治疗雌激素受体阳性癌的方法
专利名称：治疗雌激素受体阳性癌的方法
背景技术：
本发明涉及雷怕霉素和抗雌激素的组合在治疗或抑制雌激素受体阳性癌，特别是乳腺和卵巢癌中的应用。
乳腺癌是全球导致女性癌死亡的主要原因。某些人乳腺癌细胞的生长是在激素控制下。许多证据提示，雌激素促使乳腺癌恶化。雌激素在乳腺中的生物学作用通过雌激素受体(ER)介导，其是配体可诱导转录因子的一个大家族的一员。在与其受体结合后，配体引发受体上热激蛋白的解离、受体二聚作用、磷酸化以及靶基因的DNA效应元件结合。结合DNA之后，ER与可有可无的其它转录因子和辅激活物/辅阻遏物有差异地调控靶基因的转录。雌激素作用可以被拮抗剂(抗雌激素)部分阻断，所述拮抗剂通过ER与雌激素竞争但无法激活促进细胞生长的基因的方式起作用。抗雌激素他莫昔芬(Tam)在基于雌激素对肿瘤生长刺激作用的反应性的乳腺癌的治疗和控制中业已成为一线疗法。不幸的是，Tam疗法的有效性受到它在其它组织如子宫中的激动活性和副作用如热潮红的阻碍。
需要开发新的抗雌激素或开发抗雌激素与其它治疗剂的最佳组合来获得更好的功效并减轻副作用。
雷怕霉素是一种由吸水链霉菌产生的大环三烯抗生素，还发现其在体外和体内均具有抗真菌活性，特别是抗白色念珠菌活性[C.Vezina等，J.Antibiot.28，721(1975)；S.N.Sehgal等，J.Antibiot.28，727(1975)；H.A.Baker等，J.Antibiot.31，539(1978)；美国专利3,929,992；和美国专利3,993,749]。此外，已经证明雷怕霉素单独(美国专利4,885,171)或与溶链菌制剂联合(美国专利4,401,653)具有抗肿瘤活性。
雷怕霉素酯，与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯[公开在美国专利5,362,718]，也称作CCI-779，业已证明对多种肿瘤细胞系、在体内动物肿瘤模型和I期临床试验中具有抗肿瘤活性[Gibbons，J.，Proc.Am.Assoc.Can.Res.40301(1999)；Geoerger，B.，Proc.Am.Assoc.Can.Res.40603(1999)；Alexandre，J.，Proc.Am.Assoc.Can.Res.40613(1999)；和Alexandre，J.，Clin.Cancer.Res.5(November Supp.)Abstr.7(1999)]。
据报导称非亲子宫性抗雌激素具有抗肿瘤活性[参见，美国专利5,998,402]。2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚，也称作ERA-923，已经被开发用于雌激素受体阳性转移性乳腺癌。[Gandhi，T.，2000 ASCO Program/Proceedings，Abstract 875，(May 2000)]。
发明内容
本发明提供一种在需要其的哺乳动物中治疗或抑制T雌激素受体阳性癌的方法，其包括给该哺乳动物提供有效量的雷怕霉素和抗雌激素的组合。
本发明还提供一种含有雷怕霉素和抗雌激素的作为联合制剂同时、分开或顺序给药用于治疗或抑制哺乳动物中雌激素受体阳性癌的产品。
如上定义，术语″雷怕霉素″定义一类含有基本雷怕霉素母核(如下所示)的免疫抑制化合物。本发明的雷怕霉素包括可以在化学上或生物学上修饰成为雷怕霉素母核的衍生物、同时仍然保留免疫抑制特性的化合物。所以，术语″雷怕霉素″包括雷怕霉素的酯、醚、肟、腙和羟胺化合物，以及其中雷怕霉素母核上的官能团被修饰(例如通过还原作用或氧化作用)的雷怕霉素。术语″雷怕霉素″还包括雷怕霉素类的药学可接受盐，由于含有酸性或碱性部分其能够形成此类盐。
雷怕霉素优选的是，雷怕霉素的酯类或醚类是位于雷怕霉素母核的42-和/或31-位的羟基的酯类或醚类，位于27-位的羟基(27-酮还原之后)的酯类和醚类，并且所述的肟、腙和羟胺是雷怕霉素母核的42-位酮(42-羟基氧化之后)和27-酮。
优选的雷怕霉素的42-和/或31-酯和醚公开在下列专利中，它们在此引入作为参考烷基酯(美国专利4,316,885)；氨基烷基酯(美国专利4,650,803)；氟化酯(美国专利5,100,883)；酰胺酯(美国专利5,118,677)；氨基甲酸酯(美国专利5,118,678)；甲硅烷基醚(美国专利5,120,842)；氨基酯(美国专利5,130,307)；缩醛(美国专利5,51,413)；氨基二酯(美国专利5,162,333)；磺酸酯和硫酸酯(美国专利5,177,203)；酯(美国专利5,221,670)；烷氧基酯(美国专利5,233,036)；O-芳基、-烷基、-链烯基和-链炔基醚(美国专利5,258,389)；碳酸酯(美国专利5,260,300)；芳基羰基和烷氧基羰基氨基甲酸酯(美国专利5,262,423)；氨基甲酸酯(美国专利5,302,584)；羟基酯(美国专利5,362,718)；受阻酯(美国专利5,385,908)；杂环酯(美国专利5,385,909)；偕二取代酯(美国专利5,385,910)；氨基链烷酸酯(美国专利5,389,639)；磷酰基氨基甲酸酯(美国专利5,391,730)；氨基甲酸酯(美国专利5,411,967)；氨基甲酸酯(美国专利5,434,260)；脒基氨基甲酸酯(美国专利5,463,048)；氨基甲酸酯(美国专利5,480,988)；氨基甲酸酯(美国专利5,480,989)；氨基甲酸酯(美国专利5,489,680)；受阻N-氧化物酯(美国专利5,491,231)；生物素酯(美国专利5,504,091)；O-烷基醚(美国专利5,665,772)；和雷怕霉素的PEG酯(美国专利5,780,462)。这些酯和醚的制备公开在上述专利中。
所以雷怕霉素化合物的实例包括下式的化合物 其中RA和RB各自选自氢和上述美国专利任一篇中公开的成酯基团或成醚基团。
优选的雷怕霉素的27-酯和醚公开在美国专利5,256,790中，其在此引入作为参考。这些酯和醚的制备公开在上述专利中。
优选的雷怕霉素的肟、腙和羟胺公开在美国专利5,373,014、5,378,836、5,023,264和5,563,145，其在此引入作为参考。这些肟、腙和羟胺的制备公开在上述专利中。42-氧代雷怕霉素的制备公开在5,023,263中，其在此引入作为参考。
特别优选的雷怕霉素包括雷怕霉素[美国专利3,929,992]、与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯[美国专利5,362,718 ]，和42-O-(2-羟基)乙基雷怕霉素[美国专利5,665,772]。
按照本发明使用的术语“抗雌激素”定义为是当联合给药时在试验体系中减弱或阻断雌激素激动剂如17β-雌二醇的作用的化合物。术语“非亲子宫”是指那些典型地不产生显著临床子宫内膜增生作用的抗雌激素。
优选的抗雌激素包括例如苯并[9，10]菲抗雌激素，其包括他莫昔芬和4-羟基他莫昔芬；氯米芬；和非亲子宫性抗雌激素，例如下式I和II所示的那些、雷洛昔芬、屈洛昔芬、艾多昔芬、萘福昔芬、托瑞米芬、TAT-59、左美洛昔芬(levomeloxifene)、LY-353381、CP-336156、MDL-103323、EM-800和ICI-182，780。
优选的非亲子宫性抗雌激素包括具有I或II结构式的化合物 或 其中R1是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基(carboalkoxy)、1-12个碳原子的烷氧基、卤素或1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基；R2是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基、氰基、1-6个碳原子的烷基，或三氟甲基，条件是当R1是H时，R2不是OH。
R3和R4分别独立地是、H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基或氰基，条件是，当R1是H时，R2不是OH。
