对氧化作用敏感的活性组分水溶液制剂的制备方法
专利名称：对氧化作用敏感的活性组分水溶液制剂的制备方法
技术领域：
本发明的目的是一种活性组分注射液的新方法，特别是在治疗上有效的对氧敏感的活性组分注射液的新方法，以及这些包装方式的制备方法，与它们的应用。
更确切地，本发明的目的是一种新的活性组分水溶液配制方法，这些活性组分对氧化作用很敏感，特别地在注射制剂中是可使用的，长期稳定的，例如含有酚类或多酚类物质，氨基醇或含硫物质。
活性组分水溶液有不同类的应用，特别在治疗上的应用，尤其呈用于人或动物的注射液形式。但是，有时这些活性组分中的某些组分在溶液中会出现稳定性的问题。这些问题可能与活性组分对氧很敏感，与空气中的氧，或特别是与水溶液中溶解的氧反应，生成了不希望的降解产物有关。其它的活性组分间接对氧很敏感，即它们在保存过程中能通过化学反应而生成可氧化的衍生物。这些衍生物与氧反应这时导致生成不希望的副产物。特别地，对乙酰氨基酚便是这种情况。这些申请人事实上证明了对乙酰氨基酚在水溶液中一方面进行水解，另一方面分解生成能聚合成含氮聚合物的醌-亚胺。来自这些反应的衍生物也是对氧化作用很敏感的衍生物，生成了不希望的副产物。
然而，氧与这些活性组分反应所生成的副产物，或它们的衍生物会带来许多缺陷，例如像活性降低或产生致过敏的产物。
事实上，由于通过氧化降解，含水溶液中活性组分的含量显著地不可控制地降低，这样带来严重的问题，特别是这些溶液用于治疗，更特别地以注射液形式用于治疗时，这时重要的是很好地测定活性组分的剂量。
另外，氧化作用的产物导致生成有色化合物，因此使得这种水溶液不适合于治疗应用。
此外，生成的副产物还可能因温度升高而增加，因而这样可能阻止采用加热方式对这些活性组分水溶液进行灭菌，或至少采用加热对这些活性组分水溶液灭菌变得困难。
在这里与在下文中，术语“对氧化作用敏感的酚活性组分”应当理解是含有酚结构和/或由酚结构所带官能团的有药效的或没药效的任何物质，它们很容易与氧反应，并且降解生成有色或无色的氧化产物，或水解产物或聚合作用产物。
对氧敏感的活性组分主要是带可氧化官能团的有机物质，其中特别列举酚、多酚、氨基酚、酚醇和酚酮，以及芳族胺或部分氢化的环状结构，如蒽醌衍生物。还可以列举具有烯醇结构的化合物，或具有醛官能团或酮官能团或醇官能团的化合物。
还可以列举对存在的氧也敏感的氨基苷(aminoside)。
在加入本发明水溶液中容易氧化的活性组分，更具体地可以列举酚或氨基酚，如对乙酰氨基酚、肾上腺素、降-肾上腺素、肾上腺酮、异丙基肾上腺素、间羟叔丙肾上腺素、异克舒令(isoxuprine)、苯肾上腺素或多巴酚丁胺；作为芳族胺，列举普鲁卡因、丁哌卡因、丁卡因、对氨苯酸丁酯、L-多巴或甲基多巴肼；作为氨基酮，可列举普罗帕酮(propaphenone)；作为氨基葡糖苷，可列举庆大霉素、阿米卡星、地贝卡星、萘替米星(netilmycine)、西索霉素、托伯拉霉素、小诺米星(micronomycine)，作为吩噻嗪，可列举异丙嗪；作为氢芳族分子，可列举核黄素、9-氨基二氢吖啶；还可以列举可的松衍生物，如地塞米松、倍他米松、去炎松、氟新诺龙酯、9-去氟肤轻松、氟新诺龙酯的丙酮化合物、氟考龙、氯氟美松酮及其衍生物，氯地米松及其酯、四环素衍生物，如强力霉素或二甲胺四环素。
为了改善这样一些对氧化作用敏感的有药效的活性组分的稳定性，因此为了克服上述缺陷，已经提出或者除去氧，或者进行中和氧，或者将这两类操作结合起来防止氧的作用。
为此目的曾使用几种方法a)通过升高含水溶液的温度，将水溶液抽真空或在溶液中进行惰性气体鼓泡，例如氮气、二氧化碳或氩气，除去氧。
但是，这些方法的缺陷在于只能部分，不完全除去氧，或需要很多的时间。氮气鼓泡，在药品工业中最常使用的方法，不能将氧含量降低到最大约2ppm值。
b)往溶解氧的水溶液添加抗氧化剂，例如硫醇或亚硫酸酐衍生物，像碱金属的亚硫酸盐、亚硫酸氢盐或偏亚硫酸盐。
c)除去氧和添加抗氧化剂结合起来。专利申请FR 2 751 875描述了这类方法。
所有这些现有方法都有一定的效果。但是，氧显示出非常高的溶于水的能力，这样一旦脱氧，以后再与大气空气充分接触时，有可能会失去预先除去氧的好处，这样就不得不放弃这种溶液。
在工业生产注射液的情况下，在密封槽中的散装溶液很容易进行脱氧，并且让这些溶液保持隔绝空气。但是，在以后装瓶或装袋包装操作时，很难保持这些溶液完全隔绝空气。尽管为此可能操作十分小心谨慎，特别地在添加惰性气体下装瓶包装时，这些溶液一旦包装，还可能含有或固定或重新吸收不可忽略不计量的溶解的氧。
如果这些溶液应采用加热，特别在高温下，约120℃下灭菌，残留的溶解氧量可能很容易与对氧敏感的活性组分进行反应，导致其完全或部分降解。
事实上观察到，所有存在的氧都是有害的，只要无穷少量的氧，就可诱发氧化反应，特别在灭菌温度下的氧化反应。在介质中存在的能产生氧化作用的残留极限浓度是约2ppm。
因此，这些申请人使用一种容易氧化的酚物质溶液的稳定方法，其中预脱氧作用完成达到可避免产生这种强降解作用的程度。
人们还知道，使用抗氧化剂并不总是有利的。因此，使用的抗氧化剂逐渐地降解，这样必须添加相对大量的抗氧化剂，以保证令人满意保护活性组分。
还可以将除去氧与添加抗氧化剂结合起来。
补充试验表明，本发明制剂的稳定性问题明显地比想像的复杂，尤其观察到无抗氧化剂时，基本脱氧的溶液在室温下在一定时间后呈玫瑰色。如果预先往这种溶液添加α-羟基多羧酸，特别地添加柠檬酸或柠檬酸钙或这两种的混合物，能够延缓出现颜色，对此观察到没有完全脱氧的注射液基本没有着色。
另外，显然是应用真空有可能完成对氧化作用敏感物质的溶液的脱氧作用。由此达到抗氧化剂的更高稳定性，较少生成由氧化降解得到的副产物，特别在多次灭菌循环后。
α-羟基多羧酸及其盐起作重要的作用。它们不涉及稳定pH，也不涉及起捕获自由基的作用。它们有利地代替多羟基化化合物，如山梨糖醇或甘露醇。
在对乙酰氨基酚的特别情况下，优选地使用柠檬酸三钠和柠檬酸的混合物，其量足以达到pH值约5-6，优选地5.5。
因此，本发明的目的是酚活性组分水溶液制剂的制备方法，特别地对氧化作用敏感的活性组分水溶液制剂的制备方法，如对乙酰氨基酚(4-乙酰氨基酚)，能够赋予随时间推移的高稳定性。本发明的一个目的还在于使用这些制剂制备可用于人或动物的注射液，这些注射液含有附加或未加消炎剂和/或中枢神经系统止痛剂的酚活性组分。
