)，6.80~6.77(m，2H)，2.96(d，2H，J = 7.6Hz)，1.65~1.58(m，lH)，0.64(d， 6H，J = 6.4Hz);13C-NMR(100MHz，DMS0) :163.66,163.27,161.21,157.48,155.16,146.79， 146.27,141.13,141.03,139.60,131.59,131.50,122.73,116.28,116.08,115.71,115.49， 114.40,114.07,113.88,113.80,40.65,40.44,40.24,40.03,39.82,39.61,39.40,32.86, 28.40,22.43；EI-MS:371.4[M+H] +.
[0205] 实施例35.化合物32的制备
[0206] 操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为4-吡啶甲胺。白色固体，收 率:61%。
[0208] 化合物32波谱分析数据：lH-NMR(400MHz，CDCl3)Sppm: 8 · 53(s，1H)，7 · 89(s，1H)， 7.47(q，lH，J = 6.4Hz)，7.28~7.14(m，5H)，6.81(s，lH)，4.60(d，2H，J = 6.0Hz)，2.99(t， 2H，J = 7.2Hz)，1.84~1 ·78(ι?，1H)，0.75(d，6H, J = 6.8Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13): 163.89，163.63，161.42，149.90，147.96，146.73，140.67，140.58，138.52，130.60，130.51， 122.29,121.93,121.90,116.16,115.95,115.37,114.07,113.83,77.37,77.05,76. 73， 42.13,33.12,28.76,22.18；EI-MS:353.4[M+H] +.
[0209] 实施例36.化合物33的制备
[0210] 操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为1-B0C-4-氨甲基哌啶。白 色固体，收率:60%。
[0212]化合物33波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 81 (s，1H)，7 · 50~7 ·44(m， 1H) ,7.20~7.13(m，3H)，6.16(t，lH，J = 6.0Hz)，4.13((1,2H，J= 12.8Hz)，3.30(d，2H，J = 5.2Hz)，2.97(d，2H，J = 7.6Hz)，2.70(t，2H，J=12.4Hz)，1.84~1.72(m，4H)，1.46(s，9H)， 1.23~1 · 13(m，2H)，0.75((1,6H，J = 6.8Hz) ;13C-NMR(100MHz，CDC13) : 163.88,163.61， 161.41,154.82,146.23,140.77,140.67,138.33,130.54,130.45,121.93,121.90,116.05， 115.96,115.84,114.06,113.82,79.41,77.36,77.25,77.05,76.73,44.80,43.61,36.57， 33·11，29·88，28·74，28·46，22·17;EI-MS:459·6[M+H] + ·
[0213]实施例37.化合物34的制备
[0214] 取25mL圆底烧瓶，将化合物44(100mg，0.4溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入三 乙胺（12211^，1.2_31)，然后低温下缓慢加入对硝基酰氯（10411^，0.56_31)，60°(3加热反应 过夜。反应结束后加入30mL水，乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐 水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚)分离 获取目标化合物。
[0216]化合物34波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 9 · 59(s，1H)，8 · 32(d，2H，J = 8.4Hz)，8.04(d，3H，J = 6.8Hz)，7.42~7.27(m，3H)，7.07(t，lH，J = 8.0Hz)，7.35(q，2H，J = 7.2Hz)，1.38(t，3H，J = 7.2Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl3):164.03，163.98，163.02，161.52， 150.40,141.29,141.19,140.66,139.71,137.77,130.52,130.43,128.90,124.15,118.52， 118.49,115.44,115.23,110.87,110.62,105.62,77.36,77.04,76.72,60.96,14.33 JIMS :399.3 [M+H]+·
[0217]实施例38.化合物35的制备
[0218]操作同实施例37,不同的是将34的原料对硝基酰氯替换为対硝基磺酰氯。
[0220] 化合物35波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，CDC13)δρρπι: 8 · 28(s，1H)，7 · 94( s，1H)， 7.71~7.66(m，2H)，7.38~7.32(m，lH),6.99~6.94(m，lH)，4.25(q，2H，J=7.2Hz),3.11 (s，3H)，3.06(s，3H)，1.34(t，3H，J = 7.2Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13) : 164.31,163.57， 161.14,158.37,153.68,142.73,141.02,140.92,129.49,129.40,119.14,119.11,113.14， 112.93,111.26,111.01,100.97,77.36,77.04,76.72,59.63,40.53,34.31,14.45；EI-MS: 305.4[M+H] +.
[0221] 实施例39.化合物36的制备
[0222] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为2-氟苄胺。白色固体，熔点101-102 °C，收率:49%。
[0224] 化合物35波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 80(s，1H)，7 · 59(d，1H，J = 3.2Hz)，7.40(t，lH，J = 7.2Hz)，7.38~7.25(m，lH)，7.16(d，lH，J = 3.6Hz)，7.14~7.04(m， 2H)，6.24(s，lH)，4.65(d，2H，J = 5.6Hz)，3.48(d，2H，J = 7.2Hz) ,2.12~2.02(m，lH) ,0.90 (d，6H，J = 7 · 2Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13) :162.81,162.35,161.79,159.90,147.34， 140.40，139.99，130.39，130.35，129.45，129.37，125.28，125.14，124.40，124.37，117.87， 117·14,115.55,115.33,37.59,37.55,32.93，28·84,22.06;EI-MS:359.5[M+H]+.
[0225] 实施例40.化合物37的制备
[0226] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为4-氟苯胺。白色固体，熔点126-127 °C，收率:28%。
[0228]化合物37波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13) δρρπι: 8 · 37 (t，1H，J = 8 · 0Hz)，7 · 95 (s，1H)，7.71(s，1H)，7.62((1, lH，J = 3.6Hz)，7.20(d，lH，J = 3.6Hz) ,7.17~7.07(m，3H)， 3.56(d，2H，J = 7.2Hz)，2.18~2.11(m，lH)，0.96(d，6H，J = 6.8Hz);13C-Mffi(100MHz， CDCb):161.70,160.77,153.83,151.42,147.92,140.45,140.06,126.37,126.27,124.70, 124.66,124.52,124.44,122.05,118.05,117.39,114.97,114.78(d),33.02,28.92,22.11； EI-MS:345.4[M+H]+.
[0229] 实施例41.化合物38的制备
[0230] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为4-三氟甲基苄胺。白色固体，熔点 163-164°C，收率：83%。
[0232] 化合物38波谱分析数据:iH-NMRHOOMHz，CDC13) δρρπι: 7 · 81 (s，1H)，7 · 61 (s，1H)， 7.59(d,2H,J = 7.2Hz) ,7.44(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.17(d,lH,J = 3.6Hz) ,6.35(s,lH) ,4.64 (d，2H，J = 6.0Hz)，3.51(d，2HJ = 7.2Hz)，2.12~2.05(m，lH)，0.92(d，6H，J = 7.2Hz);13C-NMR(100MHz，CDC13) :162.97,161.69,147.71,142.43,140.44,139.76,127.88(d),125.70， 125·66，117·50，117·22，77·34，77·03，76·71，42·95，32·93，28·86，22·09;EI-MS:409·5[M+ H] + .
[0233] 实施例42.化合物39的制备
[0234] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为2,4-二氟苄胺。白色固体，熔 108107-164°C，收率：92%。
[0236] 化合物39波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 80(s，1H)，7 · 59(d，1H，J = 3.2Hz)，7.42~7.36(m，lH)，7.16(d，lH，J = 3.2Hz)，6.87~6.79(m，2H)，6.27(s，lH)，4.59 (d，2H，J = 5.6Hz)，3.48(d，2H，J = 7.2Hz) ,2.10~2.03(m，lH)，0.90(d，6H，J = 6.4Hz);13C-匪R(100MHz，CDC13) :163.77,163.65,162.87,162.35,162.23,161.75,161.30,161.18， 159.87,159.75,147.39,140.40,139.91,131.34,131.28,131.24,131.19,121.40,121.36， 121.25,121.21,117.70,117.16,111.56,111.52,111.34,111.31,104.16,103.91,103.66， 77·34，77·03，76·71，37·01，36·98，32·91，28·83，22·05;EI-MS:377·5[M+H] + ·
[0237] 实施例43.化合物40的制备
[0238] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为4-甲氧基苄胺。白色固体，熔点111-113°C，收率:96%。
[0240]化合物40波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 77(s，1H)，7 · 59(d，1H，J = 3.2Hz) ,7.26(d,2H,J = 8.4Hz) ,7.16(d,lH,J = 2.8Hz) ,6.87(d,2H,J = 8.4Hz) ,6.12(s, 1H)，4.52(d，2H，J = 5.2Hz)，3.80(s，3H)，3.51(d，2H，J = 7.6Hz)，2.13~2.04(m，lH)，0.93 (d，6H，J = 6.8Hz); 13C-匪R(100MHz，CDC13) :162.69,161.81,159.16,147.41,140.40， 139.91,130.30,129.26(d),117.94,117.10,114.19,77.36,77.04,76.72,55.32,43.05， 32.93,28.86,22.12;EI-MS:371.5[M+H]+.
[0241 ]实施例44.化合物41的制备
[0242]操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为3-氟苄胺。白色固体，熔点117-119 °C，收率:79%。
[0244] 化合物41 波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDCl3)Sppm: 7 ·81 (s，1H)，7 · 59(d，1H, J = 3.6Hz),7.29(q,lH,J = 7.6Hz),7.17(d,lH,J = 3.2Hz),7.10(d,lH,J = 7.6Hz) ,7.03(d,lH, J = 9.6Hz) ,6.97(t,lH,J = 7.6Hz) ,6.28(s,lH) ,4.58(d,2H,J = 5.6Hz) ,3.51(d,2H,J = 7.2Hz) ,2.12~2.06(m, 1H)，0.92(d，6H，J = 6.4Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13) : 164.27， 162.88,161.82,161.73,147.62,140.93,140.86,140.43,139.83,130.32,130.23,123.23， 123.20,117.64,117.18,114.71,114.57,114.49,114.36,77.35,77.03,76.72,42.94， 32·93，28·87，22·11;EI-MS:359·6[M+H] + ·
[0245] 实施例45.化合物41的制备
[0246] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为4-氨基苄胺。白色固体，熔点126-128°C，收率:79%。
[0248]化合物 41 波谱分析数据 ^H-NMRGOOMHz, CDChWppm: 7.75(s，lH)，7.59((1,1H，J = 3.2Hz) ,7.15(d,2H,J = 3.2Hz) ,7.13(d,lH,J = 8.0Hz) ,6.65(d,2H,J = 8.0Hz) ,6.06(s, 1H)，4.46(d，2H，J = 5.6Hz)，3.50(d，2H，J = 7.2Hz)，3.42(s，2H)，2.14~2.06(m，lH)，0.92 (d，6H，J = 6 · 4Hz); 13C-匪R( 100MHz，CDC13): 162 · 64，161 · 84，147 · 32，145 · 97，140 · 38， 139.95,129.28,127.97,118.04,117.08,115.29,77.37,77.05,76.73,43.26,32.92, 28.86,22.13；EI-MS:356.5[M+H] +.
[0249]实施例46.化合物42的制备
[0250]操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为4-氨基苄胺。白色固体，熔点122-124°C，收率：55%。
[0252] 化合物42波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，CDC13) δρρπι: 9 · 31 (s，1H)，8 · 70(s，1H)， 8.24(s，lH)，7.73(s，lH)，7.63(s，lH)，7.12(d，2H，J = 7.6Hz)，6.72(d，2H，J = 7.6Hz) ,4.33 (d，2H，J = 4.0Hz)，3.48(d，2H，J = 7.2Hz) ,2.01 ~1.98(m，lH)，0.84(d，6H，J = 6.0Hz);13C-匪R(100MHz，CDC13) :162.28,161.91,156.71,146.58,141.59,140.91,130.26,129.05， 119.07.118.51.115.48.42.01.40.62.40.41.40.20.40.00. 39.79.39.58.39.37.32.53， 28.71,22.37；EI-MS:357.4[M+H]+.
[0253] 实施例47.化合物47的制备
[0254] 操作同实施例1，不同的是将44的原料替换为2-噻唑肼。白色固体，收率:35%。
[0256] 化合物47波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 75(s，1H)，7 · 53(d，1H，J = 3·6Ηζ)，7· 14(s，2H) ,7.05(d，2H，J = 3.6Hz) ,4.30(q，2H，J = 7.2Hz)，1.36 (t，3H，J = 7 · 2Hz); 13C-NMR( 100MHz，CDC13): 164 · 00，162 · 38，150 · 38，142 · 70，139 · 70，114 · 54，95 · 46， 77.35,77.24,77.04,76.72,59.82,14.52；EI-MS:239.0[M+H]+.