X是H、1-6个碳原子的烷基、氰基、硝基、三氟甲基或卤素；n是2或3；Y是饱和、部分饱和或不饱和5-7员含氮杂环，其可以选择性地含有选自基团-O-、-NH-、1-6个碳原子的烷基胺、-N＝和S(O)m的第二杂原子；m是0-2；或其药物可接受盐。
优选的化合物是那些其中R1选自H、OH或其C1-C12酯或烷基醚、卤素；R2、R3、R4、R5和R6独立地选自H、OH或其C1-C12酯或烷基醚、卤素、氰基、C1-C6烷基或三卤代甲基，优选三氟甲基，条件是当R1是H时，R2不是OH；X选自H、C1-C6烷基、氰基、硝基、三氟甲基、卤素； 或 和Y是式I和II的抗雌激素和这些化合物的药学可接受盐的制备公开在美国专利5,998,402，其在此引入作为参考。
特别优选的式I和II的抗雌激素如下表所述。 表1 表1(续) 表2 表2(续) 表2(续) 表3 表3(续) 表4
特别优选的式I或II的抗雌激素是上表中实施例31(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)和32(1-[4-(2-氮杂环庚烷-1-基-乙氧基)-苄基]2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚)的那些。
当适用时，在雷怕霉素或抗雌激素含有适当碱性部分时可以从有机和无机酸生成药学可接受盐，例如乙酸、丙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、苹果酸、邻苯二甲酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟脑磺酸和和类似的已知可接受助剂。当雷怕霉素或抗雌激素含有适当酸性不时，盐也可以从有机和无机碱生成，例如碱金属盐(例如钠、锂或钾)、碱土金属盐、铵盐、含有1-6个碳原子的烷基铵盐或各烷基含有1-6个碳原子的二烷基铵盐，和各烷基含有1-6个碳原子的三烷基铵盐。
根据本发明使用的术语″提供″涉及提供本发明所概括的化合物或物质，是指直接施用所述的化合物或物质，或者施用在体内生成等效量的所述化合物或物质的前药、衍生物或类似物。
本发明的雷怕霉素类和抗雌激素类的组合在治疗或抑制雌激素受体阳性癌中的性能在三个标准药理学试验方法中证实，它们测定雷怕霉素抗雌激素组合抑制MCF-7乳腺癌细胞和BG-1卵巢癌细胞的生长的性能，这些癌细胞是代表性的雌激素受体阳性癌。在这些试验方法中，与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基-丙酸的雷怕霉素42-酯用作代表性的雷怕霉素，并且2-(4-羟基-苯基)-3甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚、雷洛昔芬和4-羟基他莫昔芬用作代表性的抗雌激素类物质。下面简述所采用的方法，和得到的结果。
将MCF-7人乳腺癌细胞在37℃下、5％CO2和95％空气的加湿气氛中保存在IMEM培养基内，该培养基补充有10％胎牛血清。BG-1人卵巢癌细胞在37℃下、5％CO2和95％空气的加湿气氛中保存在IMEM培养基内，该培养基补充有10％胎牛血清、2μg/ml胰岛素和1％非必需氨基酸。试验前一天，细胞以2,500细胞/孔的细胞密度铺板在96-孔平板中补充有10％胎牛血清的IMEM培养基内。次日，用不同浓度的抗雌激素和3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯(在下表中称作CCI-779)处理。5或6天后，监测细胞生长。将MTT溶液(20μl)(0.5mg/ml)加入到各孔内且继续温育细胞4小时。此后取出该溶液并加入150μl的DMSO。在540nM下用自动平板读数器读取与细胞数目相对应的深蓝色的强度。
下列表概括了所得的结果；2-(4-羟基-苯基)-3甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚在下表中被称作ERA-923。
表A.CCI-779和ERA-923对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表B.CCI-779和4-羟基他莫昔芬对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表C.CCI-779和雷洛昔芬对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表D.ERA-923(单独)对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表E.CCI-779(单独)对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表F.4-羟基他莫昔芬(单独)对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表G.CCI-779和ERA-923对BG-1细胞(百分抑制率)的影响 表H.CCI-779和4-羟基他莫昔芬对BG-1细胞(百分抑制率)的影响 表I.CCI-779和雷洛昔芬对BG-1细胞(百分抑制率)的影响
用3维绘图共享软件MacSynergy II(由Prichard及其同事开发(Prichard和Shipman，19901992))进行分析来测定雷怕霉素加抗雌激素的组合是否协同抑制雌激素受体阳性癌。简单而言，理论加和相互作用是由各药物的剂量-反应曲线、基于Bliss独立模型计算的。随后从试验表面减去计算出的加和表面得到表示％抑制率的协同表面超过计算的加和值-协同指数。任何在0％平面上方的峰都表示协同作用。同样地，任何在0％平面下方的峰是拮抗的象征。下表中概括了3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯加抗雌激素的组合的结果，表示在左栏内。
在这些标准药理学试验方法中获得的结果证明，雷怕霉素和抗雌激素的组合协同抑制雌激素受体阳性癌的生长。例如，结果证明用ERA-923和CCI-779的组合处理MCF-7乳腺癌细胞，可以产生明确的生长抑制的协同增强作用。ERA-923的生长抑制作用在非抑制浓度CCI-779存在下通过IC50估计提高了约10倍，而CCI-779的生长抑制作用在非抑制浓度的ERA-923存在下提高了约40倍。如表A所示，当低浓度的ERA-923(0.25nM-1nM)与高浓度的CCI-779(300-400nM)组合时协同作用更加显著。观察到的最高程度的协同作用比加和值高约60％。
在使用抗雌激素雷洛昔芬和4-羟基他莫昔芬与CCI-779组合时也证实了类似结果。雷洛昔芬和4-羟基他莫昔芬两者均证明在CCI-779的存在下的协同抑制作用。4-羟基他莫昔芬与CCI-779组合对MCF-7细胞的协同抑制作用具有5-20nM(4-羟基他莫昔芬)和5-400nM(CCI779)的最佳浓度范围(表B)。雷洛昔芬和CCI-779的组合在任一药物0.25-5.0nM雷洛昔芬和5.0-400nM CCI-779(表C)的宽范围浓度内也具有协同作用。
在雌激素依赖性BG-1卵巢癌细胞中当将除4-羟基他莫昔芬之外的抗雌激素与雷怕霉素，例如CCI-779组合时也证明产生协同抑制作用(表G、H、I)。4-羟基他莫昔芬和CCI-779的失败证明在BG-1细胞中的协同抑制作用可能与4-羟基他莫昔芬在卵巢中的部分激动活性有关系。
