作为丙型肝炎病毒ns3丝氨酸蛋白酶抑制剂的3,4－(环戊基)－稠合的脯氨酸化合物的制作方法
专利名称：作为丙型肝炎病毒ns3丝氨酸蛋白酶抑制剂的3,4－(环戊基)－稠合的脯氨酸化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的丙型肝炎病毒(″HCV″)蛋白酶抑制剂、含有一或多个这类抑制剂的医药组合物、制备这类抑制剂的方法，以及使用这类抑制剂治疗丙型肝炎和相关病症的方法。本发明还公开新的化合物，其含有作为HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶抑制剂的双环P2部分。本申请要求2004年2月27日提交的美国临时申请系列号60/548,655的优先权。
背景技术：
丙型肝炎病毒(HCV)是(+)-有意义单股RNA病毒，其已经成为非-甲，非-乙型肝炎(NANBH)的主要病因，特别是在与血液-有关的NANBH(BB-NANBH)(参见，国际专利申请公布号WO 89/04669和欧洲专利申请公布号EP 381 216)中。NANBH与其它类型的病毒引起的肝脏疾病，如甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、δ型肝炎病毒(HDV)、巨细胞病毒(CMV)和Epstein-Barr病毒(EBV)，以及其它形式的肝脏疾病，如酒精中毒和原发胆汁性肝硬化显然有别。
最近，已经鉴定、克隆并表达多肽加工和病毒复制所需的HCV蛋白酶。(参见，例如美国专利第5,712,145号)。这种大约3000个氨基酸的多蛋白，从氨基终端到羧基终端，含有壳包核酸蛋白(C)、包膜蛋白(E1和E2)，以及数个非-结构蛋白(NS1、2、3、4a、5a和5b)。NS3是大约68kda的蛋白，由HCV基因组的大约1893个核苷酸编码，并具有两个不同的结构域(a)丝氨酸蛋白酶结构域，由大约200个N-终端的氨基酸所组成；以及(b)在蛋白的C-终端的RNA-依赖性ATP酶结构域。由于在蛋白序列、整体三维结构和催化机制上的类似性，因而认为NS3蛋白酶是胰凝乳蛋白酶家族的成员。其它胰凝乳蛋白酶样的酶是弹性蛋白酶、因子Xa、凝血酶、胰蛋白酶、血纤维蛋白溶酶、尿激酶、tPA和PSA。HCV NS3丝氨酸蛋白酶负责在NS3/NS4a、NS4a/NS4b、NS4b/NS5a和NS5a/NS5b接合处的多肽(多蛋白)的蛋白水解作用，并因此负责在病毒复制期间产生四个病毒蛋白。这制备出HCV NS3丝氨酸蛋白酶，一种有吸引力的抗病毒化学疗法的标靶。本发明化合物可抑制这类蛋白酶。它们也可调节丙型肝炎病毒(HCV)多肽的加工。
已经确定NS4a蛋白，一种大约6kda的多肽，是NS3的丝氨酸蛋白酶活性的辅因子。由NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶自动切割NS3/NS4a接合发生在分子内(即顺式)，而以分子间的方式加工其它切割位置(即反式)。
HCV蛋白酶的天然切割位置的分析，显示在P1处出现半胱氨酸并在P1′处出现丝氨酸，且在NS4a/NS4b、NS4b/NS5a和NS5a/NS5b接合处中严格地保留这些残基。NS3/NS4a接合处在P1处含有苏氨酸，并在P1′处含有丝氨酸。假定在NS3/NS4a处的Cys→Thr取代，说明在该接合处需要顺而非反式加工。参见，例如，Pizzi等(1994)Proc.Natl.Acad.Sci(USA)91888-892，Failla等(1996)Folding & Design 135-42。NS3/NS4a切割位置也比其它位置更容忍突变生成。参见，例如，Kollykhalov等(1994)J.Virol.687525-7533。也发现在切割位置的上游区中的酸性残基需要有效的切割。参见，例如，Komoda等(1994)J.Virol.687351-7357。
已经报告了HCV蛋白酶的抑制剂，包括抗氧化剂(参见，国际专利申请公布号WO 98/14181号)、某些肽和肽类似物(参见，国际专利申请公布号WO 98/17679号，Landro等(1997)Biochem.369340-9348，Ingallinella等(1998)Biochem.378906-8914，Llinàs-Brunet等(1998)Bioorg.Med.Chem.Lett.81713-1718)、以70-氨基酸多肽水蛭蛋白酶抑制剂(eglin)c为基础的抑制剂(Martin等(1998)Biochem.3711459-11468，抑制剂亲和力选自人类胰脏分泌胰蛋白酶抑制剂(hPSTI-C3)和微型抗体(minibody)节目(repertoires)(MBip)(Dimasi等(1997)J.Virol.717461-7469)、cVHE2(一种″骆驼化的(camelized)″可变结构域抗体片段)(Martin等(1997)Protein Eng.10607-614)，以及α1-抗胰凝乳蛋白酶(ACT)(Elzouki等(1997)J.Hepat.2742-28)。最近已经公开一种核酶，其被设计成选择性地破坏丙型肝炎病毒RNA(参见，BioWorldToday 9(217)4(1998年11月10日，1998))。
也参考1998年4月30日发表的PCT公布号WO 98/17679(VertexPharmaceuticals incorporated)；1998年5月28日发表的WO 98/22496(F.Hoffmann-La Roche AG)；以及1999年2月18日发表的WO 99/07734(Boehringer Ingelheim Canada Ltd.)。
HCV已经涉及肝脏的肝硬化，并引起肝细胞癌。目前，罹患HCV感染的患者的预后很差。HCV感染比其它形式的肝炎更难治疗，因为缺乏与HCV感染有关的免疫力或减轻。目前的数据指出在诊断出肝硬化后的四年内，存活率低于50％。诊断出患有局限性可切除的肝细胞癌的患者，具有10-30％的五年存活率，而患有局限性不可切除的肝细胞癌的那些患者仅具有低于1％的五年存活率。
参考WO 00/59929(美国专利第6,608,027号，受让人BoehringerIngelheim(Canada)Ltd.；2000年10月12日发表)，其公开具有下式的肽衍生物
参考A.Marchetti等，Synlett，S1，1000-1002(1999)描述的HCV NS3蛋白酶的抑制剂的双环类似物的合成。其中公开的化合物具有下式 也参考W.Han等，Bioorganic & Medicinal Chem.Lett，(2000)10，711-713，其描述某些含有烯丙基和乙基官能度的α-酮酰胺、α-酮酯和α-二酮的制备。
也参考WO 00/09558(受让人Boehringer Ingelheim Limited；2000年2月24日发表)，其公开下式的肽衍生物
其中在本文中定义各种部分(elements)。该系列的示例性化合物为 也参考WO 00/09543(受让人Boehringer Ingelheim Limited；2000年2月24日发表)，其公开下式的肽衍生物
其中在本文中定义各种部分。该系列的示例性化合物为 也参考美国专利6,608,027(Boehringer Ingelheim Canada)，其公开下列类型的NS3蛋白酶抑制剂 其中在本文中定义各种部分。
丙型肝炎的现行治疗包括干扰素-α(INFα)和利巴韦林与干扰素的联合治疗。参见，例如，Beremguer等(1998)Proc.Assoc.Am.Physicians110(2)98-112。这些治疗苦恼于低的持续反应率和频繁的副作用。参见，例如Hoofnagle等(1997)N.Engl.J.Med.336:347。目前，没有可供HCV感染使用的疫苗。
进一步参考2001年10月11日发表的WO 01/74768(受让人VertexPharmaceuticals Inc)，其公开某些具有下列通式的化合物(R在本文中定义)，作为丙型肝炎病毒的NS3-丝氨酸蛋白酶抑制剂 在上述WO 01/74768中公开的特殊化合物具有下式 PCT公布号WO 01/77113；WO 01/081325；WO 02/08198；WO02/08256；WO 02/08187；WO 02/08244；WO 02/48172；WO 02/08251；以及2002年1月18日提交的正在待审的美国专利申请系列号10/052,386公开了作为丙型肝炎病毒的NS-3丝氨酸蛋白酶抑制剂的各种类型的肽和/或其它化合物。这些申请的公开内容全部以引用的方式和结合到本文中。
需要HCV感染的新的治疗和疗法。需要可用来治疗或预防或改善丙型肝炎的一或多种症状的化合物。
需要治疗或预防或改善丙型肝炎的一或多种症状的方法。
需要使用在本文中提供的化合物，调节丝氨酸蛋白酶，特别是HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶的活性的方法。
需要使用在本文中提供的化合物，调节HCV多肽的加工的方法。
发明概述在本发明的许多实施方案中，提供了新型的HCV蛋白酶抑制剂、含有一或多个所述化合物的药用组合物、制备包含一或多个此类化合物的药用组合物的方法，以及使用一或多个这类化合物或一或多个这类制剂治疗或预防HCV或改善一或多种丙型肝炎的症状的方法。也提供调节HCV多肽与HCV蛋白酶的相互作用的方法。在本文公开的化合物的中，抑制HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶活性的化合物是优选的。本发明公开化合物或所述化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物，或所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物或酯，所述化合物具有在结构式1中所示的通用结构 式1其中R1为H、OR8、NR9R10或CHR9R10，其中R8、R9和R10可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基-、烯基-、炔基-、芳基-、杂烷基-、杂芳基-、环烷基-、杂环基-、芳烷基-和杂芳烷基，或在NR9R10中的R9和R10彼此连接，使NR9R10形成四至八元的杂环基，而同样独立地，在CHR9R10中的R9和R10彼此连接，使CHR9R10形成四至八元的环烷基；R2和R3可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；Y选自下列部分 其中G为NH或O；且R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基，或者(i)R17和R18彼此独立地连接，形成三至八元的环烷基或杂环基；(ii)同样独立地，R15和R19彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iii)同样独立地，R15和R16彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iv)同样独立地，R15和R20彼此连接，形成四至八元的杂环基；(v)同样独立地，R22和R23彼此连接，形成三至八元的环烷基或四至八元的杂环基；且(vi)同样独立地，R24和R25彼此连接，形成三至八元的环烷基或四至八元的杂环基；其中每个所述烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基可以是未取代的，或任选由一个或多个选自以下的部分独立地取代羟基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、烷氨基、芳氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、亚磺酰氨基(sulfonamido)、烷基、芳基、杂芳基、烷基亚磺酰氨基、芳基亚磺酰氨基、酮基、羧基、烷氧羰基、酰氨基(carboxamido)、烷氧基羰氨基、烷氧基羰氧基、烷基脲基、芳基脲基、卤代、氰基和硝基。
在上文提及的定义中，优选的烷基由1至10个碳原子构成，优选的烯基或炔基由2至10个碳原子构成，优选的环烷基由3至8个碳原子构成，而优选的杂烷基、杂芳基或杂环烷基(杂环基)具有1至6个氧、氮、硫或磷原子。
由式1代表的化合物，本身或与在本文中公开的一或多种其它的适当药物联合，可用于治疗疾病，例如HCV、HIV、AIDS(获得性免疫缺陷综合征)及相关病症，并可用来调解丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶的活性，预防HCV，或改善丙型肝炎的一或多种症状。可利用本发明的化合物，以及包含这类化合物的药用组合物或制剂，来进行这类调节、治疗、预防或改善。不受理论的限制，相信HCV蛋白酶可能是NS3或NS4a蛋白酶。本发明的化合物可抑制这类蛋白酶。它们也可调节丙型肝炎病毒(HCV)多肽的加工。
详细描述在一个实施方案中，本发明公开由结构式1代表的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或酯，其中各部分如上所定义。
在另一个实施方案中，R1为NR9R10，且R9为H，R10为H或R14，
其中R14为H、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、芳基-烷基、烯基、炔基或杂芳基-烷基。
在另一个实施方案中，R14选自下列基团 在另一个实施方案中，R2选自下列部分
在进一步的实施方案中，R3选自下列的基团
其中R31为OH或O-烷基；且R32为H、C(O)CH3、C(O)OtBu或C(O)N(H)tBu。
在另外的实施方案中，R3选自下列部分
在另一个实施方案中，G为NH。
在进一步的实施方案中，Y选自下列的部分
其中R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基，或者(i)R17和R18彼此独立地连接，形成三至八元的环烷基或杂环基；(ii)同样独立地，R15和R19彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iii)同样独立地，R15和R16彼此连接，形成四至八元的杂环基；且(iv)同样独立地，R15和R20彼此连接，形成四至八元的杂环基；其中每个所述烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基可以是未取代的，或任选由一个或多个选自以下的部分独立地取代羟基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、烷氨基、芳氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、亚磺酰氨基、烷基、芳基、杂芳基、烷基亚磺酰氨基、芳基亚磺酰氨基、酮基、羧基、烷氧羰基、酰氨基、烷氧基羰氨基、烷氧基羰氧基、烷基脲基、芳基脲基、卤代、氰基和硝基。
在另外的实施方案中，该部分 为选自下列的基团 其中Y32为选自下列的基团
在进一步的实施方案中，Y选自
在另外的实施方案中，所述部分 为选自下列的结构
在另外的实施方案中，R1为NHR14，其中R14为选自下列的基团 R2为选自下列的部分
R3为选自下列的部分
该部分 选自
且Y选自
本发明其它的实施方案公开在表1中所示的化合物。
表1
也在表1A中提供根据本发明的另外的化合物表1A
如同上文使用的，并在本公开全文中，除非另外指明，应理解下列的术语具有下列的意义″患者″包括人和动物。
″哺乳动物″意指人及其它哺乳动物。
″烷基″意指可以是直链或支链脂肪族烃基，且在链中包含大约1到大约20个碳原子。优选的烷基基团在链中含有大约1到大约12个碳原子。更优选的烷基基团在链中含有大约1到大约6个碳原子。支链意指一或多个低级烷基基团，如甲基、乙基或丙基，与直链的烷基链连接。″低级烷基″意指在链中具有大约1至大约6个碳原子的基团，其可以是直链或支链。术语″取代的烷基″意指该烷基基团可被一或多个取代基取代，其可以是相同或不同的，每个取代基各自独立选自卤代、烷基、芳基、环烷基、氰基、羟基、烷氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(环烷基)、-N(烷基)2、-N(烷基)2、羧基和-C(O)O-烷基。合适的烷基基团的非限制性实例包括甲基、乙基、正-丙基、异丙基和叔-丁基。
″烯基″意指含有至少一个碳-碳双键的脂肪族烃基，且其可以是直链或支链，且在链中包含大约2到大约15个碳原子。优选的烯基基团在链中具有大约2到大约12个碳原子；而更优选在链中具有大约2到大约6个碳原子。支链意指一或多个低级烷基基团，如甲基、乙基或丙基，与直链的烯基链连接。″低级烯基″意指在链中具有大约2至大约6个碳原子的基团，其可以是直链或支链。术语″取代的烯基″意指该烯基基团可被一或多个取代基取代，所述取代基可以是相同或不同的，各自独立选自卤代、烷基、芳基、环烷基、氰基、烷氧基和-S(烷基)。合适的烯基基团的非限制性实例包括乙烯基、丙烯基、正-丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正-戊烯基、辛烯基和癸烯基。
″炔基″意指含有至少一个碳-碳三键的脂肪族烃基，且其可以是直链或支链，且在链中包含大约2到大约15个碳原子。优选的炔基基团在链中具有大约2到大约12个碳原子；而更优选在链中具有大约2到大约4个碳原子。支链意指一或多个低级烷基基团，如甲基、乙基或丙基，与直链的炔基链连接。″低级炔基″意指在链中具有大约2至大约6个碳原子的基团，其可以是直链或支链。合适的炔基基团的非限制性实例包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基和3-甲基丁炔基。术语″取代的炔基″意指该炔基基团可被一或多个取代基取代，其可以是相同或不同的，每个取代基各自独立选自烷基、芳基和环烷基。
″芳基″意指芳香族单环或多环的环系统，其包含大约6到大约14个碳原子，优选大约6到大约10个碳原子。所述芳基可任选由″环系统取代基″取代，所述取代基可以是相同或不同的，并如同在本文中的定义。合适的芳基基团的非限制性实例包括苯基和萘基。
″杂芳基″意指包括大约5到大约14个环原子，优选大约5到大约10个环原子的芳香族单环或多环的环系统，其中一或多个环原子是碳以外的元素，例如氮、氧或硫，它们可单独或组合存在。优选的杂芳基含有大约5到大约6个环原子。所述″杂芳基″可任选由″环系统取代基″取代，所述取代基可以是相同或不同的，并如同在本文中的定义。在杂芳基词根名字前的前缀氮杂、氧杂或硫杂，意指分别出现至少一个氮、氧或硫原子作为环原子。可任选将杂芳基的氮原子氧化成相应的N-氧化物。合适的杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、吡啶酮(包括N-取代的吡啶酮)、异唑基、异噻唑基、唑基、噻唑基、吡唑基、呋呫基、吡咯基、吡唑基、三唑基、1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹喔啉基、2，3-二氮杂萘基(phthalazinyl)、羟吲哚基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、苯并呋呫基、吲哚基、氮杂吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并氮杂吲哚基、1，2，4-三嗪基、苯并噻唑基等。术语″杂芳基″也意指部分饱和的杂芳基部分，例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基等。
″芳烷基″或″芳基烷基″意指芳基-烷基-基团，其中该芳基和烷基如同前文所述。优选的芳烷基包括低级烷基基团。合适的芳烷基基团的非限制性实例包括苄基、2-苯乙基和萘甲基。通过烷基与母体部分连接。
″烷芳基″意指烷基-芳基-基团，其中该烷基和芳基如同前文所述。优选的烷芳基包括低级烷基基团。合适的烷芳基基团的非限制性实例为甲苯基。通过芳基与母体部分连接。
″环烷基″意指非-芳香族单-或多环的环系统，其包括大约3至大约10个碳原子，优选大约5至大约10个碳原子。优选的环烷基环含有大约5至大约7个环原子。环烷基可任选由一或多个″环系统取代基″取代，所述取代基可以是相同或不同的，并如同在上文中的定义。合适的单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。合适的多环环烷基的非限制性实例包括1-萘烷基、降冰片基(norbornyl)、金刚烷基等，以及部分饱和的物质，例如茚满基、四氢萘基等。
″卤素″或″卤代″意指氟、氯、溴或碘。优选氟、氯和溴。
″环系统取代基″意指与芳香族或非-芳香族环系统连接的取代基，其例如代替在该环系统上可用的氢。环系统取代基可以是相同或不同的，各自独立选自烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷芳基、杂芳烷基、杂芳烯基、杂芳炔基、烷基杂芳基、羟基、羟烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰基、芳酰基、卤代、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、芳氧羰基、芳烷氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、芳烷硫基、杂芳烷硫基、环烷基、杂环基、-C(＝N-CN)-NH2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH)-NH(烷基)、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-、Y1Y2NSO2-和-SO2NY1Y2，其中Y1和Y2可以是相同或不同的，并各自独立选自氢、烷基、芳基、环烷基和芳烷基。″环系统取代基″也可意指单一部分，其同时代替在环系统上的两个相邻碳原子上的两个可用的氢(每个碳上一个H)。这类部分的实例是亚甲二氧基、亚乙二氧基、-C(CH3)2-等，其形成例如 的部分。