[0257] 实施例48.化合物48的制备
[0258] 操作同实施例2,不同的是将1的原料替换为化合物47,将碳酸钾替换为氢化钠。白 色固体，收率:35%。
[0260] 化合物48的波谱分析数据:iH-NMRHOOMHz，CDC13)δρρπι: 8 · 77(s，1H)，7 · 84(s，1H)， 7.46(d，lH，J = 3.6Hz)，7.35 ~7.24(m，5H)，7.03(d，lH，J = 3.6Hz)，5.08(d，2H，J = 6.0Hz)， 4.25(q，2H，J = 7.2Hz)，1.32(t，3H，J = 7.2Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl3):163.10，162.71， 150.23.145.53.139.32.139.10.128.63.127.43.127.33.114.68.97.00. 77.35.77.03， 76.72,59.96,49.40,14.46;EI-MS:657.2[2Μ+Η]+·
[0261] 实施例49.化合物49的制备
[0262]操作同实施例3，不同的是将2的原料替换为化合物48。白色固体，收率:70%。
[0264] 化合物 49 的波谱分析数据 jH-NMRHOOMHz^DChWppnKW.lWsJHhS.eTUjH， J = 6.4Hz)，7.84(s，lH)，7.67((1, lH，J = 3.6Hz)，7.54((1, lH，J = 3.6Hz) ,7.34~7.22(m， 5H)，5.05(d，2H，J = 6.4Hz);13C-MMR(100MHz，CDCl3):163.86，162.81，150.02，146.01， 139.99,139.87,129.02,127.66,127.63,117.11,97.64,48.39,40.63,40.42,40.21, 40·00,39·79,39·58,39·38;EI-MS:299·5[M-H] - ·
[0265] 实施例50.化合物50的制备
[0266] 操作同实施例4,不同的是将3的原料替换为化合物49,将环丙胺替换为2,4-二氟 苄胺。白色固体，收率:70%。
[0268] 化合物50波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，CDC13) δρρπι: 8 · 37 (s，1H)，7 · 61 (s，1H)， 7.49(d，lH，J = 3.6Hz) ,7.34~7.23(m，6H)，7.05(d，lH，J = 3.2Hz) ,6.84~6.77(m，2H)， 6.14(s，lH)，4.79(s，2H)，4.52((1,2H，J = 6.4Hz); 13C-NMR(100MHz，CDC13) :162.83,148.76， 142.24,139.47,138.72,131.28,131.22,131.12,128.56,127.37,127.31,121.62,114.90， 111.50,111.46,111.29,111.25,104.12,103.87,103.62,101.05,77.36,77.24,77.04， 76.72,49.36,37.04；EI-MS:426.2[M+H]+.
[0269] 实施例51.目标化合物的体外抗HBV细胞活性筛选试验
[0270] 测试原理
[0271] HBV转染的肝癌细胞HepG2.2.15细胞株，在进行细胞培养时能够分泌HBV病毒颗粒 (包含HBsAg、HBeAg和DNA)。在抗HBV目标化合物的干预下，细胞分泌HBsAg的和HBeAg的含量 和产生的DNA会有所变化，因此检测细胞分泌到培养上清中的HBsAg的和HBeAg的含量以及 产生的HBV DNA，参照未加药对照组的含量，可以反映样品药物的抗病毒活性作用。以拉米 夫定为阳性对照药，用酶联免疫法(ELISA)检测样品药物达到抑制病毒HBsAg的和HBeAg分 泌的50 %时的浓度数值为IC5Q;用聚合酶链反应(PCR)检测药物抑制HBV DNA复制量的50 % 时的浓度数值IC5Q;运用CCK-8检测样品药物导致50%细胞毒性死亡的数值浓度为CC5Q值； 并计算出待测化合物的"选择系数"（selectivity index)，计算公式:SI = CC5〇/IC5〇。
[0272] 测试方法
[0273] ⑴细胞毒性实验
[0274]配成实验所需样品储备浓度（100μ mol/L)，每个样品用HepG2.2.15细胞培养液配 置成做5个稀释浓度（100μ mol/L、ΙΟμ mol/L、lymol/L、0. lymol/L、0. Ο?μπιο?/L)，设立空白对 照并以拉米夫定作为的阳性对照药。加入96孔板细胞培养板，每浓度3复孔，每4天换同浓度 药液并设无药细胞对照组，共培养9天。用CCK-8法检测细胞存活率，确定药物对!fepG2.2.15 细胞的毒性。
[0275] ⑵抑制HBeAg和HBsAg抗原分泌实验
[0276] HepG2 2.2.15细胞在96孔细胞培养板中培养24小时后，加入所配不同浓度含药培 养液，继续培养8天(每4天换液一次），收集上清液，用HBsAg和HBeAg诊断试剂盒(ELISA)检 测HBsAg和HBeAg。
[0277] ⑶抑制HBV DNA合成实验(PCR方法）
[0278] HepG2 2.2.15细胞在96孔细胞培养板中培养24小时后，加入所配不同浓度含药培 养液，继续培养8天(每4天换液一次），收集上清液，用探针法进行PCR检测。
[0279] 化合物的活性列于表2中。由表2可以看出，化合物36和39显示出了较显著的抑制 抗原分泌的活性可以作为HIV抑制剂的先导化合物加以利用。但其基本上没有抑制DNA合成 活性，只有化合物26表现较弱的活性(71μπι 〇1/υ。
[0280] 表2.吡唑类衍生物抗HBV的毒性(HepG22.2.15细胞）、活性和选择系数
[0284] 注：aIC5Q:保护50 %感染HBV的HepG22.2.15细胞免于细胞病变的化合物浓度； bCC5Q:使50 %未感染HBV的细胞发生病变的化合物浓度;eSI选择性系数:CC5Q/IC5Q的比值。
【主权项】
1. 化挫类衍生物，其特征在于是具有如下通式I所示的结构：其中， Ri为含取代基的苯环或芳杂环； R2为烷基、苄基或不同链长度的醋基； X为NH、S或C出； R3为簇基、醋基或不同取代基的酷胺。2. 如权利要求1所述的化合物，其特征在于通式I中，Ri为不同取代基的苯环或嚷挫环； R2为饱和烷基、苄基或下酸乙醋;X为0、NH或C出;R3为甲酸、甲酸乙醋、环丙酷胺、不同取代基 的苯酷胺、不同取代基的节酷胺。3. 如权利要求2所述的化合物，其特征在于是下述结构的化合物之一： ^ 结构式 ^ 络掏式 ^ 結巧式 号 号 号4.如权利要求1或2所述的化合物的制备方法，其特征在于为下列方法之一： (1) W乙氧甲叉氯乙酸乙醋Ia为初始原料，首先在醋酸和水的混合溶液中经过醋酸钢 的催化与不同的芳香阱反应得到中间体化粗品，然后化与漠化亚铜、2-甲基-2-硝基丙烷烃 重氮化反应得到中间体Ic Jb或Ic与不同取代基发生亲核取代反应生成不同的目标化合物 Id;接着，在碱性条件下发生水解反应生成中间体Ie，Ie与不同取代的胺发生酷化反应得到 目标产物If; 合成路线1如下：试剂及条件：（i)醋酸钢，醋酸，水，回流；（ii)漠化亚铜，乙腊，50°C;(iii)氨化钢、碳酸 钟或碳酸飽，不同的胺、醇或面代烧，DMF，室溫或加热；（iV)氨氧化钢，乙醇，水，四氨巧喃， 50°C; (V)不同的胺，二氯甲烧，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-径基苯并 S挫； 其中， Ri为含取代基的苯环或芳杂环； R2为烷基、苄基或不同链长度的醋基； X为畑或S; R3为不同取代基的酷胺； 所述的不同的胺为环丙胺，2，4-二氣节胺； 或者， (2) W碳酸二乙醋IIa为初始原料，首先在醋酸和四氨巧喃的混合溶液中经过氨化钢的 催化与不同的脂肪酬得到中间体nb粗品，然后nb与N，N-二甲基甲酯胺缩二甲醇反应得到 中间体He, IIc与不同阱盐酸盐发生成环反应生成不同的目标化合物IId;接着，在碱性条 件下发生水解反应生成中间体He, IIe与不同取代的胺发生酷化反应得到目标产物Hf; 合成路线2如下：试剂及条件：（i)四氨巧喃，氨化钢，60°0;(11)100°0;(11。乙醇，^乙胺；（1乂)氨氧化 钢，乙醇，水，四氨巧喃，50°C;(v)N，N-二甲基甲酯胺，2-(7-偶氮苯并S氮挫）-N，N，N'，N'-四甲基脈六氣憐酸醋，=乙胺，室溫； 其中， Ri为含取代基的苯环或芳杂环； R2为烷基； R3为不同取代的苯基、苄基、苯胺或酪。5.如权利要求4所述的化合物的制备方法，其特征在于方法(1)的具体步骤如下： (1) 取25mL圆底烧瓶，将不同取代基的阱盐酸盐Ial.59mmol溶于3mL乙酸中，加入ImL 水，醋酸钢3.49mmol回流4h;反应结束后冷却至室溫，加入20血冰水中；乙酸乙醋萃取S次， 合并有机相，30mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶 柱分离获取纯品Ib; (2) 取25mL圆底烧瓶，将中间体化0. Smmol溶于乙腊5mL中，加入漠化亚铜，冷却至0°C， 缓慢加入亚硝酸叔下醋2.17mmol，50°C揽拌过夜；反应结束后冷却至室溫，加50mL水泽灭； 乙酸乙醋萃取S次，合并有机相，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上 样，快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品Ic; (3) 取25mL圆底烧瓶，将中间体化1.12mmol溶于5mL DMF中，加入碳酸钟、碳酸飽或者 氨化钢，室溫揽拌5min;加入不同的面代烧1.35mmol，室溫揽拌过夜；反应结束后加入50mL 水，乙酸乙醋萃取=次，合并有机相，饱和食盐水洗=次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样， 快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品Id; 取25mL圆底烧瓶，将中间体Ic 0.64mmol溶于5mL DMF中，加入60%化H 0.77mmol，室溫 揽拌5分钟;缓慢加入不同的硫醇等试剂，室溫揽拌过夜;反应结束后加入50mL水，乙酸乙醋 萃取=次，合并有机相，饱和食盐水洗=次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样，快速制备色 谱硅胶柱分离获取纯品Id; (4) 取25mL圆底烧瓶，将中间体Id 0.74mmo 1溶于2mL乙醇、2mL水和2血四氨巧喃的混合 溶液中，50°C加热反应过夜;反应结束后用旋转蒸发仪除去四氨巧喃和乙醇，加入30mL氯化 锭水溶液中和反应，乙酸乙醋萃取S次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢 干燥;浓缩，石油酸洗，重结晶得到纯品Ie; (5)取25mL圆底烧瓶，将中间体Ie 0.19mmol溶于5mL二氯甲烧中，然后低溫下缓慢加入 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.25mmol和1-径基苯并S挫0.25mmol，揽拌 10分钟;加入不同的胺，室溫反应过夜;反应结束后加入30mL水，乙酸乙醋萃取=次，合并有 机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱分离 获取纯品If。6. 如权利要求4所述的化合物的制备方法，其特征在于方法(2)的具体步骤如下： (1) 取50mL圆底烧瓶，低溫下将60 %氨化钢11.98mmo 1溶于15mL四氨巧喃溶液中，缓慢 滴加不同的脂肪酬IIa 1.59mmol溶于混合溶液中，室溫揽拌半小时;低溫下继续滴加碳酸 二乙醋14.98mmol于混合溶液中，60°C反应4小时；反应结束后冷却至室溫，加入50mL冰水 中，加入1.5mL醋酸中和反应，乙酸乙醋萃取S次，合并有机相，30mL饱和食盐水洗一次，无 水硫酸钢干燥;浓缩得到粗品IIb; (2) 取25mL圆底烧瓶，将中间体IIb 5.Slmmol溶于5mL N，N-二甲基甲酯胺缩二甲醇中 100°C揽拌过夜;反应结束后减压蒸馈得到粗品IIc; (3) 取25mL圆底烧瓶，将1 .59mmol不同取代基的阱盐酸盐溶于6mL乙醇中，加入 1.90mmol中间体IIc于混合溶液中，缓慢滴加 S乙胺7.93mmol，室溫揽拌过夜;反应结束后 冷却至室溫，减压蒸馈除去部分乙醇，加入50mL水中；乙酸乙醋萃取S次，合并有机相，30mL 饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品 IId; (4) 取25mL圆底烧瓶，将中间体IId 0.69mmo 1溶于3mL乙醇、3mL水和3mL四氨巧喃的混 合溶液中，50°C加热反应过夜;反应结束后用旋转蒸发仪除去四氨巧喃和乙醇，加入30mL氯 化锭水溶液，乙酸乙醋萃取=次，合并有机相，饱和食盐水洗一次20mL，无水硫酸钢干燥;浓 缩，石油酸洗，重结晶得到纯品IIe; (5) 取25mL圆底烧瓶，将中间体IIe 0.38mmol溶于5血N，N-二甲基甲酯胺中，然后低溫 下缓慢加入2-(7-偶氮苯并S氮挫）-N，N，N'，N'-四甲基脈六氣憐酸醋0.46mmol，揽拌10分 钟;加入不同的胺及S乙胺0.76mmo 1，室溫反应1小时;反应结束后加入30mL水，乙酸乙醋萃 取S次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样，快速制备 色谱硅胶柱分离获取纯品Ilf。7. 权利要求1-3任一项所述的化合物在制备抗HBV的药物中的应用。8. -种抗皿V药物组合物，包含权利要求1-3任一项所述化合物和一种或多种药学上可 接受载体或赋形剂。
【专利摘要】本发明公开了一种吡唑类衍生物及其制备方法和应用。所述化合物具有式I所示的结构。本发明还涉及含有式I结构化合物的药物组合物以及提供上述化合物在制备抗HBV药物中的应用。
【IPC分类】A61P1/16, C07D231/38, C07D231/18, C07D231/16, C07D471/04, C07D403/12, C07D417/04, A61P31/20, C07D231/40, C07D231/14, C07D401/12
【公开号】CN105503730
【申请号】CN201510997646
【发明人】刘新泳, 贾海永, 展鹏
【申请人】山东大学