在第三种标准药理学试验方法中，植入MCF-7肿瘤的小鼠用ERA-923和CCI-779的组合处理。下面简单概括所用的方法和所得的结果。将ERA-923溶解在1％吐温80和0.9％NaCl注射剂USP中。用10.0ml玻璃瓶将药物等分为日剂量并在-20℃下冷冻直至需要。CCI-779是用含5％ETOH、4.9％Phosal和0.1％吐温80的灭菌水新制。在肿瘤移植后当天开始口服0.2ml的各药物。试验期间每天给予ERA923并且在第一个10天内隔天给予CCI-779。对照载体采用与药物相同的给药方案。MCF7细胞在含5％胎牛血清的IMEM中培养2-20个不同传代。胰蛋白酶消化后将肿瘤重新悬浮在含2％的IMEM中与Matrigel比例为1∶1。用带有233/4规针头的1.0ml结核菌素注射器将10百万细胞皮下注射到各小鼠的乳房组织中。选用体重20.0-23.0g的5-6周龄雌性卵巢切除无胸腺nu/nu小鼠(Charles River LabsWilmington，MA)。将动物5只圈养在笼中Microisolator Open RackSystem(Lab ProductsMaywood，NJ)内。各小鼠接受17-雌二醇丸(0.72mg/丸-60天解除)。在肿瘤注射之前1-2周用10规trochar将药丸注射到耳和肩膀之间颈部的外侧。对照组是15只小鼠/载体，而药物组是10只小鼠/药物。用solar卡钳(Cole-Parmer InstumentsVernon Hills，IL)每周测量肿瘤并从肿瘤直径按照下式估计肿瘤重量
肿瘤重量(mg)＝重量长度(mm)×重量宽度(mm)2/2在肿瘤注射后第36天通过吸入CO2使小鼠安乐死。下面概括了得到的结果。给携带MCF-7肿瘤的裸鼠施用ERA-923、CCI-779或两种药物的组合。在这些条件下，ERA-923或CCI-779具有部分效应(约35％生长抑制率；生长抑制率＝试验值-200(基线)/对照值-200)。然而，药物的组合可以抑制约85％的肿瘤生长。没有观察到这种药物组合具有毒性的征兆。结果该在下表中。
采用CCI-779和ERA-923的联合治疗对裸鼠中MCF-7如下癌生长的作用1
1.卵巢切除的裸鼠在移植之前1周给予0.72mg60天的缓释17β-雌二醇丸，移植是将1×107MCF-7肿瘤细胞移植到接近动物的乳腺附近。肿瘤移植后第一天，按照指示口服药物治疗(PO)。在上述方法规定的天内测量肿瘤大小(参见Discafani等，1999.BiochemPharmacol.57917-925)。
2.对照处理是用CCI-779的载体(phosal)、ERA-923的载体(吐温)或两种药物的载体处理的动物的联合效果。各对照组的平均肿瘤大小彼此之间没有明显差异且因此合并。数值是平均值±标准偏差。利用数据的log转化通过ANOVA进行统计学分析；进行成对比较。一个星号是指与对照组相比显著性差异为p＜0.05。双星号(*/*)或-/*表示与单独CCI-779或ERA-923成对比较中有显著性差异，或者没有显著性差异。在CCI-779加ERA-923组中的值在统计学上在p＜0.001水平不同于对照。
3.存在于phosal的CCI-779从第1天开始至第9天结束隔天经口服给药。
4.含在吐温中的ERA-923从第1天开始经口服每天给药。
5.药物以两个分开剂量给药。给药是在给予一种药物的组中在规定天数进行。
基于在上述标准药理学试验方法中获得的结果，雷怕霉素和抗雌激素的组合可以有效治疗或抑制雌激素受体阳性癌，特别是雌激素受体阳性乳腺或卵巢癌。
应理解有效剂量的雷怕霉素和抗雌激素的组合可以根据所用具体化合物、给药方式、状况和被治疗病症的严重性以及与被治疗固体有关的多种身体因素而变化。建议CCI-779(作为代表性雷怕霉素)和ERA-923(作为代表性抗雌激素)应该每周以5-500mg CCI-779(优选剂量50-200mg)和2-500mg ERA-923(优选剂量25-100mg)的推荐剂量给药。其它雷怕霉素类和抗雌激素类的起始剂量可以通过与CCI-779和ERA-923比较相对效价来获得。
如本发明使用，组合给药方案可以同时给予，或者可以以交错方案给药，在化疗过程中雷怕霉素在与抗雌激素不同的时间给药。在两种药物的给药之间这种时间差可以是数分钟、数小时、数天、数周或更长时间。所以，术语“组合”不一定是指同时或单一给药，但各组分是在一个预定治疗期内给药，例如，在CCI-779和ERA-923的组合中，首先CCI-779可以非肠道给药，并且ERA-923经口服给药。所述的组合物可以每天、每周或每月给药1次。对于化疗方案的典型地是，化疗过程可能在数周后反复进行，并且可以按照两种药物给药的相同时间框，或可以基于患者反应来调整。
所示剂量可以以任何使活性化合物定向进入接受者血液的方式给药，包括经口服、经植入、非肠道(包括静脉内、腹膜内和皮下注射)，经直肠、经鼻内、经阴道内和经皮给药。鉴于这样的目的，经皮给药理解为包括透过机体表面和机体通道的内层(包括上皮和粘膜组织)的所有给药。这样的给药可以利用本发明的化合物或其药学可接受盐以乳液、霜剂、泡沫剂、贴剂、混悬剂、溶液和栓剂(直肠和阴道)进行。
含有本发明活性化合物的口服制剂可以含有包括常用口服剂型，包括片剂、胶囊、经颊剂型、含片、锭剂和口服液、混悬剂和溶液。胶囊可以含有所述活性化合物与多相填充剂和/或稀释剂的混合物，例如药学可接受淀粉(如玉米、土豆或木薯淀粉)、糖、人造甜味剂、粉状纤维素，例如结晶和微晶纤维素、面粉、明胶、树胶等。适用的片剂可以通过常规压缩、湿法制粒和干粉制粒方法并利用药学可接受稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、表面改性剂(包括表面活性剂)、助悬剂或稳定剂来制备，包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、十二烷基硫酸钠、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、藻酸、阿拉伯胶、黄原胶、柠檬酸钠、复合硅酸盐、碳酸钙、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、高岭土、甘露糖醇、氯化钠、滑石、干淀粉和糖粉。优选的表面改性剂包括非离子和阴离子表面改性剂。表面改性剂的代表性实例包括，但不限于，泊洛沙姆188、氯苄烷铵、硬脂酸钙、鲸蜡醇硬脂醇混合物、鲸蜡聚乙二醇乳化蜡、脱水山梨糖醇酯、胶体二氧化硅、磷酸盐、十二烷基硫酸钠、硅酸镁铝和三乙醇胺。更加优选泊洛沙姆188作为表面改性剂。本发明的口服制剂可以采用标准延迟或定时湿法剂型以改变活性化合物的吸收作用。雷怕霉素的优选口服剂型公开在美国专利5,559,121；5,536,729；5,989,591；和5,985,325中，其在此引入作为参考。
在某些情况中，可能希望所述的化合物以气雾剂的形式直接给药至呼吸道。
本发明的化合物也可以经非肠道或腹膜内给药。所述活性混合物作为游离碱或药学可接受盐的溶液和混悬剂可以在水中制备与适当表面活性剂例如羟丙基纤维素混合。还可以在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散体。在葡糖储存和使用的条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。
所述注射使用的药剂包括灭菌含水溶液或分散体和用于灭菌可注射溶液和分散体的即时制剂的无菌粉末。在所有情况中，剂型必须经过灭菌并且必须流化达到存在易注射性能的成对。它在制造和储存的条件下必须稳定且必须经防腐处理以对抗微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或分散体介质含有，例如，水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)，其适当混合物，和植物油。优选的施用雷怕霉素的制剂公开在美国专利5,530,006；5,516,770；和5,616,588，其在此引入作为参考。
栓剂可以由传统材料制备，包括可可脂，加入或不加入蜡来改变栓剂的熔点，和甘油。也可以使用水溶性栓剂基质，例如不同分子量的聚乙二醇。
权利要求
1.一种治疗或抑制哺乳动物中雌激素受体阳性癌的方法，其包括给该哺乳动物提供有效量的雷怕霉素和抗雌激素的组合。
2.按照权利要求1所述的方法，其中所述的雷怕霉素是雷怕霉素。
3.按照权利要求1所述的方法，其中所述的雷怕霉素是雷怕霉素的酯、醚、肟、腙或羟胺。
4.按照权利要求3所述的方法，其中所述的雷怕霉素是雷怕霉素的42-酯或42-醚。