″杂环基″意指非芳香族的饱和单环或多环的环系统，其包含大约3至大约10个环原子，优选大约5到大约10个环原子，其中在该环系统中的一或多个原子是碳以外的元素，例如氮、氧或硫，它们可单独或组合存在。在环系统中不存在相邻的氧和/或硫原子。优选的杂环基包含大约5至大约6个环原子。在杂环词根名字前的前缀氮杂、氧杂或硫杂，意指分别出现至少一个氮、氧或硫原子作为环原子。任何在杂环基环中的-NH均可以以被保护的基团，例如作为-N(Boc)、-N(CBz)、-N(Tos)基团等存在；也将这类保护视为本发明的一部分。所述杂环基可任选由一或多个″环系统取代基″取代，所述取代基可以是相同或不同的，并如同在本文中的定义。可任选将杂环基的氮或硫原子氧化成相对应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。合适的单环杂环基环的非限制性实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑烷基、1，4-二氧六环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、内酰胺、内酯等。
应注意到在本发明的环系统所含有的杂原子中，在与N、O或S相邻的碳原子上没有羟基基团，而且在与其它杂原子相邻的碳原子上没有N或S基团。因此，例如在环中 没有-OH直接连接在标号为2和5的碳上。
也应注意到互变异构形式，例如下列的部分 在本发明的某些实施方案中认为它们是等同的。
″炔烷基″意指炔基-烷基-基团，其中该炔基和烷基如同前文所述。优选的炔烷基含有低级炔基和低级烷基基团。通过烷基与母体部分连接。合适的炔烷基基团的非限制性实例包括炔丙基甲基。
″杂芳烷基″意指杂芳基-烷基-基团，其中该杂芳基和烷基如同前文所述。优选的杂芳烷基含有低级烷基基团。合适的芳烷基基团的非限制性实例包括吡啶基甲基和喹啉-3-基甲基。通过烷基与母体部分连接。
″羟烷基″意指HO-烷基-基团，其中烷基如同前述所定义。优选的羟烷基含有低级烷基。合适的羟烷基基团的非限制性实例包括羟甲基和2-羟乙基。
″酰基″意指H-C(O)-、烷基-C(O)-或环烷基-C(O)-基团，其中各种基团如同前文所述。通过羰基与母体部分连接。优选的酰基含有低级烷基。合适的酰基基团的非限制性实例包括甲酰基、乙酰基和丙酰基。
″芳酰基″意指芳基-C(O)-基团，其中该芳基基团如同前文所述。通过羰基与母体部分连接。合适的基团的非限制性实例包括苯甲酰基和1-萘酰基。
″烷氧基″意指烷基-O-基团，其中该烷基基团如同前文所述。合适的烷氧基基团的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异丙氧基和正-丁氧基。通过醚氧与母体部分连接。
″芳氧基″意指芳基-O-基团，其中该芳基基团如同前文所述。合适的芳氧基基团的非限制性实例包括苯氧基和萘氧基。通过醚氧与母体部分连接。
″芳烷氧基″意指芳烷基-O-基团，其中该芳烷基如同前文所述。合适的芳烷氧基基团的非限制性实例包括苄氧基和1-或2-萘甲氧基。通过醚氧与母体部分连接。
″烷硫基″意指烷基-S-基团，其中该烷基基团如同前文所述。合适的烷硫基基团的非限制性实例包括甲硫基和乙硫基。通过硫与母体部分连接。
″芳硫基″意指芳基-S-基团，其中该芳基基团如同前文所述。合适的芳硫基基团的非限制性实例包括苯硫基和萘硫基。通过硫与母体部分连接。
″芳烷硫基″意指芳烷基-S-基团，其中该芳烷基基团如同前文所述。合适的芳烷硫基基团的非限制性实例是苄硫基。通过硫与母体部分连接。
″烷氧羰基″意指烷基-O-CO-基团。合适的烷氧羰基基团的非限制性实例包括甲氧羰基和乙氧羰基。通过羰基与母体部分连接。
″芳氧羰基″意指芳基-O-C(O)-基团。合适的芳氧羰基基团的非限制性实例包括苯氧羰基和萘氧羰基。通过羰基与母体部分连接。
″芳烷氧羰基″意指芳烷基-O-C(O)-基团。合适的芳烷氧羰基基团的非限制性实例为苄氧羰基。通过羰基与母体部分连接。
″烷基磺酰基″意指烷基-S(O2)-基团。优选的基团是其中烷基基团为低级烷基的那些基团。通过磺酰基与母体部分连接。
″芳基磺酰基″意指芳基-S(O2)-基团。通过磺酰基与母体部分连接。
术语″取代的″意指由选自指定的基团代替在指明的原子上的一或多个氢，条件为在现有情况下不超过该指明的原子的正常价数，且该取代产生稳定的化合物。只要这类组合结果产生稳定的化合物，取代基和/或变量的组合就是允许的。″稳定的化合物″或″稳定的结构″意指一化合物足够稳定，能承受从反应混合物中分离至有用程度的纯度，并配制成有效的治疗剂。
当指示取代基、化合物、组合试剂等的数目时，术语″一或多个″或″至少一个″，依据前后文，意指出现或添加至少一个，并最高达到在化学或物理上可容许的最大数目的取代基、化合物、组合试剂等。这类技术和知识在本领域技术人员熟知的范围内。
术语″任选取代的″意指可视需要用指定的基团、原子团或部分取代。
对化合物而言，术语″分离的″或″以分离的形式″，意指所述化合物在从合成过程或天然来源或其组合中分离后的物理状态。对化合物而言，术语″纯化的″或″以纯化的形式″，意指在从本文中描述或技术少熟练人员熟知的纯化过程获得该化合物后的物理状态，其具有足够的纯度，可通过本文中描述的或技术少熟练人员熟知的标准分析技术鉴定。
也应注意到，假设在本文的正文、流程、实施例和表格中，任何具有不饱和价数的碳或杂原子具有满足价数的氢原子。
当称化合物中的官能基是″保护的″时，这意指该基团是经过修改的形式，从而使该化合物经历反应时，在保护位置排除不想要的副反应。将借通过本领域普通技术人员，以及通过参考教科书，例如T.W.Greene等，Protective Groups in organic Synthesis(1991)，Wiley，New York，识别合适的保护基团。
当任何变数(例如芳基、杂环、R2等)在任何成分或在式1中出现一次以上时，其在每次出现时的定义独立于其在其它地方每次出现处的定义。
当在本文中使用时，术语″组合物″意欲包含含有指定量的特定成分的产物，以及任何直接或间接由指定量的特定成分的组合获得的产物。
在本文中也设计本发明的化合物的前药和溶剂合物。当在本文中使用时，术语″前药″代表为药物前体的化合物，当将其给予患者时，通过代谢或化学过程经历化学转变，产生式1的化合物，或其盐和/或溶剂合物。在T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel DeliverySystems(1987)14 of the A.C.S.Symposium Series中，以及在Bioreversible Carriers in Drug Design，(1987)Edward B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press中提供了前药的讨论，两者均通过引用结合到本文中。
″溶剂合物″意指本发明化合物与一或多种溶剂分子的物理缔合。该物理缔合涉及各种程度的离子和共价键结合，包括氢键。在某些例子中，溶剂合物将能够分离，例如当将一或多个溶剂分子并入结晶固体的晶格中时。″溶剂合物″包括溶液-相和可分离溶剂合物两者。合适的溶剂合物的非限制性实例包括乙醇化物、甲醇化物等。″水合物″为其中该溶剂分子为H2O的溶剂合物。
″有效量″或″治疗有效量″意在叙述的本发明化合物或组合物的量在抑制CDK(s)上是有效的，并因此产生所需的治疗、改善、抑制或预防效果。
可形成盐的式1化合物也在本发明的范围内。除非另外指明，在本文中提及式1化合物时，应该理解也包括其盐。当在本文中使用时，术语″盐″表示与无机和/或有机酸形成的酸加成盐，以及与无机和/或有机碱形成的碱加成盐。此外，当式1化合物含有碱性部分，例如但不限于吡啶或咪唑，和酸性部分，例如但不限于羧酸两者时，可形成两性离子(″内盐″)，并也包括在本文中使用的术语″盐″中。药学上可接受的(即无毒性、生理学上可接受的)盐是优选的，虽然也可使用其它的盐。可借着例如使式1化合物与一定量(如等当量)的酸或碱，在其中使盐沉淀的介质或在含水介质中反应，接着冷冻干燥，形成式1化合物的盐。
示例性的酸加成盐类包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、甲烷磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(也称为甲苯基磺酸盐)等。此外，由例如P.Stahl等，Camille G.(编辑)药用盐手册，特性、选择和用途(Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use)，(2002)ZurichWiley-VCH；S.Berge等，Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson等，ThePractice of Medicinal Chemistry(1996)，Academic Press，New York；以及在The Orange Book(Food & Drug Administration，Washington，D.C.在其网址上)中，讨论了一般认为适合用来从碱性药学化合物来形成在药学上有用的盐类的酸。这些公开的内容通过引用结合到本文中。
示例性的碱加成盐包括铵盐、碱金属盐，如钠、锂和钾盐、碱土金属盐，如钙和镁盐，与有机碱(例如有机胺)所成的盐，如二环己胺、叔-丁胺，以及与氨基酸如精氨酸、离氨酸等所成的盐。可利用试剂将碱性含氮基团季铵化，如低级烷基卤化物(例如甲基、乙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、二乙酯和二丁酯)、长链卤化物(例如癸基、十二烷基和硬脂酰基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基和苯乙基的溴化物)及其它。
为了本发明，所有预定为药学上可接受的盐的这类酸加成盐和碱加成盐均在本发明的范围内，并认为所有的酸加成盐和碱加成盐均等于相应的化合物的游离形式。
本发明化合物的药学上可接受的酯包括下列各组(1)通过羟基基团的酯化作用而获得的羧酸酯，其中酯类的羧酸部分的非-羰基部分选自直链或支链的烷基(例如乙酰基、正-丙基、叔-丁基或正-丁基)、烷氧烷基(例如甲氧甲基)、芳烷基(例如苄基)、芳氧烷基(例如苯氧基甲基)、芳基(例如任选由例如卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基或氨基取代的苯基)；(2)磺酸酯，如烷基-或芳烷基磺酰基(例如甲烷磺酰基)；(3)氨基酸酯(例如L-缬氨酰基或L-异亮氨酰基)；(4)膦酸酯和(5)单-、二-或三-磷酸酯。可通过例如C1-20醇或其反应性衍生物，或通过2，3-二(C6-24)酰基甘油，将磷酸酯进一步酯化。
式1的化合物，及其盐、溶剂合物、酯和前药，可以其互变异构形式存在(例如酰胺或亚氨基醚)。在本文中，所有的这类互变异构形式被视为本发明的一部分。
打算使本发明的化合物(包括化合物的盐、溶剂合物和前药，以及前药的盐和溶剂合物)的所有的立体异构体(例如几何异构体、光学异构体等)，如可能是因为在各种取代基上的不对称碳而出现的那些异构体，包括对映体形式(甚至可能在缺少不对称碳时出现)、旋转异构体形式、阻转异构体和非对映异构体形式均在本发明的范围内，位置异构体(例如4-吡啶基和3-吡啶基)也是如此。本发明化合物的各立体异构体可以是，例如基本上不含其它异构体，或可以混合成为例如外消旋物，或带有所有其它的，或其它选择的立体异构体。本发明的手性中心可具有S或R构型，如同由IUPAC 1974推荐书定义的。术语″盐″、″溶剂合物″、″前药″等的使用，旨在等同地应用在本发明化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、位置异构体、外消旋物或前药的盐、溶剂合物和前药上。
打算将式1化合物，以及式1化合物的盐、溶剂合物和前药的多形形式纳入本发明内。
应了解式1化合物在本文中讨论的治疗应用上的用途，可适用于每个化合物本身或一或多个式1化合物的混合或组合，如同在例如紧接着的下一段中说明的。相同的理解也适用于药用组合物，其包含一种或多种这样的化合物，以及涉及这样的化合物的治疗方法。
根据本发明的化合物可具有药理学特性；具体而言，式1化合物可以是HCV蛋白酶的抑制剂，每个化合物本身或一或多个式1化合物，可与一或多个选自式1中的化合物混合。所述化合物可用来治疗疾病，例如HCV、HIV、AIDS(获得性免疫缺陷综合征)及相关病症，并可用来调节丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶的活性、预防HCV或改善丙型肝炎的一或多种症状。
可使用式1化合物来制备用来治疗与HCV蛋白酶有关的病症的药物，例如，该方法包括使式1化合物与药学上可接受的载体紧密接触。
在其它的实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含作为活性成分的本发明的一种或多种化合物。药用组合物通常还地包括至少一种药学上可接受的载体稀释剂、赋形剂或载体(在本文中统称为载体原料)。因为其HCV抑制活性，这类药用组合物具有治疗丙型肝炎和相关病症的用途。
在另一个实施方案中，本发明公开制备包含作为活性成分的本发明化合物的药用组合物的方法。在本发明的药用组合物和方法中，活性成分通常将与合适的载体原料混合给予，针对想要的给药形式而适当地选择载体原料，即口服片剂、胶囊(填装固体、填装半固体或填装液体)、构成用的粉末、口服凝胶、酏剂、可分散的颗粒、糖浆、悬浮液等，并符合常规药学实践。例如，对于口服给药用的片剂或胶囊形式，可将活性药物组分与任何口服无毒性的药学上可接受的惰性载体混合，如乳糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑石、甘露糖醇、乙醇(液体形式)等。此外，在想要或需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。散剂和片剂可包含从大约5到大约95％的本发明组合物。
合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖类、玉米增甜剂、天然和合成的树胶，如阿拉伯树胶、藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。在润滑剂中，可提及的用于这些剂型中的有硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、瓜耳树胶等。
合适时也可包括增甜剂和着色剂及防腐剂。在上文中提及的一些术语，即崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂等，在下文中有更详细地讨论。
此外，本发明的组合物可以持续释放的形式配制，以便提供任一种或多种组分或活性成分的速率控制释放，以发挥最大的治疗效果，即HCV抑制活性等。持续释放的适当剂型包括多层片剂，其含有具有不同崩解速率的各层，或充满活性组分的控制释放的聚合基质，并制成片剂形式或含有这类充满或包胶(encapsulated)多孔聚合基质的胶囊。
液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳剂。举例来说，可提及水或水-丙二醇溶液，用于胃肠外注射，或为了口服溶液、悬浮液和乳剂，可加入增甜剂和镇静剂(pacifiers)。液体形式的制剂也可包括鼻内给药的溶液。
适合吸入的气溶胶制剂可包括溶液和粉末形式的固体，可将其与药学上可接受的载体，如惰性压缩气体，例如氮气组合。
至于制备栓剂，首先熔化低熔点的蜡，如脂肪酸甘油酯，如可可脂的混合物，并通过搅拌或类似地混合使活性成分均匀地分散在其中。然后将熔化的均质混合物倒入适当尺寸的模具中，使其冷却并藉此固化。
也包括固体形式的制剂，计划在临用前将其转变成液体形式的制剂，以供口服或胃肠外给药。这类液体形式包括溶液、悬浮液和乳剂。
本发明的化合物也可经皮传递。经皮传递的组合物可采用霜剂、洗剂、气溶胶和/或乳剂的形式，并可将其包括在本领域中用于该目的的传统基质或贮库类型的经皮贴片中。
本发明的化合物也可口服，静脉内、鼻内或皮下给药。
本发明的化合物也可包括为单位剂型的制剂。在这类形式中，将制剂细分成含有适当量的活性组分的适当尺寸的单位剂量，例如达到所需目的的有效量。
在单位剂量的制剂中的本发明活性组合物的量，通常根据特殊的应用，可从大约1.0毫克变化或调整到大约1,000毫克，优选从大约1.0到大约950毫克，更优选从大约1.0到大约500毫克，而典型的是从大约1到大约250毫克。可根据患者的年龄、性别、体重和待治疗疾病的严重性，改变所使用的实际剂量。这类技术为本领域普通技术人员所熟知。
通常，可每天给予人含有活性成分的口服剂型1或2次。将根据临床医师的判断调整给药的用量和频率。一般对于口服给药推荐的日剂量方案可在每天大约1.0毫克到大约1,000毫克范围内，以单一或分开的剂量给予。
在下文中描述一些有用的名词胶囊-意指由甲基纤维素、聚乙烯醇或变性明胶或淀粉制备的特殊容器或包封外壳，用以容纳或含有包括活性成分的组合物。硬壳胶囊通常是由较高凝胶强度的骨和猪皮明胶的混合物制成。胶囊本身可含有少量的染料、不透明剂、塑化剂和防腐剂。
片剂-意指压缩或模压的固体剂型，其含有活性成分与合适的稀释剂。可通过压缩混合物或通过湿法制粒、干法制粒而获得的颗粒，或通过压紧来制备片剂。
口服凝胶-意指活性成分分散或溶解于亲水性固体基质内。
构成用的粉末-意指含有活性成分和适当稀释剂的粉末混合物，可将其悬浮于水或果汁中。
稀释剂-意指通常构成大部分组合物或剂型的物质。合适的稀释剂包括糖，如乳糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨糖醇；衍生自小麦、玉米、稻米和马铃薯的淀粉；以及纤维素，如微晶纤维素。稀释剂在组合物中的量的范围可从总组合物的大约10到大约90％重量，优选从大约25到大约75％，更优选从大约30到大约60％重量，甚至更优选从大约12到大约60％。
崩解剂-意指加在组合物中帮助它瓦解(崩解)并释放药物的原料。合适的崩解剂包括淀粉；″可溶于冷水″的经修饰的淀粉，如羧甲基淀粉钠；天然和合成的树胶，如槐树豆胶、刺梧桐树胶、瓜耳树胶、黄蓍胶和琼脂；纤维素衍生物，如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠；微晶纤维素和交联微晶纤维素，如交联羧甲基纤维素钠；藻酸盐，如藻酸和藻酸钠；粘土，如膨润土；以及泡腾混合物。崩解剂在组合物中的量d范围可从组合物的大约2到大约15％重量，优选从大约4到大约10％重量。
粘合剂-意指将粉末结合或″粘合″在一起，并通过形成颗粒使它们粘结的物质，因此在配制时用来作为″粘附剂″。已经在稀释剂或填充剂中获得粘合剂加上粘结强度。合适的粘合剂包括糖，如蔗糖；衍生自小麦、玉米、稻米和马铃薯的淀粉；天然的树胶，如阿拉伯树胶、明胶和黄蓍胶；海藻的衍生物，如藻酸、藻酸钠和藻酸钙铵；纤维素材料，如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠，以及羟丙基甲基纤维素；聚乙烯吡咯烷酮；以及无机物，如硅酸铝镁。粘合剂在组合物中的量的范围可从组合物的大约2到大约20％重量，更优选从大约3到大约10％重量，甚至更优选从大约3到大约6％重量。
润滑剂-意指加在剂型中，使片剂、颗粒等在已经压缩后，能够通过降低摩擦力或磨损而从模具或冲模中释放的物质。合适的润滑剂包括金属硬脂酸盐，如硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸钾；硬脂酸；高熔点的蜡；以及水溶性润滑剂，如氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠、油酸钠、聚乙二醇和d′l-亮氨酸。通常在压缩前很晚的步骤中才加入润滑剂，因为它必须出现在颗粒的表面，并在它们和压片机的部件之间。润滑剂在组合物中的量的范围可从组合物的大约0.2到大约5％重量，优选从大约0.5到大约2％，更优选从大约0.3到大约1.5％重量。
助流剂(Glident)-防止结块并改善颗粒的流动特征的材料，使得流动平顺并均匀。合适的助流剂包括二氧化硅或滑石。助流剂在组合物中的量的范围可从总组合物的大约0.1％到大约5％重量，优选从大约0.5到大约2％重量。
着色剂-提供给组合物或剂型颜色的赋形剂。这类赋形剂可包括食品级染料，并将食品级的染料吸附在合适的吸附剂上，如粘土或氧化铝。着色剂的量可从组合物的大约0.1变化到大约5％重量，优选从大约0.1到大约1％。
生物利用度-意指与标准物或对照组相比较，活性药物成分或治疗部分从给予的剂型被吸收至全身循环内的速率和程度。
制备片剂的传统方法是已知的。这类方法包括干式方法，如直接压缩和压缩通过压紧产生的颗粒，或湿式方法，或其它特殊程序。制备其它给药形式，例如胶囊、栓剂等的传统方法也是已熟知的。
本发明的另一实施方案公开上文公开的本发明化合物或药用组合物在治疗疾病，例如丙型肝炎等中的用途。该方法包括对患有这样的疾病，且需要这类治疗的患者，给予治疗有效量的本发明化合物或药用组合物。
在又一个实施方案中，可使用本发明的化合物，以单一疗法模式或以联合疗法(例如双重联合、三重联合等)模式，例如与抗病毒和/或免疫调节剂联合使用来治疗人类的HCV。这类抗病毒和/或免疫调节剂的实例，包括利巴韦林(得自Schering-Plough Corporation，Madison，New Jersey)和LevovirinTM(得自ICN Pharmaceuticals，Costa Mesa，California)、VP 50406TM(得自Viropharma，Incorporated，Exton，Pennsylvania)、ISIS 14803TM(得自ISIS Pharmaceuticals，Carlsbad，California)、HeptazymeTM(得自Ribozyme Pharmaceuticals，Boulder，Colorado)、VX 497TM(得自Vertex Pharmaceuticals，Cambridge，Massachusetts)、胸腺素(Thymosin)TM(得自SciClone Pharmaceuticals，San Mateo，California)、MaxamineTM(得自Maxim Pharmaceuticals，SanDiego，California)、麦考酚酸吗乙酯(得自Hoffman-LaRoche，Nutley，New Jersey)、干扰素(例如干扰素α、PEG-干扰素α缀合物)等。″PEG-干扰素α缀合物″是与PEG分子共价连接的干扰素α分子。代表性的PEG-干扰素α缀合物包括干扰素α-2a(RoferonTM，得自Hoffman La-Roche，Nutley，New Jersey)，为聚乙二醇化的干扰素α-2a的形式(例如以商标名PegasysTM出售)、干扰素α-2b(IntronTM，得自Schering-PloughCorporation)，以聚乙二醇化的干扰素α-2b的形式(例如以商标名PEG-IntronTM出售)、干扰素α-2c(Berofor αTM，得自Boehringer Ingelheim，Ingelheim，Germany)，或通过测定天然存在的干扰素α的共有序列定义的共有干扰素(InfergenTM，得自Amgen，Thousand Oaks，California)。
