天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法
专利名称：天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法
技术领域：
本发明属于脏器提取技术领域，具体涉及脏器提取中采用天然澄清抑菌剂对料液进行澄清抑菌处理，继后分离纯化制得有效成分。
背景技术：
脏器提取是指从动物的组织、器官、腺体、体液、以及胎盘、骨、毛、皮、角中提取、分离、纯化获得如氨基酸、多肽、蛋白质、酶类、脂类、激素、核酸等有效成分的过程。这些有效成分具有毒性低、副作用小、容易被人体吸收的特点。作为药物、生物试剂、医用材料、食品添加剂、日化产品可广泛用于药品、食品、保健品和化妆品中。
目前多数脏器提取厂家，在脏器提取(水解)步骤后，为了保证下一步分离、纯化步骤的高效，首先要进行固体-液体的分离，一般采用自然沉降、自然过滤、离心、化学试剂沉淀等手段来达到固液分离的目的，并且对于分离出的料液还需加入抑菌剂以达到防腐的目的。这些方法在不同方面或程度上存在着缺陷工艺周期长、分离效果差、设备成本高、分离液易被染菌、加入的化学沉淀试剂和化学抑菌剂有的对人体有毒有害。
例如毛发水解提取胱氨酸的工艺，是将毛发经酸水解后，直接加碱液调整料液PH值至胱氨酸的等电点(PH值4.8)，利用胱氨酸在等电点PH值时溶解度最低的原理，沉淀结晶出胱氨酸。但由于在水解液中胶体、蛋白质、色素等杂质影响，使胱氨酸沉淀结晶的纯度不高，一般为60～70％，收率也仅为8％左右，并且料液在沉淀结晶过程中易被染菌，影响胱氨酸结晶的品质。
再如动物眼提取物(眼氨肽注射液、眼氨肽滴眼液的中间体)的制备工艺，是用猪、牛、羊眼球经提取、除蛋白质后制备而成的一种生物制剂。在工艺中为使料液澄清，采用滤纸自然过滤；为了除掉蛋白质，采用磺基水扬酸沉淀；为了防止中间体料液染菌，加入苯甲酸钠、氯仿作为抑菌剂。其工艺缺陷是自然过滤时间长，效果不佳，并且磺基水扬酸、苯甲酸钠等是对人体存在有毒有害隐患的物质。
发明内容
针对上述缺陷，本发明提供天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法。采用天然澄清抑菌剂对脏器提取过程中的料液进行澄清抑菌处理，继后分离纯化制得有效成分。具体地讲，就是在脏器提取中的料液中加入10～1500ppm的一种或多种天然澄清抑菌剂，经过搅拌，静置沉淀，固液分离，纯化制得有效成分。所述的天然澄清抑菌剂是从天然动植物中提取的一种或多种多糖类物质。如卡拉胶、海藻酸、壳聚糖、阳离子淀粉。配成0.2～2％浓度的液体后使用，其中壳聚糖采用氨基酸溶解。在料液中的加入量最好为50～1000ppm。脏器提取过程中的料液是指提取液、水解液、离心液、过滤液或浓缩液。
本发明所述的天然澄清抑菌剂是一类聚阳离子或聚阴离子的大分子物质，具有分子吸附、“架桥”以及干扰细菌细胞质膜的代谢作用，可使料液中的大分子杂质尤其是细菌快速絮凝沉淀。
本发明与现有技术相比优点在于(1)澄清抑菌效率高，处理后的澄清料液消光值(OD值)可从0.9左右降到0.01～0.1之间。再有，以往脏器提取的固液分离方法所获得的料液极易被染菌，使料液变浑浊，需加抑菌剂。而本发明在澄清过程中就具有除菌的作用，以达到抑菌的目的，处理后的料液自然放置至少90天仍为澄清，经测定，料液的细菌总数在0～10个/ml，抑菌效果极佳，从而保证了下一步的分离纯化的高效。(2)安全无毒，本发明澄清抑菌剂的使用方法，不存在对人体有毒有害的隐患。(3)本发明由于可使料液中的大分子杂质尤其是细菌快速絮凝沉淀，可缩短生产周期。(4)本发明应用简便经济，设备投资小，适于各种规模的脏器提取。
实施方式通过下面将要叙述的非限定实施例对本发明作进一步描述。
实施例1胱氨酸。取1000L以猪毛发为原料的酸水解液，在水解液中加入30～40％氢氧化钠调整料液PH值2.5～3.0。再加入预先配制0.2％浓度的卡拉胶水溶液，加入量为10ppm，稍加搅拌后，可见絮凝现象发生，静置1小时，板框过滤获得澄清料液。再用30～40％氢氧化钠调整料液PH至4.8沉淀结晶。本发明与现有技术相比分离纯化效果好，收得胱氨酸40kg，纯度75％，收率9％，纯度和收率分别提高15％和12％。