本发明的特别一个目的是长期稳定的易氧化酚活性组分含水制剂的生产方法，这些制剂任选地含有抗氧化剂，其特征在于采用惰性气体鼓泡或采用抽真空，让这些含水制剂进行强脱氧，然后通过保持在惰性气体气氛下，在生产过程中防止它们任选的摄取氧而得到这些含水制剂，其特征还在于它们包装在预先通过吹入惰性气体除去空气的瓶中，特别是比空气更重的拔顶(nappage)气体，例如氩气，然后其特征还在于封口时，让它们降压，以便达到内压低于大气压力，最高65 000帕，优选地5000-50 000帕，得到该溶液中的氧浓度低于2ppm的溶解物。
根据本发明的另一个方面，本发明在于如前面所述制剂的制备方法，该方法包括实施下述步骤a)让至少一种活性组分的水溶液进行强脱氧，并且任选完全脱氧，b)在惰性气氛下，把一部分或全部这种脱氧含水溶液加入预先除去其中含有的空气的容器中，c)在惰性气氛下关闭这种容器，同时进行在容器中产生最大压力65 000帕。
优选地采用惰性气体鼓泡，例如像氮气，使这种水溶液脱氧。这种鼓泡可以进行直到这种水溶液中氧含量低于2ppm，优选地1-0.5ppm，甚至特别地低于0.05ppm。如此得到的脱氧溶液这时在隔绝空气下转移到灌装机中，以便分装到例如瓶、安瓿或罐的容器中。
在例如氮气的惰性气氛下将这种水溶液加入这种容器中。在活性组分水溶液加入这种容器中之前，例如通过往这种容器中吹入惰性气体，优选地比空气重的惰性气体，像氩气，除去该容器中的空气，以便避免该容器因静水升举(Archimède)原则不能立刻被空气更换。
一旦这些容器装满，总是同时伴随吹惰性气体，在强真空下封闭这些瓶，以便在封闭后让这些瓶压力保持低于或等于65 000帕，优选地5 000-50 000帕。为达到这一点，可以采用已知的方法，例如像在封闭后立刻将容器的颈置于真空箱。在密封接触后，这种罐容器抽真空，例如将这种罐与真空容器连接起来。提起这种容器的塞，抽吸这种溶液周围的气体。塞子然后再放回到这种容器上的原位，这种容器例如可以放一个盖，然后折边镶接进行密封。这种容器一旦密封就可以进行灭菌，特别地采用压热(autoclavage)或采用辐射进行灭菌。
活性组分水溶液可以在将这种溶液加入这种容器之前可以采用灭菌过滤进行消毒。这种溶液然后优选地在防腐条件下，在惰性气体下加入这种容器中，这种容器有利地是无菌的。
在本发明的方法中鼓气优选使用的惰性气体是氮气，拔顶的惰性气体是氩气，它比空气重。还可以使用氙或氖。
在总是伴随吹惰性气体下，易氧化物质的溶液装满瓶后，在强真空下关闭瓶，以便在关闭后在瓶中的压力还保持在负压300毫米汞柱，或最大压力65 000帕。
根据本发明的方法，瓶中负压有利于除去在这种溶液中还存在的氧，这是很明显的优点。
这种除去能够减少保护活性组分所必需的抗氧化剂的量，甚至免去添加抗氧化剂。由于这种操作时因氧化作用造成活性组分和/或抗氧化剂降解前未进行灭菌的溶液，通过加热也可以进行灭菌。这种抗氧化剂量的减少也可能允许更长时间稳定这些溶液。
因此，法国专利2 751 875提出，这些对乙酰氨基酚水溶液鼓氮气泡，在氮气下装瓶和添加抗氧化剂时这些溶液在光下于室温以及在黑暗下于70℃稳定48小时。使用如下面实施例中指出的所述方法，可能达到更长时间的稳定性。
适合往这种介质添加的抗氧化剂是亚硫酸盐或亚硫酸盐衍生物，硫醇物质，例如像半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、二硫苏糖醇或α-硫甘油，硫代苹果酸、硫代甘油、蛋氨酸；羟基化物质，如抗坏血酸、异-抗坏血酸、甘露醇、山梨糖醇，烯属未饱和物质，如山梨酸、十一烯酸或反丁烯二酸，或羟基多羧酸，或还原糖，如海藻酮糖(trehalulose)，麦芽酮糖(maltulose)或异麦芽酮糖(isomaltulose)。
另外，曾观察到，与脱氧操作结合添加羟基多羧酸或代替脱氧操作的作用是显著降低抗氧化剂的消耗，因此降低了抗氧化剂的浓度。适合添加的抗氧化剂的量是低的，优选地是每升溶液0.1-1 000毫克，优选地0.2-20毫克。
添加调节pH的剂，特别地缓冲剂可能也是有利的，当容易氧化的酚活性组分在特定的pH范围会降解或水解时尤其如此。因此将溶液的pH调节到4-8，特别地4.5-6.0可以是合适的，在其pH范围内酚分子的可氧化性是比较低的。合适的缓冲剂例如是磷酸氢钠/盐酸混合物，磷酸氢钠/氢氧化钠混合物，磷酸二钠/膦酸混合物，醋酸/醋酸钠混合物，柠檬酸/柠檬酸钠混合物，柠檬酸三钠/盐酸混合物。pH选择主要取决活性组分种类及其可氧化性特性。
本发明的制剂在治疗领域中有应用，呈直接用药或添加到输注袋中的可注射形式，作为止痛剂或作为抗生素或作为心血管药物。本发明的对乙酰氨基酚注射液以非常明显的止痛性能著称。这种溶液还含有血管收缩剂，如肾上腺素，或中枢神经系统的止痛剂，如可待因或d-丙氧吩，或消炎剂，如苯噻丙酸或其中一种盐。
制备这样一种溶液是在氮气下进行的。溶解氧的浓度小于0.05ppm。
还可以在酒石酸二金属盐存在下使用如羟基多羧酸，酒石酸或单酒石酸碱金属盐，如钠盐或钾盐，以便pH的值约5.5。还应指出，在羟基多羧酸存在下，pH稳定得多。对于其它的羟基多羧酸，如葡糖酸，糖酸，柠苹酸或苹果酸同样如此。
仅仅可以使用羟基多羧酸盐，如柠檬酸三钠或酒石酸二钠，并通过混合添加盐酸调节pH。
添加其浓度能够达到pH值约5.5的羟基多羧酸，特别地柠檬酸可起重要的作用。被证实每100毫升5-200毫克浓度范围可保证有效防止氧化作用(没有色彩)，防止抗氧化剂降解，这可通过作为抗氧化剂使用的半胱氨酸降解产物含量较低予以证实。
特别地，在对乙酰氨基酚的情况下，在加浓度70毫克/毫升柠檬酸三钠溶液后，半胱氨酸的残留浓度是无柠檬酸盐制剂的约两倍，没有出现着色，甚至在40℃下7星期后也是如此，对乙酰氨基酚浓度没有改变。
结论，对于在加热灭菌后保存对氧化作用敏感的活性组分含水制剂，应该考虑四个实质性的参数分别或结合起来，即·鼓惰性气体完成脱氧达到氧浓度低于2ppm，·任选加抗氧化剂补充脱氧，·加羟基多羧酸，·以及在如氩气的惰性气氛下，含水溶液加入预先脱气的容器中。
在这些条件下，活性组分的浓度不会发生变化，溶液长期保持无色，可以认为没有氧化作用。
