一种含大青叶的中药组合物及其应用的制作方法

专利名称：：一种含大青叶的中药组合物及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种含大青叶的中药组合物，及其在制备防治流感病毒的药物中的应用，以及利用该中药组合物制备的防治流感的喷雾剂。(二)
背景技术：
''流感是严重危害人类健康的呼吸道传染病，由于流感病毒容易变异形成新抹型，给疫苗预防带来很大的困难，因而，流感是至今尚无法完全加以控制的一种非常重要的病毒性传染病，同时也是国际上第一个实现全球监测的传染病。目前西医尚无针对性有效方法和药物。应用中草药治疗流感有数千年的历史，对流感的防治积累了丰富的理论和实践经验。如在抗击SARS的中，中医中药显示了其强大的作用。SARS属于中医"温病"的范畴。病因为感受疫毒时邪，病位在肺，病邪从口鼻而入。中药具有抑制病毒复制、阻止病毒致细胞病变、调节免疫功能、改善肺循环、镇痛抗炎等综合功效，可使流感疾愈。因此，中药在防治流感方面具有独特的优势和广阔的发展前景。但中医需要辨证论治才能处方，应用起来不是很方便，也难以满足大规模推广的要求。因而，迫切需要经多年临床应用证实在防治和治疗流感方面具有确切疗效的中药方剂。(三)
发明内容本发明即是为了提供一种疗效确切、无明显毒副作用、药源丰富、价格低廉的能在体内外抑制流感病毒的含大青叶的防感药物组合物，以及这种中药组合物在制备防治流感药物中的应用。本发明采用的技术方案是4一种含大青叶的中药组合物(防感药物组合物)，由质量配比如下的组分组成(均以干重计)大青叶10~20份蒲公英1020份野菊花102(H分制苍术5~20份.薄荷110份。其中大青叶味苦，性寒，归心、胃经，具有清热解毒、凉血消斑之功效，为本方之君药。现代药理研究表明大青叶对曱型流感病毒、乙型脑炎病毒、腮腺炎病毒、流感病毒有抑制感染并有抑制增殖作用，同时具有才是高机体免疫力的作用。蒲公英味苦、甘，性寒，归肝、胃经，具有清热解毒、消痈散结、利湿通淋的功效。现代药梦研究表明蒲公英具有广谱抑菌作用。野菊花味苦、辛，性微寒，归肺、肝、心经，具有清热解毒之功效。现代药理研究表明野菊花具有抗病毒、抗炎作用。大青叶、蒲公英、野菊花三味药均有清热解毒之功效,对引起流感的时疫热毒具有良好的治疗作用。从现代研究角度来说，此三味药不仅通过抑制病毒直接治疗流感，且能通过调节机体免疫力达到间接防治流感的疗效。苍术味辛、苦,性温，归脾、胃经，具有燥湿健脾、祛风除湿的功效。现代药理研究表明苍术具有抗菌、抗病毒及抗炎作用。流感多易兼夹湿浊之邪，故而本发明用苍术以除湿浊之邪。薄荷味辛，性凉，归肺、肝经，具有疏散风热、清利头目、利咽透瘆、疏肝解郁、辟秽气之功效。时疫热毒之邪首先犯表，薄荷长于疏散表邪，以截断病邪入里之通道。本发明配方合理，经多年临床应用，其在防治和治疗流感方面具有确切的疗效，是防治流感的理想药物。所述中药组合物优选的质量配比如下大青叶15份蒲公英15份野菊花15份制.苍术10份薄荷5份。本发明还涉及中药组合物在制备防治流感病毒感染的药物中的应用。所述药物可添加常规辅料，制成下列之一的剂型①汤剂②胶嚢剂③颗粒剂粉剂(D片剂(D口服液⑦喷雾剂。本发明还涉及一种本发明中药组合物制备的喷雾剂，所述的喷雾剂取组方量的组分，主要用.于防治流感病毒的喷雾剂(防感喷雾剂)，斷述喷雾剂由如下方法制备得到(1)取1020质量份的大青叶、1020质量份野菊花、10~20质量份蒲公英，混合后加入质量为混合物质量510倍的水，煎煮1~3次，每次0.52小时，收集煎液，冷却，膜分离(常失见膜分离装置，截留分子量2070万)，浓缩，得药液；(2)取520质量份的制苍术和510质量份的薄荷，粉碎，提取混合挥发油；通常以挥发油提取器挺取。