5.按照权利要求4所述的方法，其中所述的雷怕霉素是与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯。
6.按照权利要求4所述的方法，其中所述的雷怕霉素42-O-(2-羟基)乙基雷怕霉素。
7.按照权利要求1-6任一项的方法，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、4-羟基他莫昔芬或氯米芬。
8.按照权利要求1-6任一项所述的方法，其中所述的抗雌激素非亲子宫性雌激素。
9.按照权利要求8所述的方法，其中所述的非亲子宫性抗雌激素选自雷洛昔芬、屈洛昔芬、艾多昔芬、萘福昔芬、托瑞米芬、TAT-59、左美洛昔芬、LY-353381、CP-336156、MDL-103323、EM-800和ICI-182，780。
10.按照权利要求8所述的方法，其中所述的非亲子宫性抗雌激素是具有下面结构的式I或II的化合物 其中R1是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素或1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基；R2是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基、氰基、1-6个碳原子的烷基，或三氟甲基，条件是当R1是H时，R2不是OH；R3和R4分别独立地是、H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基或氰基，条件是，当R1是H时，R2不是OH。X是H、1-6个碳原子的烷基、氰基、硝基、三氟甲基或卤素；n是2或3；Y是饱和、部分饱和或不饱和5-7员含氮杂环，其可以选择性地含有选自基团-O-、-NH-、其中烷基含有1-6个碳原子的N(烷基)、-N＝和S(O)m的第二杂原子；m是0-2；或其药物可接受盐。
11.按照权利要求10所述的方法，其中所述的抗雌激素是(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药物可接受盐。
12.按照权利要求10所述的方法，其中所述的抗雌激素是(1-[4-(2-氮杂环庚烷-1-基乙氧基)-苄基]-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚)或其药物可接受盐。
13.按照权利要求1所述的方法，其中所述的雷怕霉素是与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯，并且所述的抗雌激素是(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药学可接受盐。
14.按照权利要求1-13任一项的方法，其中所述的雌激素受体阳性癌是乳腺或卵巢的雌激素受体阳性癌。
15.一种在需要其的哺乳动物中治疗或抑制乳腺的雌激素受体阳性癌的方法，其包括给该哺乳动物提供有效量的与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯和(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药学可接受盐的组合。
16.一种在需要其的哺乳动物中治疗或抑制卵巢的雌激素受体阳性癌的方法，其包括给该哺乳动物提供有效量的与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯和(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药学可接受盐的组合。
17.雷怕霉素和抗雌激素的组合在制备治疗或抑制哺乳动物中的雌激素受体阳性癌的药物中的应用。
18.按照权利要求17的应用，其中所述的雷怕霉素和抗雌激素如权利要求1-13和15和16任一项定义。
19.按照权利要求17或权利要求18的应用，其中所述的雌激素受体阳性癌是乳腺或卵巢的雌激素受体阳性癌。
20.一种含有雷怕霉素和抗雌激素的作为组合制剂同时、分开或顺序给药用于治疗或抑制哺乳动物中雌激素受体阳性癌的产品。
21.按照权利要求20所述的产品，其中所述的雷怕霉素是雷怕霉素。
22.按照权利要求20所述的产品，其中雷怕霉素是所述的雷怕霉素是雷怕霉素的酯、醚、肟、腙或羟胺。
23.按照权利要求22所述的产品，其中所述的雷怕霉素是雷怕霉素的42-酯或42-醚。
24.按照权利要求23所述的产品，其中所述的雷怕霉素是与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯。
25.按照权利要求23所述的产品，其中所述的雷怕霉素42-O-(2-羟基)乙基雷怕霉素。
26.按照权利要求20-25任一项的产品，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、4-羟基他莫昔芬或氯米芬。
27.按照权利要求20-25任一项所述的产品，其中所述的抗雌激素非亲子宫性雌激素。
28.按照权利要求27所述的产品，其中所述的非亲子宫性抗雌激素选自雷洛昔芬、屈洛昔芬、艾多昔芬、萘福昔芬、托瑞米芬、TAT-59、左美洛昔芬、LY-353381、CP-336156、MDL-103323、EM-800和ICI-182，780。
29.按照权利要求27所述的产品，其中所述的非亲子宫性抗雌激素是具有下面结构的式I或II的化合物 其中R1是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素或1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基；R2是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基、氰基、1-6个碳原子的烷基，或三氟甲基，条件是当R1是H时，R2不是OH；R3和R4分别独立地是、H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基或氰基，条件是，当R1是H时，R2不是OH；X是H、1-6个碳原子的烷基、氰基、硝基、三氟甲基或卤素；n是2或3；Y是饱和、部分饱和或不饱和5-7员含氮杂环，其可以选择性地含有选自基团-O-、-NH-、其中烷基含有1-6个碳原子的N(烷基)、-N＝和S(O)m的第二杂原子；m是0-2；或其药物可接受盐。
30.按照权利要求29所述的产品，其中所述的抗雌激素是(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药物可接受盐。
31.按照权利要求29所述的方法，其中所述的抗雌激素是(1-[4-(2-氮杂环庚烷-1-基乙氧基)-苄基]-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚)或其药物可接受盐。
32.按照权利要求20所述的方法，其中所述的雷怕霉素是与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯，并且所述的抗雌激素是(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药学可接受盐或1-[4-(2-氮杂环庚烷-1-基-乙氧基)-苄基]-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚或其药用盐。
33.一种治疗或抑制哺乳动物中雌激素受体阳性癌的药物组合物，该组合物含有雷怕霉素和雌激素或其药学可接受盐以及药学可接受载体。
全文摘要
本发明提供一种在需要其的哺乳动物中治疗或抑制雌激素受体阳性癌的方法，其包括给该哺乳动物提供有效量的雷怕霉素和抗雌激素的组合。
文档编号A61K31/135GK1446106SQ01813753
公开日2003年10月1日 申请日期2001年8月6日 优先权日2000年8月11日
发明者张易贤, T·M·萨德勒, P·弗罗斯特, L·M·格林伯格 申请人:惠氏公司