如同较早陈述的，本发明也包括本发明的化合物的互变异构体、旋转异构体、对映体和其它立体异构体。因此，本领域普通技术人员意识到一些本发明的化合物可以以合适的异构形式存在。打算将这类变化包括在本发明的范围内。
本发明它的再一个实施方案公开制备在本文中公开的化合物的方法。可通过本领域已知的几种技术制备该化合物。在下列的反应方案中概述了示例性程序。不应将示例解释为对本发明的范围的限制，其在附录的权利要求书中定义。其它的机械路径和类似结构对本领域技术人员而言，将是显而易见的。
应该理解，虽然下列的示例性方案描述了数个代表性本发明化合物的制备，但任何天然和非天然氨基酸两者的适当取代作用将导致形成以这样的取代为基础的所需化合物。打算将这类变化纳入本发明的范围内。
缩写在方案、制备和实施例的描述中使用的缩写如下THF四氢呋喃DMFN，N-二甲基甲酰胺EtOAc乙酸乙酯AcOH醋酸HOOBt3-羟基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮EDCl1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐NMMN-甲基吗啉ADDP1，1′-(偶氮二羰基)二哌啶DEAD偶氮二羧酸二乙酯MeOH甲醇EtOH乙醇Et2O乙醚DMSO二甲亚砜HOBtN-羟基苯并三唑PyBrOP溴-三-吡咯烷六氟磷酸盐DCM二氯甲烷DCC1，3-二环己基碳化二亚胺TEMPO2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基Phg苯基甘氨酸Chg环己基甘氨酸Bn苄基Bzl苄基Et乙基Ph苯基iBoc异丁氧羰基iPr异丙基
tBu或But叔-丁基Boc叔-丁氧羰基Cbz苄氧羰基Cp环戊二烯基Ts对-甲苯磺酰基Me甲基HATUO-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐DMAP4-N，N-二甲氨基吡啶BOP苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲氨基)六氟磷酸盐PCC吡啶氯铬酸盐KHMDS六甲基二硅叠氮化钾或双(三甲基甲硅烷基氨化)钾NaHMDS六甲基二硅叠氮化钠或双(三甲基甲硅烷基氨化)钠LiHMDS六甲基二硅叠氮化锂或双(三甲基甲硅烷基氨化)锂10％Pd/C10％披钯碳(按重量计)TG硫甘油实施例中间体的合成乙基酯1a的合成 根据由Monn和Valli(J.Org.Chem.1994，59，2773-2778)描述的程序，合成乙基酯1a。
中间体1的合成 步骤A 在0℃下，分小份将硼氢化钠(924.5mg)加至在乙醇(50mL)中的二环酮1a的不均匀混合物中。搅拌反应物30分钟，TLC分析(乙酸乙酯/己烷；1∶1)显示所有的起始原料均已耗尽。通过加入AcOH(3mL)使该反应猝灭。以250mL乙酸乙酯稀释该混合物，并以碳酸氢钠的饱和水溶液(2×50mL)和盐水(1×40mL)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤，并在减低的压力下浓缩。通过柱层析纯化残余物，得到产率92％的产物。
步骤B 在0℃下，以1.08g 60％NaH的悬浮液处理，在130mL无水四氢呋喃中的环戊醇1b的溶液。移除冷却浴并搅拌所得的黄色溶液30分钟。加入二硫化碳(16.2mL)，并搅拌该反应45分钟。然后逐滴加入碘代甲烷(16.8mL)，并再搅拌该混合物1小时。通过小心地加入饱和氯化铵水溶液(30mL)使该反应猝灭。以80mL乙醚萃取该混合物并分离各层。以乙醚(2×80mL)反萃取含水层。以水(30mL)、盐水(30mL)洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度己烷至30％在己烷中的丙酮)，得到产率63％的黄色油状的黄原酸盐产物。
步骤C 利用干燥氮气将在90mL甲苯中的黄原酸盐1c的溶液脱气。加入AIBN(150.4mg)和氢化三-正-丁基锡(3.7mL)。再将该反应混合物脱气，并在95℃下搅拌1小时。TLC分析(丙酮/己烷；1∶9)显示所有的起始原料均已耗尽。在减低的压力下移除所有的挥发物，并将残余物溶解于250mL乙醚中，并以氟化钾的饱和水溶液(2×30mL)洗涤。将有机层经硫酸镁干燥，过滤，并在减低的压力下浓缩。经硅胶柱层析纯化残余物(梯度己烷至20％在己烷中的乙酸乙酯)，得到产率98％的产物。
步骤D 在0℃下，将N-Cbz起始原料1d(2.5g)溶解于80mL三氟乙酸中，接着加入20mL二甲硫。在0℃下搅拌该反应混合物5分钟，并移除冷却浴。再搅拌该反应5小时。在减低的压力下除去所有的挥发物，并使残余物在二氯甲烷(250mL)和1N NaOH水溶液(50mL)之间分配。以二氯甲烷(2×80mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。不需进一步纯化产物(1.46g，97％产率)。
步骤E 在0℃下，搅拌在80mL无水二氯甲烷和60mL无水二甲基甲酰胺中的N-Boc-叔-丁基亮氨酸(1.46g)的溶液，并以HATU(3.26g)处理。逐滴加入在二氯甲烷(10mL)中的外消旋胺1e(1.42g)，接着加入N-甲基吗啉(2.7mL)。将该混合物逐渐加温至室温，并搅拌过夜。在减低的压力(高真空)下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于350mL乙醚中。以1N HCl水溶液(30mL)、饱和的NaHCO3水溶液(30mL)、水(30mL)和盐水(30mL)洗涤有机层。将有机层经硫酸镁干燥，并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度乙醚/己烷；1∶9至5∶5)，得到产率72％的非对映体的产物1f和1g。
步骤F 将氢氧化锂一水合物(79mg)加入到15mL四氢呋喃/水/甲醇(1∶1∶1)溶液中的300mg酯1f的溶液中。在室温下搅拌该反应大约3小时，直到通过TLC分析(乙醚/己烷；4∶6)未检测出更多的起始原料为止。在减低的压力下浓缩该混合物，并使残余物在二氯甲烷(100mL)和1NHCl水溶液(20mL)之间分配。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。获得产率91％的白色固体状产物1，其不需进一步纯化。
中间体2的合成 步骤A 在N2下，将酮亚胺2a(50g，187.1mmol)在无水THF(400mL)中的搅拌的溶液冷却至-78℃，并以在THF中的K-tBuO的1M溶液(220mL，1.15当量)处理。将该反应混合物加温至0℃，并搅拌1小时，再以溴甲基环丁烷(28mL，249mmol)处理。在室温下搅拌该反应混合物48小时，并在真空中浓缩。将残余物溶解于Et2O(300mL)中，并以HCl水溶液(2M，300mL)处理。在室温下搅拌所得的溶液5小时，并以Et2O(1公升)萃取。以NaOH(50％水溶液)将含水层碱化至pH～12-14，并以CH2Cl2(3×300mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到纯的胺(2b，18g)，为无色的油。
步骤B 在0℃下，以二羧酸二-叔-丁酯(23g，105.4mmol)处理胺2b(18g，105.2mmol)的CH2Cl2(350mL)溶液，并在室温下搅拌12小时。在反应完成(TLC)后，在真空中浓缩该反应混合物，并将残余物溶解于THF/H2O(200mL，1∶1)，并以LiOH·H2O(6.5g，158.5mmol)处理，然后在室温下搅拌3小时。浓缩该反应混合物，并以Et2O萃取碱性的液层。以浓HCl将含水层酸化至pH～1-2，并以CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩，得到2c，为无色粘性油，其无需任何进一步的纯化而用于下一步骤。
步骤C 以BOP试剂(41.1g，93mmol)、N-甲基吗啉(27mL)、N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(9.07g，93mmol)处理酸2c(15.0g，62mmol)的CH2Cl2(250mL)溶液，并在室温下搅拌过夜。以1NHCl水溶液(250mL)稀释该反应混合物，分离各层，并以CH2Cl2(3×300mL)萃取含水层。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩，通过层析法纯化(SiO2，EtOAc/Hex 2∶3)，产生无色固体状的酰胺2d(15.0g)。
步骤D 在0℃下，以LiAlH4的溶液(1M，93mL，93mmol)逐滴处理在无水THF(200mL)中的酰胺2d(15g，52.1mmol)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物1小时，并在0℃下小心地以KHSO4的溶液(10％水溶液)使其猝灭，然后搅拌0.5小时。以HCl水溶液(1M，150mL)稀释该反应混合物，并以CH2Cl2(3×200mL)萃取。以HCl水溶液(1M)、饱和的NaHCO3、盐水洗涤合并的有机层，并干燥(MgSO4)。过滤该混合物，并在真空中浓缩，得到粘性无色油状的2e(14g)。
步骤E 以Et3N(10.73mL，74.4mmol)和丙酮合氰化氢(10.86g，127.57mmol)处理在CH2Cl2(50mL)中的醛2e(14g，61.6mmol)的溶液，并在室温下搅拌24小时。在真空中浓缩该反应混合物，并以HCl水溶液(1M，200mL)稀释，再萃取至CH2Cl2(3×200mL)中。以H2O、盐水洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)，过滤，在真空中浓缩并通过层析法纯化(SiO2，EtOAc/Hex 1∶4)，得到无色液体状的2f(10.3g)。
步骤F 以氰醇2f处理用HCl饱和的甲醇*(通过在0℃下使HCl气体鼓泡通过CH3OH(700mL)来制备)，并加热至回流24小时。在真空中浓缩该反应，产生2g，其无须纯化而直接用于下一步骤中。
*或者，也可使用通过将AcCl加至无水甲醇中而制备的6M HCl。
步骤G 在-78℃下，以Et3N(45.0mL，315mmol)和Boc2O(45.7g，209mmol)处理在CH2Cl2(200mL)中的胺盐酸盐2g的溶液。然后在室温下搅拌该反应混合物过夜，并以HCl(2M，200mL)稀释，然后萃取至CH2Cl2内。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤，在真空中浓缩，并通过层析法纯化(EtOAc/Hex 1∶4)，产生羟基酯2h。
步骤H 以LiOH·H2O(645mg，15.75mmol)处理在THF/H2O(1∶1)中的甲基酯2h(3g，10.5mmol)的溶液，并在室温下搅拌2小时。以HCl水溶液(1M，15mL)酸化该反应混合物，并在真空中浓缩。在真空中将残余物干燥，按定量产率得到2i。
步骤I 以NH4Cl(2.94g，55.5mmol)、EDCl(3.15g，16.5mmol)、HOOBt(2.69g，16.5mmol)和NMM(4.4g，44mmol)处理在CH2Cl2(50mL)和DMF(25mL)中的酸2i(得自上文)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物3天。在真空下移除溶剂，并以HCl水溶液(250mL)稀释残余物，然后以CH2Cl2萃取。以饱和的NaHCO3水溶液洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)，过滤，在真空中浓缩，获得2j，原样在下列的步骤中使用它。(或者也可通过在0℃下，在50mLCH3OH中，使2f(4.5g，17.7mmol)与H2O2水溶液(10mL)、LiOH·H2O(820mg，20.8mmol)反应0.5小时，直接获得2j)。
步骤J 将在先前步骤中获得的2j溶液，溶解于在二氧六环中的4N HCl中，并在室温下搅拌2小时。在真空中浓缩该反应混合物，得到固体状的中间体2，其可直接使用不需进一步纯化。
中间体3的合成 步骤A 将L-叔-亮氨酸(1当量，10g)慢慢地加至氢化铝锂的悬浮液(150mmol，在THF中的1M溶液)中。回流该反应混合物6小时。将该混合物冷却至0℃，并通过加入10mL的10％NaOH水溶液和10mL水使其猝灭。在室温下搅拌该混合物10分钟，然后以二碳酸二-叔-丁酯(1.1当量，18.22g)处理，并在60℃下搅拌该混合物过夜。通过硫酸镁过滤该反应混合物。浓缩滤液，并在硅胶上层析残余物，得到产率62％的产物3b。
步骤B 将三苯膦(3当量)和醇3b(1当量)加入到50mL无水THF中的邻苯二甲酰亚胺(1.01g)的溶液中。在冰-水浴中冷却该混合物，并逐滴加入偶氮二羧酸二异丙酯(2.5当量)。在0℃下搅拌所得的混合物10分钟，并加温至室温，再搅拌大约2.5小时，直到通过TLC(乙酸乙酯/己烷；3∶7)未检测到更多的起始原料为止。在减低的压力下浓缩该混合物。将残余物再悬浮于80mL二氯甲烷中。滤掉固体。浓缩滤液至其一半的体积，并加入己烷(30mL)。滤掉固体。在减低的压力下浓缩滤液，并在硅胶上层析残余物(梯度乙酸乙酯/己烷；1∶9至4∶6)，得到产物3c。
步骤C 将N-Boc保护的胺3c(1.4g)溶解于20mL在二氧六环中的4M HCl溶液中。搅拌该混合物大约2小时。在真空下除去所有的挥发物。对产物3d不需进行任何更进一步的纯化。
步骤D 在0℃下，以光气(10mL，在甲苯中的15％溶液)处理在20mL二氯甲烷和20mL饱和NaHCO3水溶液中的胺盐酸盐3d(1.14g)的混合物，并搅拌2小时。以100mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以30mL冷的饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层经硫酸镁干燥，过滤，并进一步以10mL甲苯稀释。浓缩该混合物，并保持产物3为在甲苯中的0.2M溶液。
中间体4的合成 步骤A 在0℃下，将溴化环丙基镁(4当量，7.68mmol)加入到THF中的酰胺4a(0.5g，1当量)中。将该反应物加温至最高达室温15分钟后，在室温下搅拌该反应5小时，然后通过加入1N HCl使其猝灭。以EtOAc稀释该反应，并以盐水洗涤。有机层经MgSO4干燥，通过柱层析以在己烷中的10％EtOAc纯化，得到0.2g的产物4b。产率43.1％。
步骤B 将4M HCl(在二氧六环中)加至N-Boc保护的胺4b(0.2g)中。在室温下搅拌该反应50分钟，TLC指出该反应已经完成。浓缩该混合物至干燥，得到0.162g的产物4c。
步骤C
在0℃下，将4c加入到CH2Cl2中的光气(2当量，1.65mmol)、NaHCO3(5mL饱和水溶液)中。在室温下搅拌该混合物2.5小时。通过漏斗分离。有机层经Na2SO4(无水的)干燥。用冷却浴将其浓缩至一半的体积。稀释至10mL，得到所需的异氰酸酯4，为在二氯甲烷中的0.083M的溶液。
中间体5的合成 步骤A 在-78℃、氮气氛下，将KHMDS(200mL在甲苯中的0.5M溶液)逐滴加入到无水THF(200mL)中的环己烷羧酸甲酯5a(11.1g，78mmol)的搅拌溶液中。当加入完成时，将该反应维持于该温度下0.5小时，然后加入苄基氯甲基醚(18.6mL，134mmol)。容许将该反应物加温至室温过夜，并加入水(100mL)。含水处理提供了残余物，通过硅胶柱层析纯化，使用EtOAc；己烷(1∶10)作为洗脱液，得到所需的、不纯的中间体醚(14.98g)，为无色的油。
在室温下，使10％Pd/C(0.5g)和前述的粗品醚(4.1g)在MeOH(80mL)中的黑色悬浮液暴露在氮气氛(气球)下过夜。通过硅藻土垫过滤该反应物，并以甲醇充分洗涤固体。在减低的压力下浓缩合并的滤液，并通过硅胶柱层析纯化粗产物，使用EtOAc；己烷(1∶5)，得到伯醇(5b；0.62g)，为无色的油。
步骤B 在0℃、氮气氛下，将甲烷磺酰氯(0.31mL)加至伯醇(5b；0.62g)的搅拌溶液中，接着加入三乙胺(0.75mL)。在该温度下搅拌所得的混合物0.5小时。将该反应混合物萃取至EtOAc中，并以1M HCl、饱和NaHCO3水溶液、水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩。获得黄色油状的残余物(甲磺酸盐5c；0.74g)，其无须纯化而直接用于下一步骤中。
步骤C 将二甲基甲酰胺(20mL；无水的；Aldrich)加至氢化钠(0.56g，Aldrich)中，并在悬浮液中加入叔-丁基硫醇，同时在氮气氛下，在冰浴中冷却。一旦加入完成，便加入甲磺酸盐(5c；按照上文从2.00g醇5b制备)，并在室温下搅拌所得的混合物过夜。使反应物在EtOAc和水之间分配，并分离有机相，干燥(MgSO4)。经硅胶柱层析，使用EtOAc-己烷(2∶98)，得到甲基酯-硫化物(5d；1.75g)。在液相中加入EtOAc，并加入10％HCl水溶液，直到水层pH＝1为止。分离有机层，以水洗涤，干燥，并在减低的压力下浓缩，得到白色固体状的硫化物-羧酸(5e；0.747g)。
步骤D 将过硫酸氢钾制剂(18.00g；Aldrich)加入到甲醇(75mL)中的硫化物(5e；2.287g)中，并在室温下搅拌所得的白色悬浮液过夜。在减低的压力下除去挥发物，并使白色固体在EtOAc和水之间分配。分离有机相，干燥并浓缩，提供砜(5f；2.52g；含有一些溶剂)。
步骤E 以DPPA(1当量，1.33mL，d 1.270)和三乙胺(1当量，0.85mL，d 0.726)处理在50mL甲苯中的酸5f(1.61g)的溶液。将该混合物加热至100℃2小时。以饱和的NaHCO3水溶液稀释该反应混合物，并以二氯甲烷(2×100mL)萃取。以饱和的NaHCO3水溶液和盐水洗涤合并的有机层。有机层经MgSO4干燥，过滤并在减低的压力下浓缩，直到剩下大约20mL溶剂为止。使用甲苯将产物5的溶液调节为0.2M异氰酸酯的浓度。
中间体6的合成
步骤A 将肼(0.9mL，28.68mmol，1.4当量)加入到100mLMeOH中的邻苯二甲酰亚胺3c(7g)的溶液中，并使该混合物回流(在N2下)6小时。TLC显示存在一些起始原料，加入更多的肼(0.45mL)，并在室温下继续搅拌过夜。形成白色的沉淀物。滤掉固体，并浓缩滤液，产生白色固体状的产物6a(4.48g)。
步骤B 将在100mL二氯甲烷中的胺6a(2.16g，10mmol)的溶液冷却至0℃，并以三乙胺(2当量，2.8mL)处理。逐滴加入甲烷磺酰氯(1.2当量，0.93mL)。搅拌不均匀的混合物过夜(温度0至25℃)。滤掉固体，并以饱和的氯化铵水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤滤液。有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于少量的二氯甲烷/乙酸乙酯(约10mL)中，并滤掉不溶的白色固体。经硅胶柱层析纯化滤液，得到浓稠半固体状的产物6b(2.7g)。
步骤C 将在50mL无水DMF中的磺酰胺6b(2.2g，7.5mmol)的溶液冷却至0℃，并以碳酸铯(3当量，7.34g)处理。逐滴加入碘甲烷(5当量，2.34mL)，并搅拌该混合物45分钟。移除冷却浴，并再搅拌该混合物4小时。通过加入饱和的氯化铵水溶液(100mL)使该反应猝灭，并以乙酸乙酯(2×100mL)萃取。以水(200mL)、盐水(200mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠干燥。过滤有机层并浓缩。在硅胶上层析残余物，得到产物6c(2.16g)。
步骤D 在室温下，将N-Boc保护的胺6c(2.1g，6.82mmol)溶解于20mL在二氧六环中的4M HCl中。搅拌该反应混合物1小时，然后在减低的压力下除去所有的挥发物，得到定量产率的产物6d。
步骤E 在0℃下，以光气(在甲苯中的15％溶液)处理在二氯甲烷和饱和的NaHCO3水溶液中的胺盐酸盐6d的混合物，并搅拌2小时。以二氯甲烷稀释该反应混合物，并以冷的饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并以甲苯进一步稀释。浓缩该混合物，并调节产物6，使维持为在甲苯中的0.2M溶液。
中间体7的合成
根据对异氰酸酯6的描述，制备异氰酸脂7。在磺酰胺合成步骤中，使用2-噻吩磺酰氯代替甲烷磺酰氯。
中间体8的合成 步骤A 将Dess-Martin全碘烷(periodinane)(30.25g；Aldrich)加至4-戊炔-1-醇，8a(4.15g，Aldrich)的溶液中，并搅拌所得的混合物45分钟，然后加入(叔-丁氧羰基亚甲基)三苯基正膦(26.75g；Aldrich)。搅拌所得的深色反应物过夜，以乙酸乙酯稀释，以亚硫酸钠水溶液、饱和的碳酸氢钠水溶液、水、盐水洗涤，并干燥。在减低的压力下除去挥发物，并通过硅胶柱层析纯化残余物，使用在己烷中的1％乙酸乙酯作为洗脱液，得到所需的化合物8b(3.92g)。也获得一些不纯的流份，但在此时将它搁置一边。