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月25日
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及吡唑类衍生物及其制备方法与制药用途。
【背景技术】
[0002] 乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B)，简称乙肝(Hepatitis B)，是由乙型 肝炎病毒(HBV)所致的重大传染性疾病，长期发展可导致急慢性病毒性肝炎、重型肝炎、肝 硬化和原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)。据世界卫生组织(WHO)报道，全 球近20亿人曾感染过HBV，其中约3.5亿人为慢性HBV感染者，平均每年约有100万人死于HBV 感染所致的急、慢性肝炎及相关并发症。目前用于预防和治疗慢性乙型肝炎(CHB)的药物主 要有疫苗、干扰素、免疫调节药以及DNA聚合酶抑制剂。但是由于它们存在耐药性、副作用、 停药后反弹和不能彻底的清除乙肝病毒等缺点，因此发现和研究新的安全、高效、低毒和抗 耐药性的非核苷类乙肝病毒抑制剂显得至关重要。
[0003] 杂环化合物是发现药物活性先导物的重要源泉。取代吡唑作为结构独特的一类杂 环"优势结构"，具有广泛的生物活性。它可以作为构成药效团的基本结构母核，以适合药物 特殊作用靶点的空间要求;还可以作为活性取代基或环系的组成部分而产生相应的生物活 性;另外杂环具有较好的体内代谢稳定性及生物相容性，对发现高效广谱、生物利用度好的 新型抗HBV药物具有重要意义。
[0004] 本发明基于噻唑类乙肝病毒抑制剂药效团模型和活性构象，采用分子杂合和电子 等排药物设计策略，设计合成了一系列吡唑类化合物，此类化合物在现有技术中未见相关 报道。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术的不足，本发明提供了吡唑类衍生物及其制备方法。本发明还提供 了上述化合物作为非核苷类HBV抑制剂的活性筛选结果及其应用。
[0006] 本发明的技术方案如下：
[0007] -.吡唑类衍生物
[0008] 本发明涉及的吡唑类衍生物，具有如下通式I所示的结构：
[0010] 其中，
[0011] R1为含取代基的苯环或芳杂环；
[0012] R2为烷基、苄基或不同链长度的酯基；
[0013] X 为NH、S或 CH2;
[0014] R3为羧基、酯基或不同取代基的酰胺。
[0015] 根据本发明优选的，通式I中，R1为不同取代基的苯环或噻唑环;R2为饱和烷基、苄 基或丁酸乙酯;X为〇、NH或CH 2;R3为甲酸、甲酸乙酯、环丙酰胺、不同取代基的苯酰胺、不同取 代基的苄酰胺。
[0016] 进一步优选的，吡唑类衍生物是具有下列结构的化合物之一：
[0017] 表1.化合物1-50的结构式
[0023] 二.吡唑类衍生物的制备方法
[0024] 本发明吡唑类衍生物的制备方法为下列之一：
[0025] 1.吡唑类衍生物的制备方法，步骤如合成路线1:以乙氧甲叉氰乙酸乙酯la为初始 原料，首先在醋酸和水的混合溶液中经过醋酸钠的催化与不同的芳香肼反应得到中间体lb 粗品，然后lb与溴化亚铜、2-甲基-2-硝基丙烷经重氮化反应得到中间体Ic，Ib或Ic与不同 取代基发生亲核取代反应生成不同的目标化合物Id;接着，在碱性条件下发生水解反应生 成中间体Ie，Ie与不同取代的胺发生酰化反应得到目标产物If。
[0026] 合成路线1如下：
[0027]
[0028] 试剂及条件：（i)醋酸钠，醋酸，水，回流；（ii)溴化亚铜，乙腈，50°C;(iii)氢化钠、 碳酸钾或碳酸铯，不同的胺、醇或卤代烷，N，N_二甲基甲酰胺，30_80°C;(iv)氢氧化钠，乙 醇，水，四氢呋喃，50°C;(v)不同的胺，二氯甲烷，1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐 酸盐，1-羟基苯并三唑；
[0029] 其中，
[0030] R1为含取代基的苯环或芳杂环；
[0031] R2为烷基、苄基或不同链长度的酯基；
[0032] X 为 NH或 S;
[0033] R3为不同取代基的酰胺；
[0034] 所述的不同的胺为环丙胺，2，4-二氟苄胺；
[0035] 本发明所述的吡唑类衍生物的制备方法，具体制备步骤如下：
[0036] (1)取25mL圆底烧瓶，将不同取代基的肼盐酸盐Ial.59mmol溶于3mL乙酸中，加入 lmL水，醋酸钠3.49mmol回流4h;反应结束后冷却至室温，加入20mL冰水中；乙酸乙酯萃取三 次，合并有机相，30mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱 硅胶柱分离获取纯品lb;
[0037] (2)取25mL圆底烧瓶，将中间体lb 0.8mmo 1溶于乙腈5mL中，加入溴化亚铜，冷却至 〇°C，缓慢加入亚硝酸叔丁酯2.17mmol，50°C搅拌过夜。反应结束后冷却至室温，加50mL水淬 灭；乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法 上样，快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品Ic;
[0038] (3)取25mL圆底烧瓶，将中间体lb 1.12mmol溶于5mL DMF中，加入碳酸钾、碳酸铯 或者氢化钠，室温搅拌5min;加入不同的卤代烷1.35mmol，室温搅拌过夜。反应结束后加入 50mL水，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗三次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法 上样，快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品Id;
[0039] 取25mL圆底烧瓶，将中间体Ic 0.64mmol溶于5mL DMF中，加入60%NaH 0.77mmol， 室温搅拌5分钟;缓慢加入不同的硫醇等试剂，室温搅拌过夜。反应结束后加入50mL水，乙酸 乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗三次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制 备色谱硅胶柱分离获取纯品Id;
[0040] (4)取25mL圆底烧瓶，将中间体Id 0.74mmo 1溶于2mL乙醇、2mL水和2mL四氢呋喃的 混合溶液中，50°C加热反应过夜。反应结束后用旋转蒸发仪除去四氢呋喃和乙醇，加入30mL 氯化铵水溶液中和反应，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫 酸钠干燥;浓缩，石油醚洗，重结晶得到纯品Ie;
[0041 ] (5)取25mL圆底烧瓶，将中间体Ie 0.19mmo 1溶于5mL二氯甲烷中，然后低温下缓慢 加入1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.25mmol和1-羟基苯并三唑0.25mmol， 搅拌10分钟；加入不同的胺，室温反应过夜。反应结束后加入30mL水，乙酸乙酯萃取三次，合 并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱 分离获取纯品If。
[0042] 2.吡唑类衍生物的制备方法，步骤如合成路线2:以碳酸二乙酯Ila为初始原料，首 先在醋酸和四氢呋喃的混合溶液中经过氢化钠的催化与不同的脂肪酮得到中间体lib粗 品，然后lib与N，N-二甲基甲酰胺缩二甲醇反应得到中间体II C，IIc与不同肼盐酸盐发生成 环反应生成不同的目标化合物lid;接着，在碱性条件下发生水解反应生成中间体lie，lie 与不同取代的胺发生酰化反应得到目标产物Ilf;
[0043] 合成路线2如下：
[0045]试剂及条件：（i)四氢呋喃，氢化钠，60°C ; (i i ) 100°C ; (i i i)乙醇，三乙胺；（iv)氢 氧化钠，乙醇，水，四氢呋喃，50°C; (v)N，N-二甲基甲酰胺，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N '， Ν'-四甲基脲六氟磷酸酯，三乙胺，室温；
[0046] 其中，
[0047] R1为含取代基的苯环或芳杂环；
[0048] R2为烷基；
[0049 ] R3为不同取代的苯基、苄基、苯胺或酚；
[0050]本发明所述的吡唑类衍生物的制备方法，具体制备步骤如下：
[0051 ] (1)取50mL圆底烧瓶，低温下将60%氢化钠11.98mmol溶于15mL四氢呋喃溶液中， 缓慢滴加不同的脂肪酮Ila 1.59_〇1溶于混合溶液中，室温搅拌半小时;低温下继续滴加 碳酸二乙酯14.98mmol于混合溶液中，60°C反应4小时。反应结束后冷却至室温，加入50mL冰 水中，加入1.5mL醋酸中和反应，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，30mL饱和食盐水洗一次， 无水硫酸钠干燥;浓缩得到粗品lib;
[0052] (2)取25mL圆底烧瓶，将中间体lib 5.81mmol溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺缩二甲 醇中100°C搅拌过夜;反应结束后减压蒸馏得到粗品lie;
[0053] (3)取25mL圆底烧瓶，将1.59mmol不同取代基的肼盐酸盐溶于6mL乙醇中，加入 1 · 90mmol中间体lie于混合溶液中，缓慢滴加三乙胺7 · 93mmol，室温搅拌过夜。反应结束后 冷却至室温，减压蒸馏除去部分乙醇，加入50mL水中；乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，30mL 饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品 lid；
[0054] (4)取25mL圆底烧瓶，将中间体lid 0·69mmo 1溶于3mL乙醇、3mL水和3mL四氢呋喃 的混合溶液中，50°C加热反应过夜。反应结束后用旋转蒸发仪除去四氢呋喃和乙醇，加入 30mL氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗一次20mL，无水硫酸钠 干燥;浓缩，石油醚洗，重结晶得到纯品lie;
[0055] (5)取25mL圆底烧瓶，将中间体lie 0.38mmol溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，然后 低温下缓慢加入2-(7-偶氮苯并三氮唑）-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯0.46mmol，搅拌 10分钟；加入不同的胺及三乙胺0.76mmol，室温反应1小时;反应结束后加入30mL水，乙酸乙 酯萃取三次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速 制备色谱硅胶柱分离获取纯品Ilf。
[0056] 三.吡唑类衍生物的应用
[0057]本发明公开了吡唑类衍生物抗HBV活性筛选结果及其作为抗HBV抑制剂的应用。通 过实验证明本发明的吡唑类衍生物可作为经典的HBV非核苷类抑制剂应用。具体地说，可以 作为HBV抑制剂用于制备抗乙肝药物。因此，本发明还提供吡唑类衍生物在制备抗HBV的药 物中的应用。
[0058]四.啦唑类衍生物的抗HBV活性和毒性实验
[0059] 对上述新合成的化合物(化合物的结构式见表1)运用酶联免疫法(ELISA)检测样 品药物达到抑制病毒HBeAg和HBsAg分泌的50%时的浓度数值为IC 5Q;运用MTT法检测样品药 物导致50%细胞毒性死亡的数值浓度为CC5Q值；用聚合酶链反应(PCR)检测药物抑制HBV DNA复制量的50%时的浓度数值IC 5Q，以拉米夫定作为阳性对照药。它们的抗HBV活性和毒性 数据列于表2中。由表2看出新合成的化合物部分呈现出较好抑制病毒HBeAg和HBsAg分泌活 性，大部分细胞毒性较低。
[0060] 本发明的吡唑类衍生物是一类结构新颖的非核苷类HBV抑制剂，可作为抗HBV的先 导化合物。
[0061] 本发明的吡唑类衍生物可作为非核苷类HBV抑制剂应用。具体地说，作为HBV抑制 剂用来制备抗乙肝药物。
[0062] 一种抗HBV药物组合物，包括本发明的吡唑类衍生物和一种或多种药学上可接受 载体或赋形剂。
[0063]本发明公开了吡唑类衍生物、其制备方法、抗HBV活性筛选结果及其作为抗HBV抑 制剂的首次应用。实验证明本发明的吡唑类衍生物可作为HBV抑制剂用于制备抗乙肝药物。
【具体实施方式】
[0064] 通过下述实例有助于理解本发明，但是不能限制本发明的内容，在下列实例中，所 有目标化合物的编号与表1相同。
[0065] 合成路线：
[0067]实施例1.化合物44的制备方法
[0068] 取25mL圆底烧瓶，将3-氟苯肼盐酸盐(5g，30.52mmol)溶于45mL乙酸中，加入15mL 水，醋酸钠(5.68g，33.58mmol)，回流4h。反应结束后冷却至室温，加入200mL冰水中；乙酸乙 酯萃取三次(50mL X 3)，合并有机相，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法 上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯：石油醚=1:20)分离获取淡黄色固体3-氨基-1- (3-氟苯)-1!1-吡唑-4-甲酸乙酯(44)6.938，熔点为130-131°(3，收率为91%。
[0070]化合物44波谱数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 79(s，1H)，7 · 51 ~7 · 45(m，1H)， 7.37~7.30(m，2H)，7.13~7.08(m，lH)，5.36(s，lH)，4.31(q，2H，J = 7.1Hz)，1.37(t，3H，J =7.1Hz);13C-匪R(100MHz，CDC13) :164.47,164.39,161.92,149.15,140.97,139.15， 139.04,131.10,131.01,118.88,188.85,115.11,114.90,111.41,111.17,96.57,59.78， 14.49；EI-MS:250.4[M+H] +.