背景技术：
本发明涉及雷怕霉素和抗雌激素的组合在治疗或抑制雌激素受体阳性癌，特别是乳腺和卵巢癌中的应用。
乳腺癌是全球导致女性癌死亡的主要原因。某些人乳腺癌细胞的生长是在激素控制下。许多证据提示，雌激素促使乳腺癌恶化。雌激素在乳腺中的生物学作用通过雌激素受体(ER)介导，其是配体可诱导转录因子的一个大家族的一员。在与其受体结合后，配体引发受体上热激蛋白的解离、受体二聚作用、磷酸化以及靶基因的DNA效应元件结合。结合DNA之后，ER与可有可无的其它转录因子和辅激活物/辅阻遏物有差异地调控靶基因的转录。雌激素作用可以被拮抗剂(抗雌激素)部分阻断，所述拮抗剂通过ER与雌激素竞争但无法激活促进细胞生长的基因的方式起作用。抗雌激素他莫昔芬(Tam)在基于雌激素对肿瘤生长刺激作用的反应性的乳腺癌的治疗和控制中业已成为一线疗法。不幸的是，Tam疗法的有效性受到它在其它组织如子宫中的激动活性和副作用如热潮红的阻碍。
需要开发新的抗雌激素或开发抗雌激素与其它治疗剂的最佳组合来获得更好的功效并减轻副作用。
雷怕霉素是一种由吸水链霉菌产生的大环三烯抗生素，还发现其在体外和体内均具有抗真菌活性，特别是抗白色念珠菌活性[C.Vezina等，J.Antibiot.28，721(1975)；S.N.Sehgal等，J.Antibiot.28，727(1975)；H.A.Baker等，J.Antibiot.31，539(1978)；美国专利3,929,992；和美国专利3,993,749]。此外，已经证明雷怕霉素单独(美国专利4,885,171)或与溶链菌制剂联合(美国专利4,401,653)具有抗肿瘤活性。
雷怕霉素酯，与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯[公开在美国专利5,362,718]，也称作CCI-779，业已证明对多种肿瘤细胞系、在体内动物肿瘤模型和I期临床试验中具有抗肿瘤活性[Gibbons，J.，Proc.Am.Assoc.Can.Res.40301(1999)；Geoerger，B.，Proc.Am.Assoc.Can.Res.40603(1999)；Alexandre，J.，Proc.Am.Assoc.Can.Res.40613(1999)；和Alexandre，J.，Clin.Cancer.Res.5(November Supp.)Abstr.7(1999)]。
据报导称非亲子宫性抗雌激素具有抗肿瘤活性[参见，美国专利5,998,402]。2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚，也称作ERA-923，已经被开发用于雌激素受体阳性转移性乳腺癌。[Gandhi，T.，2000 ASCO Program/Proceedings，Abstract 875，(May 2000)]。
发明内容
本发明提供一种在需要其的哺乳动物中治疗或抑制T雌激素受体阳性癌的方法，其包括给该哺乳动物提供有效量的雷怕霉素和抗雌激素的组合。
本发明还提供一种含有雷怕霉素和抗雌激素的作为联合制剂同时、分开或顺序给药用于治疗或抑制哺乳动物中雌激素受体阳性癌的产品。
如上定义，术语″雷怕霉素″定义一类含有基本雷怕霉素母核(如下所示)的免疫抑制化合物。本发明的雷怕霉素包括可以在化学上或生物学上修饰成为雷怕霉素母核的衍生物、同时仍然保留免疫抑制特性的化合物。所以，术语″雷怕霉素″包括雷怕霉素的酯、醚、肟、腙和羟胺化合物，以及其中雷怕霉素母核上的官能团被修饰(例如通过还原作用或氧化作用)的雷怕霉素。术语″雷怕霉素″还包括雷怕霉素类的药学可接受盐，由于含有酸性或碱性部分其能够形成此类盐。
雷怕霉素优选的是，雷怕霉素的酯类或醚类是位于雷怕霉素母核的42-和/或31-位的羟基的酯类或醚类，位于27-位的羟基(27-酮还原之后)的酯类和醚类，并且所述的肟、腙和羟胺是雷怕霉素母核的42-位酮(42-羟基氧化之后)和27-酮。
优选的雷怕霉素的42-和/或31-酯和醚公开在下列专利中，它们在此引入作为参考烷基酯(美国专利4,316,885)；氨基烷基酯(美国专利4,650,803)；氟化酯(美国专利5,100,883)；酰胺酯(美国专利5,118,677)；氨基甲酸酯(美国专利5,118,678)；甲硅烷基醚(美国专利5,120,842)；氨基酯(美国专利5,130,307)；缩醛(美国专利5,51,413)；氨基二酯(美国专利5,162,333)；磺酸酯和硫酸酯(美国专利5,177,203)；酯(美国专利5,221,670)；烷氧基酯(美国专利5,233,036)；O-芳基、-烷基、-链烯基和-链炔基醚(美国专利5,258,389)；碳酸酯(美国专利5,260,300)；芳基羰基和烷氧基羰基氨基甲酸酯(美国专利5,262,423)；氨基甲酸酯(美国专利5,302,584)；羟基酯(美国专利5,362,718)；受阻酯(美国专利5,385,908)；杂环酯(美国专利5,385,909)；偕二取代酯(美国专利5,385,910)；氨基链烷酸酯(美国专利5,389,639)；磷酰基氨基甲酸酯(美国专利5,391,730)；氨基甲酸酯(美国专利5,411,967)；氨基甲酸酯(美国专利5,434,260)；脒基氨基甲酸酯(美国专利5,463,048)；氨基甲酸酯(美国专利5,480,988)；氨基甲酸酯(美国专利5,480,989)；氨基甲酸酯(美国专利5,489,680)；受阻N-氧化物酯(美国专利5,491,231)；生物素酯(美国专利5,504,091)；O-烷基醚(美国专利5,665,772)；和雷怕霉素的PEG酯(美国专利5,780,462)。这些酯和醚的制备公开在上述专利中。
所以雷怕霉素化合物的实例包括下式的化合物 其中RA和RB各自选自氢和上述美国专利任一篇中公开的成酯基团或成醚基团。
优选的雷怕霉素的27-酯和醚公开在美国专利5,256,790中，其在此引入作为参考。这些酯和醚的制备公开在上述专利中。
优选的雷怕霉素的肟、腙和羟胺公开在美国专利5,373,014、5,378,836、5,023,264和5,563,145，其在此引入作为参考。这些肟、腙和羟胺的制备公开在上述专利中。42-氧代雷怕霉素的制备公开在5,023,263中，其在此引入作为参考。
特别优选的雷怕霉素包括雷怕霉素[美国专利3,929,992]、与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯[美国专利5,362,718 ]，和42-O-(2-羟基)乙基雷怕霉素[美国专利5,665,772]。
按照本发明使用的术语“抗雌激素”定义为是当联合给药时在试验体系中减弱或阻断雌激素激动剂如17β-雌二醇的作用的化合物。术语“非亲子宫”是指那些典型地不产生显著临床子宫内膜增生作用的抗雌激素。
优选的抗雌激素包括例如苯并[9，10]菲抗雌激素，其包括他莫昔芬和4-羟基他莫昔芬；氯米芬；和非亲子宫性抗雌激素，例如下式I和II所示的那些、雷洛昔芬、屈洛昔芬、艾多昔芬、萘福昔芬、托瑞米芬、TAT-59、左美洛昔芬(levomeloxifene)、LY-353381、CP-336156、MDL-103323、EM-800和ICI-182，780。
优选的非亲子宫性抗雌激素包括具有I或II结构式的化合物 或 其中R1是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基(carboalkoxy)、1-12个碳原子的烷氧基、卤素或1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基；R2是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基、氰基、1-6个碳原子的烷基，或三氟甲基，条件是当R1是H时，R2不是OH。
R3和R4分别独立地是、H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基或氰基，条件是，当R1是H时，R2不是OH。