实施例2动物眼提取物。量取以80kg羊眼为原料经75％乙醇提取所得的提取液200L，经1200r/min离心过滤，先后加入预先配制0.2％浓度的卡拉胶水溶液、1％浓度的谷氨酸和壳聚糖液体，加入量分别为50和300ppm，经过搅拌，稍后，可见絮凝物产生，静置2小时，布氏漏斗过滤分离出上清液，再经浓缩除醇、布氏漏斗过滤，即得动物眼提取物中间体溶液。经氨基酸含量测定，符合国家标准。与现有技术相比可缩短浓缩前过滤分离周期70％，动物眼提取物中间体溶液在未加抑菌剂苯甲酸钠的情况下，存放三个月无染菌，抑菌效果佳。并且本发明使用方法不存在对人体有毒有害的隐患，可备用制剂。
实施例3动物眼提取物。量取以40kg牛眼为原料经95％乙醇提取所得的提取液80L，经1600r/min离心过滤，减压浓缩除醇后，搅拌下，在浓缩液中加入预先配制2％浓度的阳离子淀粉溶液，加入量为1500ppm。可见絮凝物产生，静置1小时，滤纸漏斗过滤分离出上清液，即为动物眼提取物溶液。本发明使用方法与实施例2效果相同，在未加抑菌剂氯仿的情况下，中间体溶液存放三个月无染菌，其结果氨基酸含量符合国家标准，可用作制剂。
实施例4转移因子。将健康猪脾去除脂肪和筋膜，称重20kg，切碎，加入等量生理盐水，用胶体磨进行匀浆处理两次。匀浆物在-20℃冷冻，然后常温融化，反复冻融三次。1600r/min离心过滤，调整料液PH值6，搅拌下加入预先配制1％浓度的谷氨酸和壳聚糖液体、1％浓度的海藻酸水溶液，加入量分别为300和200ppm。稍后，可见絮凝物产生，静置2小时，布氏漏斗过滤得澄清液。将澄清液经截留分子量5000的超滤膜超滤，超滤液中转移因子含量以福林酚测定法测定，为2.8mg/ml。与现有技术相比转移因子收率可提高10％，并且避免现有技术中采用高速冷冻离心机的设备投入，具有简便经济，设备投资小的优点。
实施例5转移因子。将健康猪脾去除脂肪和筋膜，称重18kg，切碎，用胶体磨进行匀浆处理一次，放置-20℃冷冻。冷冻物稍融化后，加入半量生理盐水，搅均，再用胶体磨进行匀浆处理一次。放置-20℃冷冻，然后常温融化，反复冻融两次。1600r/min离心过滤，调整料液PH值6。搅拌下，先后加入预先配制0.2％浓度的卡拉胶液体和2％阳离子淀粉液体，加入量分别为100和900ppm，稍后，可见絮凝物产生，停止搅拌。静置2小时，布氏漏斗过滤得澄清液。将澄清液装入截留分子量6000的透析袋中，扎紧两头。在4℃的生理盐水中透析，透析96小时透析。透析液中转移因子含量以福林酚测定法测定，为2.6mg/ml。现有技术中，当透析超过36小时易产生染菌，而本发明透析长达96小时未发现染菌腐败现象，同时还可节省高速冷冻离心机和超滤器的投资。
权利要求
1.天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，在脏器提取的料液中加入10～1500ppm的一种或多种天然澄清抑菌剂，经过搅拌，静置沉淀，固液分离，纯化制得有效成分。
2.根据专利要求书1所述的天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，所述的天然澄清抑菌剂是从天然动植物中提取的一种或多种多糖类物质。
3.根据专利要求书1所述的天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，所述的天然澄清抑菌剂是卡拉胶、海藻酸、壳聚糖、阳离子淀粉。
4.根据专利要求书1所述的天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，所述的天然澄清抑菌剂配成0.2～2％浓度的液体后使用，其中壳聚糖采用氨基酸溶解。
5.根据专利要求书1所述的天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，所述的天然澄清抑菌剂在料液中的加入量最好为50～1000ppm。
6.根据专利要求书1所述的天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，所述的脏器提取过程中的料液是提取液、水解液、离心液、过滤液或浓缩液。
全文摘要
本发明公开了天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法。其特征是，在脏器提取的料液中加入10～1500ppm的一种或多种天然澄清抑菌剂，经过搅拌，静置沉淀，固液分离，纯化制得有效成分。本发明具有澄清抑菌效率高、生产周期短、安全无毒、简便经济，设备投资小，适于各种规模的脏器提取。
文档编号C07K1/00GK1683333SQ200410030558