[0071]实施例2.化合物1的制备
[0072] 取25mL圆底烧瓶，将化合物44 (280mg，1.12mmo 1)溶于5mL DMF中，加入碳酸钾 (466mg，3 · 36mmol)，室温搅拌5min;加入溴化节（230mg, 1 · 35mmol)，室温搅拌过夜。反应结 束后加入50mL水，乙酸乙酯萃取三次(25mL X 3)，合并有机相，饱和食盐水洗三次(50mL X 3 )，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚=1:30)分离 获取浅黄色油状液体1280mg，收率为73%。
[0074] 化合物1 的波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 81 (s，1H)，7 · 43~7 ·4536 (m，2H)，7.32~7.27(m，lH)，7.25~7.22(m，3H)，7.12~7.07(m，lH)7.04(dd，2H，Jl = 2.0Hz,J2 = 7.6Hz) ,6.52(s,lH) ,4.29(q,2H,J = 7.2Hz) ,4.03(s,lH) ,1.34(t,3H,J = 7.2Hz);1 3C-NMR(100MHz，CDC13):164.72，164.00，161.53，151.71，141.21，140.87，140.77， 137.81,130.42,130.33,128.66,127.66,127.19,120.37,120.34,115.28,115.07,112.51， 112.27,99.11,77.34,77.23,77.03,76.71,59.84,49.79,14.45；EI-MS:340.5[M+H] +.
[0075] 实施例3.化合物2的制备
[0076] 将化合物1 (250mg，0 · 74mmo 1)溶于2mL乙醇、2mL7K和2mL四氢呋喃的混合溶液中， 50°C加热反应过夜。反应结束后用旋转蒸发仪除去四氢呋喃和乙醇，加入30mL水，乙酸乙酯 萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，石油醚 洗，重结晶得到白色固体化合物21 OOmg，收率为32%。
[0078] 化合物2波谱分析数据：1!1-匪1?(4001^，0)(：13)3??111:7.89(8，1!〇,7.45~7.40(111， lH)，7.35~7.33(m，lH)，7.33~7.24(m，4H)，7.14~7.09(m，lH)，7.02(dd，2H，Jl = 2.0Hz， J2 = 7.6Hz) ,6.57(s,lH) ,4.07(s , 1H) ； 13C-NMR( 100MHz ,CDC13): 169.57,163.95,161.48, 152.18,141.89,140.59,140.49,137.58,130.46,130.37,128.74,127.77,127.04,120.76, 120.73,115.65,115.44,112.90,112.66,97.91,77.35,77.23,77.03,76.71,49.50；EI-MS: 312.4[M+H] +.
[0079] 实施例4.化合物3的制备
[0080] 取25mL圆底烧瓶，将化合物3 (60mg，0.19mmo 1)溶于5mL二氯甲烷中，然后低温下缓 慢加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(43mg，0.25mmol)和1-羟基苯并三唑 (39mg，0.25mmol)，搅拌10分钟；加入不同的胺，室温反应过夜。反应结束后加入30mL水，乙 酸乙酯萃取三次（15mL x 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩， 干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚=1:8)分离获取白色固体化合物340mg， 收率为60 %。
[0082] 化合物3波谱分析数据：1!1-匪1?(4001^，0)(：13)5??111:7.58(8，1!〇,7.42~7.36(111， 2H)，7.31~7.29(m，lH)，7.26~7.20(m，3H)，7.11~7.07(m，lH)，7.04(dd，2H，Ji = 2.0Hz，j2 =8.0Hz)，5.87(s，lH)，4.01(s，2H),2.82~2.76(m，lH),0.88~0.82(m，2H),0.62~0.58 (m，2H) ;13C-NMR(100MHz，CDCl3) :163.99,161.52,151.35,140.92,140.82,137.97,137.59， 130.39,130.30,129.17,128.53,127.67,127.44,127.26,120.24,120.21,115.19,114.98， 112.38,112.13,100.82,49.66,29.70,22.39,6.82;EI-MS:351.6[Μ+Η]+·
[0083] 实施例5.化合物4的制备
[0084] 操作同实施例2,所不同的是将溴化苄换成碘乙烷。油状液体，收率72%。
[0086] 化合物4波谱分析数据：1!1-匪1?(4001^，0)(：13)5??111:7.81(8，1!〇,7.46~7.39(111， 2H)，7.38~7.34(m，lH)，7.11~7.06(m，lH)，6.00(s，lH)，4.30(q，2H，J = 7.2Hz)，2.87(q， 2H，J = 7.2Hz)，1.37(t，3H，J = 7.1Hz)，1.08(t，3H，J = 7.1Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13): 164.87.164.00. 161.53.152.33.141.21.141.01.130.38.130.29.120.07.120.04.115.05， 114.84,112.16,111.92,98.58,77.37,77.25,77.05,76.73,59.76,40.92,15.55,14.50; EI-MS :278.2[M+H] + .
[0087] 实施例6.化合物5的制备
[0088] 操作同实施例2,所不同的是将溴化苄换成碘甲烷。油状液体，收率38%。
[0090] 化合物5波谱分析数据咕-匪R(400MHz，CDC13)δρρπι: 7 · 80( s，1H)，7 · 47~7 · 32(m， 3H)，7.12~7.07(m，lH)，4.30(q，2H，J = 7.2Hz)，2.95(s，3H)，1.36(t，3H，J = 7.2Hz);13C-匪R(100MHz，CDC13) :164.88,163.96,153.23,141.10,140.85,130.36,130.27,120.53， 120.50.115.21.115.00. 112.59.112.35.97.75.59.78.32.74.14.49；EI-MS:264.3[M+H]+.
[0091] 实施例7.化合物7的制备
[0092]操作同实施例2,不同的是将溴化苄换成溴代环丁烷，将碳酸钾换成碳酸铯。油状 液体，收率27 %。
[0094] 化合物7波谱分析数据：1!1-匪1?(4001^，0)(：13)3??111:7.80(8，1!〇,7.46~7.41(111， lH)，7.38~7.30(m，2H)，7.12~7.07(m，lH)，6.29(s，lH)，4.31(q，2H，J = 7.2Hz)，3.49(s， lH)，2.07~1.99(m，2H)，1.89~1.79(m，2H)，1.67~1.59(m，lH)，1.47~1.42(m，lH)，1.37 (t，3H，J = 7 · 2Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13) :164.89,163.94,161.48,150.98,141.17， 141.08,140.98,130.36,130.27,120.08,120.05,115.06,114.85,112.17,111.93,98.32， 59.77,50.93,32.26,14.51,14.19;EI-MS:304.4[M+H]+.
[0095] 实施例8.化合物8的制备
[0096] 操作同实施例2,不同的是将溴化苄换成溴代环戊烷，将碳酸钾换成碳酸铯。油状 液体，收率47 %。
[0098] 化合物8波谱分析数据：1!1-匪1?(4001^，0)(：13)5??111:7.82(8，1!〇,7.45~7.37(111， 3H)，7· 11 ~7·06(ι?，1H)，5.99(s，1H)，4.30(q，2H，J = 7.2Hz)，3.44((1, lH，J = 4.4Hz)，1.67 ~1.59(m，4H)，1.47~1.40(m，4H)，1.36(t，3H, J = 7.2Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13): 164.83,163.98,161.52,151.93,141.20,141.10,130.36,130.27,119.98,119.94,114.98， 114.77,112.06,111.81,99.34,77.35,77.24,77.03,76.72,59.76,56.96,33.49,23.41， 14.48,EI-MS:318.4[M+H] +.
[0099] 实施例9.化合物9的制备
[0100] 操作同实施例2,操作同实施例2,不同的是将溴化苄换成溴代丁酸乙酯，将碳酸钾 换成氢化钠。油状液体，收率44 %。
[0102]化合物9波谱分析数据：1!1-匪1?(4001!^，0)(：13)5??111:7.84(8，1!〇,7.48~7.42(111， lH)，7.38~7.36(m，lH)，7.33~7.29(m，lH)，7.15~7.10(m，lH)，6.44(d，lH，J=10.4Hz)， 4.30(q，2H，J=7.2Hz),4.13~4.03(m，2H)，3.73~3.67(m，lH),1.73~1.62(m，3H),1.38 (t，3H，J = 7.2Hz)，1.17(t，3H，J = 7.2Hz)，0.87(t，3H，J = 7.2Hz);13C-NMR(100MHz，CDC13): 171.87,164.33,164.09,161.62,150.51,141.46,140.51,140.41,130.71,130.62,120.30， 120.27,115.58,115.37,112.46,112.22,99.93,77.35,77.23,77.03,76.71,61.24,59.95, 58.71,26.31,14.46,14.06,9.37,EI-MS:364.5[M+H] +.
[0103] 实施例10.化合物6的制备
[0104] 取25mL圆底烧瓶，将中间体3-氨基-1-(3-氟苯基)-1Η-吡唑-4-碳酸乙酯（200mg， 0.8mmol)溶于5mL乙腈中，加入溴化亚铜，冷却至0°C，缓慢加入亚硝酸叔丁酯（223mg， 2.17mmol)，50°C搅拌过夜。反应结束后冷却至室温，加50mL水淬灭；乙酸乙酯萃取三次 (25mL X 3)，合并有机相，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速 制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚=1:30)分离获取黄色固体3-溴-1-(3-氟苯基)-1Η-吡 唑-4-碳酸乙酯195mg，收率72%。
[0106] 化合物6波谱分析数据:iH-NMRHOOMHz，CDCl3)Sppm: 8 · 14( s，1H)，7 · 52~7 · 4(m, lH)，7.36(dd，lH，Jl = 2.0Hz，J2 = 7.6Hz)，7.32~7.28(m，lH)，7.23~7.18(m，lH)，4.37(q， 2H，J = 7.2Hz)，1.37(t，3H，J = 7.2Hz)，1.40(t，3H，J = 7.2Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13): 163.69,161.62,161.22,143.43,139.60,139.50,130.39,130.31,121.85,121.81,117.78, 116.50,116.29,115.55,113.98,113.73,77.34,77.23,77.03,76.71,60.71,14.33,EI-MS: 313.3[M+H] +.
