微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法

专利名称：：微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法
技术领域：
：本发明涉及畜牧行业，尤其涉及一种微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法。
背景技术：
：仔猪腹泻是养猪生产中的一种典型的多因素疾病，据统计，仔猪腹泻的发病率为35%，其间接损失又表现在治愈仔猪生长发育迟缓，饲料转化率低，严重威胁养猪业的发展。自2006年5月以来，在全国各地先后爆发流行猪高热病，引起大批猪只发病死亡，造成重大的经济损失。直至目前，高热病仍在全国22个省份的猪群中发生流行，危害猪只的健康生长，威胁着养猪业的发展。抗生素在养殖中的使用所带来的不良后果大家都己充分认识。许多专家都认为在全国很多地区广泛流行的"猪高热病"的一个重要原因是猪的免疫力低下，抗病力低，而长期地、大剂量地使用抗生素是导致猪免疫力低下的一个重要原因。
发明内容本发明的目的在于提供一种微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法，利用该方法得到的药物和添加剂能有效抗菌，治疗仔猪的细菌性疾病、促生长、可应用、提高猪免疫力，而且无残留、无污染。为了实现上述目的本发明采用的技术方案如下本发明微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法，在药物和添加剂中加入溶菌酶，并且保证浓度在300ppm。本发明的另一个技术方案如下本发明微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法，在药物和添加剂中加入溶菌酶，并且保证仔猪每天采食溶菌酶l-2g。本发明的再一个技术方案如下-本发明微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法，在药物和添加剂中加入溶菌酶，保证浓度在300ppm,同时添加氟本尼考，溶菌酶配比氟本尼考的比例为2:11:1。本发明的有益效果如下-本发明有效治疗猪的细菌性疾病及高热病，缓解症状，显著提高猪的免疫力，减缓应激反应，改善维护胃肠道菌群平衡。疗效好、安全性高，成本低廉，无耐药性、无药物残留、无毒副作用、是绿色环保的活性物质。具体实施方式溶菌酶是能溶解细菌细胞壁的一种酶，是一类物质的的总称。作为非特异性免疫的重要成员，溶菌酶在防御外源微生物入侵方面发挥重要的作用，其在动物的免疫细胞和巨噬细胞中含量比较高。溶菌酶对革兰氏阳性菌、好气性孢子形成的菌、枯草杆菌、耐辐射微球菌均具有良好的分解作用，对大肠杆菌、普通变球菌和副血性弧菌等革兰氏阴性菌也具有溶解作用。基于此，本发明将溶菌酶添加到用于预防猪疾病的药物和添加剂中，来预防猪的细菌性疾病。本专利所用的溶菌酶的要求为通过药敏试验，在lOOppm时应有明显的抑菌圈，即抑菌圈的直径〉10mm。药敏试验方法如下做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。一、一般LB培养基的配制1、液体培养基的配制蛋白胨lg、NaCllg、酵母提取物0.5g(建议选用国外公司产品)溶于100ml水中。2、固体培养基的配制在液体培养基的基础上每100ml中添加琼脂1.7g或琼脂粉2g。二、灭菌整个实验过程中所用的培养基、平板、枪头、棉签、生理盐水以及缓冲溶液均需要灭菌。三、操作过程1、将指示菌(大肠杆菌、沙门氏菌等等)从培养液(基)中接种于平板活化培养，待菌落长出后在平板上挑选典型菌落接种于试管中的液体培养基中培养4-6小时后比浊。2、用涂菌棒(或者灭菌棉签)将待检细菌混悬液涂抹于平皿培养基表面，要求涂布均匀致密。3、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管(也可用玻璃管、瓷管)，放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合(以防药液渗漏，影响结果)。4、将配制好的待测样品液80微升加入样孔中，样品加完后放入30-37'C的培养箱中培养12-18小时后观察结果。注意试验的过程在无菌的条件下操作。四、溶菌酶样品液的配制1、粉状样品的配制取溶菌酶样品用灭菌好的生理盐水逐级稀释到浓度梯度为300ppm，200ppm，lOOppm,50ppm然后分别取80微升稀释好的溶液置于样品孔中。(注在温度较低的情况下，可能会出现稍微的不溶的情况，可加热至35-4(TC即可溶解)2、注意事项1)配置好的样品液不要放在冷冻的条件下保存，也不能放在无菌操作台上被紫外线照射；2)样品液在配制稀释过程中注意要逐级稀释。为了确定溶菌酶在药物及添加剂中的加入量，我们进行了如下药敏实验选择500ppm,300ppm，200卯m，100ppm，50ppm四个浓度进行试验，试验方法同上，以埃希氏大肠杆菌为试验菌种，通过检测检测抑菌圈的大小检验试验结果，具体如表l。表l抑菌试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>从表l可以看出，超过300ppm,抑菌效果增加不明显。仔猪腹泻是一种细菌性疾病，通过给腹泻的仔猪喂食溶菌酶可以去除其体内感染的细菌从而起到一定的治疗作用，同时也能预防因新摄入的细菌而再次发病，预防腹泻的选择体况相同的仔猪进行攻毒试验，当仔猪出现腹泻情况后，为仔猪灌服溶菌酶制剂日平均0.5g、lg、2g、3g、4g、5g，其治疗效果如表2。表2仔猪腹泻的治疗试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>从上表可以看出，在日平均灌服l-2g溶菌酶制剂可以有效的治疗仔猪的细菌性的腹泻，继续增加用量对治愈率增加的影响不明显。在猪场高热病的发病初期，通过喂食含有溶菌酶的饲料可以是预防高热病的进一步恶化，并同时添加氟本尼考，可以将发热病控制在初期，具体配比参见抑菌试验结果，溶菌酶的含量选在300ppm，同时按3:1，2:1，1:1,1:2，1:3的比例配入氟本尼考，混合后，最终的治疗效果如表3。表3高热病初期的治疗结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>从上表可以看出，在2:1—1:1的范围之内对疾病的控制已经达到理想的控制效果，在3:1的条件下疾病控制率增加不明显，所以最终选择2:1—1:1的范围。权利要求1、微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法，在药物和添加剂中加入溶菌酶，并且保证浓度在300ppm。2、微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法，在药物和添加剂中加入溶菌酶，并且保证仔猪每天采食溶菌酶l-2g。3、微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法，在药物和添加剂中加入溶菌酶，保证浓度在300ppm，同时添加氟本尼考，溶菌酶配比氟本尼考的比例为2:11:1。全文摘要本发明公开了一种微生物溶菌酶在预防猪疾病的药物及添加剂中的应用方法，通过控制溶菌酶在药物或者添加剂中的加入量在300ppm时，可以很好的预防仔猪腹泻，通过加入溶菌酶保证每天摄入1-2g，使仔猪在腹泻初期能够使病情得到控制，防止进一步的恶化，在添加溶菌酶的基础上同时添加氟本尼考可以预防并控制高热病。本发明有效治疗猪的细菌性疾病及高热病，缓解症状，显著提高猪的免疫力，减缓应激反应，改善维护胃肠道菌群平衡。疗效好、安全性高，成本低廉，无耐药性、无药物残留、无毒副作用、是绿色环保的活性物质。文档编号A61K38/48GK101612393SQ20091014777公开日2009年12月30日申请日期2009年6月19日优先权日2009年6月19日发明者潘宏涛申请人:杭州康源饲料科技有限公司