X是H、1-6个碳原子的烷基、氰基、硝基、三氟甲基或卤素；n是2或3；Y是饱和、部分饱和或不饱和5-7员含氮杂环，其可以选择性地含有选自基团-O-、-NH-、1-6个碳原子的烷基胺、-N＝和S(O)m的第二杂原子；m是0-2；或其药物可接受盐。
优选的化合物是那些其中R1选自H、OH或其C1-C12酯或烷基醚、卤素；R2、R3、R4、R5和R6独立地选自H、OH或其C1-C12酯或烷基醚、卤素、氰基、C1-C6烷基或三卤代甲基，优选三氟甲基，条件是当R1是H时，R2不是OH；X选自H、C1-C6烷基、氰基、硝基、三氟甲基、卤素； 或 和Y是式I和II的抗雌激素和这些化合物的药学可接受盐的制备公开在美国专利5,998,402，其在此引入作为参考。
特别优选的式I和II的抗雌激素如下表所述。 表1 表1(续) 表2 表2(续) 表2(续) 表3 表3(续) 表4
特别优选的式I或II的抗雌激素是上表中实施例31(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)和32(1-[4-(2-氮杂环庚烷-1-基-乙氧基)-苄基]2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚)的那些。
当适用时，在雷怕霉素或抗雌激素含有适当碱性部分时可以从有机和无机酸生成药学可接受盐，例如乙酸、丙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、苹果酸、邻苯二甲酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟脑磺酸和和类似的已知可接受助剂。当雷怕霉素或抗雌激素含有适当酸性不时，盐也可以从有机和无机碱生成，例如碱金属盐(例如钠、锂或钾)、碱土金属盐、铵盐、含有1-6个碳原子的烷基铵盐或各烷基含有1-6个碳原子的二烷基铵盐，和各烷基含有1-6个碳原子的三烷基铵盐。
根据本发明使用的术语″提供″涉及提供本发明所概括的化合物或物质，是指直接施用所述的化合物或物质，或者施用在体内生成等效量的所述化合物或物质的前药、衍生物或类似物。
本发明的雷怕霉素类和抗雌激素类的组合在治疗或抑制雌激素受体阳性癌中的性能在三个标准药理学试验方法中证实，它们测定雷怕霉素抗雌激素组合抑制MCF-7乳腺癌细胞和BG-1卵巢癌细胞的生长的性能，这些癌细胞是代表性的雌激素受体阳性癌。在这些试验方法中，与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基-丙酸的雷怕霉素42-酯用作代表性的雷怕霉素，并且2-(4-羟基-苯基)-3甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚、雷洛昔芬和4-羟基他莫昔芬用作代表性的抗雌激素类物质。下面简述所采用的方法，和得到的结果。
将MCF-7人乳腺癌细胞在37℃下、5％CO2和95％空气的加湿气氛中保存在IMEM培养基内，该培养基补充有10％胎牛血清。BG-1人卵巢癌细胞在37℃下、5％CO2和95％空气的加湿气氛中保存在IMEM培养基内，该培养基补充有10％胎牛血清、2μg/ml胰岛素和1％非必需氨基酸。试验前一天，细胞以2,500细胞/孔的细胞密度铺板在96-孔平板中补充有10％胎牛血清的IMEM培养基内。次日，用不同浓度的抗雌激素和3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯(在下表中称作CCI-779)处理。5或6天后，监测细胞生长。将MTT溶液(20μl)(0.5mg/ml)加入到各孔内且继续温育细胞4小时。此后取出该溶液并加入150μl的DMSO。在540nM下用自动平板读数器读取与细胞数目相对应的深蓝色的强度。
下列表概括了所得的结果；2-(4-羟基-苯基)-3甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚在下表中被称作ERA-923。
表A.CCI-779和ERA-923对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表B.CCI-779和4-羟基他莫昔芬对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表C.CCI-779和雷洛昔芬对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表D.ERA-923(单独)对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表E.CCI-779(单独)对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表F.4-羟基他莫昔芬(单独)对MCF-7细胞(百分抑制率)的影响 表G.CCI-779和ERA-923对BG-1细胞(百分抑制率)的影响 表H.CCI-779和4-羟基他莫昔芬对BG-1细胞(百分抑制率)的影响 表I.CCI-779和雷洛昔芬对BG-1细胞(百分抑制率)的影响
用3维绘图共享软件MacSynergy II(由Prichard及其同事开发(Prichard和Shipman，19901992))进行分析来测定雷怕霉素加抗雌激素的组合是否协同抑制雌激素受体阳性癌。简单而言，理论加和相互作用是由各药物的剂量-反应曲线、基于Bliss独立模型计算的。随后从试验表面减去计算出的加和表面得到表示％抑制率的协同表面超过计算的加和值-协同指数。任何在0％平面上方的峰都表示协同作用。同样地，任何在0％平面下方的峰是拮抗的象征。下表中概括了3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯加抗雌激素的组合的结果，表示在左栏内。
在这些标准药理学试验方法中获得的结果证明，雷怕霉素和抗雌激素的组合协同抑制雌激素受体阳性癌的生长。例如，结果证明用ERA-923和CCI-779的组合处理MCF-7乳腺癌细胞，可以产生明确的生长抑制的协同增强作用。ERA-923的生长抑制作用在非抑制浓度CCI-779存在下通过IC50估计提高了约10倍，而CCI-779的生长抑制作用在非抑制浓度的ERA-923存在下提高了约40倍。如表A所示，当低浓度的ERA-923(0.25nM-1nM)与高浓度的CCI-779(300-400nM)组合时协同作用更加显著。观察到的最高程度的协同作用比加和值高约60％。
在使用抗雌激素雷洛昔芬和4-羟基他莫昔芬与CCI-779组合时也证实了类似结果。雷洛昔芬和4-羟基他莫昔芬两者均证明在CCI-779的存在下的协同抑制作用。4-羟基他莫昔芬与CCI-779组合对MCF-7细胞的协同抑制作用具有5-20nM(4-羟基他莫昔芬)和5-400nM(CCI779)的最佳浓度范围(表B)。雷洛昔芬和CCI-779的组合在任一药物0.25-5.0nM雷洛昔芬和5.0-400nM CCI-779(表C)的宽范围浓度内也具有协同作用。
在雌激素依赖性BG-1卵巢癌细胞中当将除4-羟基他莫昔芬之外的抗雌激素与雷怕霉素，例如CCI-779组合时也证明产生协同抑制作用(表G、H、I)。4-羟基他莫昔芬和CCI-779的失败证明在BG-1细胞中的协同抑制作用可能与4-羟基他莫昔芬在卵巢中的部分激动活性有关系。