(3)将步骤(2)所得混合挥发油溶于步骤(1)所得药液中，加入适量增溶剂和生物黏附剂，喷雾干燥得喷鼻粉；将喷鼻粉加入适量无水乙二醇和丙二醇体积比5~10:1的混合液(添加量为前述挥发油和药液总体积的1.0~5.0%)和蒸馏水，灌装，得喷6雾剂；所述的增溶剂为常规用于喷雾剂制备的增溶剂，本发明中优选为无水乙二醇和丙二醇的混合液(体积比5~10:1)或吐温-80，添加量为挥发油和药液总体积的1.0~5.0%;所述的生物恭附剂为常规用于制备喷雾剂的生物粘附剂，本发明中优选为Poloxmer(泊洛沙姆)或壳聚糖，添加量为挥发油和药液总体积的15.0-25.0%。本发明所述含大青叶的中药组合物的有益效果主要体现在(1)本发明中药组合物配方合理，具有清热解毒的作用，能有效祛除时疫热毒；(2)本发明提供的防感药物组合物成本低廉，药源丰富；(3)在体外对曱型流感病毒株有一定的抑制作用；(4)可有效抑制流感病毒感染所致肺炎的发生、发展。具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此实施例1:防感喷雾剂的制备1、处方大青叶150g蒲公英150g野菊花150g制苍术100g薄荷50g2、水溶性有效成分的提取工艺实验以大青叶、野菊花、蒲公英混合加水煎煮时的加水量、煎煮时间、煎煮次数为三因素，每个因素设三个水平，用HPLC法测量水煎液中靛玉7红含量，以靛玉红标准品为对照标准。选取用L9(34)正交设计试-睑，见表1。表l:水提^^因素水平表水平因素A[溶剂量(倍)]B[煎煮次数]C[煎煮时间，h]1104328236.21色谱条件与系统适应性试验以C18(250mmx4.6mm,5pm)为填充剂；曱醇-0.1%磷酸(72:28)为流动相，流速lml/min;柱温28。C,检测波长为290nm。实验结果以靛玉红含量指标，对影响提取的因素进行考察。测定所需条件较严格，经方法学考察，该测定方法准确、可靠。结论实马^i殳计三因素中，煎提次数的影响有显著意义。大青叶、野菊花、蒲公英的最佳提取工艺为煎煮3次，加8倍质量的水，每次煎煮1小时。收集煎液，冷却，用微型无机陶瓷膜分离设备(南京中医药大学中医研究院生产，膜孔径O.l0.5jam，截留分子量2070万，膜材质A1203,膜面积0.1m2)分别对大青叶、蒲公英、野菊花水煎液进行分离精制，浓缩至约80ml(相当大于5.6g/ml),备用。3、挥发油的提取制备工艺苍术、薄荷中的挥发油用挥发油提取器提取。具体方法为取苍术和薄荷饮片，拣净杂质，粉碎，过40目筛，备用。样品共150g，装入500ml圓底烧瓶中，加10-15倍质量的蒸馏水浸泡，按2005年版《中国药典》一部附录XD中的"水蒸汽蒸馏法"规定安装挥发油提取器，提取6小时。(保持微沸5.0小时，室温静置1.0小时，记录提取得的挥发油量。)收集混合挥发油，备用。84、喷雾剂的制备耳又混合挥发油，溶于80ml药液中，吐温-80增溶(2.0%，v/v);调节pH至4.9,加入生物黏附性辅料Poloxmer(20%,v/v)混匀，混合液用喷雾干燥法干燥。喷雾干燥工艺的研究实验设计用进口温度、出口温度，辅料加入量，液体相对密度为四因素，每个因素设三个水平进行L9(34)正交试-验，正交因素及水平见表2。以干燥粉的含水量为测定指标，确定最佳喷雾干燥的条件。'表2:喷雾干燥因素水平表水平.因素a(进口温度。C)b(出口温;i:c)c(辅料加入量)d(液体相对密忠11809020%1.0521708030%uo31607040%1.15实验结果以干燥i的含水量为测定指标，经方法学考察，该测定方法准确、可靠。结论实验设计四因素中，液体相对密度的影响有显著意义。最佳喷雾干燥工艺为液体相对密度UO,辅料加入量20%,出口温度170。C，进口温度70°C。