实施例I对乙酰氨基酚水溶液组合物的制备制备浓度为2-50毫克/毫升的对乙酰氨基酚水溶液。通过鼓惰性气体进行脱氧达到2ppm以下，然后在惰性气氛与在真空(残余压力65000帕以下)下用瓶包装。这样在这种溶液中氧的残余浓度保持在2ppm以下，优选地1ppm以下。
这种溶液的pH是4-8，优选地4.5-6.0。此后添加调节到5.5的缓冲系统。
调节抗氧化剂有助于这种溶液的稳定性。优选的抗氧化剂是抗坏血酸，抗坏血酸盐，硫醇，多酚或羟基多羧酸。优选的抗氧化剂是柠檬酸钠-半胱氨酸混合物。
这种溶液可以加等渗剂。
实施例II无抗氧化剂的对乙酰氨基酚含水溶液组合物的制备(对比实施例)制备浓度为10毫克/毫升的对乙酰氨基酚水溶液。加HCl调节到pH5.5，并且添加磷酸氢钠使这种溶液缓冲。
然后进行氮气鼓泡脱氧，直到达到氧残余浓度约0.2ppm。在长时间鼓氮气下用这种溶液装瓶后，这些瓶在121℃灭菌15分钟。
在25℃保存6个月后，这种溶液总是无色的，对乙酰氨基酚含量也没有变化，采用CLHP测定对乙酰氨基酚降解产物含量仍然是小于0.015％对乙酰氨基酚。
在其它试验中，在鼓氮气后的对乙酰氨基酚溶液在氮气下包装。在盖住装溶液的瓶后，抽真空，以便达到残余压力10 000帕以下。残留的溶解氧含量是0.16ppm。在121℃灭菌15分钟后，在30℃保存8天，这种溶液仍然无色。
因此可以看出，这种基本方法是在残留约0.2ppm以下脱氧，并且这种方法能够达到长期的完全保存。抗氧化剂的可能存在补充了脱氧作用，但不能代替。
实施例III含有柠檬酸根离子的对乙酰氨基酚水溶液组合物的制备曾确定含有不太高氧残余浓度，即约0.3-0.4ppm的对乙酰氨基酚水溶液，由于对乙酰氨基酚可以与非常少量的氧进行反应，并且可以生成有色化合物，保存时间较短。
因此用盐酸调节到pH5.5的10毫克/毫升对乙酰氨基酚溶液进行氮气鼓泡，直到达到氧含量约0.4ppm。这些瓶在121℃灭菌15分钟，并在室温下保存。
在保存9天后，观察到玫瑰黄色的对乙酰氨基酚溶液。
相反地，如果往与前面相同的组合物添加呈柠檬酸和柠檬酸钠混合物形式的稳定剂，pH自动地调节到5.5，不需要添加盐酸。在氮气鼓泡后，氧的残余浓度是约0.4ppm。然后，这种溶液在真空下用瓶包装，在121℃灭菌15分钟。这些瓶在室温下保存67天。这种溶液仍然是完全无色的。
这个结果是出乎意外的，因为柠檬酸根离子既没有同络合性质联系起来，也没有同抗氧化剂增强性质联系起来。另外，柠檬酸根离子的固有作用不可能与抗氧化作用联系起来。
实施例IV部分脱氧的对乙酰氨基酚水溶液的稳定作用对于可能达到1-5ppm的更高残余氧含量，优选地求助于添加具有更强抗氧化性质的稳定剂，例如像亚硫酸盐，硫醇衍生物或抗坏血酸盐。
10毫克/毫升对乙酰氨基酚水溶液用氢氧化钠调节到pH5.5，并且加醋酸钠缓冲剂保持在这个值，这种溶液再加适当量的氯化钠变成等渗溶液，然后加入抗氧化剂，在这种情况下，0.20毫克/毫升半胱氨酸盐酸盐。这种溶液进行氮气鼓泡，然后在盖住瓶前抽真空(负压约550毫米汞柱)。残余氧含量升高到约1.5ppm溶解氧。在灭菌后，装有这种溶液的瓶保存在25℃达24个月。在这个期间后，这些瓶仍然无色，对乙酰氨基酚含量是100％起始含量，采用CLHP测量的对乙酰氨基酚降解产物是对乙酰氨基酚含量为0.02％以下。
因此抗氧化剂的存在起着非常大的作用。在这种对乙酰氨基酚溶液中，由于代替寻求保护的酚分子，如半胱氨酸的抗氧化剂与溶解的氧进行反应。
但是，在保存后，半胱氨酸几乎完全消失，生成主要是半胱氨酸氧化产物的胱氨酸。
实施例V缓冲与稳定的对乙酰氨基酚含水溶液已知柠檬酸根离子对对乙酰氨基酚施加稳定作用，希望证实这种作用可用对像半胱氨酸的抗氧化剂保护作用进行解释。
0.25毫克/毫升半胱氨酸水溶液调节到pH5.5，加氯化钠变成等渗溶液，加缓冲剂进行缓冲脱水柠檬酸钠(0.70毫克/毫升)，醋酸钠，磷酸氢钠，与柠檬酸盐等摩尔量。
既没有氮气鼓泡也没有抽真空的这些溶液含有约7ppm溶解的氧。它们在黑暗中于25℃保存3天。
测定结果表明，或者在未缓冲的溶液(15％)中，或者在柠檬酸盐存在下，都观察到最低的残余半胱氨酸含量。相反地，在醋酸盐(18％)或磷酸氢盐(21％)存在下，这种含量是比较高的。
由此得出柠檬酸根离子对如半胱氨酸的抗氧化剂没有施加任何特别的保护作用。
实施例VI缓冲的对乙酰氨基酚溶液的制备在这个试验中，使用对乙酰氨基酚、半胱氨酸和缓冲剂。10毫克/毫升对乙酰氨基酚水溶液，添加氯化钠变成等渗溶液，添加半胱氨酸盐酸盐(0.25毫克/毫升)进行稳定，往这种溶液添加一定量的柠檬酸钠(呈二水合柠檬酸二钠形式)，其pH固有地调节到5.5。约0.7毫克/毫升柠檬酸盐的量足够了。制备了无柠檬酸钠或用等摩尔柠檬酸盐，或者醋酸钠，或者磷酸氢钠代替柠檬酸根离子的对比溶液，在所有情况下，应添加氢氧化钠或盐酸将pH调节到5.5。
这些溶液没有进行惰性气体(氮气)鼓泡，在黑暗中于25℃保存3天。
因此观察到，分别在未缓冲的溶液(42％)中，在醋酸钠(17％)存在下，在磷酸氢钠(21％)存在下与柠檬酸盐(22％)存在下，残余半胱氨酸的量不断增加的情况。
在保存20天后，所有这些溶液都强着色，但含有柠檬酸根离子的溶液除外，它仍然是无色的。观察到在对乙酰氨基酚存在下，柠檬酸盐的存在保护半胱氨酸，而没有柠檬酸盐时，半胱氨酸没有施加任何保护作用。
下面表1说明上述的结论。
这些实验因此表明在不同含量氧存在下的相互作用
出乎意外地，正是对乙酰氨基酚、半胱氨酸和柠檬酸盐结合起来可达到比较好的保存，甚至在氧存在下，那么多的半胱氨酸，以至于对乙酰氨基酚也是如此。
使用比较浓的对乙酰氨基酚溶液进行了同样实验。
包装在氮气(A)下或在残余压力约10 000帕下在121℃灭菌15分钟结果(灭菌后)a)溶液PPV(在真空下)和PA(在氮气下)是玫瑰色的b)溶液PCPCV(柠檬酸盐)是无色的，PCA(在氮气下)是玫瑰色的c)溶液PCCPCCV和PCCA是无色的，但使用PCV时，残余半胱氨酸含量是高的。
结论对于约0.5ppm残余氧含量，为了保证对乙酰氨基酚的稳定性，这种真空对于这种含量是不够的。
反过来，对于保存对乙酰氨基酚和保存半胱氨酸，真空与柠檬酸盐具有协同作用。
实施例VII对乙酰氨基酚溶液稳定性，与在氮气存在下，或氮气和真空存在下添加柠檬酸钠的对乙酰氨基酚溶液稳定性溶液的制备
在氮气下(＜0.50ppm)制备这些溶液。在氮气下装瓶，每瓶为80毫升，瓶体积100毫升。往瓶里鼓氮气30秒钟，然后盖瓶。