步骤B 使用在正-丙醇(20mL；Aldrich)中的烯8b(1.9g)、在正-丙醇(40mL)中的氨基甲酸苄酯(4.95g；Aldrich)、在水(79mL)中的NaOH(1.29g)、次氯酸叔-丁酯(3.7mL)、在正-丙醇(37.5mL)中的(DHQ)2PHAL(0.423g；Aldrich)和锇酸钾脱水物(0.1544g；Aldrich)，以及在Angew.Chem.Int.Ed.Engl(1998)，35，(23/24)，第2813-7页中提出的程序，得到粗产物，通过硅胶柱层析纯化，使用EtOAc∶己烷(1∶5)，得到所需的氨基醇8c(1.37g，37％)，为白色固体。
步骤C 将在二氧六环中的4M HCl(20mL；Aldrich)加至酯8c(0.700g)中，并将所得的混合物在室温下静置过夜。在减低的压力下除去挥发物，得到白色固体状的酸8d(0.621g)。
步骤D 在室温下将BOP试剂(3.65g；Sigma)加至羧酸8d(2.00g)的二氯甲烷(20mL)溶液和丙烯胺(0.616mL)中，接着加入三乙胺(3.45mL)，并搅拌所得的混合物过夜。使该反应混合物在EtOAc和10％HCl水溶液之间分配。分离有机相，以饱和的碳酸氢钠水溶液、水洗涤，干燥(硫酸镁)。通过硅胶柱层析纯化粗制的反应产物，使用(EtOAc∶己烷；70∶30)作为洗脱液，提供所需的酰胺8e(1.73g)，为粘性黄色油。
步骤E 在室温下搅拌在5mL三氟乙酸/二甲硫醚的4∶1混合物中的N-Cbz胺8e(85.8mg)的溶液大约3小时。在减低的压力下除去所有的挥发物。将产物8置于高真空下大约3小时，并直接使用不需进一步纯化。
中间体9的合成步骤1 将锌粉(21g，320mmol)、二氯锆苯(zirconecene dichloride)(14.04g，48mmol)加入到THF(200mL)中的1a(13.24g，40mmol，按照Monn和Valli，J.Org.Chem.，1994，59，2773-2778的描述来制备)的溶液中，且最后逐滴加入二溴甲烷(6.18mL，44mmol)。将该反应混合物加热至回流5小时。然后将其冷却至室温，然后使用冰浴冷却至0℃。逐滴加入水(小心放热的)，直到停止放出气体为止。加入乙醚(400mL)，并通过硅藻土垫过滤该混合物。以乙醚(200mL)洗涤滤饼，并以水(2×500mL)、1N HCl水溶液(500mL)、水(500mL)、盐水(500mL)洗涤合并的滤液，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过快速层析法纯化粗制的物质，使用10/90至20/80的EtOAc/己烷，得到6.82g的9a，为淡黄色的油。
步骤2 在0℃、氮气氛下，将二乙基锌(1M在庚烷中，73mL，73mmol)加至二氯甲烷(100mL)中。在30分钟内逐滴加入三氟乙酸(5.6mL，73mmol)。维持温度另外15-20分钟。然后在20分钟内逐滴加入二碘甲烷(5.9mL，73mmol)，并维持温度另外15-20分钟。最后，逐滴加入在二氯甲烷(20mL)中的9a(4.8g，14.6mmol)的溶液。在16小时内将该反应混合物加温至室温。然后将该反应混合物冷却至0℃，并通过慢慢加入饱和的氯化铵溶液(200mL)使其猝灭。分离液层，并以二氯甲烷(125mL)萃取。以饱和的碳酸氢钠、盐水洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过快速层析法纯化粗制的物质，使用15/85的EtOAc/己烷，得到2.89g的9b。
步骤3 将在二氧六环中的4M HCl(2mL)和催化量的10％披钯碳加入到乙醇(100mL)中的9b(2.41g，7.03mmol)的充分搅拌的溶液中。在室温下使用充满氢气的气球氢化该混合物5小时。在此时加入其它部分的催化剂，并在16小时内氢化该混合物。中止该反应，通过硅藻土垫过滤，以乙醇洗涤，并浓缩滤液，得到1.74g的9，可直接使用不需进一步纯化。
中间体10的合成 使用上述的氢化作用程序(步骤3)，使用氧化铂(IV)代替10％披钯碳，将化合物9b转变为所需物质10。
合成 步骤A 将在200mL无水THF中的4，4-二甲基戊二酰亚胺11a(1.5当量，4.86g，Aldrich)的溶液冷却至0℃，并以三苯膦(3当量，18.07g)和S-Boc-叔-丁基甘氨醇(glycinol)11b(5g，Aldrich)处理。逐滴加入偶氮二羧酸二异丙酯(2.5当量，11.3mL，d 1.027)，并在0℃下搅拌所得的溶液。在10分钟后，该混合物变成淤浆，并继续搅拌过夜(0至25℃)。在减低的压力下浓缩该混合物，并将残余物溶解于80mL乙醚中。加入己烷(100mL)，并滤掉沉淀的固体。浓缩滤液至其一半体积，并再度加入己烷(100mL)。滤掉固体。在减低的压力下浓缩滤液。在硅胶上层析残余物(乙酸乙酯/己烷；2∶8)，得到白色固体状的产物11c(4.0g；51％)。
步骤B 将N-Boc保护的胺11c(3g)溶解于50mL在二氧六环中的4M HCl的溶液中。搅拌该反应混合物大约1小时，直到通过TLC分析(乙酸乙酯/己烷；2∶8)确定起始原料已经耗尽为止。在减低的压力下除去所有的挥发物，得到白色固体状的产物11d(2.4g，98％)。
步骤C 以40mL饱和的碳酸氢钠水溶液处理在40mL二氯甲烷中的胺盐酸盐11d(1.0g)的溶液，并在0℃下剧烈地搅拌10分钟。停止搅拌，并容许分离各层。通过针头一次性在有机层(下层)中加入光气(10mL在甲苯中的20％溶液)。在加入后立刻在0℃下剧烈地搅拌该混合物10分钟，并在室温下进一步搅拌2.5小时。以100mL二氯甲烷稀释该混合物，并分离各层。以30mL冷的饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机层，并经硫酸镁干燥。过滤有机层，并以50mL甲苯稀释滤液。浓缩所得的溶液，并将产物11e保持为0.241M溶液。
步骤D 将在40mL无水DHF中的酸1(2.19g)的溶液冷却至0℃，并以碳酸铯(1.2当量，1.22g)处理，接着加入苄基溴(1.2当量，0.85mL，d1.438)。搅拌该反应混合物24小时(温度0至25℃)。以乙酸乙酯(350mL)稀释该混合物，并以水(3×50mL)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度己烷对乙酸乙酯/己烷 25∶75)，得到澄清油状的产物11f(2.1g；77％)。
步骤E 将N-Boc保护的胺11f(2.1g)溶解于50mL在二氧六环中的4MHCl溶液中。在室温下搅拌所得的溶液，直到通过TLC分析(乙酸乙酯/己烷；25∶75)确定所有的起始原料均已耗尽为止。在1小时后，在减低的压力下除去所有的挥发物，得到白色固体状的产物11g(1.8g；98％)。
步骤F
在0℃下，以N-甲基吗啉(2.5当量，0.7mL，d 0.920)处理在10mL无水二氯甲烷中的胺盐酸盐11g的溶液。搅拌所得的溶液5分钟，接着加入异氰酸酯11e(1.3当量，13.6mL在甲苯中的0.241M溶液)。搅拌该反应混合物5分钟，并移除冷却浴。进一步搅拌该混合物2小时。使该混合物在二氯甲烷(200mL)和1M HCl水溶液(50mL)之间分配。分离各层，并以饱和的碳酸氢钠水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；5∶95至35∶65)，得到白色固体状的产物11h(1.33g；84％)。
步骤G 将苄基酯11h(1.3g)溶解于30mL乙酸乙酯中，并以载于碳上的20％二氢氧化钯(0.1mol％；145mg)处理。在50磅/平方英寸下氢化该不均匀的混合物2小时。以200mL二氯甲烷稀释该混合物，并通过短硅藻土柱过滤。在减低的压力下浓缩滤液，得到白色固体状的产物11(1.1g；98％)。
合成
步骤A 按顺序，以N，O-二甲基羟胺盐酸盐(1.1当量，986mg)、BOP试剂(1.1当量，4.47g)和N-甲基吗啉(3.3当量，3.3mL，d 0.920)处理在100mL无水二氯甲烷和5mLDMF中的酸12a(2g)的溶液。将该混合物加热至50℃过夜。将该反应混合物浓缩至其体积的一半，并以400mL乙酸乙酯稀释。以水(80mL)、1M HCl水溶液(80mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(80mL)和盐水(80mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；5∶95至3∶7)，得到澄清油状的产物12b。
步骤B 将在100mL无水THF中的酰胺12b(2.2g)的溶液冷却至0℃。逐滴加入氢化铝锂溶液(1.3当量)。在5分钟后移除冷却浴，并使该混合物达到室温。TLC分析(乙酸乙酯/己烷；2∶8)显示所有的起始原料均已耗尽。通过加入数滴饱和的硫酸氢钠水溶液，小心地使过量的LAH猝灭。以200mL乙醚稀释该混合物，并分成小部分加入饱和的硫酸氢钠水溶液，直到沉淀出白色固体为止。通过硅藻土过滤该混合物，并以50mL盐水洗涤滤液。有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度乙酸乙酯/己烷；5∶95至4∶6)，得到无色油状的醛产物12c。
步骤C 以异腈(1.1当量，680mg)和乙酸(2当量，1.02mL，d 1.0149)处理在100mL无水二氯甲烷中的醛12c(1.8g)的溶液。搅拌该混合物过夜。在真空下除去所有的挥发物，并在硅胶上层析残余物(梯度乙酸乙酯/己烷；2∶8至6∶4)，得到白色固体状的产物12d。
步骤D 以氢氧化锂一水合物处理在60mL THF/MeOH/水的1∶1∶1混合物中的乙酸酯12d(1.6g)的溶液，并搅拌大约1小时，直到通过TLC分析(乙酸乙酯/己烷；1∶1)确定所有的起始原料均已耗尽为止。在旋转蒸发器中除去挥发物，并以二氯甲烷(150mL)稀释残余物。分离各层，以30mL饱和的碳酸氢钠水溶液稀释含水层，并以二氯甲烷(3×80mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到白色固体状的产物12e。
步骤E 将N-Boc保护的胺12e(1.5g)溶解于20mL在二氧六环中的4MHCl中。搅拌该反应混合物大约1小时，直到所有的起始原料均已耗尽为止。在真空下除去所有的挥发物，得到白色固体状的产物12。
合成 依据对制备胺盐酸盐12描述的合成路径，制备胺盐酸盐13。使用市售的N-Boc-D，L-正缬氨酸作为起始原料，并使用烯丙基异氰化物代替环丙基异氰化物，形成相应的烯丙基酰胺。
合成 依据对制备胺盐酸盐12描述的合成路径，制备胺盐酸盐14。使用N-Boc-D，L-正亮氨酸作为起始原料，并使用烯丙基异氰化物代替环丙基异氰化物，形成相应的烯丙基酰胺。
合成 依据对制备胺盐酸盐12描述的合成路径，制备胺盐酸盐15。使用市售的N-Boc-β-环丙基-D，L-丙氨酸作为起始原料，并使用烯丙基异氰化物代替环丙基异氰化物，形成相应的烯丙基酰胺。
抑制剂的合成制备实施例A 步骤1 在0℃下，搅拌在5mL无水二氯甲烷和5mL无水DMF中的酸1(255mg)的溶液，并以HATU(368mg)处理。加入胺盐酸盐2(201mg)，接着加入N-甲基吗啉(0.42mL)。将该反应物逐渐加温至室温，并搅拌过夜。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于100mL乙酸乙酯中。以1N HCl水溶液(15mL)、饱和NaHCO3水溶液(15mL)、水(15mL)、盐水(15mL)洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤并在减低的压力下浓缩，得到所需的产物A1。不需对产物进行进一步的纯化。
步骤2
以EDCl(1.3g)和二氯乙酸(0.42mL，d 1.563)处理在20mL甲苯/DMSO的1∶1混合物中的A1(360mg)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物大约3小时。以二氯甲烷(100mL)稀释该反应混合物，并以饱和的NaHCO3水溶液(15mL)、1N HCl水溶液(15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；2∶8至5∶5)，得到产率84％的产物A2。
步骤3 以10mL甲酸处理N-Boc保护的胺A2。搅拌所得的溶液2小时。在减低的压力下除去所有的挥发物。不需对产物A3进行更进一步的纯化。
步骤4 将N-甲基吗啉(0.037mL，d 0.920)加入到1mL无水二氯甲烷中的胺盐A3的溶液中。在冰水浴中冷却所得的溶液，并慢慢地加入在甲苯中的异氰酸酯的溶液(2.5mL的0.135M溶液)。搅拌该混合物2小时(温度0至25℃)。以60mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1NHCl水溶液洗涤。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物A(15mg)，产率20％。HRMS(FAB)C37H53N6O7[M+H]的计算值693.3976；实验值693.3987。
制备实施例B 步骤1 将N-甲基吗啉(0.037mL，d 0.920)加入到1mL无水二氯甲烷中的胺盐A3的溶液中。在冰水浴中冷却所得的溶液，并慢慢地加入在甲苯中的异氰酸酯4的溶液(0.64mL的0.538M溶液)。搅拌该混合物2小时(温度0至25℃)。以60mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1NHCl水溶液洗涤。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物B(14.6mg)，产率22％。HRMS(FAB)C31H50N5O6[M+H]的计算值588.3761；实验值588.3757。
制备实施例C 步骤1 将N-甲基吗啉(0.037mL，d 0.920)加入到1mL无水二氯甲烷中的胺盐A3的溶液中。在冰水浴中冷却所得的溶液，并慢慢地加入在甲苯中的异氰酸酯5的溶液(1.4mL的0.250M溶液)。搅拌该混合物2小时(温度0至25℃)。以60mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1NHCl水溶液洗涤。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物C(9.7mg)，产率13％。HRMS(FAB)C34H58N5O7S[M+H]的计算值680.4057；实验值680.4066。
制备实施例D 步骤1 将N-甲基吗啉(0.037mL，d 0.920)加入到1mL无水二氯甲烷中的胺A3的溶液中。在冰水浴中冷却所得的溶液，并慢慢地加入在甲苯中的异氰酸酯6的溶液(1.0mL的0.340M溶液)。搅拌该混合物2小时(温度0至25℃)。以60mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1N HCl水溶液洗涤。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物D(23mg)，产率32％。HRMS(FAB)C31H55N6O7S[M+H]的计算值655.3853；实验值655.3870。
制备实施例E 步骤1 将N-甲基吗啉(0.037mL，d 0.920)加入到1mL无水二氯甲烷中的胺A3的溶液中。在冰水浴中冷却所得的溶液，并慢慢地加入在甲苯中的异氰酸酯7的溶液(1.4mL的0.250M溶液)。搅拌该混合物2小时(温度0至25℃)。以60mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1N HCl水溶液洗涤。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物D(11.5mg)，产率14％。HRMS(FAB)C34H55N6O7S2[M+H]的计算值723.3574；实验值723.3568。
制备实施例F 步骤1 在0℃下搅拌在10mL无水二氯甲烷和10mL无水DMF中的酸1(280mg)的溶液，并以HATU(1.4当量，405mg)处理。加入在二氯甲烷中的胺盐8(1.3当量，569mg)。然后加入N-甲基吗啉(4当量，0.33mL，d 0.920)。在-20℃下搅拌该反应混合物48小时。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于200mL乙酸乙酯中。以水(30mL)、1N HCl水溶液(30mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。产物F1可直接使用，不需进一步纯化。
步骤2 以Dess-Martin全碘烷(periodinane)(3当量，966mg)处理在20mL无水二氯甲烷中的羟基酰胺F1(415mg)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物45分钟。以1M硫代硫酸钠水溶液(15mL)和饱和的碳酸氢钠水溶液(15mL)处理该混合物，并搅拌15分钟。以二氯甲烷(3×50mL)萃取该混合物。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至4∶6)，得到无色油状的产物F2。
步骤3 在室温下，将N-Boc保护的胺F2(155mg)溶解于5mL在二氧六环中的4M HCl中。搅拌该混合物，直到通过TLC分析(丙酮/己烷；3∶7)确定所有的起始原料均已耗尽为止。在45分钟后，在真空下除去所有的挥发物，得到白色固体状的产物F3，可直接使用不需进一步纯化。
步骤4 以N-甲基吗啉(3.7当量，0.06mL，d 0.920)处理在2mL无水二氯甲烷中的胺盐酸盐F3(67mg)的溶液，并冷却至0℃。逐滴加入异氰酸酯(0.75mL在甲苯中的0.2M溶液)，并搅拌该混合物过夜(温度0至25℃)。以50mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1M HCl水溶液和15mL饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物F。HRMS(FAB)C36H58N5O7S[M+H]的计算值704.4057；
实验值704.4071。
制备实施例G 步骤1 在0℃下搅拌在2mL无水二氯甲烷和1mL无水DMF中的酸11(60mg)的溶液，并以HATU(1.4当量，60mg)处理。加入胺盐12(1.2当量，30mg)，接着加入N-甲基吗啉(4当量，0.05mL，d 0.920)。搅拌该反应混合物过夜(温度0至25℃)。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于50mL乙酸乙酯中。以水(20mL)、1M HCl水溶液(10mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。产物G1可直接使用，不需进一步纯化。
步骤2 以Dess-Martin全碘烷(periodinane)(2.0当量，95mg)处理在10mL无水二氯甲烷中的羟基酰胺G1(0.112mmol)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物30分钟。以1M硫代硫酸钠水溶液(10mL)处理该混合物，并搅拌5分钟。也加入饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)，并继续搅拌另外10分钟。以二氯甲烷(3×30mL)萃取该混合物。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至4∶6)，得到白色固体状的产物G(63mg；80％)。HRMS(FAB)C37H61N6O7[M+H]的计算值701.4601；实验值701.4614。
制备实施例H 步骤1 在0℃下搅拌在2mL无水二氯甲烷和1mL无水DMF中的酸11(60mg)的溶液，并以HATU(1.4当量，60mg)处理。加入胺盐13(1.2当量，30mg)，接着加入N-甲基吗啉(4当量，0.05mL，d 0.920)。搅拌该反应混合物过夜(温度0至25℃)。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于50mL乙酸乙酯中。以水(20mL)、1M HCl水溶液(10mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。产物H1可直接使用，不需进一步纯化。
步骤2 以Dess-Martin全碘烷(periodinane)(2.0当量，95mg)处理在10mL无水二氯甲烷中的羟基酰胺H1(0.112mmol)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物30分钟。以1M硫代硫酸钠水溶液(10mL)处理该混合物，并搅拌5分钟。也加入饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)，并继续搅拌另外10分钟。以二氯甲烷(3×30mL)萃取该混合物。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至45∶55)，得到白色固体状的产物H(64mg；82％)。HRMS(FAB)C37H61N6O7[M+H]的计算值701.4601；实验值701.4607。
制备实施例I 步骤1 在0℃下搅拌在2mL无水二氯甲烷和1mL无水DMF中的酸11(60mg)的溶液，并以HATU(1.4当量，60mg)处理。加入胺盐14(1.2当量，32mg)，接着加入N-甲基吗啉(4当量，0.05mL，d 0.920)。搅拌该反应混合物过夜(温度0至25℃)。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于50mL乙酸乙酯中。以水(20mL)、1M HCl水溶液(10mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。产物I1可直接使用，不需进一步纯化。