收集制得的喷鼻4分，加入适量的附加剂[无水乙醇-丙二醇(无水乙醇、丙二醇体积比8:1)](2%,v/v)混匀，加蒸馏水至全量(500ml),制成每ml含生药1.2g的喷雾液，罐装于喷雾容器内(选用费弗公司专用鼻喷泵)，即得。'实施例2:含大青叶的防感药物组合物对流感病毒的体外作用研究1、材料与方法(l)毒抹的制备取PR8流感病毒林(A/PR/8/34，由浙江省疾病预防控制中心提供)，接种9~11龄SPF鸡胚尿嚢腔，48小时后收获，作血凝效价滴定，分装小管，置-80。C保存。取一管估文10倍梯度稀释，将各浓度病毒液分别接种适龄鸡胚每组5只，34匸赠育72h,取鸡胚尿嚢液滴定血凝(HA)效价，计算半数感染量(ID50)。(2)药物对鸡胚的毒性测定将防感喷雾剂(按照实施例1制备)调至0.12g生药/ml浓度IO(TC加热5min和达菲溶液(上海罗氏制药有限公司生产，批号J20050038)，分别连续作倍比稀释，各3个浓度，分别接种于鸡胚尿嚢腔，每胚0.20ml,每个浓度接种5个鸡胚；34。C孵育，连续观察鸡胚生长发育情况。以鸡胚可存活96h的最大浓度作为药物的最大无毒剂量。(3)鸡胚体外试验将稀释好的药物与病毒在试管中等量中和放入34。C温箱l.Oh后吸取0.2ml,接种于鸡胚尿嚢，每个处理组接种5个鸡胚，同时设病毒对照、阴性对照与鸡胚空白对照，接种后置34。C培养48小时，然后转至4。C水箱过夜，收取尿嚢液。对吸取的尿嚢液充分混匀后进行红细胞凝集(HA)试验。2、结果(1)病毒毒力测定经鸡胚尿嚢液滴定血凝(HA)效价，计算半数感染量ID50为10-5。(2)药物对鸡胚的毒性作用试验结果显示，防感喷雾剂和达菲溶液对鸡胚的最大无毒剂量分别为0.012g生药/胚和10mg/胚。(3)鸡胚体外试验表3:药物血凝与病毒混合作用后34°C1.Oh注入鸡胚后的HA滴定__防感喷雾剂_达菲病毒对照阴性对照■1:201:501:1000.5mg/ml-1:101:40---1:40-10-51:5121:10241:51210-1:801:80-1:512--_-80_:_1:1024_^_注:表内数字代表每个鸡胚的HA效价，(-)代表血凝阴性。由表4可知，该药实-睑组血凝效1介为1:10~1:80,而对照组血凝效价l:512-1:1024，是实4全组血凝效价6倍以上，表明该药对流感病毒抹在鸡胚体外有明显的抑制或杀灭作用。_表4:防感喷雾剂对流感病毒的抑制作用__^_数量感染数未感染数感染率/%防感喷雾剂1:20514201:50523401:10054180达菲对照5050病毒对照550100空白对照5050上述实验结果说明防感喷雾剂在体外对曱型流感病毒抹有一定的抑制作用，呈一定的量效关系，对鸡胚尿嚢液HA效价有明显抑制趋势,但统计学处理无明显差异。实施例3:含大青叶的防感药物组合物对流感病毒感染小鼠肺指数的影响1、试验目的观察含大青叶的防感药物组合物对ICR小鼠流感病毒感染肺指数的影响.，并与阳性对照品一抗病毒软胶嚢进行比较；为评价防感喷雾剂的研究开发提供初步的依据。2、受试药物.(l)测试样品防感喷雾剂根据实施例1方法制备，棕黄色粘稠液体(每ml含生药1.2g),4。C干燥保存，临用前用生理盐水配制至所需浓度。(2)阳性对照品抗病毒软胶嚢本品为软胶嚢，内容物为深褐色教稠液，气微香，味苦；由广州白云山制药股份有限公司广州白云山制药总厂生产；临用前去除软胶嚢内容物用生理盐水配制至所需浓度。批号2070005，临用前用生理盐水配制至所需浓度。(3)阴性对照品生理盐水。3、{式—验动物ICR小鼠，130X,清洁级，体重17-19g,雌雄各半。由中囪科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限公司提供，生产许可证SCXK(沪)2003-0003。