一半的瓶在盖瓶前抽真空。这些溶液在+120℃加热灭菌15分钟。
这些溶液在+25℃与在+40℃下进行稳定性试验。
在T＝0分析
采用CLHP分析没有显示出相应于降解产物的峰的存在(＜0.01％)在黑暗下于25℃保存2个月后溶液外观
结论仅仅柠檬酸盐+真空结合就能保证完全保存对乙酰氨基酚。
实施例VIII对于氧浓度接近1ppm，用柠檬酸钠和半胱氨酸保护的对乙酰氨基酚溶液稳定性溶液组成
在连续鼓氮气泡下制备溶液。在氮气下装入100毫升瓶中，直到得到含有0.7-1.0ppm氧的溶液。
这些瓶然后在氮气气氛下或在真空下(约10 000帕)盖住。在121℃灭菌15分钟后，这些瓶保存在40℃黑暗中。在灭菌后立刻评价着色、pH、氧含量和残余半胱氨酸含量，然后在保存14天后进行同样评价。
结果
结论在加速降解的条件下保存溶液时，在真空下保存可施加对乙酰氨基酚保护作用。反过来，在氮气下保存是不充分的。这种真空类似于抑制对乙酰氨基酚和半胱氨酸的氧化反应，与真空下保持残余氧比较，这样证实了在氮气下残余氧的降低。
实施例IX1％多巴酚丁胺硫酸盐溶液将1克多巴酚丁胺溶解于50毫升水中制备多巴酚丁胺硫酸盐溶液，再在连续鼓氮气泡下，往其中添加19毫升0.10％抗坏血酸钠溶液。还往其中添加25毫克水合半胱氨酸盐酸盐和70毫克水合柠檬酸钠，然后添加700毫克氯化钠，以保证等渗性。对于可注射液，加蒸馏水补充到100毫升。
在氮气下装瓶，每个瓶100毫升，直到残余氧含量低于0.8ppm。这些瓶然后在真空(约10 000帕)下盖住，在121℃灭菌20分钟。
在从压力釜出来后，这些瓶保存在黑暗的50℃恒温箱中。
在灭菌后立刻评价308nm的吸收，作为副产物氧化作用指数，残余氧含量和残余半胱氨酸含量，然后在50℃保存14天后进行同样评价。
结果加热时没有多巴酚丁胺降解。
由液相色谱观察到，通过在308nm处的吸收测量检测出现次峰，其吸收随pH增加而降低。着色仍然很低，随pH增加而降低。
权利要求
1.长期保存的对氧化敏感的酚类活性组分含水溶液的制备方法，其特征在于采用至少一种惰性气体鼓泡和/或采用抽真空，让这些含水溶液进行脱氧，直到其中含有氧的含量低于2ppm，其特征还在于上述的活性组分水溶液上面任选地有惰性气体气氛，并且这种水溶液装在密封的容器中，其中压力最大是65000帕，其特征还在于这种水溶液的氧含量低于或等于2ppm，其特征还在于添加抗氧化剂完成这种溶液的脱氧作用。
2.根据权利要求1所述制剂的制备方法，其中加羟基多羧酸完成这种溶液的脱氧作用。
3.根据权利要求1或2所述制剂的制备方法，其特征在于酚活性组分是对乙酰氨基酚。
4.根据权利要求1所述制剂的制备方法，其中这种水溶液中残余氧含量低于1ppm。
5.根据权利要求1所述制剂的制备方法，其中这种水溶液的残余氧含量等于0.5ppm或低于这个值。
6.根据权利要求1或2所述制剂的制备方法，其中羟基多羧酸选自柠檬酸、酒石酸、葡糖酸、糖酸、柠苹酸和苹果酸。
7.根据上述权利要求中任一权利要求所述制剂的制备方法，其中羟基多羧酸是一种酸或这种酸的盐。
8.根据权利要求1-9中任一权利要求所述制剂的制备方法，其特征在于羟基多羧酸和/或其中一种盐的浓度是5-200毫克/100毫升水溶液。
9.根据上述权利要求中任一权利要求所述制剂的制备方法，其特征在于抗氧化剂选自硫醇、抗坏血酸衍生物以及还原糖。
10.根据上述权利要求中任一权利要求所述制剂的制备方法，其特征在于抗氧化剂选自抗坏血酸和异抗坏血酸。
11.根据上述权利要求中任一权利要求所述制剂的制备方法，其特征在于抗氧化剂由柠檬酸钠-半胱氨酸混合物组成。
12.根据权利要求1-11中任一权利要求所述制剂的制备方法，其特征在于(1)让含有至少一种酚活性组分的水溶液进行强脱氧作用，该溶液添加了抗氧化剂和任选添加一种羟基多羧酸，(2)在如氩气的惰性气体气氛下，往预先除去其中含有的空气的容器中加入一部分或全部脱氧含水溶液，(3)在惰性气体气氛下关闭容器，使得在关闭容器中产生最大压力65000帕，(4)得到在关闭容器中的酚活性组分含水溶液，其氧含量低于或等于2ppm。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于通过惰性气体鼓泡进行脱氧。
14.根据权利要求12所述的方法，其特征在于通过施加真空进行脱氧。
15.根据权利要求11-14中任一权利要求所述的方法，其特征在于封闭后进行灭菌，特别地采用压热或采用辐射进行灭菌。
16.根据权利要求11-15中任一权利要求所述的方法，其特征在于在惰性气体下，采用灭菌过滤对可氧化活性组分水溶液进行灭菌。
17.根据权利要求11-16中任一权利要求所述的方法，其特征在于鼓泡的惰性气体是氮气。
18.根据权利要求11-17中任一权利要求所述的方法，其特征在于拔顶(nappage)惰性气体比空气重，如氩气。
19.根据权利要求11-18中任一权利要求所述的方法，其特征在于采用吹入惰性气体除去容器中含有的空气。
20.根据权利要求1-11中任一权利要求所得到的含有酚活性组分的制剂在制备用于人或动物用药的可注射液中的应用。
21.根据权利要求20所述的应用，其特征在于活性组分是对乙酰氨基酚。
22.根据权利要求20和/或21所述的应用，其特征在于对乙酰氨基酚中加入消炎剂和/或中枢神经系统止痛剂。
23.含有对氧化作用敏感的酚类组分作为活性组分的可长期保存的注射液，只要它们是根据权利要求1所述方法得到的。
全文摘要
本发明涉及有机化学领域，更具体地涉及治疗化学领域。更确切地，本发明涉及容易氧化的活性组分，特别地酚的长期稳定的含水制剂的制备方法，该方法在于采用惰性气体鼓泡和/或采用抽真空，让这些含水溶液进行强脱氧，同时通过保存在惰性气体气氛下，防止它们可能再摄取氧，在惰性气体下装入预先采用吹入惰性气体除去空气的瓶中，然后，还在于在封闭这些瓶时使它们在负压下，以达到瓶中压力最大是65000帕，还在于因此得到的溶液中残余氧浓度低于2ppm，优选地约1ppm，其中约0.5ppm。特别应用于溶液中氧浓度低于2ppm的注射制剂。
文档编号A61K31/167GK1556694SQ01813670
公开日2004年12月22日 申请日期2001年6月6日 优先权日2000年6月6日
发明者F·蒂伊特林, D·弗雷德, F 蒂伊特林, 椎 申请人:法马托普公司