步骤2 以Dess-Martin全碘烷(periodinane)(2.0当量，95mg)处理在10mL无水二氯甲烷中的羟基酰胺I1(0.112mmol)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物30分钟。以1M硫代硫酸钠水溶液(10mL)处理该混合物，并搅拌5分钟。也加入饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)，并继续搅拌另外10分钟。以二氯甲烷(3×30mL)萃取该混合物。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至45∶55)，得到白色固体状的产物I(64mg；80％)。
制备实施例J
步骤1 在0℃下搅拌在2mL无水二氯甲烷和1mL无水DMF中的酸11(60mg)的溶液，并以HATU(1.4当量，60mg)处理。加入胺盐15(1.2当量，31mg)，接着加入N-甲基吗啉(4当量，0.05mL，d 0.920)。搅拌该反应混合物过夜(温度0至25℃)。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于50mL乙酸乙酯中。以水(20mL)、1M HCl水溶液(10mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。产物J1可直接使用，不需进一步纯化。
步骤2 以Dess-Martin全碘烷(periodinane)(2.0当量，95mg)处理在10mL无水二氯甲烷中的羟基酰胺J1(0.112mmol)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物30分钟。以1M硫代硫酸钠水溶液(10mL)处理该混合物，并搅拌5分钟。也加入饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)，并继续搅拌另外10分钟。以二氯甲烷(3×30mL)萃取该混合物。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至45∶55)，得到白色固体状的产物J(57mg；71％)。HRMS(FAB)C38H61N6O7[M+H]的计算值713.4601；实验值713.4607。
本发明涉及新的HCV蛋白酶抑制剂。可在其抑制HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶的能力上，证明该用途。通过下列的体外测定，说明这类证明的一般程序。
HCV蛋白酶抑制活性的测定分光光度计测定可通过依据R.Zhang等，Analytical Biochemistry，270(1999)268-275描述的程序(其公开内容以引用的方式结合到本文中)，对本发明的化合物进行HCV丝氨酸蛋白酶的分光光度测定。该测定以适合连续监视HCV NS3蛋白酶活性的色原酯(chromogenic ester)酶解物的蛋白水解作用为基础。该酶解物衍生自NS5A-NS5B接合序列的P侧(Ac-DTEDVVX(Nva)，其中X＝A或P)，其C-终端羧基基团被用四个不同发色团的醇(3-或4-硝基酚、7-羟基-4-甲基-香豆素或4-苯基偶氮苯酚)之一酯化。下文解释了这些新的分光光度测定的酯酶解物的合成、鉴定和应用，以便进行HCV NS3蛋白酶抑制剂的高通过量筛选和详细的动力学评估。
材料和方法材料从Sigma Chemical Company(St.Louis，Missouri)获得与测定有关的缓冲液的化学试剂。肽合成的试剂则得自AldrichChemicals、Novabiochem(San Diego，California)、Applied Biosystems(Foster City，California)和Perseptive Biosystems (Framingham，Massachusetts)。以手工或在自动ABI 431A型合成器(得自AppliedBiosystems)上合成肽。UV/VIS分光计LAMBDA 12型得自PerkinElmer(Norwalk，Connecticut)，而96-孔UV培养板则获自Corning(Corning，New York)。预热块可得自USA Scientific(Ocala，Florida)，且96-孔培养板旋转器(vortexer)则得自Labline Instruments(MelrosePark，Illinois)。具有单色仪的Spectramax Plus微量滴定板读取器获自Molecular Devices(Sunnyvale，California)。
酶制备通过使用先前发表的程序(D.L.Sali等，Biochemistry，37(1998)3392-3401)，制备重组的异种二聚体的HCV NS3/NS4a蛋白酶(strain la)。通过Biorad染色法，使用先前通过氨基酸分析定量的重组HCV蛋白酶标准物，确定蛋白浓度。在开始测定的前，使用BioradBio-Spin P-6预先包装的管柱，以测定缓冲液(25mM MOPS pH6.5、300mM NaCl、10％甘油、0.05％月桂基麦芽糖苷、5μM EDTA和5μM DTT)交换酶储备缓冲液(50mM磷酸钠pH8.0、300mM NaCl、10％甘油、0.05％月桂基麦芽糖苷和10mM DTT)。
酶解物合成和纯化按照R.Zhang等(出处同上)的报告，进行酶解物的合成，并通过使用标准方案(K.Barlos等，Int.J.Pept.Protein Res.，37(1991)，513-520)，使Fmoc-Nva-OH锚定在2-氯三苯甲基氯树脂上来启动。接着使用Fmoc化学，以手工或在自动ABI 431型肽合成器上组装肽。通过在二氯甲烷(DCM)中的10％乙酸(HOAc)和10％三氟乙醇(TFE)处理30分钟，或通过在DCM中的2％三氟乙酸(TFA)处理10分钟，从树脂上裂解N-乙酰化且完全保护的肽片段。以共沸方式蒸发合并的滤液和DCM洗涤液(或以Na2CO3水溶液重复萃取)，除去在裂解时使用的酸。将DCM相经Na2SO4干燥，并蒸发。
使用标准酸-醇偶联程序(K.Holmber等，Acta Chem.Scand.，B33(1979)410-412)，组装酯酶解物。将肽片段溶解于无水吡啶(30-60mg/mL)中，在其中加入10摩尔当量的发色团和催化量(0.1当量)的对-甲苯磺酸(pTSA)。加入二环己基碳化二亚胺(DCC，3当量)，以启动偶联反应。通过HPLC监测产物形成，并可发现在室温下12-72小时后完成反应。在真空下蒸发吡啶溶剂，并通过与甲苯共沸蒸发进一步除去。用在DCM中的95％TFA处理2小时，将肽酯脱保护，并以无水的二乙醚萃取3次，除去过量的发色团。在C3或C8管柱上，使用30％至60％乙腈梯度(使用6倍的柱体积)，通过逆相HPLC纯化脱保护的酶解物。在HPLC纯化后的整体产率可能是大约20-30％。可通过电喷雾电离质谱分析，证实分子质量。以干粉形式将酶解物在干燥条件下储存。
酶解物和产物的光谱在pH6.5测定缓冲液中，获得酶解物和相应的发色团产物的光谱。在最佳非高峰波长处(对3-Np和HMC为340nm，对PAP为370nm，而对4-Np为400nm)，在1-cm比色杯中，使用多倍稀释测定消光系数。将最佳非高峰波长定义为在酶解物与产物之间，产生吸光度的最大分数差异(产物OD-酶解物OD/酶解物OD)的波长。
蛋白酶测定在30℃下，在96-孔微量滴定板中，使用200μl反应混合物进行HCV蛋白酶测定。测定缓冲液条件(25mM MOPS pH6.5，300mM NaCl，10％甘油，0.05％月桂基麦芽糖苷，5μM EDTA和5uM DTT)是最适合NS3/NS4a异二聚体(heterodimer)的(D.L.Sali等，出处同上)。通常，将缓冲液、酶解物和抑制剂的150μl混合物放在孔中(DMSO的终浓度≤4％体积/体积)，并容许在30℃下预先温育大约3分钟。然后使用50μl在测定缓冲液中的预热的蛋白酶(12nM，30℃)启动反应(终体积200μl)。在整个测定长度(60分钟)内，使用装有单色仪的Spectromax Plus微量滴定板读取器，在合适的波长下(对3-Np和HMC为340nm，对PAP为370nm，而对4-Np为400nm)，监测培养板的吸光度变化(可利用使用截止滤纸的培养板读取器获得可接受的结果)。在合适的波长下，对作为无-酶水解作用的对照组的无酶空白组，监视在Nva和发色团之间的酯键的氮白水解裂解作用。在30-倍酶解物浓度范围(～6-200μM)内，进行酶解物动力学参数的评估。使用线性回归确定初速，并通过使用非线性回归分析，使数据拟合Michaelis-Menten方程式，获得动力学常数(Mac Curve Fit 1.1，K.Raner)。在假定酶完全是有活性的情况下计算转换数(Turnovernumbers)(kcat)。
评估抑制剂和失活剂在固定浓度的酶和酶解物下，根据为了竞争性抑制动力学而重新整理的Michaelis-Menten方程式vo/vi＝1+[I]o/(Ki(1+[S]o/Km))，通过vo/vi对抑制剂浓度([I]o)作图，以实验方式确定竞争抑制剂Ac-D-(D-Gla)-L-I-(Cha)-C-OH(27)、Ac-DTEDVVA(Nva)-OH和Ac-DTEDVVP(Nva)-OH的抑制常数(Ki)，其中vo为未被抑制的初速，vi为在抑制剂存在下，在任何给定的抑制剂浓度([I]o)下的初速，及[S]o是所使用的酶解物浓度。使用线性回归拟合所得数据，并使用所得的斜率1/(Ki(1+[S]o/Km)来计算Ki值。在下文表2中示出一些本发明化合物所得的Ki*值(按毫微摩尔计)。
表2
表2A列举另外的本发明化合物及其活性表2A
Ki*的范围表示A≤75nM；75＜B≤250nM；C＞250nM。
虽然已经结合上文所述的具体实施方案一起说明本发明，但其许多改变、修饰和其它变化对本领域普通技术人员而言将是显而易见的。打算使所有的这类改变、修饰和变化落入本发明的精神及范围内。
权利要求
1.一种化合物，或所述化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物，或所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物或酯，所述化合物具有如式1所示的一般结构 式1其中R1为H、OR8、NR9R10或CHR9R10，其中R8、R9和R10可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基-、烯基-、炔基-、芳基-、杂烷基-、杂芳基-、环烷基-、杂环基-、芳烷基-和杂芳烷基，或在NR9R10中的R9和R10彼此连接，使NR9R10形成四至八元的杂环基，而或者同样独立地，在CHR9R10中的R9和R10彼此连接，使CHR9R10形成四至八元的环烷基；R2和R3可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；Y选自下列部分 其中G为NH或O；且R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基，或者(i)R17和R18彼此独立地连接，形成三至八元的环烷基或杂环基；(ii)同样独立地，R15和R19彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iii)同样独立地，R15和R16彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iv)同样独立地，R15和R20彼此连接，形成四至八元的杂环基；(v)同样独立地，R22和R23彼此连接，形成三至八元的环烷基或四至八元的杂环基；且(vi)同样独立地，R24和R25彼此连接，形成三至八元的环烷基或四至八元的杂环基；其中每个所述烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基可以是未取代的，或任选由一个或多个选自以下的部分独立地取代羟基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、烷氨基、芳氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、亚磺酰氨基、烷基、芳基、杂芳基、烷基亚磺酰氨基、芳基亚磺酰氨基、酮基、羧基、烷氧羰基、羧酰氨基、烷氧基羰氨基、烷氧基羰氧基、烷基脲基、芳基脲基、卤代、氰基和硝基。
2.权利要求1的化合物，其中R1为NR9R10，且R9为H，R10为H或R14，其中R14为H、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、芳基-烷基、烯基、炔基或杂芳基-烷基。
3.权利要求2的化合物，其中R14为选自下列的基团
4.权利要求1的化合物，其中R2为选自下列的部分
5.权利要求1的化合物，其中R3为选自下列的基团 其中R31为OH或O-烷基；和R32为H、C(O)CH3、C(O)OtBu或C(O)N(H)tBu。
6.权利要求5的化合物，其中R3为选自下列的部分
7.权利要求1的化合物，其中G为NH。
8.权利要求7的化合物，其中Y选自下列的部分 其中R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基，或者(i)R17和R18彼此独立地连接，形成三至八元的环烷基或杂环基；(ii)同样独立地，R15和R19彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iii)同样独立地，R15和R16彼此连接，形成四至八元的杂环基；且(iv)同样独立地，R15和R20彼此连接，形成四至八元的杂环基；或其中每个所述烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基可以是未取代的，或任选由一个或多个选自以下的部分独立地取代羟基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、烷氨基、芳氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、亚磺酰氨基、烷基、芳基、杂芳基、烷基亚磺酰氨基、芳基亚磺酰氨基、酮基、羧基、烷氧羰基、羧酰氨基、烷氧基羰氨基、烷氧基羰氧基、烷基脲基、芳基脲基、卤代、氰基和硝基。
9.权利要求8的化合物，其中所述部分 选自 其中Y32为选自下列的基团
10.权利要求8的化合物，其中Y选自
11.权利要求1的化合物，其中所述部分 选自下列的结构
12.权利要求1的化合物，其中R1为NHR14，其中R14为选自下列的基团 R2为选自下列的部分 R3为选自下列的部分 所述部分 选自 且Y选自
13.一种药用组合物，它包括作为活性成分的至少一种权利要求1的化合物。
14.权利要求13的药用组合物，它用于治疗与HCV有关的病症。
15.权利要求14的药用组合物，它还包含至少一种药学上可接受的载体。
16.权利要求15的药用组合物，它还包含至少一种抗病毒剂。
17.权利要求16的药用组合物，它还另外包含至少一种干扰素。
18.权利要求17的药用组合物，其中所述至少一种抗病毒剂是利巴韦林，及至少一种干扰素是α-干扰素或聚乙二醇化的干扰素。
19.一种治疗与HCV有关的病症的方法，所述方法包括给予需要这类治疗的患者药用组合物，所述药用组合物包含治疗有效量的至少一种权利要求1的化合物。
20.权利要求19的方法，其中所述给予为口服或皮下给予。
21.权利要求1的化合物在制备治疗与HCV有关的病症的药物中的用途。
22.一种制备用于治疗与HCV有关的病症的药用组合物的方法，所述方法包括使至少一种权利要求1的化合物与至少一种药学上可接受的载体产生紧密物理接触。
23.一种显示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物，或所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物或酯，所述化合物选自具有下列结构的化合物
24.一种治疗与HCV有关的病症的药用组合物，所述组合物包含治疗有效量的一或多种权利要求23的化合物，以及药学上可接受载体。
25.权利要求24的药用组合物，它还含有至少一种抗病毒剂。
26.权利要求25的药用组合物，它还另外含有至少一种干扰素或PEG-干扰素α缀合物。
27.权利要求26的药用组合物，其中所述至少一种抗病毒制剂是利巴韦林，及所述至少一种干扰素是α-干扰素或聚乙二醇化的干扰素。
28.一种治疗与丙型肝炎病毒有关病症的方法，该方法包括给予有效量的一种或多种权利要求23的化合物。
29.一种调节丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶活性的方法，该方法包括使HCV蛋白酶与一种或多种权利要求23的化合物接触。
30.一种治疗、预防或改善丙型肝炎的一或多种症状的方法，该方法包括给予有效量的一种或多种权利要求23的化合物。
31.权利要求30的方法，其中所述HCV蛋白酶是NS3/NS4a蛋白酶。
32.权利要求31的方法，其中所述化合物抑制HCV NS3/NS4a蛋白酶。
33.一种调节丙型肝炎病毒(HCV)多肽的加工的方法，该方法包括在其中所述多肽被加工的条件下，使含有HCV多肽的组合物与一种或多种权利要求23的化合物接触。
34.一种治疗与HCV有关病症的药剂的方法，该方法包括给予需要这类治疗的患者药用组合物，所述组合物包含治疗有效量的至少一种化合物，或所述化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物，或所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物或酯，所述选自下列的化合物
35.纯化形式的权利要求1的化合物。
全文摘要
本发明公开新的式I的化合物，其具有HCV蛋白酶抑制剂活性，以及制备这类化合物的方法。在另一个实施方案中，本发明公开包含这类化合物的药用组合物，以及使用它们来治疗与HCV蛋白酶有关的病症的方法。其中R
文档编号A61K38/04GK1946692SQ200580012857
公开日2007年4月11日 申请日期2005年2月24日 优先权日2004年2月27日
发明者F·G·恩裘洛吉, S·文卡特拉曼, A·阿拉萨潘, F·贝拉斯克斯, V·M·吉里加瓦拉布汉 申请人:先灵公司
技术领域：
本发明涉及新的丙型肝炎病毒(″HCV″)蛋白酶抑制剂、含有一或多个这类抑制剂的医药组合物、制备这类抑制剂的方法，以及使用这类抑制剂治疗丙型肝炎和相关病症的方法。本发明还公开新的化合物，其含有作为HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶抑制剂的双环P2部分。本申请要求2004年2月27日提交的美国临时申请系列号60/548,655的优先权。
背景技术：
丙型肝炎病毒(HCV)是(+)-有意义单股RNA病毒，其已经成为非-甲，非-乙型肝炎(NANBH)的主要病因，特别是在与血液-有关的NANBH(BB-NANBH)(参见，国际专利申请公布号WO 89/04669和欧洲专利申请公布号EP 381 216)中。NANBH与其它类型的病毒引起的肝脏疾病，如甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、δ型肝炎病毒(HDV)、巨细胞病毒(CMV)和Epstein-Barr病毒(EBV)，以及其它形式的肝脏疾病，如酒精中毒和原发胆汁性肝硬化显然有别。
最近，已经鉴定、克隆并表达多肽加工和病毒复制所需的HCV蛋白酶。(参见，例如美国专利第5,712,145号)。这种大约3000个氨基酸的多蛋白，从氨基终端到羧基终端，含有壳包核酸蛋白(C)、包膜蛋白(E1和E2)，以及数个非-结构蛋白(NS1、2、3、4a、5a和5b)。NS3是大约68kda的蛋白，由HCV基因组的大约1893个核苷酸编码，并具有两个不同的结构域(a)丝氨酸蛋白酶结构域，由大约200个N-终端的氨基酸所组成；以及(b)在蛋白的C-终端的RNA-依赖性ATP酶结构域。由于在蛋白序列、整体三维结构和催化机制上的类似性，因而认为NS3蛋白酶是胰凝乳蛋白酶家族的成员。其它胰凝乳蛋白酶样的酶是弹性蛋白酶、因子Xa、凝血酶、胰蛋白酶、血纤维蛋白溶酶、尿激酶、tPA和PSA。HCV NS3丝氨酸蛋白酶负责在NS3/NS4a、NS4a/NS4b、NS4b/NS5a和NS5a/NS5b接合处的多肽(多蛋白)的蛋白水解作用，并因此负责在病毒复制期间产生四个病毒蛋白。这制备出HCV NS3丝氨酸蛋白酶，一种有吸引力的抗病毒化学疗法的标靶。本发明化合物可抑制这类蛋白酶。它们也可调节丙型肝炎病毒(HCV)多肽的加工。
已经确定NS4a蛋白，一种大约6kda的多肽，是NS3的丝氨酸蛋白酶活性的辅因子。由NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶自动切割NS3/NS4a接合发生在分子内(即顺式)，而以分子间的方式加工其它切割位置(即反式)。
HCV蛋白酶的天然切割位置的分析，显示在P1处出现半胱氨酸并在P1′处出现丝氨酸，且在NS4a/NS4b、NS4b/NS5a和NS5a/NS5b接合处中严格地保留这些残基。NS3/NS4a接合处在P1处含有苏氨酸，并在P1′处含有丝氨酸。假定在NS3/NS4a处的Cys→Thr取代，说明在该接合处需要顺而非反式加工。参见，例如，Pizzi等(1994)Proc.Natl.Acad.Sci(USA)91888-892，Failla等(1996)Folding & Design 135-42。NS3/NS4a切割位置也比其它位置更容忍突变生成。参见，例如，Kollykhalov等(1994)J.Virol.687525-7533。也发现在切割位置的上游区中的酸性残基需要有效的切割。参见，例如，Komoda等(1994)J.Virol.687351-7357。