4、实验条件屏障系统小鼠实验饲养室，温度22士rC,湿度50-70%,光照150-200Lx,12小时明暗交替，噪音〈50dB,使用许可证SYXK(浙)2003-0003。自来;Kit滤灭菌，置于高压灭菌的饮水瓶中自由饮^],用灭菌小鼠全价营养颗粒祠料铜喂。饲养方式自由饮食，小鼠饲养笼中给予充足的祠料和水，每笼饲养5只小鼠，试验前，每只小鼠称重、标记编号。5、剂量设置防感喷雾剂高剂量组，原液生理盐水=1:5(v/v)防感喷雾剂中剂量組，原液生理盐水-l:10防感喷雾剂低剂量组，原液生理盐水-l:15防感喷雾剂喷鼻组，原液生理盐水=1:5阳性对照组2.7g.kg"抗病毒软胶嚢才莫型对照组生理盐水10ml'kg"空白对照组生理盐水10mbkg"6、给药途径和容量12给药途径防感喷雾剂喷鼻组鼻腔外部喷雾给药，并置于含高浓度防感喷雾剂的小箱中5min;其余各组经口灌胃给药或溶剂给药容量10ml'kg"g体重7、试验方法取17-19g的ICR小鼠130只，雌雄各半，按体重随机分组，即模型对照组、防感喷雾剂高剂量组、防感喷雾剂中剂量组、防感喷雾剂低剂量组、防感喷雾剂喷鼻组、阳性对照品组(抗病毒软胶嚢)、空白对照组。空白对照组每组10只，其余各组每组20只，雌雄各半。各组小鼠自感染病毒前3天开始,每日按不同给药方式给予相应药物，当日于给药后l小时各组小鼠在乙醚的浅麻醉下，分别以流感病毒5LDso滴鼻感染，每鼠20ul，空白对照组滴鼻给予生理盐水。从感染后连续给药4天，空白对照组、模型对照组给予相应容积的生理盐水。攻击后第4天称重并处死，摘取肺脏称重，逐个计算肺指数值和肺指数抑制率。肺重肺指数=-xi00%体重病毒对照组平均肺脂数-实验组平均肺肺指凄1抑制率=__xlOO%病毒对照组平均肺指数8、数据处理用NDST8.8W软件进行统计分析，所有数据均采用平均值士标准差(±s),计量资料应用t检验评价试验结果。.9、试验结果(l)防感喷雾剂对曱型流感病毒感染小鼠(雄性)肺指数的影响由表5可见，防感喷雾剂各给药组肺指数值与模型对照组比较呈显著性差异(户<0.05，户<0.01)，对流感病毒感染雄性小鼠均有一定的保护作用。各给药组剂量关系不明显，但效果均优于抗病毒软胶嚢(阳性对照组)。13其中防感喷雾剂喷鼻组作用效果略优于中、低剂量组，弱于防感喷雾剂高剂量组。防感喷雾剂高剂量组的肺指数抑制率为31.26%,优于其余各给药组。表5:防感喷雾剂对曱型流感病毒PR8感染小鼠(d)肺指数的影响组别动物数肺指数值肺指数抑制率(剂量)(只)(i±s)(%),空白对照组-(生理盐水10ml'kg'1)0.4。5±0.06**71.68才莫型对照组(生理盐水10ml'kg")81.430±0.22—防感喷雾剂高剂量组80.983±0.43*31.26防感喷雾剂中剂量组81.035士0.3151527.62防感喷雾剂低剂量组81.033±0.37*27.76防感喷雾剂喷鼻组8l扁士0.37"28.95阳性对照组81.079±0.31*24.55注:与模型对照组比较，<0.05,**户<0.01。(2)防感喷雾剂对曱型流感病毒感染小鼠($)肺指数的影响由表6可见，防感喷雾剂各给药组与模型对照组相比较呈显著性差异(尸<0.05，尸<0.01),对流感病毒感染雌性小鼠有一定的保护作用。其中防感喷雾剂喷鼻组作用效果优于其余各试药组，与模型组比较差异显著(P<0.01);其余各给药组剂量关系不明显，防感喷雾剂高剂量的效果优于中、低剂量，但弱于防感喷雾剂喷鼻组。抗病毒软胶嚢(阳性对照组)对雌性小鼠的保护作用较弱，其肺指数值与模型对照组比较无差异。表6:防感喷雾剂对甲型流感病毒PR8感染小鼠($)肺指数的影响组别动物数肺指数值肺指数抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注:与模型对照组比较，<0.05，**尸<0.01。