技术领域：
本发明的目的是一种活性组分注射液的新方法，特别是在治疗上有效的对氧敏感的活性组分注射液的新方法，以及这些包装方式的制备方法，与它们的应用。
更确切地，本发明的目的是一种新的活性组分水溶液配制方法，这些活性组分对氧化作用很敏感，特别地在注射制剂中是可使用的，长期稳定的，例如含有酚类或多酚类物质，氨基醇或含硫物质。
活性组分水溶液有不同类的应用，特别在治疗上的应用，尤其呈用于人或动物的注射液形式。但是，有时这些活性组分中的某些组分在溶液中会出现稳定性的问题。这些问题可能与活性组分对氧很敏感，与空气中的氧，或特别是与水溶液中溶解的氧反应，生成了不希望的降解产物有关。其它的活性组分间接对氧很敏感，即它们在保存过程中能通过化学反应而生成可氧化的衍生物。这些衍生物与氧反应这时导致生成不希望的副产物。特别地，对乙酰氨基酚便是这种情况。这些申请人事实上证明了对乙酰氨基酚在水溶液中一方面进行水解，另一方面分解生成能聚合成含氮聚合物的醌-亚胺。来自这些反应的衍生物也是对氧化作用很敏感的衍生物，生成了不希望的副产物。
然而，氧与这些活性组分反应所生成的副产物，或它们的衍生物会带来许多缺陷，例如像活性降低或产生致过敏的产物。
事实上，由于通过氧化降解，含水溶液中活性组分的含量显著地不可控制地降低，这样带来严重的问题，特别是这些溶液用于治疗，更特别地以注射液形式用于治疗时，这时重要的是很好地测定活性组分的剂量。
另外，氧化作用的产物导致生成有色化合物，因此使得这种水溶液不适合于治疗应用。
此外，生成的副产物还可能因温度升高而增加，因而这样可能阻止采用加热方式对这些活性组分水溶液进行灭菌，或至少采用加热对这些活性组分水溶液灭菌变得困难。
在这里与在下文中，术语“对氧化作用敏感的酚活性组分”应当理解是含有酚结构和/或由酚结构所带官能团的有药效的或没药效的任何物质，它们很容易与氧反应，并且降解生成有色或无色的氧化产物，或水解产物或聚合作用产物。
对氧敏感的活性组分主要是带可氧化官能团的有机物质，其中特别列举酚、多酚、氨基酚、酚醇和酚酮，以及芳族胺或部分氢化的环状结构，如蒽醌衍生物。还可以列举具有烯醇结构的化合物，或具有醛官能团或酮官能团或醇官能团的化合物。
还可以列举对存在的氧也敏感的氨基苷(aminoside)。
在加入本发明水溶液中容易氧化的活性组分，更具体地可以列举酚或氨基酚，如对乙酰氨基酚、肾上腺素、降-肾上腺素、肾上腺酮、异丙基肾上腺素、间羟叔丙肾上腺素、异克舒令(isoxuprine)、苯肾上腺素或多巴酚丁胺；作为芳族胺，列举普鲁卡因、丁哌卡因、丁卡因、对氨苯酸丁酯、L-多巴或甲基多巴肼；作为氨基酮，可列举普罗帕酮(propaphenone)；作为氨基葡糖苷，可列举庆大霉素、阿米卡星、地贝卡星、萘替米星(netilmycine)、西索霉素、托伯拉霉素、小诺米星(micronomycine)，作为吩噻嗪，可列举异丙嗪；作为氢芳族分子，可列举核黄素、9-氨基二氢吖啶；还可以列举可的松衍生物，如地塞米松、倍他米松、去炎松、氟新诺龙酯、9-去氟肤轻松、氟新诺龙酯的丙酮化合物、氟考龙、氯氟美松酮及其衍生物，氯地米松及其酯、四环素衍生物，如强力霉素或二甲胺四环素。
为了改善这样一些对氧化作用敏感的有药效的活性组分的稳定性，因此为了克服上述缺陷，已经提出或者除去氧，或者进行中和氧，或者将这两类操作结合起来防止氧的作用。
为此目的曾使用几种方法a)通过升高含水溶液的温度，将水溶液抽真空或在溶液中进行惰性气体鼓泡，例如氮气、二氧化碳或氩气，除去氧。
但是，这些方法的缺陷在于只能部分，不完全除去氧，或需要很多的时间。氮气鼓泡，在药品工业中最常使用的方法，不能将氧含量降低到最大约2ppm值。
b)往溶解氧的水溶液添加抗氧化剂，例如硫醇或亚硫酸酐衍生物，像碱金属的亚硫酸盐、亚硫酸氢盐或偏亚硫酸盐。
c)除去氧和添加抗氧化剂结合起来。专利申请FR 2 751 875描述了这类方法。
所有这些现有方法都有一定的效果。但是，氧显示出非常高的溶于水的能力，这样一旦脱氧，以后再与大气空气充分接触时，有可能会失去预先除去氧的好处，这样就不得不放弃这种溶液。
在工业生产注射液的情况下，在密封槽中的散装溶液很容易进行脱氧，并且让这些溶液保持隔绝空气。但是，在以后装瓶或装袋包装操作时，很难保持这些溶液完全隔绝空气。尽管为此可能操作十分小心谨慎，特别地在添加惰性气体下装瓶包装时，这些溶液一旦包装，还可能含有或固定或重新吸收不可忽略不计量的溶解的氧。
如果这些溶液应采用加热，特别在高温下，约120℃下灭菌，残留的溶解氧量可能很容易与对氧敏感的活性组分进行反应，导致其完全或部分降解。
事实上观察到，所有存在的氧都是有害的，只要无穷少量的氧，就可诱发氧化反应，特别在灭菌温度下的氧化反应。在介质中存在的能产生氧化作用的残留极限浓度是约2ppm。
因此，这些申请人使用一种容易氧化的酚物质溶液的稳定方法，其中预脱氧作用完成达到可避免产生这种强降解作用的程度。
人们还知道，使用抗氧化剂并不总是有利的。因此，使用的抗氧化剂逐渐地降解，这样必须添加相对大量的抗氧化剂，以保证令人满意保护活性组分。
还可以将除去氧与添加抗氧化剂结合起来。
补充试验表明，本发明制剂的稳定性问题明显地比想像的复杂，尤其观察到无抗氧化剂时，基本脱氧的溶液在室温下在一定时间后呈玫瑰色。如果预先往这种溶液添加α-羟基多羧酸，特别地添加柠檬酸或柠檬酸钙或这两种的混合物，能够延缓出现颜色，对此观察到没有完全脱氧的注射液基本没有着色。
另外，显然是应用真空有可能完成对氧化作用敏感物质的溶液的脱氧作用。由此达到抗氧化剂的更高稳定性，较少生成由氧化降解得到的副产物，特别在多次灭菌循环后。
α-羟基多羧酸及其盐起作重要的作用。它们不涉及稳定pH，也不涉及起捕获自由基的作用。它们有利地代替多羟基化化合物，如山梨糖醇或甘露醇。
在对乙酰氨基酚的特别情况下，优选地使用柠檬酸三钠和柠檬酸的混合物，其量足以达到pH值约5-6，优选地5.5。
因此，本发明的目的是酚活性组分水溶液制剂的制备方法，特别地对氧化作用敏感的活性组分水溶液制剂的制备方法，如对乙酰氨基酚(4-乙酰氨基酚)，能够赋予随时间推移的高稳定性。本发明的一个目的还在于使用这些制剂制备可用于人或动物的注射液，这些注射液含有附加或未加消炎剂和/或中枢神经系统止痛剂的酚活性组分。