[0107] 实施例11.化合物10的制备
[0108] 取25mL圆底烧瓶，将中间体3-溴-1-(3-氟苯基）-1Η-吡唑-4-碳酸乙酯（200mg， 0 · 64mmol)溶于5mL DMF中，加入60%NaH(31mg，0 · 77mmol)，室温搅拌5分钟；缓慢加入不同 的硫醇等试剂，室温搅拌过夜。反应结束后加入50mL水，乙酸乙酯萃取三次（25mL X 3)，合 并有机相，饱和食盐水洗三次(50mL X 3 )，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱 硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚)分离获取油状液体85mg，收率38%。
[0110] 化合物 10 波谱分析数据 jH-NMRGOOMHz^DChWppnKS.lMsJiOjjgwTjSU， 1H) ,7.33~7.27(m，2H) ,7.19~7.15(m，lH)，4.37(q，2H，J = 7.2Hz) ,4.13~4.03(m，2H)， 3.30~3.28(m，lH)，1.73~1.50(m，5H)，1.40(t，3H，J = 7.2Hz)，1.21~1.15(m，5H)，EI-MS: 349·5[Μ+Η]+·
[0111] 实施例12.化合物11的制备
[0112] 取251^圆底烧瓶，将中间体异丁酰乙酸乙酯（1.338,8.39謹〇1)溶于111111^，^二 甲基甲酰胺缩二甲醇中100°c搅拌过夜。反应结束后减压蒸馏得到粗品。将中间体溶于llmL 乙醇，加入1. lmL三乙胺，3-氟苯肼盐酸盐化合物（1.36g，8.39mmol)，室温反应2小时。反应 结束后，加入150mL水，乙酸乙酯萃取三次（50mL x 3)，合并有机相，饱和食盐水洗三次 (50mL X 3)，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚= 30:1)分离获取油状液体832mg，收率36 %。
[0114] 化合物 11 波谱分析数据:1H-NMR(400MHz，CDCl3)Sppm:8.03(s，lH)，7.50~7.45(m， lH)，7.23~7.11(m，3H)，4.33(q，2H，J = 7.2Hz)，3.31~3.24(m，lH)，1.41~1.37(m，9H) ? 13C-NMR(100MHz，CDC13) : 163.86,163.20,161.38,152.90,143.31，140.79,140.69， 130.48,130.39,122.42,122.38,116.41,116.20,114.54,114.30,111.98,77.35,77.24, 77.04,76.72,60.11,26.42,20.09,14.41，EI-MS:277.4[Μ+Η]+·
[0115] 实施例13.化合物12的制备
[0116] 取50mL圆底烧瓶，将中间体碳酸二乙酯（1.77g，14.98mmo 1)溶于15mL THF中，低温 下加入60%NaH(480mg，ll .98mmol)，室温搅拌30分钟；缓慢加4-甲基-2-戊酮（lg， 9.98mmol)，60°C加热反应4h。反应结束后冷却至室温，加入50mL醋酸水溶液猝灭，乙酸乙酯 萃取三次(25mL X 3)，合并有机相，50mL饱和碳酸氢钠水溶液洗一次，50mL饱和食盐水洗一 次，无水硫酸钠干燥;浓缩得粗品4-甲基丁酰乙酸乙酯，直接进行下一步。
[0117] 取25mL圆底烧瓶，将上步得到的粗品4-甲基丁酰乙酸乙酯（1 g，5.8 lmmo 1)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺缩二甲醇中100°C搅拌过夜。反应结束后减压蒸馏得到黄色油状液体。
[0118] 取25mL圆底烧瓶，将上步中间体（3 35mg，1.47mmol)溶于6mL乙醇，加入三乙胺 (622mg，6.14mmol)，3_氟苯肼盐酸盐化合物（200mg，l .23mmol)，室温反应2小时。反应结束 后，减压蒸馏除去部分乙醇，加入50mL水，乙酸乙酯萃取三次(25mL X 3)，合并有机相，50mL 饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯：石 油醚= 30:1)分离获取油状液体135mg，收率38 %。
[0120] 化合物 12 波谱分析数据 jH-NMRGOOMHz^DChWppnKS.OSbJiOj.SO-TjSU， 1H) ,7.21 ~7.14(m，3H)，4.34(q，2H，J = 7.2Hz)，2.94(d，2H，J = 7.6Hz)，1.89~1.78(m， 1H) ,1,38(t,3H,J = 7.2Hz) ,0.76(d,6H,J = 6.8Hz) .13C-NMR(100MHz,CDC13) : 163.90, 163.55,161.43,147.59,142.37,140.70,140.60,130.56,130.47,122.08,122.05,116.13, 115.92,114.21,113.97,113.18,77.35,77.24,77.03,76.71,60.04,33.31,28.85,22.21, 14.40,EI-MS:291.4[M+H]+.
[0121] 实施例14.化合物13的制备
[0122] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为2-氟苯肼盐酸盐。 油状液体，收率58 %。
[0124] 化合物 13 光谱分析数据 jH-NMRGOOMHz^DChWppnKS.OWsJiOj.SS-TjeU， lH)，7.44~7.39(m，lH)，7.31~7.24(m，2H)，4.33(q，2H，J = 7.2Hz)，2.79(d，2H，J = 7·6Ηζ)，1.90~1.80(m, 1H)，1.38(t，3H，J = 7.2Hz)，0.75(d，6H, J = 6.8Hz) .13C-NMR (100MHz，CDC13) : 163.53,158.33,155.82,149.02,142.73,131.29,131.21，129.52， 127.18,127.06,124.77,124.73,116.91,116.72,112.65,77.36,77.24,77.04,76.72, 59.99,33.53,33.51,28.68,22.20,14.40；EI-MS:291.4[M+H] +.
[0125] 实施例15.化合物14的制备
[0126] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为4-氟苯肼盐酸盐。 油状液体，收率56 %。
[0128] 化合物14波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 8 ·03(s，1H)，7 · 38~7 · 35(m， 2H) ,7.21 ~7.17(m，2H)，4.32(q，2H，J = 7.2Hz)，2.88(d，2H，J = 7.2Hz)，1.87~1.80(m， 1H)，1.38( t，3H，J = 7.2Hz)，0.75((1,6H，J = 6.8Hz) .13C-匪 R(100MHz，CDC13) : 163.75， 163.60,161.27,147.65,142.11,135.42,135.39,128.41,128.32,116.37,116.14,112.86, 77.34,77.23,77.02,76.71,59.97,33.34,28.76,22.20,14.39；EI-MS:291.4[M+H] +.
[0129] 实施例16.化合物15的制备
[0130] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为4-硝基苯肼盐酸 盐。油状液体，收率37 %。
[0132] 化合物 15波谱分析数据：七-匪以400MHz，CDC13) δρρπι: 8 · 39 (dd，2H，Ji = 2 · 0Hz，J2 = 6·8Ηζ)，8.09(s，lH)，7.64(dd，2H，Ji = 2.0Hz，j2 = 6.8Hz)，7.27(s，lH)，4.34(q，2H，J = 7.2Hz)，3.01(d，2H，J = 7.2Hz)，1.85~1.78(m，lH)，1.39(t，3H，J = 7.2Hz)，0.75(d，6H，J = 6 · 8Hz) · 13C-NMR( 100MHz，CDC13): 163 · 28，147 · 78，147 · 34，144 · 53，143 · 15，126 · 68，124 · 82， 114.13,77.35,77.24,77.04,76.72,60.23,33.36,29.09,22.18,14.38；EI-MS:318.5[M+H ] + ·
[0133] 实施例17.化合物16的制备
[0134] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为3-甲氧基苯肼盐酸 盐。油状液体，收率47 %。
[0136] 化合物 16波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 39(t，1H，J = 8 · 4Hz)，7 · 00 (dd,lH, Ji = l .6Hz,J2 = 8.4Hz) ,6.98(dd,lH,Ji = l .6Hz,J2 = 8.4Hz) ,6.92( t, 1H,J = 2.0Hz),4.32(q，2H，J = 7.2Hz) ,3.85(s,3H) ,2.92(d，2H，J = 7.2Hz) ,1.89~1.82(m,lH)， 1.38(t，3H，J = 7.2Hz)，0.76((1,6H，J = 6.8Hz) .13C-NMR(100MHz，CDCl3) :163.69,160.20， 147.55,141.98,140.27,129.92,118.58,114.93,112.81,112.12,77.35,77.24,77.03， 76.72,59.95,55.58,33.38，28·74,22·24,14.41;EI-MS:303.5[M+H]+.
[0137] 实施例18.化合物17的制备
[0138] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为2-硝基苯肼盐酸 盐。油状液体，收率52 %。
[0140] 化合物 17波谱分析数据：七-匪以400MHz，CDC13) δρρπι: 8 · 10 (dd，1H，Ji = 0 · 8Hz，J2 = 8.0Hz) ,8.05(s,lH) ,7.78(dt,lH ,Ji = 1.2Hz j2 = 7.6Hz),7.68(dt,lH ,Ji=1.2Hz ,J2 = 7.6Hz), 7.54 (dd, 1H, Ji = 0.8Hz , J2 = 7.6Hz), 4.33 (q, 2H, J = 7.2Hz) , 2.83 (d , 2H, J = 7.6Hz), 1.89~1.79(m, 1H) , 1.38(t,3H，J = 7.2Hz)，0.81(d，6H, J = 6.8Hz) .13C-NMR (100MHz，CDC13):163.34,148.59,146.03,143.16,133.50,132.53,130.42,129.77, 125.64,113.52,77.36,77.05,76.73,60.08,33.45,28.43,22.23,14.36；EI-MS:318.5[M+ H] + .
[0141] 实施例19.化合物18的制备
[0142] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为4-甲氧基苯肼盐酸 盐。油状液体，收率32 %。
[0144] 化合物 18 波谱分析数据 ^Η-ΝΜΚΗΟΟΜΗζ,ΟΧ^ΜρρπιΑ.?^Ο,Ι?Ο,Υ^Μ?Μ^υι = 2.4Hz ,J2 = 6.8Hz) ,6.99(dd, 2H ,Ji = 2.4Hz ,J2 = 6.8Hz) ,4.32(q, 2H ,J = 7.2Hz) , 3.87(s, 1H)，2.86(d，2H，J = 7.2Hz) ,1.90~1.80(m，lH)，1.37(t，3H，J = 7.2Hz)，0.75(d，6H，J = 6.8Hz),EI-MS:303.5[M+H]+.
[0145] 实施例20.化合物19的制备
[0146]操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为3-羧基苯肼盐酸 盐。白色固体，收率52%。
[0148] 化合物 19波谱分析数据:七-匪以400MHz，CDC13) δρρπι: 9 · 80 (s，1H)，8 · 21 (dd，1H，Ji = 1.6Hz，J2 = 7.2Hz)，8.15(s，lH)，8.10(s，lH)，4.34(q，2H，J = 7.2Hz)，2.94(d，2H，J = 7.6Hz)，1.88~1.81(m,1H)，1.39(t，3H,J=7.2Hz),0.76.13C-匪R(100MHz，CDC13): 170.08,163.55,147.77,142.47,139.57,131.49,130.79,130.52,129.68,127.88,113.25， 77.35,77.24,77.03,76.71,60.12,33.36,28.94,22.23,14.40；EI-MS:317.5[M+H] +.
[0149] 实施例21.化合物20的制备
[0150] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为4-羧基苯肼盐酸 盐。白色固体，收率50%。
[0152] 化合物20波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 9 · 84(s，1H)，8 · 27(d，2H，J = 8·8Ηζ)，8· ll(s，lH)，7.56(d，2H，J = 8.8Hz)，4.34(q，2H，J = 7.2Hz)，2.99(d，2H，J = 7.2Hz)，1.86~1.79(m，lH)，1.39(t，3H，J = 7.2Hz)，0.75(d，6H，J = 6.8Hz);EI-MS:317.5[M +H] + .
[0153] 实施例22.化合物45的制备
[0154] 操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为3-硝基苯肼盐酸 盐。油状液体，收率45 %。
[0156] 化合物45波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 8 · 35~8 · 33(m，2H)，8 · 09(s， lH),7.80(d,lH ,J = 8.0Hz),7.72(t,lH ,J = 8.0Hz),4.34(q,2H ,J = 7.2Hz),2.98(d,2H ,J = 7.2Hz) ,1.90~1.79(m，lH)，1.39(t，3H，J = 7.2Hz)，0.77(d，6H，J = 6.8Hz) · 13C-匪R (100MHz，CDC13):163.32,148.58,147.76,142.95,140.41,132.02,130.33,123.52， 121.32,113.81,77.35,77.24,77.04,76.72,60.21,33.36,29.09,22.22,14.39；EI-MS: 318.5[M+H] + .
[0157] 实施例23.化合物21的制备
[0158]操作同实施例13,不同的是将12的原料3-氟苯肼盐酸盐替换为2-噻唑肼。白色固 体，收率25 %。
[0160] 化合物 21 波谱分析数据 ^H-NMRGOOMHz, CDChWppm: 8.02(s，lH)，7.60((1,1H，J = 3.2Hz)，7.18(d，lH，J = 3.6Hz)，4.33(q，2H，J = 7.2Hz)，3.51(d，2H，J = 7.2Hz)，2.16~2.06 (m，lH)，1.38(t，3H，J = 7.2Hz)，0.94(d，6H，J = 6.8Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl3):163.14， 161.89.148.96.143.46.140.40.117.18.115.17.60.25.33.02.28.89.22.13.14.35 JIMS: 280.3 [M+H]+.
[0161] 实施例24.化合物46的制备
[0162] 取25mL圆底烧瓶，将化合物12 (200mg，0 · 69mmo 1)溶于3mL乙醇、3mL水和3mL四氢呋 喃的混合溶液中，加入氢氧化钠（165mg，4.13mmol)，50°C加热反应过夜。反应结束后用旋转 蒸发仪除去四氢呋喃和乙醇，加入30mL氯化铵水溶液中和反应，乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，石油醚洗，重结晶得到白 色固体120mg，收率:66%。
[0164] 化合物 46 波谱分析数据 ^H-NMRGOOMHz, CDChWppm: 8.02(s，lH)，7.60((1,1H，J = 3.2Hz)，7.18(d，lH，J = 3.6Hz)，4.33(q，2H，J = 7.2Hz)，3.51(d，2H，J = 7.2Hz)，2.16~2.06 (m，lH)，1.38(t，3H，J = 7.2Hz)，0.94(d，6H，J = 6.8Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl3):163.14， 161.89.148.96.143.46.140.40.117.18.115.17.60.25.33.02.28.89.22.13.14.35 JIMS: 280.3 [M+H]+.