10、讨论小鼠流感病毒性肺炎是用流感病毒小鼠适应抹所致的出血性肺炎的模型，是最常用的病毒致整体动物感染模型。小鼠感染病毒后引起肺炎，导致肺组织内炎症细胞渗出增多，形成肝样实变，-使全部肺质量增加，肺质量增加和肺炎的严重程度相关，通常以肺指数值的大小表示。实践表明，传统中草药在预治流感病毒方面有一定的作用。本实验采用流感病毒体内实验方法，模型对照组小鼠感染流感病毒后第2~3天起开始出现症状，表现为消瘦，活动减少，卑毛，毛松，倦缩，饮食减少，并出现不同程度的呼吸困难。感染发病后47天开始发生死亡。与模型对照组相比，实验小鼠灌胃给予不同浓度的防感喷雾剂以及防感喷雾剂喷鼻居能降低感染流感病毒小鼠的肺指数值，升高肺指数抑制率，说明防感喷雾剂有抑制小鼠流感病毒的作用，能抑制病毒所致肺炎发生、发展，使其炎症减轻。各剂量组中，防感喷雾剂喷鼻对小鼠的死亡保护作用较佳，其次是高剂量的防感喷雾剂。11、结论以上试验结果表明，防感喷雾剂有较好的体内抗病毒作用，其中，防感喷雾剂喷鼻对小鼠的死亡保护作用较佳。权利要求1.一种含大青叶的中药组合物，由质量配比如下的组分组成大青叶10～20份蒲公英10～20份野菊花10～20份制苍术5～20份薄荷1～10份。2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述中药组合物质量配大青叶15份蒲公英15份野菊花15份制苍术10份薄荷5份。3.如权利要求1或2所述的中药组合物在制备防治流感病毒感染的药物中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述药物制成下列之一的剂型①汤剂、②胶嚢剂、③颗粒剂、粉剂、⑤片剂、⑥口服液、⑦喷雾剂。5.—种以权利要求1所述的含大青叶的中药组合物制备的喷雾剂，所述的喷雾剂取组方量的组分，由如下方法制备得到(1)取1020质量份的大青叶、1020质量份野菊花、1020质量份蒲公英，混合后加入质量为混合物质量510倍的水，煎煮1~3次，每次0.52小时，收集煎液，冷却，膜分离，浓缩，得药液；(2)取520质量份的制苍术和510质量份的薄荷，粉碎，提取混合挥发油；(3)将步骤(2)所得混合挥发油溶于步骤(1)所得药液中，加入适量增溶剂和生物黏附剂，喷雾干燥得喷鼻粉；将喷鼻粉加入适量-无水乙二醇和丙上醇体积>比的混合液和蒸馏水，灌装，得喷雾剂。6.如权利要求5所述的喷雾剂，其特征在于所述的步骤(2)所述的提取混合挥发油的方法是以用挥发油提取器提取。7.'如权利要求5所述的喷雾剂，其特征在于所述的增溶剂为下列之一无水乙二醇和丙二醇的混合液或吐温-80。8.如权利要求5所述的喷雾剂，其特征在于所述的生物黏附为下列之一Poloxmer或冗聚糖。9.如权利要求1所述的含大青叶的中药组合物在制备预防治疗流感病毒中药物中的应用。全文摘要本发明提供了一种含大青叶的中药组合物，由质量配比如下的组分组成(均以干重计)大青叶10～20份，蒲公英10～20份，野菊花10～20份，制苍术5～20份，薄荷1～10份。本发明所述含大青叶的中药组合物的有益效果主要体现在(1)本发明中药组合物配方合理，具有清热解毒的作用，能有效祛除时疫热毒；(2)本发明提供的防感药物组合物成本低廉，药源丰富；(3)在体外对甲型流感病毒株有一定的抑制作用；(4)可有效抑制流感病毒感染所致肺炎的发生、发展。文档编号A61K36/534GK101664441SQ200910153629公开日2010年3月10日申请日期2009年9月30日优先权日2009年9月30日发明者吴巧凤,张永生,珊徐,朱飞叶,李范珠,陈民利申请人:浙江中医药大学