已经报告了HCV蛋白酶的抑制剂，包括抗氧化剂(参见，国际专利申请公布号WO 98/14181号)、某些肽和肽类似物(参见，国际专利申请公布号WO 98/17679号，Landro等(1997)Biochem.369340-9348，Ingallinella等(1998)Biochem.378906-8914，Llinàs-Brunet等(1998)Bioorg.Med.Chem.Lett.81713-1718)、以70-氨基酸多肽水蛭蛋白酶抑制剂(eglin)c为基础的抑制剂(Martin等(1998)Biochem.3711459-11468，抑制剂亲和力选自人类胰脏分泌胰蛋白酶抑制剂(hPSTI-C3)和微型抗体(minibody)节目(repertoires)(MBip)(Dimasi等(1997)J.Virol.717461-7469)、cVHE2(一种″骆驼化的(camelized)″可变结构域抗体片段)(Martin等(1997)Protein Eng.10607-614)，以及α1-抗胰凝乳蛋白酶(ACT)(Elzouki等(1997)J.Hepat.2742-28)。最近已经公开一种核酶，其被设计成选择性地破坏丙型肝炎病毒RNA(参见，BioWorldToday 9(217)4(1998年11月10日，1998))。
也参考1998年4月30日发表的PCT公布号WO 98/17679(VertexPharmaceuticals incorporated)；1998年5月28日发表的WO 98/22496(F.Hoffmann-La Roche AG)；以及1999年2月18日发表的WO 99/07734(Boehringer Ingelheim Canada Ltd.)。
HCV已经涉及肝脏的肝硬化，并引起肝细胞癌。目前，罹患HCV感染的患者的预后很差。HCV感染比其它形式的肝炎更难治疗，因为缺乏与HCV感染有关的免疫力或减轻。目前的数据指出在诊断出肝硬化后的四年内，存活率低于50％。诊断出患有局限性可切除的肝细胞癌的患者，具有10-30％的五年存活率，而患有局限性不可切除的肝细胞癌的那些患者仅具有低于1％的五年存活率。
参考WO 00/59929(美国专利第6,608,027号，受让人BoehringerIngelheim(Canada)Ltd.；2000年10月12日发表)，其公开具有下式的肽衍生物
参考A.Marchetti等，Synlett，S1，1000-1002(1999)描述的HCV NS3蛋白酶的抑制剂的双环类似物的合成。其中公开的化合物具有下式 也参考W.Han等，Bioorganic & Medicinal Chem.Lett，(2000)10，711-713，其描述某些含有烯丙基和乙基官能度的α-酮酰胺、α-酮酯和α-二酮的制备。
也参考WO 00/09558(受让人Boehringer Ingelheim Limited；2000年2月24日发表)，其公开下式的肽衍生物
其中在本文中定义各种部分(elements)。该系列的示例性化合物为 也参考WO 00/09543(受让人Boehringer Ingelheim Limited；2000年2月24日发表)，其公开下式的肽衍生物
其中在本文中定义各种部分。该系列的示例性化合物为 也参考美国专利6,608,027(Boehringer Ingelheim Canada)，其公开下列类型的NS3蛋白酶抑制剂 其中在本文中定义各种部分。
丙型肝炎的现行治疗包括干扰素-α(INFα)和利巴韦林与干扰素的联合治疗。参见，例如，Beremguer等(1998)Proc.Assoc.Am.Physicians110(2)98-112。这些治疗苦恼于低的持续反应率和频繁的副作用。参见，例如Hoofnagle等(1997)N.Engl.J.Med.336:347。目前，没有可供HCV感染使用的疫苗。
进一步参考2001年10月11日发表的WO 01/74768(受让人VertexPharmaceuticals Inc)，其公开某些具有下列通式的化合物(R在本文中定义)，作为丙型肝炎病毒的NS3-丝氨酸蛋白酶抑制剂 在上述WO 01/74768中公开的特殊化合物具有下式 PCT公布号WO 01/77113；WO 01/081325；WO 02/08198；WO02/08256；WO 02/08187；WO 02/08244；WO 02/48172；WO 02/08251；以及2002年1月18日提交的正在待审的美国专利申请系列号10/052,386公开了作为丙型肝炎病毒的NS-3丝氨酸蛋白酶抑制剂的各种类型的肽和/或其它化合物。这些申请的公开内容全部以引用的方式和结合到本文中。
需要HCV感染的新的治疗和疗法。需要可用来治疗或预防或改善丙型肝炎的一或多种症状的化合物。
需要治疗或预防或改善丙型肝炎的一或多种症状的方法。
需要使用在本文中提供的化合物，调节丝氨酸蛋白酶，特别是HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶的活性的方法。
需要使用在本文中提供的化合物，调节HCV多肽的加工的方法。
发明概述在本发明的许多实施方案中，提供了新型的HCV蛋白酶抑制剂、含有一或多个所述化合物的药用组合物、制备包含一或多个此类化合物的药用组合物的方法，以及使用一或多个这类化合物或一或多个这类制剂治疗或预防HCV或改善一或多种丙型肝炎的症状的方法。也提供调节HCV多肽与HCV蛋白酶的相互作用的方法。在本文公开的化合物的中，抑制HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶活性的化合物是优选的。本发明公开化合物或所述化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物，或所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物或酯，所述化合物具有在结构式1中所示的通用结构 式1其中R1为H、OR8、NR9R10或CHR9R10，其中R8、R9和R10可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基-、烯基-、炔基-、芳基-、杂烷基-、杂芳基-、环烷基-、杂环基-、芳烷基-和杂芳烷基，或在NR9R10中的R9和R10彼此连接，使NR9R10形成四至八元的杂环基，而同样独立地，在CHR9R10中的R9和R10彼此连接，使CHR9R10形成四至八元的环烷基；R2和R3可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；Y选自下列部分 其中G为NH或O；且R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基，或者(i)R17和R18彼此独立地连接，形成三至八元的环烷基或杂环基；(ii)同样独立地，R15和R19彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iii)同样独立地，R15和R16彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iv)同样独立地，R15和R20彼此连接，形成四至八元的杂环基；(v)同样独立地，R22和R23彼此连接，形成三至八元的环烷基或四至八元的杂环基；且(vi)同样独立地，R24和R25彼此连接，形成三至八元的环烷基或四至八元的杂环基；其中每个所述烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基可以是未取代的，或任选由一个或多个选自以下的部分独立地取代羟基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、烷氨基、芳氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、亚磺酰氨基(sulfonamido)、烷基、芳基、杂芳基、烷基亚磺酰氨基、芳基亚磺酰氨基、酮基、羧基、烷氧羰基、酰氨基(carboxamido)、烷氧基羰氨基、烷氧基羰氧基、烷基脲基、芳基脲基、卤代、氰基和硝基。
在上文提及的定义中，优选的烷基由1至10个碳原子构成，优选的烯基或炔基由2至10个碳原子构成，优选的环烷基由3至8个碳原子构成，而优选的杂烷基、杂芳基或杂环烷基(杂环基)具有1至6个氧、氮、硫或磷原子。
由式1代表的化合物，本身或与在本文中公开的一或多种其它的适当药物联合，可用于治疗疾病，例如HCV、HIV、AIDS(获得性免疫缺陷综合征)及相关病症，并可用来调解丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶的活性，预防HCV，或改善丙型肝炎的一或多种症状。可利用本发明的化合物，以及包含这类化合物的药用组合物或制剂，来进行这类调节、治疗、预防或改善。不受理论的限制，相信HCV蛋白酶可能是NS3或NS4a蛋白酶。本发明的化合物可抑制这类蛋白酶。它们也可调节丙型肝炎病毒(HCV)多肽的加工。
详细描述在一个实施方案中，本发明公开由结构式1代表的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或酯，其中各部分如上所定义。
在另一个实施方案中，R1为NR9R10，且R9为H，R10为H或R14，
其中R14为H、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、芳基-烷基、烯基、炔基或杂芳基-烷基。
在另一个实施方案中，R14选自下列基团 在另一个实施方案中，R2选自下列部分
在进一步的实施方案中，R3选自下列的基团
其中R31为OH或O-烷基；且R32为H、C(O)CH3、C(O)OtBu或C(O)N(H)tBu。
在另外的实施方案中，R3选自下列部分
在另一个实施方案中，G为NH。
在进一步的实施方案中，Y选自下列的部分
其中R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基，或者(i)R17和R18彼此独立地连接，形成三至八元的环烷基或杂环基；(ii)同样独立地，R15和R19彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iii)同样独立地，R15和R16彼此连接，形成四至八元的杂环基；且(iv)同样独立地，R15和R20彼此连接，形成四至八元的杂环基；其中每个所述烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基可以是未取代的，或任选由一个或多个选自以下的部分独立地取代羟基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、烷氨基、芳氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、亚磺酰氨基、烷基、芳基、杂芳基、烷基亚磺酰氨基、芳基亚磺酰氨基、酮基、羧基、烷氧羰基、酰氨基、烷氧基羰氨基、烷氧基羰氧基、烷基脲基、芳基脲基、卤代、氰基和硝基。
在另外的实施方案中，该部分 为选自下列的基团 其中Y32为选自下列的基团
在进一步的实施方案中，Y选自
在另外的实施方案中，所述部分 为选自下列的结构
在另外的实施方案中，R1为NHR14，其中R14为选自下列的基团 R2为选自下列的部分
R3为选自下列的部分
该部分 选自
且Y选自
本发明其它的实施方案公开在表1中所示的化合物。
表1
也在表1A中提供根据本发明的另外的化合物表1A
如同上文使用的，并在本公开全文中，除非另外指明，应理解下列的术语具有下列的意义″患者″包括人和动物。
″哺乳动物″意指人及其它哺乳动物。
″烷基″意指可以是直链或支链脂肪族烃基，且在链中包含大约1到大约20个碳原子。优选的烷基基团在链中含有大约1到大约12个碳原子。更优选的烷基基团在链中含有大约1到大约6个碳原子。支链意指一或多个低级烷基基团，如甲基、乙基或丙基，与直链的烷基链连接。″低级烷基″意指在链中具有大约1至大约6个碳原子的基团，其可以是直链或支链。术语″取代的烷基″意指该烷基基团可被一或多个取代基取代，其可以是相同或不同的，每个取代基各自独立选自卤代、烷基、芳基、环烷基、氰基、羟基、烷氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(环烷基)、-N(烷基)2、-N(烷基)2、羧基和-C(O)O-烷基。合适的烷基基团的非限制性实例包括甲基、乙基、正-丙基、异丙基和叔-丁基。
″烯基″意指含有至少一个碳-碳双键的脂肪族烃基，且其可以是直链或支链，且在链中包含大约2到大约15个碳原子。优选的烯基基团在链中具有大约2到大约12个碳原子；而更优选在链中具有大约2到大约6个碳原子。支链意指一或多个低级烷基基团，如甲基、乙基或丙基，与直链的烯基链连接。″低级烯基″意指在链中具有大约2至大约6个碳原子的基团，其可以是直链或支链。术语″取代的烯基″意指该烯基基团可被一或多个取代基取代，所述取代基可以是相同或不同的，各自独立选自卤代、烷基、芳基、环烷基、氰基、烷氧基和-S(烷基)。合适的烯基基团的非限制性实例包括乙烯基、丙烯基、正-丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正-戊烯基、辛烯基和癸烯基。
″炔基″意指含有至少一个碳-碳三键的脂肪族烃基，且其可以是直链或支链，且在链中包含大约2到大约15个碳原子。优选的炔基基团在链中具有大约2到大约12个碳原子；而更优选在链中具有大约2到大约4个碳原子。支链意指一或多个低级烷基基团，如甲基、乙基或丙基，与直链的炔基链连接。″低级炔基″意指在链中具有大约2至大约6个碳原子的基团，其可以是直链或支链。合适的炔基基团的非限制性实例包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基和3-甲基丁炔基。术语″取代的炔基″意指该炔基基团可被一或多个取代基取代，其可以是相同或不同的，每个取代基各自独立选自烷基、芳基和环烷基。
″芳基″意指芳香族单环或多环的环系统，其包含大约6到大约14个碳原子，优选大约6到大约10个碳原子。所述芳基可任选由″环系统取代基″取代，所述取代基可以是相同或不同的，并如同在本文中的定义。合适的芳基基团的非限制性实例包括苯基和萘基。
″杂芳基″意指包括大约5到大约14个环原子，优选大约5到大约10个环原子的芳香族单环或多环的环系统，其中一或多个环原子是碳以外的元素，例如氮、氧或硫，它们可单独或组合存在。优选的杂芳基含有大约5到大约6个环原子。所述″杂芳基″可任选由″环系统取代基″取代，所述取代基可以是相同或不同的，并如同在本文中的定义。在杂芳基词根名字前的前缀氮杂、氧杂或硫杂，意指分别出现至少一个氮、氧或硫原子作为环原子。可任选将杂芳基的氮原子氧化成相应的N-氧化物。合适的杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、吡啶酮(包括N-取代的吡啶酮)、异唑基、异噻唑基、唑基、噻唑基、吡唑基、呋呫基、吡咯基、吡唑基、三唑基、1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹喔啉基、2，3-二氮杂萘基(phthalazinyl)、羟吲哚基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、苯并呋呫基、吲哚基、氮杂吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并氮杂吲哚基、1，2，4-三嗪基、苯并噻唑基等。术语″杂芳基″也意指部分饱和的杂芳基部分，例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基等。
″芳烷基″或″芳基烷基″意指芳基-烷基-基团，其中该芳基和烷基如同前文所述。优选的芳烷基包括低级烷基基团。合适的芳烷基基团的非限制性实例包括苄基、2-苯乙基和萘甲基。通过烷基与母体部分连接。
″烷芳基″意指烷基-芳基-基团，其中该烷基和芳基如同前文所述。优选的烷芳基包括低级烷基基团。合适的烷芳基基团的非限制性实例为甲苯基。通过芳基与母体部分连接。
″环烷基″意指非-芳香族单-或多环的环系统，其包括大约3至大约10个碳原子，优选大约5至大约10个碳原子。优选的环烷基环含有大约5至大约7个环原子。环烷基可任选由一或多个″环系统取代基″取代，所述取代基可以是相同或不同的，并如同在上文中的定义。合适的单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。合适的多环环烷基的非限制性实例包括1-萘烷基、降冰片基(norbornyl)、金刚烷基等，以及部分饱和的物质，例如茚满基、四氢萘基等。
″卤素″或″卤代″意指氟、氯、溴或碘。优选氟、氯和溴。
″环系统取代基″意指与芳香族或非-芳香族环系统连接的取代基，其例如代替在该环系统上可用的氢。环系统取代基可以是相同或不同的，各自独立选自烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷芳基、杂芳烷基、杂芳烯基、杂芳炔基、烷基杂芳基、羟基、羟烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰基、芳酰基、卤代、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、芳氧羰基、芳烷氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、芳烷硫基、杂芳烷硫基、环烷基、杂环基、-C(＝N-CN)-NH2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH)-NH(烷基)、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-、Y1Y2NSO2-和-SO2NY1Y2，其中Y1和Y2可以是相同或不同的，并各自独立选自氢、烷基、芳基、环烷基和芳烷基。″环系统取代基″也可意指单一部分，其同时代替在环系统上的两个相邻碳原子上的两个可用的氢(每个碳上一个H)。这类部分的实例是亚甲二氧基、亚乙二氧基、-C(CH3)2-等，其形成例如 的部分。
″杂环基″意指非芳香族的饱和单环或多环的环系统，其包含大约3至大约10个环原子，优选大约5到大约10个环原子，其中在该环系统中的一或多个原子是碳以外的元素，例如氮、氧或硫，它们可单独或组合存在。在环系统中不存在相邻的氧和/或硫原子。优选的杂环基包含大约5至大约6个环原子。在杂环词根名字前的前缀氮杂、氧杂或硫杂，意指分别出现至少一个氮、氧或硫原子作为环原子。任何在杂环基环中的-NH均可以以被保护的基团，例如作为-N(Boc)、-N(CBz)、-N(Tos)基团等存在；也将这类保护视为本发明的一部分。所述杂环基可任选由一或多个″环系统取代基″取代，所述取代基可以是相同或不同的，并如同在本文中的定义。可任选将杂环基的氮或硫原子氧化成相对应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。合适的单环杂环基环的非限制性实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑烷基、1，4-二氧六环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、内酰胺、内酯等。
应注意到在本发明的环系统所含有的杂原子中，在与N、O或S相邻的碳原子上没有羟基基团，而且在与其它杂原子相邻的碳原子上没有N或S基团。因此，例如在环中 没有-OH直接连接在标号为2和5的碳上。
也应注意到互变异构形式，例如下列的部分 在本发明的某些实施方案中认为它们是等同的。
″炔烷基″意指炔基-烷基-基团，其中该炔基和烷基如同前文所述。优选的炔烷基含有低级炔基和低级烷基基团。通过烷基与母体部分连接。合适的炔烷基基团的非限制性实例包括炔丙基甲基。
″杂芳烷基″意指杂芳基-烷基-基团，其中该杂芳基和烷基如同前文所述。优选的杂芳烷基含有低级烷基基团。合适的芳烷基基团的非限制性实例包括吡啶基甲基和喹啉-3-基甲基。通过烷基与母体部分连接。
″羟烷基″意指HO-烷基-基团，其中烷基如同前述所定义。优选的羟烷基含有低级烷基。合适的羟烷基基团的非限制性实例包括羟甲基和2-羟乙基。
″酰基″意指H-C(O)-、烷基-C(O)-或环烷基-C(O)-基团，其中各种基团如同前文所述。通过羰基与母体部分连接。优选的酰基含有低级烷基。合适的酰基基团的非限制性实例包括甲酰基、乙酰基和丙酰基。
″芳酰基″意指芳基-C(O)-基团，其中该芳基基团如同前文所述。通过羰基与母体部分连接。合适的基团的非限制性实例包括苯甲酰基和1-萘酰基。
″烷氧基″意指烷基-O-基团，其中该烷基基团如同前文所述。合适的烷氧基基团的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异丙氧基和正-丁氧基。通过醚氧与母体部分连接。
″芳氧基″意指芳基-O-基团，其中该芳基基团如同前文所述。合适的芳氧基基团的非限制性实例包括苯氧基和萘氧基。通过醚氧与母体部分连接。
″芳烷氧基″意指芳烷基-O-基团，其中该芳烷基如同前文所述。合适的芳烷氧基基团的非限制性实例包括苄氧基和1-或2-萘甲氧基。通过醚氧与母体部分连接。
″烷硫基″意指烷基-S-基团，其中该烷基基团如同前文所述。合适的烷硫基基团的非限制性实例包括甲硫基和乙硫基。通过硫与母体部分连接。
″芳硫基″意指芳基-S-基团，其中该芳基基团如同前文所述。合适的芳硫基基团的非限制性实例包括苯硫基和萘硫基。通过硫与母体部分连接。
″芳烷硫基″意指芳烷基-S-基团，其中该芳烷基基团如同前文所述。合适的芳烷硫基基团的非限制性实例是苄硫基。通过硫与母体部分连接。
″烷氧羰基″意指烷基-O-CO-基团。合适的烷氧羰基基团的非限制性实例包括甲氧羰基和乙氧羰基。通过羰基与母体部分连接。
″芳氧羰基″意指芳基-O-C(O)-基团。合适的芳氧羰基基团的非限制性实例包括苯氧羰基和萘氧羰基。通过羰基与母体部分连接。
″芳烷氧羰基″意指芳烷基-O-C(O)-基团。合适的芳烷氧羰基基团的非限制性实例为苄氧羰基。通过羰基与母体部分连接。
″烷基磺酰基″意指烷基-S(O2)-基团。优选的基团是其中烷基基团为低级烷基的那些基团。通过磺酰基与母体部分连接。
″芳基磺酰基″意指芳基-S(O2)-基团。通过磺酰基与母体部分连接。
术语″取代的″意指由选自指定的基团代替在指明的原子上的一或多个氢，条件为在现有情况下不超过该指明的原子的正常价数，且该取代产生稳定的化合物。只要这类组合结果产生稳定的化合物，取代基和/或变量的组合就是允许的。″稳定的化合物″或″稳定的结构″意指一化合物足够稳定，能承受从反应混合物中分离至有用程度的纯度，并配制成有效的治疗剂。