本发明的特别一个目的是长期稳定的易氧化酚活性组分含水制剂的生产方法，这些制剂任选地含有抗氧化剂，其特征在于采用惰性气体鼓泡或采用抽真空，让这些含水制剂进行强脱氧，然后通过保持在惰性气体气氛下，在生产过程中防止它们任选的摄取氧而得到这些含水制剂，其特征还在于它们包装在预先通过吹入惰性气体除去空气的瓶中，特别是比空气更重的拔顶(nappage)气体，例如氩气，然后其特征还在于封口时，让它们降压，以便达到内压低于大气压力，最高65 000帕，优选地5000-50 000帕，得到该溶液中的氧浓度低于2ppm的溶解物。
根据本发明的另一个方面，本发明在于如前面所述制剂的制备方法，该方法包括实施下述步骤a)让至少一种活性组分的水溶液进行强脱氧，并且任选完全脱氧，b)在惰性气氛下，把一部分或全部这种脱氧含水溶液加入预先除去其中含有的空气的容器中，c)在惰性气氛下关闭这种容器，同时进行在容器中产生最大压力65 000帕。
优选地采用惰性气体鼓泡，例如像氮气，使这种水溶液脱氧。这种鼓泡可以进行直到这种水溶液中氧含量低于2ppm，优选地1-0.5ppm，甚至特别地低于0.05ppm。如此得到的脱氧溶液这时在隔绝空气下转移到灌装机中，以便分装到例如瓶、安瓿或罐的容器中。
在例如氮气的惰性气氛下将这种水溶液加入这种容器中。在活性组分水溶液加入这种容器中之前，例如通过往这种容器中吹入惰性气体，优选地比空气重的惰性气体，像氩气，除去该容器中的空气，以便避免该容器因静水升举(Archimède)原则不能立刻被空气更换。
一旦这些容器装满，总是同时伴随吹惰性气体，在强真空下封闭这些瓶，以便在封闭后让这些瓶压力保持低于或等于65 000帕，优选地5 000-50 000帕。为达到这一点，可以采用已知的方法，例如像在封闭后立刻将容器的颈置于真空箱。在密封接触后，这种罐容器抽真空，例如将这种罐与真空容器连接起来。提起这种容器的塞，抽吸这种溶液周围的气体。塞子然后再放回到这种容器上的原位，这种容器例如可以放一个盖，然后折边镶接进行密封。这种容器一旦密封就可以进行灭菌，特别地采用压热(autoclavage)或采用辐射进行灭菌。
活性组分水溶液可以在将这种溶液加入这种容器之前可以采用灭菌过滤进行消毒。这种溶液然后优选地在防腐条件下，在惰性气体下加入这种容器中，这种容器有利地是无菌的。
在本发明的方法中鼓气优选使用的惰性气体是氮气，拔顶的惰性气体是氩气，它比空气重。还可以使用氙或氖。
在总是伴随吹惰性气体下，易氧化物质的溶液装满瓶后，在强真空下关闭瓶，以便在关闭后在瓶中的压力还保持在负压300毫米汞柱，或最大压力65 000帕。
根据本发明的方法，瓶中负压有利于除去在这种溶液中还存在的氧，这是很明显的优点。
这种除去能够减少保护活性组分所必需的抗氧化剂的量，甚至免去添加抗氧化剂。由于这种操作时因氧化作用造成活性组分和/或抗氧化剂降解前未进行灭菌的溶液，通过加热也可以进行灭菌。这种抗氧化剂量的减少也可能允许更长时间稳定这些溶液。
因此，法国专利2 751 875提出，这些对乙酰氨基酚水溶液鼓氮气泡，在氮气下装瓶和添加抗氧化剂时这些溶液在光下于室温以及在黑暗下于70℃稳定48小时。使用如下面实施例中指出的所述方法，可能达到更长时间的稳定性。
适合往这种介质添加的抗氧化剂是亚硫酸盐或亚硫酸盐衍生物，硫醇物质，例如像半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、二硫苏糖醇或α-硫甘油，硫代苹果酸、硫代甘油、蛋氨酸；羟基化物质，如抗坏血酸、异-抗坏血酸、甘露醇、山梨糖醇，烯属未饱和物质，如山梨酸、十一烯酸或反丁烯二酸，或羟基多羧酸，或还原糖，如海藻酮糖(trehalulose)，麦芽酮糖(maltulose)或异麦芽酮糖(isomaltulose)。
另外，曾观察到，与脱氧操作结合添加羟基多羧酸或代替脱氧操作的作用是显著降低抗氧化剂的消耗，因此降低了抗氧化剂的浓度。适合添加的抗氧化剂的量是低的，优选地是每升溶液0.1-1 000毫克，优选地0.2-20毫克。
添加调节pH的剂，特别地缓冲剂可能也是有利的，当容易氧化的酚活性组分在特定的pH范围会降解或水解时尤其如此。因此将溶液的pH调节到4-8，特别地4.5-6.0可以是合适的，在其pH范围内酚分子的可氧化性是比较低的。合适的缓冲剂例如是磷酸氢钠/盐酸混合物，磷酸氢钠/氢氧化钠混合物，磷酸二钠/膦酸混合物，醋酸/醋酸钠混合物，柠檬酸/柠檬酸钠混合物，柠檬酸三钠/盐酸混合物。pH选择主要取决活性组分种类及其可氧化性特性。
本发明的制剂在治疗领域中有应用，呈直接用药或添加到输注袋中的可注射形式，作为止痛剂或作为抗生素或作为心血管药物。本发明的对乙酰氨基酚注射液以非常明显的止痛性能著称。这种溶液还含有血管收缩剂，如肾上腺素，或中枢神经系统的止痛剂，如可待因或d-丙氧吩，或消炎剂，如苯噻丙酸或其中一种盐。
制备这样一种溶液是在氮气下进行的。溶解氧的浓度小于0.05ppm。
还可以在酒石酸二金属盐存在下使用如羟基多羧酸，酒石酸或单酒石酸碱金属盐，如钠盐或钾盐，以便pH的值约5.5。还应指出，在羟基多羧酸存在下，pH稳定得多。对于其它的羟基多羧酸，如葡糖酸，糖酸，柠苹酸或苹果酸同样如此。
仅仅可以使用羟基多羧酸盐，如柠檬酸三钠或酒石酸二钠，并通过混合添加盐酸调节pH。
添加其浓度能够达到pH值约5.5的羟基多羧酸，特别地柠檬酸可起重要的作用。被证实每100毫升5-200毫克浓度范围可保证有效防止氧化作用(没有色彩)，防止抗氧化剂降解，这可通过作为抗氧化剂使用的半胱氨酸降解产物含量较低予以证实。
特别地，在对乙酰氨基酚的情况下，在加浓度70毫克/毫升柠檬酸三钠溶液后，半胱氨酸的残留浓度是无柠檬酸盐制剂的约两倍，没有出现着色，甚至在40℃下7星期后也是如此，对乙酰氨基酚浓度没有改变。
结论，对于在加热灭菌后保存对氧化作用敏感的活性组分含水制剂，应该考虑四个实质性的参数分别或结合起来，即·鼓惰性气体完成脱氧达到氧浓度低于2ppm，·任选加抗氧化剂补充脱氧，·加羟基多羧酸，·以及在如氩气的惰性气氛下，含水溶液加入预先脱气的容器中。
在这些条件下，活性组分的浓度不会发生变化，溶液长期保持无色，可以认为没有氧化作用。
实施例I对乙酰氨基酚水溶液组合物的制备制备浓度为2-50毫克/毫升的对乙酰氨基酚水溶液。通过鼓惰性气体进行脱氧达到2ppm以下，然后在惰性气氛与在真空(残余压力65000帕以下)下用瓶包装。这样在这种溶液中氧的残余浓度保持在2ppm以下，优选地1ppm以下。