[0165] 实施例25.化合物22的制备
[0166] 取25mL圆底烧瓶，将化合物46(lOOmg，0.38mmo 1)溶于1 OmL二氯甲烷中，然后低温 下缓慢加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(95mg，0.5mmol)和1-羟基苯并三 唑(67mg，0.5mmol)，搅拌10分钟；室温反应过夜。反应结束后加入30mL水，乙酸乙酯萃取三 次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快 速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚)分离获取白色固体，收率55%。
[0168] 化合物22波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρ??: 8 · 39(s，1H)，8 · 11 (d，1H，J = 8.4Hz),7.60~7.44(m，4H),7.28~7.21(m，3H)，2.96(d，2H，J=7.6Hz)，1.94~1.84(m， lH),0.78(d,6H ,J = 6.8Hz) ；EI-MS:380.4[M+H] + .
[0169] 实施例26.化合物23的制备
[0170] 取25mL圆底烧瓶，将化合物46(lOOmg，0 ·38mmo 1)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中， 然后低温下缓慢加入2-(7-偶氮苯并三氮唑）-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯（174mg， 0·46mmo 1)，搅拌 10分钟；加入4-氟节胺（48mg，0· 38mmo 1)及三乙胺（77mg，0.76mmo 1)，室温 反应1小时。反应结束后加入30mL水），乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱 和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯：石油 醚)分离获取白色固体137mg，收率:97%。
[0172] 化合物23波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，CDC13)δρρπι: : 7 · 79( s，1H)，7 · 49~7 · 44 (m，lH)，7.31(dd，2H，Ji = 5.6Hz，J2 = 8.8Hz)，7.19(dd，2H，Ji = 2.0Hz，j2 = 8.0Hz)，7.15~ 7.12(m，1H)，6.24(s，lH)，4.56((1,2H，J = 6.0Hz)，2.98(d，2H，J = 7.6Hz) ,1.87~1.76(m， 1H)，0.75(d，6H，J = 6.4Hz);13C-匪R(100MHz，CDC13) : 163.91,163.47,163.33,161.44， 161.02,146.43,140.77,140.67,138.42,134.31,134.28,130.56,130.47,129.50,129.42， 121.95,121.91,116.09,115.88,115.73,115.71,115.49,114.08,113.84,77.36,77.25， 77.04,76.73,42.69,33.15,28.78,22.19；EI-MS:370.4[M+H] +.
[0173] 实施例27.化合物24的制备
[0174] 取25mL圆底烧瓶，将化合物46(lOOmg，0 ·38mmo 1)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中， 然后低温下缓慢加入2-(7-偶氮苯并三氮唑）-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯（174mg， 0.46mmol)，搅拌10分钟;加入三乙胺(77mg，0.76mmol)，60°C加热反应5小时。反应结束后加 入30mL水，乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸 钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚)分离获取白色固体40mg， 收率:33%。
[0176] 化合物24波谱分析数据:h-NMRGOOMHz，CDC13)δρρ??: : 7 · 64(s，1H)，7 · 46(dd，1H， Ji = 8.0Hz，J2 = 14.4Hz)，7.22((1, lH，J = 8.4Hz)，7· 18~7.14(m，2H)，3.52(q，4H，J = 7.2Hz)，2.80(d，2H，J = 7.2Hz)，1.74~1.64(m，lH)，1.24(t，6H，J = 7.2Hz)，0.76(d，6H，J = 6·8Hz);13C-NMR(100MHz，CDC13) : 165.25,163.90,161.43,144.25,142.86,141.00， 140.90,138.04,130.45,130.36,121.70,121.66,116.93,115.72,115.51,113.83,113.59， 77.36,77.04,76.73,33.26,28.63,22.17；EI-MS:318.5[M+H] +.
[0177] 实施例28.化合物25的制备
[0178] 操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为苄胺。白色固体80mg，收 率:60%〇
[0180] 化合物25波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，CDC13)δρρπι: : 7 · 79( s，1H)，7 · 79~7 · 44 (m，lH)，7.36~7.27(m，5H)，7.20~7.12(m，3H)，6.21(s，lH)，4.61(d，2H，J = 4.4Hz)，2.99 (d，2H，J = 7.2Hz) ,1.88~1.78(m，lH)，0.75((1,6H，J = 6.4Hz); 13C-匪R(100MHz，CDC13): 163.90,163.27,161.42,146.40,140.74,140.64,138.40,130.55,130.46,128.79,127.85, 127.58,121.96,121.93,116.07,115.86,114.09,113.85,77.35,77.24,77.04,76.72， 43·45，33·15，28·77，22·20;EI-MS:352·5[M+H] + ·
[0181] 实施例29.化合物26的制备
[0182] 操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为4-氟苯胺。白色固体65mg， 收率:48%。
[0184] 化合物26波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13) δρρ??: : 8 · 00(s，1H)，7 · 78(s，1H)， 7.56~7.53(m，2H)，7.51~7.45(m，lH)，7.21(dd，2H，Ji = 2.0Hz，j2 = 8.0Hz)，7.16(dd，lH， Ji = 2.0Hz，j2 = 9.2Hz)，7.04(t，2H，J = 8.4Hz)，2.99(d，2H，J = 7.2Hz)，1.89~1.82(m，lH)， 0.75(d，6H，J=6.8Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl 3):163.91,161.52,161.43,160.73,158.30， 147.24,140.40,140.30,138.37,133.79,133.76,130.66,130.57,122.42,122.34,122.04, 122.00,116.36,116.15,115.96,115.81,115.59,114.17,113.93,77.36,77.24,77.04， 76.72,33.19,28.74,22.21.
[0185] 实施例30.化合物27的制备
[0186] 取25mL圆底烧瓶，将化合物21 (1.5g，5.37mmol)溶于14mL乙醇、14mL水和14mL四氢 呋喃的混合溶液中，加入氢氧化钠（1.29g，32.2mmol)，50°C加热反应过夜。反应结束后用旋 转蒸发仪除去四氢呋喃和乙醇，加入30mL乙酸乙酯和50mL水萃取，取水相，加入30mL稀盐酸 中和反应，乙酸乙酯萃取三次(30mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸 钠干燥;浓缩，石油醚洗，重结晶得到白色固体1.18g，收率:87%。
[0188] 化合物27波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDCl3)Sppm: : 12 · 79(s，1H)，8 · 11 (s，1H)， 7.76(d，lH，J = 3.6Hz)，7.67(d，lH，J = 3.2Hz)，3.45(d，2H，J = 7.2Hz)，2.07~2.00(m，lH)， 0.88(d，6H，J=6.8Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl3):164.30，161.71，148.11，144.06，140.95， 119.37,115.92,32.70,28.69，22.34;EI-MS:252.4[Μ+Η]+·
[0189] 实施例31.化合物28的制备
[0190] 取25mL圆底烧瓶，将化合物27 (70mg，0.28mmol)溶于5mL Ν，Ν-二甲基甲酰胺中，然 后低温下缓慢加入2-(7-偶氮苯并三氮唑）-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯（127mg， 0 · 33mmo 1)，搅拌 10分钟；加入4-氟节胺（35mg，0 · 33mmo 1)及三乙胺（56mg，0 · 56mmo 1)，室温 反应1小时。反应结束后加入30mL水，乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和 食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚） 分离获取白色固体72mg，收率:72%。
[0192]化合物28波谱分析数据:1!1-匪1?(4001抱，0)(：13)3??111::7.80(8，1!〇,7.60((1，1!1，了 = 3.6Hz)，7.32~7.29(m，2H)，7.17(d，lH，J = 3.6Hz)，7.02(t，2H，J = 8.4Hz)，6.29(s，lH)， 4.55(d，2H，J = 5.6Hz)，3.50((1,2H，J = 7.2Hz) ,2.12~2.05(m，lH)，0.92(d，6H，J = 6.8Hz) ;13C-NMR(100MHz，CDC13) : 163.45,162.82,161.74,161.01，147.53,140.43,139.87， 134.12,134.09,133.82,129.55,129.47,117.72,117.17,115.71,115.49,114.43,77.37， 77.05,76.74,42.77,32.92,28.86,22.12；EI-MS:359.4[M+H] +.
[0193] 实施例32.化合物29的制备
[0194] 取25mL圆底烧瓶，将化合物27 (100mg，0.4mmol)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，然 后低温下缓慢加入2-(7-偶氮苯并三氮唑）-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯（182mg， 0.48mmol)，搅拌10分钟；加入三乙胺（81mg，0.8mmol)，室温反应1小时。反应结束后加入 30mL水，乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠 干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚)分离获取白色固体60mg，收 率:40%。
[0196] 化合物29波谱分析数据:h-NMRHOOMHz，CDC13) δρρπι: 8 · 75(dd，1H，J1 = 0 · 8Hz，J2 = 4.4Hz) ,8.47(dd,lH,Jl = 1.2Hz ,J2 = 8.4Hz) ,7.28(d,lH,J = 3.6Hz) ,3.55(d,2H ,J = 7.2Hz)，2.22~2.16(m，lH)，0.96(d，6H，J = 6.8Hz);13C-MlR(100MHz，CDCl3):161.05， 158.58,152.21,151.84,143.11,140.89,140.67,135.05,129.55,120.89,118.11,108.90, 77·35，77·23，77·03，76·71，33·41，28·98，22·12;EI-MS:370·3[M+H] + ·
[0197] 实施例33.化合物30的制备
[0198] 操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为4-甲氧基苄氧胺。白色固 体，收率:48%。
[0200]化合物30波谱分析数据:iH-NMRHOOMHz，CDC13)δρρπι: 8 · 67(s，1H)，7 · 74( s，1H)， 7.48~7.43(m，lH)，7.35(d，2H，J = 8.8Hz)，7.19~7.10(m，lH)，6.90(d，2H，J = 8.4Hz)， 4.92(s，2H)，3.81(s，3H)，2.93(d，2H，J = 7.6Hz)，1.82~1.75(m，lH)，0.74(d，6H，J = 6 · 4Hz); 13C-NMR( 100MHz，CDC13): 163 · 88，161 · 40，160 · 07，146 · 97，140 · 59，140 · 49，138 · 74， 131.04,130.56,130.47,127.40,121.92,121.89,116.12,115.91,114.04,114.01,113.80， 112·79，78·19，77·38，77·06，76·74，55·29，33·17，28·71，22·17;EI-MS:398·4[M+H] + ·
[0201 ]实施例34.化合物31的制备
[0202]操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为4-氟苯肼盐酸盐，三乙胺 为3个当量。白色固体，收率:45%。
[0204] 化合物31 波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，DMS0)δρρπι: 10 · 〇8(s，1H)，8 · 27(s，1H)， 7.87(s,lH) ,7.61(q,lH,J = 6.8Hz) ,7.48(d,lH,J = 9.6Hz) ,7.38(t,2H,J = 8.0Hz) ,7.00 (t，2H，J = 8.8Hz)，6.80~6.77(m，2H)，2.96(d，2H，J = 7.6Hz)，1.65~1.58(m，lH)，0.64(d， 6H，J = 6.4Hz);13C-NMR(100MHz，DMS0) :163.66,163.27,161.21,157.48,155.16,146.79， 146.27,141.13,141.03,139.60,131.59,131.50,122.73,116.28,116.08,115.71,115.49， 114.40,114.07,113.88,113.80,40.65,40.44,40.24,40.03,39.82,39.61,39.40,32.86, 28.40,22.43；EI-MS:371.4[M+H] +.
[0205] 实施例35.化合物32的制备
[0206] 操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为4-吡啶甲胺。白色固体，收 率:61%。
[0208] 化合物32波谱分析数据：lH-NMR(400MHz，CDCl3)Sppm: 8 · 53(s，1H)，7 · 89(s，1H)， 7.47(q，lH，J = 6.4Hz)，7.28~7.14(m，5H)，6.81(s，lH)，4.60(d，2H，J = 6.0Hz)，2.99(t， 2H，J = 7.2Hz)，1.84~1 ·78(ι?，1H)，0.75(d，6H, J = 6.8Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13): 163.89，163.63，161.42，149.90，147.96，146.73，140.67，140.58，138.52，130.60，130.51， 122.29,121.93,121.90,116.16,115.95,115.37,114.07,113.83,77.37,77.05,76. 73， 42.13,33.12,28.76,22.18；EI-MS:353.4[M+H] +.