当指示取代基、化合物、组合试剂等的数目时，术语″一或多个″或″至少一个″，依据前后文，意指出现或添加至少一个，并最高达到在化学或物理上可容许的最大数目的取代基、化合物、组合试剂等。这类技术和知识在本领域技术人员熟知的范围内。
术语″任选取代的″意指可视需要用指定的基团、原子团或部分取代。
对化合物而言，术语″分离的″或″以分离的形式″，意指所述化合物在从合成过程或天然来源或其组合中分离后的物理状态。对化合物而言，术语″纯化的″或″以纯化的形式″，意指在从本文中描述或技术少熟练人员熟知的纯化过程获得该化合物后的物理状态，其具有足够的纯度，可通过本文中描述的或技术少熟练人员熟知的标准分析技术鉴定。
也应注意到，假设在本文的正文、流程、实施例和表格中，任何具有不饱和价数的碳或杂原子具有满足价数的氢原子。
当称化合物中的官能基是″保护的″时，这意指该基团是经过修改的形式，从而使该化合物经历反应时，在保护位置排除不想要的副反应。将借通过本领域普通技术人员，以及通过参考教科书，例如T.W.Greene等，Protective Groups in organic Synthesis(1991)，Wiley，New York，识别合适的保护基团。
当任何变数(例如芳基、杂环、R2等)在任何成分或在式1中出现一次以上时，其在每次出现时的定义独立于其在其它地方每次出现处的定义。
当在本文中使用时，术语″组合物″意欲包含含有指定量的特定成分的产物，以及任何直接或间接由指定量的特定成分的组合获得的产物。
在本文中也设计本发明的化合物的前药和溶剂合物。当在本文中使用时，术语″前药″代表为药物前体的化合物，当将其给予患者时，通过代谢或化学过程经历化学转变，产生式1的化合物，或其盐和/或溶剂合物。在T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel DeliverySystems(1987)14 of the A.C.S.Symposium Series中，以及在Bioreversible Carriers in Drug Design，(1987)Edward B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press中提供了前药的讨论，两者均通过引用结合到本文中。
″溶剂合物″意指本发明化合物与一或多种溶剂分子的物理缔合。该物理缔合涉及各种程度的离子和共价键结合，包括氢键。在某些例子中，溶剂合物将能够分离，例如当将一或多个溶剂分子并入结晶固体的晶格中时。″溶剂合物″包括溶液-相和可分离溶剂合物两者。合适的溶剂合物的非限制性实例包括乙醇化物、甲醇化物等。″水合物″为其中该溶剂分子为H2O的溶剂合物。
″有效量″或″治疗有效量″意在叙述的本发明化合物或组合物的量在抑制CDK(s)上是有效的，并因此产生所需的治疗、改善、抑制或预防效果。
可形成盐的式1化合物也在本发明的范围内。除非另外指明，在本文中提及式1化合物时，应该理解也包括其盐。当在本文中使用时，术语″盐″表示与无机和/或有机酸形成的酸加成盐，以及与无机和/或有机碱形成的碱加成盐。此外，当式1化合物含有碱性部分，例如但不限于吡啶或咪唑，和酸性部分，例如但不限于羧酸两者时，可形成两性离子(″内盐″)，并也包括在本文中使用的术语″盐″中。药学上可接受的(即无毒性、生理学上可接受的)盐是优选的，虽然也可使用其它的盐。可借着例如使式1化合物与一定量(如等当量)的酸或碱，在其中使盐沉淀的介质或在含水介质中反应，接着冷冻干燥，形成式1化合物的盐。
示例性的酸加成盐类包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、甲烷磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(也称为甲苯基磺酸盐)等。此外，由例如P.Stahl等，Camille G.(编辑)药用盐手册，特性、选择和用途(Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use)，(2002)ZurichWiley-VCH；S.Berge等，Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson等，ThePractice of Medicinal Chemistry(1996)，Academic Press，New York；以及在The Orange Book(Food & Drug Administration，Washington，D.C.在其网址上)中，讨论了一般认为适合用来从碱性药学化合物来形成在药学上有用的盐类的酸。这些公开的内容通过引用结合到本文中。
示例性的碱加成盐包括铵盐、碱金属盐，如钠、锂和钾盐、碱土金属盐，如钙和镁盐，与有机碱(例如有机胺)所成的盐，如二环己胺、叔-丁胺，以及与氨基酸如精氨酸、离氨酸等所成的盐。可利用试剂将碱性含氮基团季铵化，如低级烷基卤化物(例如甲基、乙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、二乙酯和二丁酯)、长链卤化物(例如癸基、十二烷基和硬脂酰基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基和苯乙基的溴化物)及其它。
为了本发明，所有预定为药学上可接受的盐的这类酸加成盐和碱加成盐均在本发明的范围内，并认为所有的酸加成盐和碱加成盐均等于相应的化合物的游离形式。
本发明化合物的药学上可接受的酯包括下列各组(1)通过羟基基团的酯化作用而获得的羧酸酯，其中酯类的羧酸部分的非-羰基部分选自直链或支链的烷基(例如乙酰基、正-丙基、叔-丁基或正-丁基)、烷氧烷基(例如甲氧甲基)、芳烷基(例如苄基)、芳氧烷基(例如苯氧基甲基)、芳基(例如任选由例如卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基或氨基取代的苯基)；(2)磺酸酯，如烷基-或芳烷基磺酰基(例如甲烷磺酰基)；(3)氨基酸酯(例如L-缬氨酰基或L-异亮氨酰基)；(4)膦酸酯和(5)单-、二-或三-磷酸酯。可通过例如C1-20醇或其反应性衍生物，或通过2，3-二(C6-24)酰基甘油，将磷酸酯进一步酯化。
式1的化合物，及其盐、溶剂合物、酯和前药，可以其互变异构形式存在(例如酰胺或亚氨基醚)。在本文中，所有的这类互变异构形式被视为本发明的一部分。
打算使本发明的化合物(包括化合物的盐、溶剂合物和前药，以及前药的盐和溶剂合物)的所有的立体异构体(例如几何异构体、光学异构体等)，如可能是因为在各种取代基上的不对称碳而出现的那些异构体，包括对映体形式(甚至可能在缺少不对称碳时出现)、旋转异构体形式、阻转异构体和非对映异构体形式均在本发明的范围内，位置异构体(例如4-吡啶基和3-吡啶基)也是如此。本发明化合物的各立体异构体可以是，例如基本上不含其它异构体，或可以混合成为例如外消旋物，或带有所有其它的，或其它选择的立体异构体。本发明的手性中心可具有S或R构型，如同由IUPAC 1974推荐书定义的。术语″盐″、″溶剂合物″、″前药″等的使用，旨在等同地应用在本发明化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、位置异构体、外消旋物或前药的盐、溶剂合物和前药上。
打算将式1化合物，以及式1化合物的盐、溶剂合物和前药的多形形式纳入本发明内。
应了解式1化合物在本文中讨论的治疗应用上的用途，可适用于每个化合物本身或一或多个式1化合物的混合或组合，如同在例如紧接着的下一段中说明的。相同的理解也适用于药用组合物，其包含一种或多种这样的化合物，以及涉及这样的化合物的治疗方法。
根据本发明的化合物可具有药理学特性；具体而言，式1化合物可以是HCV蛋白酶的抑制剂，每个化合物本身或一或多个式1化合物，可与一或多个选自式1中的化合物混合。所述化合物可用来治疗疾病，例如HCV、HIV、AIDS(获得性免疫缺陷综合征)及相关病症，并可用来调节丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶的活性、预防HCV或改善丙型肝炎的一或多种症状。
可使用式1化合物来制备用来治疗与HCV蛋白酶有关的病症的药物，例如，该方法包括使式1化合物与药学上可接受的载体紧密接触。
在其它的实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含作为活性成分的本发明的一种或多种化合物。药用组合物通常还地包括至少一种药学上可接受的载体稀释剂、赋形剂或载体(在本文中统称为载体原料)。因为其HCV抑制活性，这类药用组合物具有治疗丙型肝炎和相关病症的用途。
在另一个实施方案中，本发明公开制备包含作为活性成分的本发明化合物的药用组合物的方法。在本发明的药用组合物和方法中，活性成分通常将与合适的载体原料混合给予，针对想要的给药形式而适当地选择载体原料，即口服片剂、胶囊(填装固体、填装半固体或填装液体)、构成用的粉末、口服凝胶、酏剂、可分散的颗粒、糖浆、悬浮液等，并符合常规药学实践。例如，对于口服给药用的片剂或胶囊形式，可将活性药物组分与任何口服无毒性的药学上可接受的惰性载体混合，如乳糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑石、甘露糖醇、乙醇(液体形式)等。此外，在想要或需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。散剂和片剂可包含从大约5到大约95％的本发明组合物。
合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖类、玉米增甜剂、天然和合成的树胶，如阿拉伯树胶、藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。在润滑剂中，可提及的用于这些剂型中的有硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、瓜耳树胶等。
合适时也可包括增甜剂和着色剂及防腐剂。在上文中提及的一些术语，即崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂等，在下文中有更详细地讨论。
此外，本发明的组合物可以持续释放的形式配制，以便提供任一种或多种组分或活性成分的速率控制释放，以发挥最大的治疗效果，即HCV抑制活性等。持续释放的适当剂型包括多层片剂，其含有具有不同崩解速率的各层，或充满活性组分的控制释放的聚合基质，并制成片剂形式或含有这类充满或包胶(encapsulated)多孔聚合基质的胶囊。
液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳剂。举例来说，可提及水或水-丙二醇溶液，用于胃肠外注射，或为了口服溶液、悬浮液和乳剂，可加入增甜剂和镇静剂(pacifiers)。液体形式的制剂也可包括鼻内给药的溶液。
适合吸入的气溶胶制剂可包括溶液和粉末形式的固体，可将其与药学上可接受的载体，如惰性压缩气体，例如氮气组合。
至于制备栓剂，首先熔化低熔点的蜡，如脂肪酸甘油酯，如可可脂的混合物，并通过搅拌或类似地混合使活性成分均匀地分散在其中。然后将熔化的均质混合物倒入适当尺寸的模具中，使其冷却并藉此固化。
也包括固体形式的制剂，计划在临用前将其转变成液体形式的制剂，以供口服或胃肠外给药。这类液体形式包括溶液、悬浮液和乳剂。
本发明的化合物也可经皮传递。经皮传递的组合物可采用霜剂、洗剂、气溶胶和/或乳剂的形式，并可将其包括在本领域中用于该目的的传统基质或贮库类型的经皮贴片中。
本发明的化合物也可口服，静脉内、鼻内或皮下给药。
本发明的化合物也可包括为单位剂型的制剂。在这类形式中，将制剂细分成含有适当量的活性组分的适当尺寸的单位剂量，例如达到所需目的的有效量。
在单位剂量的制剂中的本发明活性组合物的量，通常根据特殊的应用，可从大约1.0毫克变化或调整到大约1,000毫克，优选从大约1.0到大约950毫克，更优选从大约1.0到大约500毫克，而典型的是从大约1到大约250毫克。可根据患者的年龄、性别、体重和待治疗疾病的严重性，改变所使用的实际剂量。这类技术为本领域普通技术人员所熟知。
通常，可每天给予人含有活性成分的口服剂型1或2次。将根据临床医师的判断调整给药的用量和频率。一般对于口服给药推荐的日剂量方案可在每天大约1.0毫克到大约1,000毫克范围内，以单一或分开的剂量给予。
在下文中描述一些有用的名词胶囊-意指由甲基纤维素、聚乙烯醇或变性明胶或淀粉制备的特殊容器或包封外壳，用以容纳或含有包括活性成分的组合物。硬壳胶囊通常是由较高凝胶强度的骨和猪皮明胶的混合物制成。胶囊本身可含有少量的染料、不透明剂、塑化剂和防腐剂。
片剂-意指压缩或模压的固体剂型，其含有活性成分与合适的稀释剂。可通过压缩混合物或通过湿法制粒、干法制粒而获得的颗粒，或通过压紧来制备片剂。
口服凝胶-意指活性成分分散或溶解于亲水性固体基质内。
构成用的粉末-意指含有活性成分和适当稀释剂的粉末混合物，可将其悬浮于水或果汁中。
稀释剂-意指通常构成大部分组合物或剂型的物质。合适的稀释剂包括糖，如乳糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨糖醇；衍生自小麦、玉米、稻米和马铃薯的淀粉；以及纤维素，如微晶纤维素。稀释剂在组合物中的量的范围可从总组合物的大约10到大约90％重量，优选从大约25到大约75％，更优选从大约30到大约60％重量，甚至更优选从大约12到大约60％。
崩解剂-意指加在组合物中帮助它瓦解(崩解)并释放药物的原料。合适的崩解剂包括淀粉；″可溶于冷水″的经修饰的淀粉，如羧甲基淀粉钠；天然和合成的树胶，如槐树豆胶、刺梧桐树胶、瓜耳树胶、黄蓍胶和琼脂；纤维素衍生物，如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠；微晶纤维素和交联微晶纤维素，如交联羧甲基纤维素钠；藻酸盐，如藻酸和藻酸钠；粘土，如膨润土；以及泡腾混合物。崩解剂在组合物中的量d范围可从组合物的大约2到大约15％重量，优选从大约4到大约10％重量。
粘合剂-意指将粉末结合或″粘合″在一起，并通过形成颗粒使它们粘结的物质，因此在配制时用来作为″粘附剂″。已经在稀释剂或填充剂中获得粘合剂加上粘结强度。合适的粘合剂包括糖，如蔗糖；衍生自小麦、玉米、稻米和马铃薯的淀粉；天然的树胶，如阿拉伯树胶、明胶和黄蓍胶；海藻的衍生物，如藻酸、藻酸钠和藻酸钙铵；纤维素材料，如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠，以及羟丙基甲基纤维素；聚乙烯吡咯烷酮；以及无机物，如硅酸铝镁。粘合剂在组合物中的量的范围可从组合物的大约2到大约20％重量，更优选从大约3到大约10％重量，甚至更优选从大约3到大约6％重量。
润滑剂-意指加在剂型中，使片剂、颗粒等在已经压缩后，能够通过降低摩擦力或磨损而从模具或冲模中释放的物质。合适的润滑剂包括金属硬脂酸盐，如硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸钾；硬脂酸；高熔点的蜡；以及水溶性润滑剂，如氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠、油酸钠、聚乙二醇和d′l-亮氨酸。通常在压缩前很晚的步骤中才加入润滑剂，因为它必须出现在颗粒的表面，并在它们和压片机的部件之间。润滑剂在组合物中的量的范围可从组合物的大约0.2到大约5％重量，优选从大约0.5到大约2％，更优选从大约0.3到大约1.5％重量。
助流剂(Glident)-防止结块并改善颗粒的流动特征的材料，使得流动平顺并均匀。合适的助流剂包括二氧化硅或滑石。助流剂在组合物中的量的范围可从总组合物的大约0.1％到大约5％重量，优选从大约0.5到大约2％重量。
着色剂-提供给组合物或剂型颜色的赋形剂。这类赋形剂可包括食品级染料，并将食品级的染料吸附在合适的吸附剂上，如粘土或氧化铝。着色剂的量可从组合物的大约0.1变化到大约5％重量，优选从大约0.1到大约1％。
生物利用度-意指与标准物或对照组相比较，活性药物成分或治疗部分从给予的剂型被吸收至全身循环内的速率和程度。
制备片剂的传统方法是已知的。这类方法包括干式方法，如直接压缩和压缩通过压紧产生的颗粒，或湿式方法，或其它特殊程序。制备其它给药形式，例如胶囊、栓剂等的传统方法也是已熟知的。
本发明的另一实施方案公开上文公开的本发明化合物或药用组合物在治疗疾病，例如丙型肝炎等中的用途。该方法包括对患有这样的疾病，且需要这类治疗的患者，给予治疗有效量的本发明化合物或药用组合物。
在又一个实施方案中，可使用本发明的化合物，以单一疗法模式或以联合疗法(例如双重联合、三重联合等)模式，例如与抗病毒和/或免疫调节剂联合使用来治疗人类的HCV。这类抗病毒和/或免疫调节剂的实例，包括利巴韦林(得自Schering-Plough Corporation，Madison，New Jersey)和LevovirinTM(得自ICN Pharmaceuticals，Costa Mesa，California)、VP 50406TM(得自Viropharma，Incorporated，Exton，Pennsylvania)、ISIS 14803TM(得自ISIS Pharmaceuticals，Carlsbad，California)、HeptazymeTM(得自Ribozyme Pharmaceuticals，Boulder，Colorado)、VX 497TM(得自Vertex Pharmaceuticals，Cambridge，Massachusetts)、胸腺素(Thymosin)TM(得自SciClone Pharmaceuticals，San Mateo，California)、MaxamineTM(得自Maxim Pharmaceuticals，SanDiego，California)、麦考酚酸吗乙酯(得自Hoffman-LaRoche，Nutley，New Jersey)、干扰素(例如干扰素α、PEG-干扰素α缀合物)等。″PEG-干扰素α缀合物″是与PEG分子共价连接的干扰素α分子。代表性的PEG-干扰素α缀合物包括干扰素α-2a(RoferonTM，得自Hoffman La-Roche，Nutley，New Jersey)，为聚乙二醇化的干扰素α-2a的形式(例如以商标名PegasysTM出售)、干扰素α-2b(IntronTM，得自Schering-PloughCorporation)，以聚乙二醇化的干扰素α-2b的形式(例如以商标名PEG-IntronTM出售)、干扰素α-2c(Berofor αTM，得自Boehringer Ingelheim，Ingelheim，Germany)，或通过测定天然存在的干扰素α的共有序列定义的共有干扰素(InfergenTM，得自Amgen，Thousand Oaks，California)。
如同较早陈述的，本发明也包括本发明的化合物的互变异构体、旋转异构体、对映体和其它立体异构体。因此，本领域普通技术人员意识到一些本发明的化合物可以以合适的异构形式存在。打算将这类变化包括在本发明的范围内。
本发明它的再一个实施方案公开制备在本文中公开的化合物的方法。可通过本领域已知的几种技术制备该化合物。在下列的反应方案中概述了示例性程序。不应将示例解释为对本发明的范围的限制，其在附录的权利要求书中定义。其它的机械路径和类似结构对本领域技术人员而言，将是显而易见的。
应该理解，虽然下列的示例性方案描述了数个代表性本发明化合物的制备，但任何天然和非天然氨基酸两者的适当取代作用将导致形成以这样的取代为基础的所需化合物。打算将这类变化纳入本发明的范围内。
缩写在方案、制备和实施例的描述中使用的缩写如下THF四氢呋喃DMFN，N-二甲基甲酰胺EtOAc乙酸乙酯AcOH醋酸HOOBt3-羟基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮EDCl1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐NMMN-甲基吗啉ADDP1，1′-(偶氮二羰基)二哌啶DEAD偶氮二羧酸二乙酯MeOH甲醇EtOH乙醇Et2O乙醚DMSO二甲亚砜HOBtN-羟基苯并三唑PyBrOP溴-三-吡咯烷六氟磷酸盐DCM二氯甲烷DCC1，3-二环己基碳化二亚胺TEMPO2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基Phg苯基甘氨酸Chg环己基甘氨酸Bn苄基Bzl苄基Et乙基Ph苯基iBoc异丁氧羰基iPr异丙基
tBu或But叔-丁基Boc叔-丁氧羰基Cbz苄氧羰基Cp环戊二烯基Ts对-甲苯磺酰基Me甲基HATUO-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐DMAP4-N，N-二甲氨基吡啶BOP苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲氨基)六氟磷酸盐PCC吡啶氯铬酸盐KHMDS六甲基二硅叠氮化钾或双(三甲基甲硅烷基氨化)钾NaHMDS六甲基二硅叠氮化钠或双(三甲基甲硅烷基氨化)钠LiHMDS六甲基二硅叠氮化锂或双(三甲基甲硅烷基氨化)锂10％Pd/C10％披钯碳(按重量计)TG硫甘油实施例中间体的合成乙基酯1a的合成 根据由Monn和Valli(J.Org.Chem.1994，59，2773-2778)描述的程序，合成乙基酯1a。
中间体1的合成 步骤A 在0℃下，分小份将硼氢化钠(924.5mg)加至在乙醇(50mL)中的二环酮1a的不均匀混合物中。搅拌反应物30分钟，TLC分析(乙酸乙酯/己烷；1∶1)显示所有的起始原料均已耗尽。通过加入AcOH(3mL)使该反应猝灭。以250mL乙酸乙酯稀释该混合物，并以碳酸氢钠的饱和水溶液(2×50mL)和盐水(1×40mL)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤，并在减低的压力下浓缩。通过柱层析纯化残余物，得到产率92％的产物。