在第三种标准药理学试验方法中，植入MCF-7肿瘤的小鼠用ERA-923和CCI-779的组合处理。下面简单概括所用的方法和所得的结果。将ERA-923溶解在1％吐温80和0.9％NaCl注射剂USP中。用10.0ml玻璃瓶将药物等分为日剂量并在-20℃下冷冻直至需要。CCI-779是用含5％ETOH、4.9％Phosal和0.1％吐温80的灭菌水新制。在肿瘤移植后当天开始口服0.2ml的各药物。试验期间每天给予ERA923并且在第一个10天内隔天给予CCI-779。对照载体采用与药物相同的给药方案。MCF7细胞在含5％胎牛血清的IMEM中培养2-20个不同传代。胰蛋白酶消化后将肿瘤重新悬浮在含2％的IMEM中与Matrigel比例为1∶1。用带有233/4规针头的1.0ml结核菌素注射器将10百万细胞皮下注射到各小鼠的乳房组织中。选用体重20.0-23.0g的5-6周龄雌性卵巢切除无胸腺nu/nu小鼠(Charles River LabsWilmington，MA)。将动物5只圈养在笼中Microisolator Open RackSystem(Lab ProductsMaywood，NJ)内。各小鼠接受17-雌二醇丸(0.72mg/丸-60天解除)。在肿瘤注射之前1-2周用10规trochar将药丸注射到耳和肩膀之间颈部的外侧。对照组是15只小鼠/载体，而药物组是10只小鼠/药物。用solar卡钳(Cole-Parmer InstumentsVernon Hills，IL)每周测量肿瘤并从肿瘤直径按照下式估计肿瘤重量
肿瘤重量(mg)＝重量长度(mm)×重量宽度(mm)2/2在肿瘤注射后第36天通过吸入CO2使小鼠安乐死。下面概括了得到的结果。给携带MCF-7肿瘤的裸鼠施用ERA-923、CCI-779或两种药物的组合。在这些条件下，ERA-923或CCI-779具有部分效应(约35％生长抑制率；生长抑制率＝试验值-200(基线)/对照值-200)。然而，药物的组合可以抑制约85％的肿瘤生长。没有观察到这种药物组合具有毒性的征兆。结果该在下表中。
采用CCI-779和ERA-923的联合治疗对裸鼠中MCF-7如下癌生长的作用1
1.卵巢切除的裸鼠在移植之前1周给予0.72mg60天的缓释17β-雌二醇丸，移植是将1×107MCF-7肿瘤细胞移植到接近动物的乳腺附近。肿瘤移植后第一天，按照指示口服药物治疗(PO)。在上述方法规定的天内测量肿瘤大小(参见Discafani等，1999.BiochemPharmacol.57917-925)。
2.对照处理是用CCI-779的载体(phosal)、ERA-923的载体(吐温)或两种药物的载体处理的动物的联合效果。各对照组的平均肿瘤大小彼此之间没有明显差异且因此合并。数值是平均值±标准偏差。利用数据的log转化通过ANOVA进行统计学分析；进行成对比较。一个星号是指与对照组相比显著性差异为p＜0.05。双星号(*/*)或-/*表示与单独CCI-779或ERA-923成对比较中有显著性差异，或者没有显著性差异。在CCI-779加ERA-923组中的值在统计学上在p＜0.001水平不同于对照。
3.存在于phosal的CCI-779从第1天开始至第9天结束隔天经口服给药。
4.含在吐温中的ERA-923从第1天开始经口服每天给药。
5.药物以两个分开剂量给药。给药是在给予一种药物的组中在规定天数进行。
基于在上述标准药理学试验方法中获得的结果，雷怕霉素和抗雌激素的组合可以有效治疗或抑制雌激素受体阳性癌，特别是雌激素受体阳性乳腺或卵巢癌。
应理解有效剂量的雷怕霉素和抗雌激素的组合可以根据所用具体化合物、给药方式、状况和被治疗病症的严重性以及与被治疗固体有关的多种身体因素而变化。建议CCI-779(作为代表性雷怕霉素)和ERA-923(作为代表性抗雌激素)应该每周以5-500mg CCI-779(优选剂量50-200mg)和2-500mg ERA-923(优选剂量25-100mg)的推荐剂量给药。其它雷怕霉素类和抗雌激素类的起始剂量可以通过与CCI-779和ERA-923比较相对效价来获得。
如本发明使用，组合给药方案可以同时给予，或者可以以交错方案给药，在化疗过程中雷怕霉素在与抗雌激素不同的时间给药。在两种药物的给药之间这种时间差可以是数分钟、数小时、数天、数周或更长时间。所以，术语“组合”不一定是指同时或单一给药，但各组分是在一个预定治疗期内给药，例如，在CCI-779和ERA-923的组合中，首先CCI-779可以非肠道给药，并且ERA-923经口服给药。所述的组合物可以每天、每周或每月给药1次。对于化疗方案的典型地是，化疗过程可能在数周后反复进行，并且可以按照两种药物给药的相同时间框，或可以基于患者反应来调整。
所示剂量可以以任何使活性化合物定向进入接受者血液的方式给药，包括经口服、经植入、非肠道(包括静脉内、腹膜内和皮下注射)，经直肠、经鼻内、经阴道内和经皮给药。鉴于这样的目的，经皮给药理解为包括透过机体表面和机体通道的内层(包括上皮和粘膜组织)的所有给药。这样的给药可以利用本发明的化合物或其药学可接受盐以乳液、霜剂、泡沫剂、贴剂、混悬剂、溶液和栓剂(直肠和阴道)进行。
含有本发明活性化合物的口服制剂可以含有包括常用口服剂型，包括片剂、胶囊、经颊剂型、含片、锭剂和口服液、混悬剂和溶液。胶囊可以含有所述活性化合物与多相填充剂和/或稀释剂的混合物，例如药学可接受淀粉(如玉米、土豆或木薯淀粉)、糖、人造甜味剂、粉状纤维素，例如结晶和微晶纤维素、面粉、明胶、树胶等。适用的片剂可以通过常规压缩、湿法制粒和干粉制粒方法并利用药学可接受稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、表面改性剂(包括表面活性剂)、助悬剂或稳定剂来制备，包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、十二烷基硫酸钠、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、藻酸、阿拉伯胶、黄原胶、柠檬酸钠、复合硅酸盐、碳酸钙、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、高岭土、甘露糖醇、氯化钠、滑石、干淀粉和糖粉。优选的表面改性剂包括非离子和阴离子表面改性剂。表面改性剂的代表性实例包括，但不限于，泊洛沙姆188、氯苄烷铵、硬脂酸钙、鲸蜡醇硬脂醇混合物、鲸蜡聚乙二醇乳化蜡、脱水山梨糖醇酯、胶体二氧化硅、磷酸盐、十二烷基硫酸钠、硅酸镁铝和三乙醇胺。更加优选泊洛沙姆188作为表面改性剂。本发明的口服制剂可以采用标准延迟或定时湿法剂型以改变活性化合物的吸收作用。雷怕霉素的优选口服剂型公开在美国专利5,559,121；5,536,729；5,989,591；和5,985,325中，其在此引入作为参考。
在某些情况中，可能希望所述的化合物以气雾剂的形式直接给药至呼吸道。
本发明的化合物也可以经非肠道或腹膜内给药。所述活性混合物作为游离碱或药学可接受盐的溶液和混悬剂可以在水中制备与适当表面活性剂例如羟丙基纤维素混合。还可以在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散体。在葡糖储存和使用的条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。
所述注射使用的药剂包括灭菌含水溶液或分散体和用于灭菌可注射溶液和分散体的即时制剂的无菌粉末。在所有情况中，剂型必须经过灭菌并且必须流化达到存在易注射性能的成对。它在制造和储存的条件下必须稳定且必须经防腐处理以对抗微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或分散体介质含有，例如，水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)，其适当混合物，和植物油。优选的施用雷怕霉素的制剂公开在美国专利5,530,006；5,516,770；和5,616,588，其在此引入作为参考。
栓剂可以由传统材料制备，包括可可脂，加入或不加入蜡来改变栓剂的熔点，和甘油。也可以使用水溶性栓剂基质，例如不同分子量的聚乙二醇。
权利要求
1.一种治疗或抑制哺乳动物中雌激素受体阳性癌的方法，其包括给该哺乳动物提供有效量的雷怕霉素和抗雌激素的组合。
2.按照权利要求1所述的方法，其中所述的雷怕霉素是雷怕霉素。
3.按照权利要求1所述的方法，其中所述的雷怕霉素是雷怕霉素的酯、醚、肟、腙或羟胺。
4.按照权利要求3所述的方法，其中所述的雷怕霉素是雷怕霉素的42-酯或42-醚。
5.按照权利要求4所述的方法，其中所述的雷怕霉素是与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯。