[0209] 实施例36.化合物33的制备
[0210] 操作同实施例26,不同的是将23的原料4-氟苄胺替换为1-B0C-4-氨甲基哌啶。白 色固体，收率:60%。
[0212]化合物33波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 81 (s，1H)，7 · 50~7 ·44(m， 1H) ,7.20~7.13(m，3H)，6.16(t，lH，J = 6.0Hz)，4.13((1,2H，J= 12.8Hz)，3.30(d，2H，J = 5.2Hz)，2.97(d，2H，J = 7.6Hz)，2.70(t，2H，J=12.4Hz)，1.84~1.72(m，4H)，1.46(s，9H)， 1.23~1 · 13(m，2H)，0.75((1,6H，J = 6.8Hz) ;13C-NMR(100MHz，CDC13) : 163.88,163.61， 161.41,154.82,146.23,140.77,140.67,138.33,130.54,130.45,121.93,121.90,116.05， 115.96,115.84,114.06,113.82,79.41,77.36,77.25,77.05,76.73,44.80,43.61,36.57， 33·11，29·88，28·74，28·46，22·17;EI-MS:459·6[M+H] + ·
[0213]实施例37.化合物34的制备
[0214] 取25mL圆底烧瓶，将化合物44(100mg，0.4溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入三 乙胺（12211^，1.2_31)，然后低温下缓慢加入对硝基酰氯（10411^，0.56_31)，60°(3加热反应 过夜。反应结束后加入30mL水，乙酸乙酯萃取三次（15mL X 3)，合并有机相，20mL饱和食盐 水洗一次，无水硫酸钠干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱（乙酸乙酯:石油醚)分离 获取目标化合物。
[0216]化合物34波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 9 · 59(s，1H)，8 · 32(d，2H，J = 8.4Hz)，8.04(d，3H，J = 6.8Hz)，7.42~7.27(m，3H)，7.07(t，lH，J = 8.0Hz)，7.35(q，2H，J = 7.2Hz)，1.38(t，3H，J = 7.2Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl3):164.03，163.98，163.02，161.52， 150.40,141.29,141.19,140.66,139.71,137.77,130.52,130.43,128.90,124.15,118.52， 118.49,115.44,115.23,110.87,110.62,105.62,77.36,77.04,76.72,60.96,14.33 JIMS :399.3 [M+H]+·
[0217]实施例38.化合物35的制备
[0218]操作同实施例37,不同的是将34的原料对硝基酰氯替换为対硝基磺酰氯。
[0220] 化合物35波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，CDC13)δρρπι: 8 · 28(s，1H)，7 · 94( s，1H)， 7.71~7.66(m，2H)，7.38~7.32(m，lH),6.99~6.94(m，lH)，4.25(q，2H，J=7.2Hz),3.11 (s，3H)，3.06(s，3H)，1.34(t，3H，J = 7.2Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13) : 164.31,163.57， 161.14,158.37,153.68,142.73,141.02,140.92,129.49,129.40,119.14,119.11,113.14， 112.93,111.26,111.01,100.97,77.36,77.04,76.72,59.63,40.53,34.31,14.45；EI-MS: 305.4[M+H] +.
[0221] 实施例39.化合物36的制备
[0222] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为2-氟苄胺。白色固体，熔点101-102 °C，收率:49%。
[0224] 化合物35波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 80(s，1H)，7 · 59(d，1H，J = 3.2Hz)，7.40(t，lH，J = 7.2Hz)，7.38~7.25(m，lH)，7.16(d，lH，J = 3.6Hz)，7.14~7.04(m， 2H)，6.24(s，lH)，4.65(d，2H，J = 5.6Hz)，3.48(d，2H，J = 7.2Hz) ,2.12~2.02(m，lH) ,0.90 (d，6H，J = 7 · 2Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13) :162.81,162.35,161.79,159.90,147.34， 140.40，139.99，130.39，130.35，129.45，129.37，125.28，125.14，124.40，124.37，117.87， 117·14,115.55,115.33,37.59,37.55,32.93，28·84,22.06;EI-MS:359.5[M+H]+.
[0225] 实施例40.化合物37的制备
[0226] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为4-氟苯胺。白色固体，熔点126-127 °C，收率:28%。
[0228]化合物37波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13) δρρπι: 8 · 37 (t，1H，J = 8 · 0Hz)，7 · 95 (s，1H)，7.71(s，1H)，7.62((1, lH，J = 3.6Hz)，7.20(d，lH，J = 3.6Hz) ,7.17~7.07(m，3H)， 3.56(d，2H，J = 7.2Hz)，2.18~2.11(m，lH)，0.96(d，6H，J = 6.8Hz);13C-Mffi(100MHz， CDCb):161.70,160.77,153.83,151.42,147.92,140.45,140.06,126.37,126.27,124.70, 124.66,124.52,124.44,122.05,118.05,117.39,114.97,114.78(d),33.02,28.92,22.11； EI-MS:345.4[M+H]+.
[0229] 实施例41.化合物38的制备
[0230] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为4-三氟甲基苄胺。白色固体，熔点 163-164°C，收率：83%。
[0232] 化合物38波谱分析数据:iH-NMRHOOMHz，CDC13) δρρπι: 7 · 81 (s，1H)，7 · 61 (s，1H)， 7.59(d,2H,J = 7.2Hz) ,7.44(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.17(d,lH,J = 3.6Hz) ,6.35(s,lH) ,4.64 (d，2H，J = 6.0Hz)，3.51(d，2HJ = 7.2Hz)，2.12~2.05(m，lH)，0.92(d，6H，J = 7.2Hz);13C-NMR(100MHz，CDC13) :162.97,161.69,147.71,142.43,140.44,139.76,127.88(d),125.70， 125·66，117·50，117·22，77·34，77·03，76·71，42·95，32·93，28·86，22·09;EI-MS:409·5[M+ H] + .
[0233] 实施例42.化合物39的制备
[0234] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为2,4-二氟苄胺。白色固体，熔 108107-164°C，收率：92%。
[0236] 化合物39波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 80(s，1H)，7 · 59(d，1H，J = 3.2Hz)，7.42~7.36(m，lH)，7.16(d，lH，J = 3.2Hz)，6.87~6.79(m，2H)，6.27(s，lH)，4.59 (d，2H，J = 5.6Hz)，3.48(d，2H，J = 7.2Hz) ,2.10~2.03(m，lH)，0.90(d，6H，J = 6.4Hz);13C-匪R(100MHz，CDC13) :163.77,163.65,162.87,162.35,162.23,161.75,161.30,161.18， 159.87,159.75,147.39,140.40,139.91,131.34,131.28,131.24,131.19,121.40,121.36， 121.25,121.21,117.70,117.16,111.56,111.52,111.34,111.31,104.16,103.91,103.66， 77·34，77·03，76·71，37·01，36·98，32·91，28·83，22·05;EI-MS:377·5[M+H] + ·
[0237] 实施例43.化合物40的制备
[0238] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为4-甲氧基苄胺。白色固体，熔点111-113°C，收率:96%。
[0240]化合物40波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 77(s，1H)，7 · 59(d，1H，J = 3.2Hz) ,7.26(d,2H,J = 8.4Hz) ,7.16(d,lH,J = 2.8Hz) ,6.87(d,2H,J = 8.4Hz) ,6.12(s, 1H)，4.52(d，2H，J = 5.2Hz)，3.80(s，3H)，3.51(d，2H，J = 7.6Hz)，2.13~2.04(m，lH)，0.93 (d，6H，J = 6.8Hz); 13C-匪R(100MHz，CDC13) :162.69,161.81,159.16,147.41,140.40， 139.91,130.30,129.26(d),117.94,117.10,114.19,77.36,77.04,76.72,55.32,43.05， 32.93,28.86,22.12;EI-MS:371.5[M+H]+.
[0241 ]实施例44.化合物41的制备
[0242]操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为3-氟苄胺。白色固体，熔点117-119 °C，收率:79%。
[0244] 化合物41 波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDCl3)Sppm: 7 ·81 (s，1H)，7 · 59(d，1H, J = 3.6Hz),7.29(q,lH,J = 7.6Hz),7.17(d,lH,J = 3.2Hz),7.10(d,lH,J = 7.6Hz) ,7.03(d,lH, J = 9.6Hz) ,6.97(t,lH,J = 7.6Hz) ,6.28(s,lH) ,4.58(d,2H,J = 5.6Hz) ,3.51(d,2H,J = 7.2Hz) ,2.12~2.06(m, 1H)，0.92(d，6H，J = 6.4Hz) ;13C-匪R(100MHz，CDC13) : 164.27， 162.88,161.82,161.73,147.62,140.93,140.86,140.43,139.83,130.32,130.23,123.23， 123.20,117.64,117.18,114.71,114.57,114.49,114.36,77.35,77.03,76.72,42.94， 32·93，28·87，22·11;EI-MS:359·6[M+H] + ·
[0245] 实施例45.化合物41的制备
[0246] 操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为4-氨基苄胺。白色固体，熔点126-128°C，收率:79%。
[0248]化合物 41 波谱分析数据 ^H-NMRGOOMHz, CDChWppm: 7.75(s，lH)，7.59((1,1H，J = 3.2Hz) ,7.15(d,2H,J = 3.2Hz) ,7.13(d,lH,J = 8.0Hz) ,6.65(d,2H,J = 8.0Hz) ,6.06(s, 1H)，4.46(d，2H，J = 5.6Hz)，3.50(d，2H，J = 7.2Hz)，3.42(s，2H)，2.14~2.06(m，lH)，0.92 (d，6H，J = 6 · 4Hz); 13C-匪R( 100MHz，CDC13): 162 · 64，161 · 84，147 · 32，145 · 97，140 · 38， 139.95,129.28,127.97,118.04,117.08,115.29,77.37,77.05,76.73,43.26,32.92, 28.86,22.13；EI-MS:356.5[M+H] +.
[0249]实施例46.化合物42的制备
[0250]操作同实施例31，不同的是将28的原料替换为4-氨基苄胺。白色固体，熔点122-124°C，收率：55%。
[0252] 化合物42波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，CDC13) δρρπι: 9 · 31 (s，1H)，8 · 70(s，1H)， 8.24(s，lH)，7.73(s，lH)，7.63(s，lH)，7.12(d，2H，J = 7.6Hz)，6.72(d，2H，J = 7.6Hz) ,4.33 (d，2H，J = 4.0Hz)，3.48(d，2H，J = 7.2Hz) ,2.01 ~1.98(m，lH)，0.84(d，6H，J = 6.0Hz);13C-匪R(100MHz，CDC13) :162.28,161.91,156.71,146.58,141.59,140.91,130.26,129.05， 119.07.118.51.115.48.42.01.40.62.40.41.40.20.40.00. 39.79.39.58.39.37.32.53， 28.71,22.37；EI-MS:357.4[M+H]+.
[0253] 实施例47.化合物47的制备
[0254] 操作同实施例1，不同的是将44的原料替换为2-噻唑肼。白色固体，收率:35%。
[0256] 化合物47波谱分析数据:iH-NMRGOOMHz，CDC13)δρρπι: 7 · 75(s，1H)，7 · 53(d，1H，J = 3·6Ηζ)，7· 14(s，2H) ,7.05(d，2H，J = 3.6Hz) ,4.30(q，2H，J = 7.2Hz)，1.36 (t，3H，J = 7 · 2Hz); 13C-NMR( 100MHz，CDC13): 164 · 00，162 · 38，150 · 38，142 · 70，139 · 70，114 · 54，95 · 46， 77.35,77.24,77.04,76.72,59.82,14.52；EI-MS:239.0[M+H]+.
[0257] 实施例48.化合物48的制备
[0258] 操作同实施例2,不同的是将1的原料替换为化合物47,将碳酸钾替换为氢化钠。白 色固体，收率:35%。
[0260] 化合物48的波谱分析数据:iH-NMRHOOMHz，CDC13)δρρπι: 8 · 77(s，1H)，7 · 84(s，1H)， 7.46(d，lH，J = 3.6Hz)，7.35 ~7.24(m，5H)，7.03(d，lH，J = 3.6Hz)，5.08(d，2H，J = 6.0Hz)， 4.25(q，2H，J = 7.2Hz)，1.32(t，3H，J = 7.2Hz);13C-NMR(100MHz，CDCl3):163.10，162.71， 150.23.145.53.139.32.139.10.128.63.127.43.127.33.114.68.97.00. 77.35.77.03， 76.72,59.96,49.40,14.46;EI-MS:657.2[2Μ+Η]+·
[0261] 实施例49.化合物49的制备
[0262]操作同实施例3，不同的是将2的原料替换为化合物48。白色固体，收率:70%。
[0264] 化合物 49 的波谱分析数据 jH-NMRHOOMHz^DChWppnKW.lWsJHhS.eTUjH， J = 6.4Hz)，7.84(s，lH)，7.67((1, lH，J = 3.6Hz)，7.54((1, lH，J = 3.6Hz) ,7.34~7.22(m， 5H)，5.05(d，2H，J = 6.4Hz);13C-MMR(100MHz，CDCl3):163.86，162.81，150.02，146.01， 139.99,139.87,129.02,127.66,127.63,117.11,97.64,48.39,40.63,40.42,40.21, 40·00,39·79,39·58,39·38;EI-MS:299·5[M-H] - ·
[0265] 实施例50.化合物50的制备
[0266] 操作同实施例4,不同的是将3的原料替换为化合物49,将环丙胺替换为2,4-二氟 苄胺。白色固体，收率:70%。
[0268] 化合物50波谱分析数据：iH-NMRHOOMHz，CDC13) δρρπι: 8 · 37 (s，1H)，7 · 61 (s，1H)， 7.49(d，lH，J = 3.6Hz) ,7.34~7.23(m，6H)，7.05(d，lH，J = 3.2Hz) ,6.84~6.77(m，2H)， 6.14(s，lH)，4.79(s，2H)，4.52((1,2H，J = 6.4Hz); 13C-NMR(100MHz，CDC13) :162.83,148.76， 142.24,139.47,138.72,131.28,131.22,131.12,128.56,127.37,127.31,121.62,114.90， 111.50,111.46,111.29,111.25,104.12,103.87,103.62,101.05,77.36,77.24,77.04， 76.72,49.36,37.04；EI-MS:426.2[M+H]+.