公开日2005年10月19日 申请日期2004年4月14日 优先权日2004年4月14日
发明者赵杰, 赵嘉伟 申请人:赵嘉伟
技术领域：
本发明属于脏器提取技术领域，具体涉及脏器提取中采用天然澄清抑菌剂对料液进行澄清抑菌处理，继后分离纯化制得有效成分。
背景技术：
脏器提取是指从动物的组织、器官、腺体、体液、以及胎盘、骨、毛、皮、角中提取、分离、纯化获得如氨基酸、多肽、蛋白质、酶类、脂类、激素、核酸等有效成分的过程。这些有效成分具有毒性低、副作用小、容易被人体吸收的特点。作为药物、生物试剂、医用材料、食品添加剂、日化产品可广泛用于药品、食品、保健品和化妆品中。
目前多数脏器提取厂家，在脏器提取(水解)步骤后，为了保证下一步分离、纯化步骤的高效，首先要进行固体-液体的分离，一般采用自然沉降、自然过滤、离心、化学试剂沉淀等手段来达到固液分离的目的，并且对于分离出的料液还需加入抑菌剂以达到防腐的目的。这些方法在不同方面或程度上存在着缺陷工艺周期长、分离效果差、设备成本高、分离液易被染菌、加入的化学沉淀试剂和化学抑菌剂有的对人体有毒有害。
例如毛发水解提取胱氨酸的工艺，是将毛发经酸水解后，直接加碱液调整料液PH值至胱氨酸的等电点(PH值4.8)，利用胱氨酸在等电点PH值时溶解度最低的原理，沉淀结晶出胱氨酸。但由于在水解液中胶体、蛋白质、色素等杂质影响，使胱氨酸沉淀结晶的纯度不高，一般为60～70％，收率也仅为8％左右，并且料液在沉淀结晶过程中易被染菌，影响胱氨酸结晶的品质。
再如动物眼提取物(眼氨肽注射液、眼氨肽滴眼液的中间体)的制备工艺，是用猪、牛、羊眼球经提取、除蛋白质后制备而成的一种生物制剂。在工艺中为使料液澄清，采用滤纸自然过滤；为了除掉蛋白质，采用磺基水扬酸沉淀；为了防止中间体料液染菌，加入苯甲酸钠、氯仿作为抑菌剂。其工艺缺陷是自然过滤时间长，效果不佳，并且磺基水扬酸、苯甲酸钠等是对人体存在有毒有害隐患的物质。
发明内容
针对上述缺陷，本发明提供天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法。采用天然澄清抑菌剂对脏器提取过程中的料液进行澄清抑菌处理，继后分离纯化制得有效成分。具体地讲，就是在脏器提取中的料液中加入10～1500ppm的一种或多种天然澄清抑菌剂，经过搅拌，静置沉淀，固液分离，纯化制得有效成分。所述的天然澄清抑菌剂是从天然动植物中提取的一种或多种多糖类物质。如卡拉胶、海藻酸、壳聚糖、阳离子淀粉。配成0.2～2％浓度的液体后使用，其中壳聚糖采用氨基酸溶解。在料液中的加入量最好为50～1000ppm。脏器提取过程中的料液是指提取液、水解液、离心液、过滤液或浓缩液。
本发明所述的天然澄清抑菌剂是一类聚阳离子或聚阴离子的大分子物质，具有分子吸附、“架桥”以及干扰细菌细胞质膜的代谢作用，可使料液中的大分子杂质尤其是细菌快速絮凝沉淀。
本发明与现有技术相比优点在于(1)澄清抑菌效率高，处理后的澄清料液消光值(OD值)可从0.9左右降到0.01～0.1之间。再有，以往脏器提取的固液分离方法所获得的料液极易被染菌，使料液变浑浊，需加抑菌剂。而本发明在澄清过程中就具有除菌的作用，以达到抑菌的目的，处理后的料液自然放置至少90天仍为澄清，经测定，料液的细菌总数在0～10个/ml，抑菌效果极佳，从而保证了下一步的分离纯化的高效。(2)安全无毒，本发明澄清抑菌剂的使用方法，不存在对人体有毒有害的隐患。(3)本发明由于可使料液中的大分子杂质尤其是细菌快速絮凝沉淀，可缩短生产周期。(4)本发明应用简便经济，设备投资小，适于各种规模的脏器提取。
实施方式通过下面将要叙述的非限定实施例对本发明作进一步描述。
实施例1胱氨酸。取1000L以猪毛发为原料的酸水解液，在水解液中加入30～40％氢氧化钠调整料液PH值2.5～3.0。再加入预先配制0.2％浓度的卡拉胶水溶液，加入量为10ppm，稍加搅拌后，可见絮凝现象发生，静置1小时，板框过滤获得澄清料液。再用30～40％氢氧化钠调整料液PH至4.8沉淀结晶。本发明与现有技术相比分离纯化效果好，收得胱氨酸40kg，纯度75％，收率9％，纯度和收率分别提高15％和12％。
实施例2动物眼提取物。量取以80kg羊眼为原料经75％乙醇提取所得的提取液200L，经1200r/min离心过滤，先后加入预先配制0.2％浓度的卡拉胶水溶液、1％浓度的谷氨酸和壳聚糖液体，加入量分别为50和300ppm，经过搅拌，稍后，可见絮凝物产生，静置2小时，布氏漏斗过滤分离出上清液，再经浓缩除醇、布氏漏斗过滤，即得动物眼提取物中间体溶液。经氨基酸含量测定，符合国家标准。与现有技术相比可缩短浓缩前过滤分离周期70％，动物眼提取物中间体溶液在未加抑菌剂苯甲酸钠的情况下，存放三个月无染菌，抑菌效果佳。并且本发明使用方法不存在对人体有毒有害的隐患，可备用制剂。