6.按照权利要求4所述的方法，其中所述的雷怕霉素42-O-(2-羟基)乙基雷怕霉素。
7.按照权利要求1-6任一项的方法，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、4-羟基他莫昔芬或氯米芬。
8.按照权利要求1-6任一项所述的方法，其中所述的抗雌激素非亲子宫性雌激素。
9.按照权利要求8所述的方法，其中所述的非亲子宫性抗雌激素选自雷洛昔芬、屈洛昔芬、艾多昔芬、萘福昔芬、托瑞米芬、TAT-59、左美洛昔芬、LY-353381、CP-336156、MDL-103323、EM-800和ICI-182，780。
10.按照权利要求8所述的方法，其中所述的非亲子宫性抗雌激素是具有下面结构的式I或II的化合物 其中R1是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素或1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基；R2是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基、氰基、1-6个碳原子的烷基，或三氟甲基，条件是当R1是H时，R2不是OH；R3和R4分别独立地是、H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基或氰基，条件是，当R1是H时，R2不是OH。X是H、1-6个碳原子的烷基、氰基、硝基、三氟甲基或卤素；n是2或3；Y是饱和、部分饱和或不饱和5-7员含氮杂环，其可以选择性地含有选自基团-O-、-NH-、其中烷基含有1-6个碳原子的N(烷基)、-N＝和S(O)m的第二杂原子；m是0-2；或其药物可接受盐。
11.按照权利要求10所述的方法，其中所述的抗雌激素是(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药物可接受盐。
12.按照权利要求10所述的方法，其中所述的抗雌激素是(1-[4-(2-氮杂环庚烷-1-基乙氧基)-苄基]-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚)或其药物可接受盐。
13.按照权利要求1所述的方法，其中所述的雷怕霉素是与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯，并且所述的抗雌激素是(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药学可接受盐。
14.按照权利要求1-13任一项的方法，其中所述的雌激素受体阳性癌是乳腺或卵巢的雌激素受体阳性癌。
15.一种在需要其的哺乳动物中治疗或抑制乳腺的雌激素受体阳性癌的方法，其包括给该哺乳动物提供有效量的与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯和(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药学可接受盐的组合。
16.一种在需要其的哺乳动物中治疗或抑制卵巢的雌激素受体阳性癌的方法，其包括给该哺乳动物提供有效量的与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯和(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药学可接受盐的组合。
17.雷怕霉素和抗雌激素的组合在制备治疗或抑制哺乳动物中的雌激素受体阳性癌的药物中的应用。
18.按照权利要求17的应用，其中所述的雷怕霉素和抗雌激素如权利要求1-13和15和16任一项定义。
19.按照权利要求17或权利要求18的应用，其中所述的雌激素受体阳性癌是乳腺或卵巢的雌激素受体阳性癌。
20.一种含有雷怕霉素和抗雌激素的作为组合制剂同时、分开或顺序给药用于治疗或抑制哺乳动物中雌激素受体阳性癌的产品。
21.按照权利要求20所述的产品，其中所述的雷怕霉素是雷怕霉素。
22.按照权利要求20所述的产品，其中雷怕霉素是所述的雷怕霉素是雷怕霉素的酯、醚、肟、腙或羟胺。
23.按照权利要求22所述的产品，其中所述的雷怕霉素是雷怕霉素的42-酯或42-醚。
24.按照权利要求23所述的产品，其中所述的雷怕霉素是与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯。
25.按照权利要求23所述的产品，其中所述的雷怕霉素42-O-(2-羟基)乙基雷怕霉素。
26.按照权利要求20-25任一项的产品，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、4-羟基他莫昔芬或氯米芬。
27.按照权利要求20-25任一项所述的产品，其中所述的抗雌激素非亲子宫性雌激素。
28.按照权利要求27所述的产品，其中所述的非亲子宫性抗雌激素选自雷洛昔芬、屈洛昔芬、艾多昔芬、萘福昔芬、托瑞米芬、TAT-59、左美洛昔芬、LY-353381、CP-336156、MDL-103323、EM-800和ICI-182，780。
29.按照权利要求27所述的产品，其中所述的非亲子宫性抗雌激素是具有下面结构的式I或II的化合物 其中R1是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素或1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基；R2是H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基、氰基、1-6个碳原子的烷基，或三氟甲基，条件是当R1是H时，R2不是OH；R3和R4分别独立地是、H、OH、2-12个碳原子的烷酰氧基、1-12个碳原子的烷氧基、卤素、1-12个碳原子的一-或多-氟烷氧基或氰基，条件是，当R1是H时，R2不是OH；X是H、1-6个碳原子的烷基、氰基、硝基、三氟甲基或卤素；n是2或3；Y是饱和、部分饱和或不饱和5-7员含氮杂环，其可以选择性地含有选自基团-O-、-NH-、其中烷基含有1-6个碳原子的N(烷基)、-N＝和S(O)m的第二杂原子；m是0-2；或其药物可接受盐。
30.按照权利要求29所述的产品，其中所述的抗雌激素是(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药物可接受盐。
31.按照权利要求29所述的方法，其中所述的抗雌激素是(1-[4-(2-氮杂环庚烷-1-基乙氧基)-苄基]-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚)或其药物可接受盐。
32.按照权利要求20所述的方法，其中所述的雷怕霉素是与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷怕霉素42-酯，并且所述的抗雌激素是(2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基-1H-吲哚-5-酚)或其药学可接受盐或1-[4-(2-氮杂环庚烷-1-基-乙氧基)-苄基]-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚或其药用盐。
33.一种治疗或抑制哺乳动物中雌激素受体阳性癌的药物组合物，该组合物含有雷怕霉素和雌激素或其药学可接受盐以及药学可接受载体。
全文摘要
本发明提供一种在需要其的哺乳动物中治疗或抑制雌激素受体阳性癌的方法，其包括给该哺乳动物提供有效量的雷怕霉素和抗雌激素的组合。
文档编号A61K31/135GK1446106SQ01813753
公开日2003年10月1日 申请日期2001年8月6日 优先权日2000年8月11日
发明者张易贤, T·M·萨德勒, P·弗罗斯特, L·M·格林伯格 申请人:惠氏公司
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