[0269] 实施例51.目标化合物的体外抗HBV细胞活性筛选试验
[0270] 测试原理
[0271] HBV转染的肝癌细胞HepG2.2.15细胞株，在进行细胞培养时能够分泌HBV病毒颗粒 (包含HBsAg、HBeAg和DNA)。在抗HBV目标化合物的干预下，细胞分泌HBsAg的和HBeAg的含量 和产生的DNA会有所变化，因此检测细胞分泌到培养上清中的HBsAg的和HBeAg的含量以及 产生的HBV DNA，参照未加药对照组的含量，可以反映样品药物的抗病毒活性作用。以拉米 夫定为阳性对照药，用酶联免疫法(ELISA)检测样品药物达到抑制病毒HBsAg的和HBeAg分 泌的50 %时的浓度数值为IC5Q;用聚合酶链反应(PCR)检测药物抑制HBV DNA复制量的50 % 时的浓度数值IC5Q;运用CCK-8检测样品药物导致50%细胞毒性死亡的数值浓度为CC5Q值； 并计算出待测化合物的"选择系数"（selectivity index)，计算公式:SI = CC5〇/IC5〇。
[0272] 测试方法
[0273] ⑴细胞毒性实验
[0274]配成实验所需样品储备浓度（100μ mol/L)，每个样品用HepG2.2.15细胞培养液配 置成做5个稀释浓度（100μ mol/L、ΙΟμ mol/L、lymol/L、0. lymol/L、0. Ο?μπιο?/L)，设立空白对 照并以拉米夫定作为的阳性对照药。加入96孔板细胞培养板，每浓度3复孔，每4天换同浓度 药液并设无药细胞对照组，共培养9天。用CCK-8法检测细胞存活率，确定药物对!fepG2.2.15 细胞的毒性。
[0275] ⑵抑制HBeAg和HBsAg抗原分泌实验
[0276] HepG2 2.2.15细胞在96孔细胞培养板中培养24小时后，加入所配不同浓度含药培 养液，继续培养8天(每4天换液一次），收集上清液，用HBsAg和HBeAg诊断试剂盒(ELISA)检 测HBsAg和HBeAg。
[0277] ⑶抑制HBV DNA合成实验(PCR方法）
[0278] HepG2 2.2.15细胞在96孔细胞培养板中培养24小时后，加入所配不同浓度含药培 养液，继续培养8天(每4天换液一次），收集上清液，用探针法进行PCR检测。
[0279] 化合物的活性列于表2中。由表2可以看出，化合物36和39显示出了较显著的抑制 抗原分泌的活性可以作为HIV抑制剂的先导化合物加以利用。但其基本上没有抑制DNA合成 活性，只有化合物26表现较弱的活性(71μπι 〇1/υ。
[0280] 表2.吡唑类衍生物抗HBV的毒性(HepG22.2.15细胞）、活性和选择系数
[0284] 注：aIC5Q:保护50 %感染HBV的HepG22.2.15细胞免于细胞病变的化合物浓度； bCC5Q:使50 %未感染HBV的细胞发生病变的化合物浓度;eSI选择性系数:CC5Q/IC5Q的比值。
【主权项】
1. 化挫类衍生物，其特征在于是具有如下通式I所示的结构：其中， Ri为含取代基的苯环或芳杂环； R2为烷基、苄基或不同链长度的醋基； X为NH、S或C出； R3为簇基、醋基或不同取代基的酷胺。2. 如权利要求1所述的化合物，其特征在于通式I中，Ri为不同取代基的苯环或嚷挫环； R2为饱和烷基、苄基或下酸乙醋;X为0、NH或C出;R3为甲酸、甲酸乙醋、环丙酷胺、不同取代基 的苯酷胺、不同取代基的节酷胺。3. 如权利要求2所述的化合物，其特征在于是下述结构的化合物之一： ^ 结构式 ^ 络掏式 ^ 結巧式 号 号 号4.如权利要求1或2所述的化合物的制备方法，其特征在于为下列方法之一： (1) W乙氧甲叉氯乙酸乙醋Ia为初始原料，首先在醋酸和水的混合溶液中经过醋酸钢 的催化与不同的芳香阱反应得到中间体化粗品，然后化与漠化亚铜、2-甲基-2-硝基丙烷烃 重氮化反应得到中间体Ic Jb或Ic与不同取代基发生亲核取代反应生成不同的目标化合物 Id;接着，在碱性条件下发生水解反应生成中间体Ie，Ie与不同取代的胺发生酷化反应得到 目标产物If; 合成路线1如下：试剂及条件：（i)醋酸钢，醋酸，水，回流；（ii)漠化亚铜，乙腊，50°C;(iii)氨化钢、碳酸 钟或碳酸飽，不同的胺、醇或面代烧，DMF，室溫或加热；（iV)氨氧化钢，乙醇，水，四氨巧喃， 50°C; (V)不同的胺，二氯甲烧，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-径基苯并 S挫； 其中， Ri为含取代基的苯环或芳杂环； R2为烷基、苄基或不同链长度的醋基； X为畑或S; R3为不同取代基的酷胺； 所述的不同的胺为环丙胺，2，4-二氣节胺； 或者， (2) W碳酸二乙醋IIa为初始原料，首先在醋酸和四氨巧喃的混合溶液中经过氨化钢的 催化与不同的脂肪酬得到中间体nb粗品，然后nb与N，N-二甲基甲酯胺缩二甲醇反应得到 中间体He, IIc与不同阱盐酸盐发生成环反应生成不同的目标化合物IId;接着，在碱性条 件下发生水解反应生成中间体He, IIe与不同取代的胺发生酷化反应得到目标产物Hf; 合成路线2如下：试剂及条件：（i)四氨巧喃，氨化钢，60°0;(11)100°0;(11。乙醇，^乙胺；（1乂)氨氧化 钢，乙醇，水，四氨巧喃，50°C;(v)N，N-二甲基甲酯胺，2-(7-偶氮苯并S氮挫）-N，N，N'，N'-四甲基脈六氣憐酸醋，=乙胺，室溫； 其中， Ri为含取代基的苯环或芳杂环； R2为烷基； R3为不同取代的苯基、苄基、苯胺或酪。5.如权利要求4所述的化合物的制备方法，其特征在于方法(1)的具体步骤如下： (1) 取25mL圆底烧瓶，将不同取代基的阱盐酸盐Ial.59mmol溶于3mL乙酸中，加入ImL 水，醋酸钢3.49mmol回流4h;反应结束后冷却至室溫，加入20血冰水中；乙酸乙醋萃取S次， 合并有机相，30mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶 柱分离获取纯品Ib; (2) 取25mL圆底烧瓶，将中间体化0. Smmol溶于乙腊5mL中，加入漠化亚铜，冷却至0°C， 缓慢加入亚硝酸叔下醋2.17mmol，50°C揽拌过夜；反应结束后冷却至室溫，加50mL水泽灭； 乙酸乙醋萃取S次，合并有机相，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上 样，快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品Ic; (3) 取25mL圆底烧瓶，将中间体化1.12mmol溶于5mL DMF中，加入碳酸钟、碳酸飽或者 氨化钢，室溫揽拌5min;加入不同的面代烧1.35mmol，室溫揽拌过夜；反应结束后加入50mL 水，乙酸乙醋萃取=次，合并有机相，饱和食盐水洗=次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样， 快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品Id; 取25mL圆底烧瓶，将中间体Ic 0.64mmol溶于5mL DMF中，加入60%化H 0.77mmol，室溫 揽拌5分钟;缓慢加入不同的硫醇等试剂，室溫揽拌过夜;反应结束后加入50mL水，乙酸乙醋 萃取=次，合并有机相，饱和食盐水洗=次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样，快速制备色 谱硅胶柱分离获取纯品Id; (4) 取25mL圆底烧瓶，将中间体Id 0.74mmo 1溶于2mL乙醇、2mL水和2血四氨巧喃的混合 溶液中，50°C加热反应过夜;反应结束后用旋转蒸发仪除去四氨巧喃和乙醇，加入30mL氯化 锭水溶液中和反应，乙酸乙醋萃取S次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢 干燥;浓缩，石油酸洗，重结晶得到纯品Ie; (5)取25mL圆底烧瓶，将中间体Ie 0.19mmol溶于5mL二氯甲烧中，然后低溫下缓慢加入 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.25mmol和1-径基苯并S挫0.25mmol，揽拌 10分钟;加入不同的胺，室溫反应过夜;反应结束后加入30mL水，乙酸乙醋萃取=次，合并有 机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱分离 获取纯品If。6. 如权利要求4所述的化合物的制备方法，其特征在于方法(2)的具体步骤如下： (1) 取50mL圆底烧瓶，低溫下将60 %氨化钢11.98mmo 1溶于15mL四氨巧喃溶液中，缓慢 滴加不同的脂肪酬IIa 1.59mmol溶于混合溶液中，室溫揽拌半小时;低溫下继续滴加碳酸 二乙醋14.98mmol于混合溶液中，60°C反应4小时；反应结束后冷却至室溫，加入50mL冰水 中，加入1.5mL醋酸中和反应，乙酸乙醋萃取S次，合并有机相，30mL饱和食盐水洗一次，无 水硫酸钢干燥;浓缩得到粗品IIb; (2) 取25mL圆底烧瓶，将中间体IIb 5.Slmmol溶于5mL N，N-二甲基甲酯胺缩二甲醇中 100°C揽拌过夜;反应结束后减压蒸馈得到粗品IIc; (3) 取25mL圆底烧瓶，将1 .59mmol不同取代基的阱盐酸盐溶于6mL乙醇中，加入 1.90mmol中间体IIc于混合溶液中，缓慢滴加 S乙胺7.93mmol，室溫揽拌过夜;反应结束后 冷却至室溫，减压蒸馈除去部分乙醇，加入50mL水中；乙酸乙醋萃取S次，合并有机相，30mL 饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样，快速制备色谱硅胶柱分离获取纯品 IId; (4) 取25mL圆底烧瓶，将中间体IId 0.69mmo 1溶于3mL乙醇、3mL水和3mL四氨巧喃的混 合溶液中，50°C加热反应过夜;反应结束后用旋转蒸发仪除去四氨巧喃和乙醇，加入30mL氯 化锭水溶液，乙酸乙醋萃取=次，合并有机相，饱和食盐水洗一次20mL，无水硫酸钢干燥;浓 缩，石油酸洗，重结晶得到纯品IIe; (5) 取25mL圆底烧瓶，将中间体IIe 0.38mmol溶于5血N，N-二甲基甲酯胺中，然后低溫 下缓慢加入2-(7-偶氮苯并S氮挫）-N，N，N'，N'-四甲基脈六氣憐酸醋0.46mmol，揽拌10分 钟;加入不同的胺及S乙胺0.76mmo 1，室溫反应1小时;反应结束后加入30mL水，乙酸乙醋萃 取S次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钢干燥;浓缩，干法上样，快速制备 色谱硅胶柱分离获取纯品Ilf。7. 权利要求1-3任一项所述的化合物在制备抗HBV的药物中的应用。8. -种抗皿V药物组合物，包含权利要求1-3任一项所述化合物和一种或多种药学上可 接受载体或赋形剂。
【专利摘要】本发明公开了一种吡唑类衍生物及其制备方法和应用。所述化合物具有式I所示的结构。本发明还涉及含有式I结构化合物的药物组合物以及提供上述化合物在制备抗HBV药物中的应用。
【IPC分类】A61P1/16, C07D231/38, C07D231/18, C07D231/16, C07D471/04, C07D403/12, C07D417/04, A61P31/20, C07D231/40, C07D231/14, C07D401/12
【公开号】CN105503730
【申请号】CN201510997646
【发明人】刘新泳, 贾海永, 展鹏
【申请人】山东大学
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月25日
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