这种溶液的pH是4-8，优选地4.5-6.0。此后添加调节到5.5的缓冲系统。
调节抗氧化剂有助于这种溶液的稳定性。优选的抗氧化剂是抗坏血酸，抗坏血酸盐，硫醇，多酚或羟基多羧酸。优选的抗氧化剂是柠檬酸钠-半胱氨酸混合物。
这种溶液可以加等渗剂。
实施例II无抗氧化剂的对乙酰氨基酚含水溶液组合物的制备(对比实施例)制备浓度为10毫克/毫升的对乙酰氨基酚水溶液。加HCl调节到pH5.5，并且添加磷酸氢钠使这种溶液缓冲。
然后进行氮气鼓泡脱氧，直到达到氧残余浓度约0.2ppm。在长时间鼓氮气下用这种溶液装瓶后，这些瓶在121℃灭菌15分钟。
在25℃保存6个月后，这种溶液总是无色的，对乙酰氨基酚含量也没有变化，采用CLHP测定对乙酰氨基酚降解产物含量仍然是小于0.015％对乙酰氨基酚。
在其它试验中，在鼓氮气后的对乙酰氨基酚溶液在氮气下包装。在盖住装溶液的瓶后，抽真空，以便达到残余压力10 000帕以下。残留的溶解氧含量是0.16ppm。在121℃灭菌15分钟后，在30℃保存8天，这种溶液仍然无色。
因此可以看出，这种基本方法是在残留约0.2ppm以下脱氧，并且这种方法能够达到长期的完全保存。抗氧化剂的可能存在补充了脱氧作用，但不能代替。
实施例III含有柠檬酸根离子的对乙酰氨基酚水溶液组合物的制备曾确定含有不太高氧残余浓度，即约0.3-0.4ppm的对乙酰氨基酚水溶液，由于对乙酰氨基酚可以与非常少量的氧进行反应，并且可以生成有色化合物，保存时间较短。
因此用盐酸调节到pH5.5的10毫克/毫升对乙酰氨基酚溶液进行氮气鼓泡，直到达到氧含量约0.4ppm。这些瓶在121℃灭菌15分钟，并在室温下保存。
在保存9天后，观察到玫瑰黄色的对乙酰氨基酚溶液。
相反地，如果往与前面相同的组合物添加呈柠檬酸和柠檬酸钠混合物形式的稳定剂，pH自动地调节到5.5，不需要添加盐酸。在氮气鼓泡后，氧的残余浓度是约0.4ppm。然后，这种溶液在真空下用瓶包装，在121℃灭菌15分钟。这些瓶在室温下保存67天。这种溶液仍然是完全无色的。
这个结果是出乎意外的，因为柠檬酸根离子既没有同络合性质联系起来，也没有同抗氧化剂增强性质联系起来。另外，柠檬酸根离子的固有作用不可能与抗氧化作用联系起来。
实施例IV部分脱氧的对乙酰氨基酚水溶液的稳定作用对于可能达到1-5ppm的更高残余氧含量，优选地求助于添加具有更强抗氧化性质的稳定剂，例如像亚硫酸盐，硫醇衍生物或抗坏血酸盐。
10毫克/毫升对乙酰氨基酚水溶液用氢氧化钠调节到pH5.5，并且加醋酸钠缓冲剂保持在这个值，这种溶液再加适当量的氯化钠变成等渗溶液，然后加入抗氧化剂，在这种情况下，0.20毫克/毫升半胱氨酸盐酸盐。这种溶液进行氮气鼓泡，然后在盖住瓶前抽真空(负压约550毫米汞柱)。残余氧含量升高到约1.5ppm溶解氧。在灭菌后，装有这种溶液的瓶保存在25℃达24个月。在这个期间后，这些瓶仍然无色，对乙酰氨基酚含量是100％起始含量，采用CLHP测量的对乙酰氨基酚降解产物是对乙酰氨基酚含量为0.02％以下。
因此抗氧化剂的存在起着非常大的作用。在这种对乙酰氨基酚溶液中，由于代替寻求保护的酚分子，如半胱氨酸的抗氧化剂与溶解的氧进行反应。
但是，在保存后，半胱氨酸几乎完全消失，生成主要是半胱氨酸氧化产物的胱氨酸。
实施例V缓冲与稳定的对乙酰氨基酚含水溶液已知柠檬酸根离子对对乙酰氨基酚施加稳定作用，希望证实这种作用可用对像半胱氨酸的抗氧化剂保护作用进行解释。
0.25毫克/毫升半胱氨酸水溶液调节到pH5.5，加氯化钠变成等渗溶液，加缓冲剂进行缓冲脱水柠檬酸钠(0.70毫克/毫升)，醋酸钠，磷酸氢钠，与柠檬酸盐等摩尔量。
既没有氮气鼓泡也没有抽真空的这些溶液含有约7ppm溶解的氧。它们在黑暗中于25℃保存3天。
测定结果表明，或者在未缓冲的溶液(15％)中，或者在柠檬酸盐存在下，都观察到最低的残余半胱氨酸含量。相反地，在醋酸盐(18％)或磷酸氢盐(21％)存在下，这种含量是比较高的。
由此得出柠檬酸根离子对如半胱氨酸的抗氧化剂没有施加任何特别的保护作用。
实施例VI缓冲的对乙酰氨基酚溶液的制备在这个试验中，使用对乙酰氨基酚、半胱氨酸和缓冲剂。10毫克/毫升对乙酰氨基酚水溶液，添加氯化钠变成等渗溶液，添加半胱氨酸盐酸盐(0.25毫克/毫升)进行稳定，往这种溶液添加一定量的柠檬酸钠(呈二水合柠檬酸二钠形式)，其pH固有地调节到5.5。约0.7毫克/毫升柠檬酸盐的量足够了。制备了无柠檬酸钠或用等摩尔柠檬酸盐，或者醋酸钠，或者磷酸氢钠代替柠檬酸根离子的对比溶液，在所有情况下，应添加氢氧化钠或盐酸将pH调节到5.5。
这些溶液没有进行惰性气体(氮气)鼓泡，在黑暗中于25℃保存3天。
因此观察到，分别在未缓冲的溶液(42％)中，在醋酸钠(17％)存在下，在磷酸氢钠(21％)存在下与柠檬酸盐(22％)存在下，残余半胱氨酸的量不断增加的情况。
在保存20天后，所有这些溶液都强着色，但含有柠檬酸根离子的溶液除外，它仍然是无色的。观察到在对乙酰氨基酚存在下，柠檬酸盐的存在保护半胱氨酸，而没有柠檬酸盐时，半胱氨酸没有施加任何保护作用。
下面表1说明上述的结论。
这些实验因此表明在不同含量氧存在下的相互作用
出乎意外地，正是对乙酰氨基酚、半胱氨酸和柠檬酸盐结合起来可达到比较好的保存，甚至在氧存在下，那么多的半胱氨酸，以至于对乙酰氨基酚也是如此。
使用比较浓的对乙酰氨基酚溶液进行了同样实验。
包装在氮气(A)下或在残余压力约10 000帕下在121℃灭菌15分钟结果(灭菌后)a)溶液PPV(在真空下)和PA(在氮气下)是玫瑰色的b)溶液PCPCV(柠檬酸盐)是无色的，PCA(在氮气下)是玫瑰色的c)溶液PCCPCCV和PCCA是无色的，但使用PCV时，残余半胱氨酸含量是高的。
结论对于约0.5ppm残余氧含量，为了保证对乙酰氨基酚的稳定性，这种真空对于这种含量是不够的。
反过来，对于保存对乙酰氨基酚和保存半胱氨酸，真空与柠檬酸盐具有协同作用。
实施例VII对乙酰氨基酚溶液稳定性，与在氮气存在下，或氮气和真空存在下添加柠檬酸钠的对乙酰氨基酚溶液稳定性溶液的制备
在氮气下(＜0.50ppm)制备这些溶液。在氮气下装瓶，每瓶为80毫升，瓶体积100毫升。往瓶里鼓氮气30秒钟，然后盖瓶。
一半的瓶在盖瓶前抽真空。这些溶液在+120℃加热灭菌15分钟。