实施例3动物眼提取物。量取以40kg牛眼为原料经95％乙醇提取所得的提取液80L，经1600r/min离心过滤，减压浓缩除醇后，搅拌下，在浓缩液中加入预先配制2％浓度的阳离子淀粉溶液，加入量为1500ppm。可见絮凝物产生，静置1小时，滤纸漏斗过滤分离出上清液，即为动物眼提取物溶液。本发明使用方法与实施例2效果相同，在未加抑菌剂氯仿的情况下，中间体溶液存放三个月无染菌，其结果氨基酸含量符合国家标准，可用作制剂。
实施例4转移因子。将健康猪脾去除脂肪和筋膜，称重20kg，切碎，加入等量生理盐水，用胶体磨进行匀浆处理两次。匀浆物在-20℃冷冻，然后常温融化，反复冻融三次。1600r/min离心过滤，调整料液PH值6，搅拌下加入预先配制1％浓度的谷氨酸和壳聚糖液体、1％浓度的海藻酸水溶液，加入量分别为300和200ppm。稍后，可见絮凝物产生，静置2小时，布氏漏斗过滤得澄清液。将澄清液经截留分子量5000的超滤膜超滤，超滤液中转移因子含量以福林酚测定法测定，为2.8mg/ml。与现有技术相比转移因子收率可提高10％，并且避免现有技术中采用高速冷冻离心机的设备投入，具有简便经济，设备投资小的优点。
实施例5转移因子。将健康猪脾去除脂肪和筋膜，称重18kg，切碎，用胶体磨进行匀浆处理一次，放置-20℃冷冻。冷冻物稍融化后，加入半量生理盐水，搅均，再用胶体磨进行匀浆处理一次。放置-20℃冷冻，然后常温融化，反复冻融两次。1600r/min离心过滤，调整料液PH值6。搅拌下，先后加入预先配制0.2％浓度的卡拉胶液体和2％阳离子淀粉液体，加入量分别为100和900ppm，稍后，可见絮凝物产生，停止搅拌。静置2小时，布氏漏斗过滤得澄清液。将澄清液装入截留分子量6000的透析袋中，扎紧两头。在4℃的生理盐水中透析，透析96小时透析。透析液中转移因子含量以福林酚测定法测定，为2.6mg/ml。现有技术中，当透析超过36小时易产生染菌，而本发明透析长达96小时未发现染菌腐败现象，同时还可节省高速冷冻离心机和超滤器的投资。
权利要求
1.天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，在脏器提取的料液中加入10～1500ppm的一种或多种天然澄清抑菌剂，经过搅拌，静置沉淀，固液分离，纯化制得有效成分。
2.根据专利要求书1所述的天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，所述的天然澄清抑菌剂是从天然动植物中提取的一种或多种多糖类物质。
3.根据专利要求书1所述的天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，所述的天然澄清抑菌剂是卡拉胶、海藻酸、壳聚糖、阳离子淀粉。
4.根据专利要求书1所述的天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，所述的天然澄清抑菌剂配成0.2～2％浓度的液体后使用，其中壳聚糖采用氨基酸溶解。
5.根据专利要求书1所述的天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，所述的天然澄清抑菌剂在料液中的加入量最好为50～1000ppm。
6.根据专利要求书1所述的天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法，其特征是，所述的脏器提取过程中的料液是提取液、水解液、离心液、过滤液或浓缩液。
全文摘要
本发明公开了天然澄清抑菌剂在脏器提取中的使用方法。其特征是，在脏器提取的料液中加入10～1500ppm的一种或多种天然澄清抑菌剂，经过搅拌，静置沉淀，固液分离，纯化制得有效成分。本发明具有澄清抑菌效率高、生产周期短、安全无毒、简便经济，设备投资小，适于各种规模的脏器提取。
文档编号C07K1/00GK1683333SQ200410030558
公开日2005年10月19日 申请日期2004年4月14日 优先权日2004年4月14日
发明者赵杰, 赵嘉伟 申请人:赵嘉伟
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