这些溶液在+25℃与在+40℃下进行稳定性试验。
在T＝0分析
采用CLHP分析没有显示出相应于降解产物的峰的存在(＜0.01％)在黑暗下于25℃保存2个月后溶液外观
结论仅仅柠檬酸盐+真空结合就能保证完全保存对乙酰氨基酚。
实施例VIII对于氧浓度接近1ppm，用柠檬酸钠和半胱氨酸保护的对乙酰氨基酚溶液稳定性溶液组成
在连续鼓氮气泡下制备溶液。在氮气下装入100毫升瓶中，直到得到含有0.7-1.0ppm氧的溶液。
这些瓶然后在氮气气氛下或在真空下(约10 000帕)盖住。在121℃灭菌15分钟后，这些瓶保存在40℃黑暗中。在灭菌后立刻评价着色、pH、氧含量和残余半胱氨酸含量，然后在保存14天后进行同样评价。
结果
结论在加速降解的条件下保存溶液时，在真空下保存可施加对乙酰氨基酚保护作用。反过来，在氮气下保存是不充分的。这种真空类似于抑制对乙酰氨基酚和半胱氨酸的氧化反应，与真空下保持残余氧比较，这样证实了在氮气下残余氧的降低。
实施例IX1％多巴酚丁胺硫酸盐溶液将1克多巴酚丁胺溶解于50毫升水中制备多巴酚丁胺硫酸盐溶液，再在连续鼓氮气泡下，往其中添加19毫升0.10％抗坏血酸钠溶液。还往其中添加25毫克水合半胱氨酸盐酸盐和70毫克水合柠檬酸钠，然后添加700毫克氯化钠，以保证等渗性。对于可注射液，加蒸馏水补充到100毫升。
在氮气下装瓶，每个瓶100毫升，直到残余氧含量低于0.8ppm。这些瓶然后在真空(约10 000帕)下盖住，在121℃灭菌20分钟。
在从压力釜出来后，这些瓶保存在黑暗的50℃恒温箱中。
在灭菌后立刻评价308nm的吸收，作为副产物氧化作用指数，残余氧含量和残余半胱氨酸含量，然后在50℃保存14天后进行同样评价。
结果加热时没有多巴酚丁胺降解。
由液相色谱观察到，通过在308nm处的吸收测量检测出现次峰，其吸收随pH增加而降低。着色仍然很低，随pH增加而降低。
权利要求
1.长期保存的对氧化敏感的酚类活性组分含水溶液的制备方法，其特征在于采用至少一种惰性气体鼓泡和/或采用抽真空，让这些含水溶液进行脱氧，直到其中含有氧的含量低于2ppm，其特征还在于上述的活性组分水溶液上面任选地有惰性气体气氛，并且这种水溶液装在密封的容器中，其中压力最大是65000帕，其特征还在于这种水溶液的氧含量低于或等于2ppm，其特征还在于添加抗氧化剂完成这种溶液的脱氧作用。
2.根据权利要求1所述制剂的制备方法，其中加羟基多羧酸完成这种溶液的脱氧作用。
3.根据权利要求1或2所述制剂的制备方法，其特征在于酚活性组分是对乙酰氨基酚。
4.根据权利要求1所述制剂的制备方法，其中这种水溶液中残余氧含量低于1ppm。
5.根据权利要求1所述制剂的制备方法，其中这种水溶液的残余氧含量等于0.5ppm或低于这个值。
6.根据权利要求1或2所述制剂的制备方法，其中羟基多羧酸选自柠檬酸、酒石酸、葡糖酸、糖酸、柠苹酸和苹果酸。
7.根据上述权利要求中任一权利要求所述制剂的制备方法，其中羟基多羧酸是一种酸或这种酸的盐。
8.根据权利要求1-9中任一权利要求所述制剂的制备方法，其特征在于羟基多羧酸和/或其中一种盐的浓度是5-200毫克/100毫升水溶液。
9.根据上述权利要求中任一权利要求所述制剂的制备方法，其特征在于抗氧化剂选自硫醇、抗坏血酸衍生物以及还原糖。
10.根据上述权利要求中任一权利要求所述制剂的制备方法，其特征在于抗氧化剂选自抗坏血酸和异抗坏血酸。
11.根据上述权利要求中任一权利要求所述制剂的制备方法，其特征在于抗氧化剂由柠檬酸钠-半胱氨酸混合物组成。
12.根据权利要求1-11中任一权利要求所述制剂的制备方法，其特征在于(1)让含有至少一种酚活性组分的水溶液进行强脱氧作用，该溶液添加了抗氧化剂和任选添加一种羟基多羧酸，(2)在如氩气的惰性气体气氛下，往预先除去其中含有的空气的容器中加入一部分或全部脱氧含水溶液，(3)在惰性气体气氛下关闭容器，使得在关闭容器中产生最大压力65000帕，(4)得到在关闭容器中的酚活性组分含水溶液，其氧含量低于或等于2ppm。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于通过惰性气体鼓泡进行脱氧。
14.根据权利要求12所述的方法，其特征在于通过施加真空进行脱氧。
15.根据权利要求11-14中任一权利要求所述的方法，其特征在于封闭后进行灭菌，特别地采用压热或采用辐射进行灭菌。
16.根据权利要求11-15中任一权利要求所述的方法，其特征在于在惰性气体下，采用灭菌过滤对可氧化活性组分水溶液进行灭菌。
17.根据权利要求11-16中任一权利要求所述的方法，其特征在于鼓泡的惰性气体是氮气。
18.根据权利要求11-17中任一权利要求所述的方法，其特征在于拔顶(nappage)惰性气体比空气重，如氩气。
19.根据权利要求11-18中任一权利要求所述的方法，其特征在于采用吹入惰性气体除去容器中含有的空气。
20.根据权利要求1-11中任一权利要求所得到的含有酚活性组分的制剂在制备用于人或动物用药的可注射液中的应用。
21.根据权利要求20所述的应用，其特征在于活性组分是对乙酰氨基酚。
22.根据权利要求20和/或21所述的应用，其特征在于对乙酰氨基酚中加入消炎剂和/或中枢神经系统止痛剂。
23.含有对氧化作用敏感的酚类组分作为活性组分的可长期保存的注射液，只要它们是根据权利要求1所述方法得到的。
全文摘要
本发明涉及有机化学领域，更具体地涉及治疗化学领域。更确切地，本发明涉及容易氧化的活性组分，特别地酚的长期稳定的含水制剂的制备方法，该方法在于采用惰性气体鼓泡和/或采用抽真空，让这些含水溶液进行强脱氧，同时通过保存在惰性气体气氛下，防止它们可能再摄取氧，在惰性气体下装入预先采用吹入惰性气体除去空气的瓶中，然后，还在于在封闭这些瓶时使它们在负压下，以达到瓶中压力最大是65000帕，还在于因此得到的溶液中残余氧浓度低于2ppm，优选地约1ppm，其中约0.5ppm。特别应用于溶液中氧浓度低于2ppm的注射制剂。
文档编号A61K31/167GK1556694SQ01813670
公开日2004年12月22日 申请日期2001年6月6日 优先权日2000年6月6日
发明者F·蒂伊特林, D·弗雷德, F 蒂伊特林, 椎 申请人:法马托普公司
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