步骤B 在0℃下，以1.08g 60％NaH的悬浮液处理，在130mL无水四氢呋喃中的环戊醇1b的溶液。移除冷却浴并搅拌所得的黄色溶液30分钟。加入二硫化碳(16.2mL)，并搅拌该反应45分钟。然后逐滴加入碘代甲烷(16.8mL)，并再搅拌该混合物1小时。通过小心地加入饱和氯化铵水溶液(30mL)使该反应猝灭。以80mL乙醚萃取该混合物并分离各层。以乙醚(2×80mL)反萃取含水层。以水(30mL)、盐水(30mL)洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度己烷至30％在己烷中的丙酮)，得到产率63％的黄色油状的黄原酸盐产物。
步骤C 利用干燥氮气将在90mL甲苯中的黄原酸盐1c的溶液脱气。加入AIBN(150.4mg)和氢化三-正-丁基锡(3.7mL)。再将该反应混合物脱气，并在95℃下搅拌1小时。TLC分析(丙酮/己烷；1∶9)显示所有的起始原料均已耗尽。在减低的压力下移除所有的挥发物，并将残余物溶解于250mL乙醚中，并以氟化钾的饱和水溶液(2×30mL)洗涤。将有机层经硫酸镁干燥，过滤，并在减低的压力下浓缩。经硅胶柱层析纯化残余物(梯度己烷至20％在己烷中的乙酸乙酯)，得到产率98％的产物。
步骤D 在0℃下，将N-Cbz起始原料1d(2.5g)溶解于80mL三氟乙酸中，接着加入20mL二甲硫。在0℃下搅拌该反应混合物5分钟，并移除冷却浴。再搅拌该反应5小时。在减低的压力下除去所有的挥发物，并使残余物在二氯甲烷(250mL)和1N NaOH水溶液(50mL)之间分配。以二氯甲烷(2×80mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。不需进一步纯化产物(1.46g，97％产率)。
步骤E 在0℃下，搅拌在80mL无水二氯甲烷和60mL无水二甲基甲酰胺中的N-Boc-叔-丁基亮氨酸(1.46g)的溶液，并以HATU(3.26g)处理。逐滴加入在二氯甲烷(10mL)中的外消旋胺1e(1.42g)，接着加入N-甲基吗啉(2.7mL)。将该混合物逐渐加温至室温，并搅拌过夜。在减低的压力(高真空)下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于350mL乙醚中。以1N HCl水溶液(30mL)、饱和的NaHCO3水溶液(30mL)、水(30mL)和盐水(30mL)洗涤有机层。将有机层经硫酸镁干燥，并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度乙醚/己烷；1∶9至5∶5)，得到产率72％的非对映体的产物1f和1g。
步骤F 将氢氧化锂一水合物(79mg)加入到15mL四氢呋喃/水/甲醇(1∶1∶1)溶液中的300mg酯1f的溶液中。在室温下搅拌该反应大约3小时，直到通过TLC分析(乙醚/己烷；4∶6)未检测出更多的起始原料为止。在减低的压力下浓缩该混合物，并使残余物在二氯甲烷(100mL)和1NHCl水溶液(20mL)之间分配。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。获得产率91％的白色固体状产物1，其不需进一步纯化。
中间体2的合成 步骤A 在N2下，将酮亚胺2a(50g，187.1mmol)在无水THF(400mL)中的搅拌的溶液冷却至-78℃，并以在THF中的K-tBuO的1M溶液(220mL，1.15当量)处理。将该反应混合物加温至0℃，并搅拌1小时，再以溴甲基环丁烷(28mL，249mmol)处理。在室温下搅拌该反应混合物48小时，并在真空中浓缩。将残余物溶解于Et2O(300mL)中，并以HCl水溶液(2M，300mL)处理。在室温下搅拌所得的溶液5小时，并以Et2O(1公升)萃取。以NaOH(50％水溶液)将含水层碱化至pH～12-14，并以CH2Cl2(3×300mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到纯的胺(2b，18g)，为无色的油。
步骤B 在0℃下，以二羧酸二-叔-丁酯(23g，105.4mmol)处理胺2b(18g，105.2mmol)的CH2Cl2(350mL)溶液，并在室温下搅拌12小时。在反应完成(TLC)后，在真空中浓缩该反应混合物，并将残余物溶解于THF/H2O(200mL，1∶1)，并以LiOH·H2O(6.5g，158.5mmol)处理，然后在室温下搅拌3小时。浓缩该反应混合物，并以Et2O萃取碱性的液层。以浓HCl将含水层酸化至pH～1-2，并以CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩，得到2c，为无色粘性油，其无需任何进一步的纯化而用于下一步骤。
步骤C 以BOP试剂(41.1g，93mmol)、N-甲基吗啉(27mL)、N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(9.07g，93mmol)处理酸2c(15.0g，62mmol)的CH2Cl2(250mL)溶液，并在室温下搅拌过夜。以1NHCl水溶液(250mL)稀释该反应混合物，分离各层，并以CH2Cl2(3×300mL)萃取含水层。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩，通过层析法纯化(SiO2，EtOAc/Hex 2∶3)，产生无色固体状的酰胺2d(15.0g)。
步骤D 在0℃下，以LiAlH4的溶液(1M，93mL，93mmol)逐滴处理在无水THF(200mL)中的酰胺2d(15g，52.1mmol)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物1小时，并在0℃下小心地以KHSO4的溶液(10％水溶液)使其猝灭，然后搅拌0.5小时。以HCl水溶液(1M，150mL)稀释该反应混合物，并以CH2Cl2(3×200mL)萃取。以HCl水溶液(1M)、饱和的NaHCO3、盐水洗涤合并的有机层，并干燥(MgSO4)。过滤该混合物，并在真空中浓缩，得到粘性无色油状的2e(14g)。
步骤E 以Et3N(10.73mL，74.4mmol)和丙酮合氰化氢(10.86g，127.57mmol)处理在CH2Cl2(50mL)中的醛2e(14g，61.6mmol)的溶液，并在室温下搅拌24小时。在真空中浓缩该反应混合物，并以HCl水溶液(1M，200mL)稀释，再萃取至CH2Cl2(3×200mL)中。以H2O、盐水洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)，过滤，在真空中浓缩并通过层析法纯化(SiO2，EtOAc/Hex 1∶4)，得到无色液体状的2f(10.3g)。
步骤F 以氰醇2f处理用HCl饱和的甲醇*(通过在0℃下使HCl气体鼓泡通过CH3OH(700mL)来制备)，并加热至回流24小时。在真空中浓缩该反应，产生2g，其无须纯化而直接用于下一步骤中。
*或者，也可使用通过将AcCl加至无水甲醇中而制备的6M HCl。
步骤G 在-78℃下，以Et3N(45.0mL，315mmol)和Boc2O(45.7g，209mmol)处理在CH2Cl2(200mL)中的胺盐酸盐2g的溶液。然后在室温下搅拌该反应混合物过夜，并以HCl(2M，200mL)稀释，然后萃取至CH2Cl2内。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤，在真空中浓缩，并通过层析法纯化(EtOAc/Hex 1∶4)，产生羟基酯2h。
步骤H 以LiOH·H2O(645mg，15.75mmol)处理在THF/H2O(1∶1)中的甲基酯2h(3g，10.5mmol)的溶液，并在室温下搅拌2小时。以HCl水溶液(1M，15mL)酸化该反应混合物，并在真空中浓缩。在真空中将残余物干燥，按定量产率得到2i。
步骤I 以NH4Cl(2.94g，55.5mmol)、EDCl(3.15g，16.5mmol)、HOOBt(2.69g，16.5mmol)和NMM(4.4g，44mmol)处理在CH2Cl2(50mL)和DMF(25mL)中的酸2i(得自上文)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物3天。在真空下移除溶剂，并以HCl水溶液(250mL)稀释残余物，然后以CH2Cl2萃取。以饱和的NaHCO3水溶液洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)，过滤，在真空中浓缩，获得2j，原样在下列的步骤中使用它。(或者也可通过在0℃下，在50mLCH3OH中，使2f(4.5g，17.7mmol)与H2O2水溶液(10mL)、LiOH·H2O(820mg，20.8mmol)反应0.5小时，直接获得2j)。
步骤J 将在先前步骤中获得的2j溶液，溶解于在二氧六环中的4N HCl中，并在室温下搅拌2小时。在真空中浓缩该反应混合物，得到固体状的中间体2，其可直接使用不需进一步纯化。
中间体3的合成 步骤A 将L-叔-亮氨酸(1当量，10g)慢慢地加至氢化铝锂的悬浮液(150mmol，在THF中的1M溶液)中。回流该反应混合物6小时。将该混合物冷却至0℃，并通过加入10mL的10％NaOH水溶液和10mL水使其猝灭。在室温下搅拌该混合物10分钟，然后以二碳酸二-叔-丁酯(1.1当量，18.22g)处理，并在60℃下搅拌该混合物过夜。通过硫酸镁过滤该反应混合物。浓缩滤液，并在硅胶上层析残余物，得到产率62％的产物3b。
步骤B 将三苯膦(3当量)和醇3b(1当量)加入到50mL无水THF中的邻苯二甲酰亚胺(1.01g)的溶液中。在冰-水浴中冷却该混合物，并逐滴加入偶氮二羧酸二异丙酯(2.5当量)。在0℃下搅拌所得的混合物10分钟，并加温至室温，再搅拌大约2.5小时，直到通过TLC(乙酸乙酯/己烷；3∶7)未检测到更多的起始原料为止。在减低的压力下浓缩该混合物。将残余物再悬浮于80mL二氯甲烷中。滤掉固体。浓缩滤液至其一半的体积，并加入己烷(30mL)。滤掉固体。在减低的压力下浓缩滤液，并在硅胶上层析残余物(梯度乙酸乙酯/己烷；1∶9至4∶6)，得到产物3c。
步骤C 将N-Boc保护的胺3c(1.4g)溶解于20mL在二氧六环中的4M HCl溶液中。搅拌该混合物大约2小时。在真空下除去所有的挥发物。对产物3d不需进行任何更进一步的纯化。
步骤D 在0℃下，以光气(10mL，在甲苯中的15％溶液)处理在20mL二氯甲烷和20mL饱和NaHCO3水溶液中的胺盐酸盐3d(1.14g)的混合物，并搅拌2小时。以100mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以30mL冷的饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层经硫酸镁干燥，过滤，并进一步以10mL甲苯稀释。浓缩该混合物，并保持产物3为在甲苯中的0.2M溶液。
中间体4的合成 步骤A 在0℃下，将溴化环丙基镁(4当量，7.68mmol)加入到THF中的酰胺4a(0.5g，1当量)中。将该反应物加温至最高达室温15分钟后，在室温下搅拌该反应5小时，然后通过加入1N HCl使其猝灭。以EtOAc稀释该反应，并以盐水洗涤。有机层经MgSO4干燥，通过柱层析以在己烷中的10％EtOAc纯化，得到0.2g的产物4b。产率43.1％。
步骤B 将4M HCl(在二氧六环中)加至N-Boc保护的胺4b(0.2g)中。在室温下搅拌该反应50分钟，TLC指出该反应已经完成。浓缩该混合物至干燥，得到0.162g的产物4c。
步骤C
在0℃下，将4c加入到CH2Cl2中的光气(2当量，1.65mmol)、NaHCO3(5mL饱和水溶液)中。在室温下搅拌该混合物2.5小时。通过漏斗分离。有机层经Na2SO4(无水的)干燥。用冷却浴将其浓缩至一半的体积。稀释至10mL，得到所需的异氰酸酯4，为在二氯甲烷中的0.083M的溶液。
中间体5的合成 步骤A 在-78℃、氮气氛下，将KHMDS(200mL在甲苯中的0.5M溶液)逐滴加入到无水THF(200mL)中的环己烷羧酸甲酯5a(11.1g，78mmol)的搅拌溶液中。当加入完成时，将该反应维持于该温度下0.5小时，然后加入苄基氯甲基醚(18.6mL，134mmol)。容许将该反应物加温至室温过夜，并加入水(100mL)。含水处理提供了残余物，通过硅胶柱层析纯化，使用EtOAc；己烷(1∶10)作为洗脱液，得到所需的、不纯的中间体醚(14.98g)，为无色的油。
在室温下，使10％Pd/C(0.5g)和前述的粗品醚(4.1g)在MeOH(80mL)中的黑色悬浮液暴露在氮气氛(气球)下过夜。通过硅藻土垫过滤该反应物，并以甲醇充分洗涤固体。在减低的压力下浓缩合并的滤液，并通过硅胶柱层析纯化粗产物，使用EtOAc；己烷(1∶5)，得到伯醇(5b；0.62g)，为无色的油。
步骤B 在0℃、氮气氛下，将甲烷磺酰氯(0.31mL)加至伯醇(5b；0.62g)的搅拌溶液中，接着加入三乙胺(0.75mL)。在该温度下搅拌所得的混合物0.5小时。将该反应混合物萃取至EtOAc中，并以1M HCl、饱和NaHCO3水溶液、水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩。获得黄色油状的残余物(甲磺酸盐5c；0.74g)，其无须纯化而直接用于下一步骤中。
步骤C 将二甲基甲酰胺(20mL；无水的；Aldrich)加至氢化钠(0.56g，Aldrich)中，并在悬浮液中加入叔-丁基硫醇，同时在氮气氛下，在冰浴中冷却。一旦加入完成，便加入甲磺酸盐(5c；按照上文从2.00g醇5b制备)，并在室温下搅拌所得的混合物过夜。使反应物在EtOAc和水之间分配，并分离有机相，干燥(MgSO4)。经硅胶柱层析，使用EtOAc-己烷(2∶98)，得到甲基酯-硫化物(5d；1.75g)。在液相中加入EtOAc，并加入10％HCl水溶液，直到水层pH＝1为止。分离有机层，以水洗涤，干燥，并在减低的压力下浓缩，得到白色固体状的硫化物-羧酸(5e；0.747g)。
步骤D 将过硫酸氢钾制剂(18.00g；Aldrich)加入到甲醇(75mL)中的硫化物(5e；2.287g)中，并在室温下搅拌所得的白色悬浮液过夜。在减低的压力下除去挥发物，并使白色固体在EtOAc和水之间分配。分离有机相，干燥并浓缩，提供砜(5f；2.52g；含有一些溶剂)。
步骤E 以DPPA(1当量，1.33mL，d 1.270)和三乙胺(1当量，0.85mL，d 0.726)处理在50mL甲苯中的酸5f(1.61g)的溶液。将该混合物加热至100℃2小时。以饱和的NaHCO3水溶液稀释该反应混合物，并以二氯甲烷(2×100mL)萃取。以饱和的NaHCO3水溶液和盐水洗涤合并的有机层。有机层经MgSO4干燥，过滤并在减低的压力下浓缩，直到剩下大约20mL溶剂为止。使用甲苯将产物5的溶液调节为0.2M异氰酸酯的浓度。
中间体6的合成
步骤A 将肼(0.9mL，28.68mmol，1.4当量)加入到100mLMeOH中的邻苯二甲酰亚胺3c(7g)的溶液中，并使该混合物回流(在N2下)6小时。TLC显示存在一些起始原料，加入更多的肼(0.45mL)，并在室温下继续搅拌过夜。形成白色的沉淀物。滤掉固体，并浓缩滤液，产生白色固体状的产物6a(4.48g)。
步骤B 将在100mL二氯甲烷中的胺6a(2.16g，10mmol)的溶液冷却至0℃，并以三乙胺(2当量，2.8mL)处理。逐滴加入甲烷磺酰氯(1.2当量，0.93mL)。搅拌不均匀的混合物过夜(温度0至25℃)。滤掉固体，并以饱和的氯化铵水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤滤液。有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于少量的二氯甲烷/乙酸乙酯(约10mL)中，并滤掉不溶的白色固体。经硅胶柱层析纯化滤液，得到浓稠半固体状的产物6b(2.7g)。
步骤C 将在50mL无水DMF中的磺酰胺6b(2.2g，7.5mmol)的溶液冷却至0℃，并以碳酸铯(3当量，7.34g)处理。逐滴加入碘甲烷(5当量，2.34mL)，并搅拌该混合物45分钟。移除冷却浴，并再搅拌该混合物4小时。通过加入饱和的氯化铵水溶液(100mL)使该反应猝灭，并以乙酸乙酯(2×100mL)萃取。以水(200mL)、盐水(200mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠干燥。过滤有机层并浓缩。在硅胶上层析残余物，得到产物6c(2.16g)。
步骤D 在室温下，将N-Boc保护的胺6c(2.1g，6.82mmol)溶解于20mL在二氧六环中的4M HCl中。搅拌该反应混合物1小时，然后在减低的压力下除去所有的挥发物，得到定量产率的产物6d。
步骤E 在0℃下，以光气(在甲苯中的15％溶液)处理在二氯甲烷和饱和的NaHCO3水溶液中的胺盐酸盐6d的混合物，并搅拌2小时。以二氯甲烷稀释该反应混合物，并以冷的饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并以甲苯进一步稀释。浓缩该混合物，并调节产物6，使维持为在甲苯中的0.2M溶液。
中间体7的合成
根据对异氰酸酯6的描述，制备异氰酸脂7。在磺酰胺合成步骤中，使用2-噻吩磺酰氯代替甲烷磺酰氯。
中间体8的合成 步骤A 将Dess-Martin全碘烷(periodinane)(30.25g；Aldrich)加至4-戊炔-1-醇，8a(4.15g，Aldrich)的溶液中，并搅拌所得的混合物45分钟，然后加入(叔-丁氧羰基亚甲基)三苯基正膦(26.75g；Aldrich)。搅拌所得的深色反应物过夜，以乙酸乙酯稀释，以亚硫酸钠水溶液、饱和的碳酸氢钠水溶液、水、盐水洗涤，并干燥。在减低的压力下除去挥发物，并通过硅胶柱层析纯化残余物，使用在己烷中的1％乙酸乙酯作为洗脱液，得到所需的化合物8b(3.92g)。也获得一些不纯的流份，但在此时将它搁置一边。
步骤B 使用在正-丙醇(20mL；Aldrich)中的烯8b(1.9g)、在正-丙醇(40mL)中的氨基甲酸苄酯(4.95g；Aldrich)、在水(79mL)中的NaOH(1.29g)、次氯酸叔-丁酯(3.7mL)、在正-丙醇(37.5mL)中的(DHQ)2PHAL(0.423g；Aldrich)和锇酸钾脱水物(0.1544g；Aldrich)，以及在Angew.Chem.Int.Ed.Engl(1998)，35，(23/24)，第2813-7页中提出的程序，得到粗产物，通过硅胶柱层析纯化，使用EtOAc∶己烷(1∶5)，得到所需的氨基醇8c(1.37g，37％)，为白色固体。
步骤C 将在二氧六环中的4M HCl(20mL；Aldrich)加至酯8c(0.700g)中，并将所得的混合物在室温下静置过夜。在减低的压力下除去挥发物，得到白色固体状的酸8d(0.621g)。
步骤D 在室温下将BOP试剂(3.65g；Sigma)加至羧酸8d(2.00g)的二氯甲烷(20mL)溶液和丙烯胺(0.616mL)中，接着加入三乙胺(3.45mL)，并搅拌所得的混合物过夜。使该反应混合物在EtOAc和10％HCl水溶液之间分配。分离有机相，以饱和的碳酸氢钠水溶液、水洗涤，干燥(硫酸镁)。通过硅胶柱层析纯化粗制的反应产物，使用(EtOAc∶己烷；70∶30)作为洗脱液，提供所需的酰胺8e(1.73g)，为粘性黄色油。
步骤E 在室温下搅拌在5mL三氟乙酸/二甲硫醚的4∶1混合物中的N-Cbz胺8e(85.8mg)的溶液大约3小时。在减低的压力下除去所有的挥发物。将产物8置于高真空下大约3小时，并直接使用不需进一步纯化。
中间体9的合成步骤1 将锌粉(21g，320mmol)、二氯锆苯(zirconecene dichloride)(14.04g，48mmol)加入到THF(200mL)中的1a(13.24g，40mmol，按照Monn和Valli，J.Org.Chem.，1994，59，2773-2778的描述来制备)的溶液中，且最后逐滴加入二溴甲烷(6.18mL，44mmol)。将该反应混合物加热至回流5小时。然后将其冷却至室温，然后使用冰浴冷却至0℃。逐滴加入水(小心放热的)，直到停止放出气体为止。加入乙醚(400mL)，并通过硅藻土垫过滤该混合物。以乙醚(200mL)洗涤滤饼，并以水(2×500mL)、1N HCl水溶液(500mL)、水(500mL)、盐水(500mL)洗涤合并的滤液，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过快速层析法纯化粗制的物质，使用10/90至20/80的EtOAc/己烷，得到6.82g的9a，为淡黄色的油。
步骤2 在0℃、氮气氛下，将二乙基锌(1M在庚烷中，73mL，73mmol)加至二氯甲烷(100mL)中。在30分钟内逐滴加入三氟乙酸(5.6mL，73mmol)。维持温度另外15-20分钟。然后在20分钟内逐滴加入二碘甲烷(5.9mL，73mmol)，并维持温度另外15-20分钟。最后，逐滴加入在二氯甲烷(20mL)中的9a(4.8g，14.6mmol)的溶液。在16小时内将该反应混合物加温至室温。然后将该反应混合物冷却至0℃，并通过慢慢加入饱和的氯化铵溶液(200mL)使其猝灭。分离液层，并以二氯甲烷(125mL)萃取。以饱和的碳酸氢钠、盐水洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过快速层析法纯化粗制的物质，使用15/85的EtOAc/己烷，得到2.89g的9b。
步骤3 将在二氧六环中的4M HCl(2mL)和催化量的10％披钯碳加入到乙醇(100mL)中的9b(2.41g，7.03mmol)的充分搅拌的溶液中。在室温下使用充满氢气的气球氢化该混合物5小时。在此时加入其它部分的催化剂，并在16小时内氢化该混合物。中止该反应，通过硅藻土垫过滤，以乙醇洗涤，并浓缩滤液，得到1.74g的9，可直接使用不需进一步纯化。
中间体10的合成 使用上述的氢化作用程序(步骤3)，使用氧化铂(IV)代替10％披钯碳，将化合物9b转变为所需物质10。
合成 步骤A 将在200mL无水THF中的4，4-二甲基戊二酰亚胺11a(1.5当量，4.86g，Aldrich)的溶液冷却至0℃，并以三苯膦(3当量，18.07g)和S-Boc-叔-丁基甘氨醇(glycinol)11b(5g，Aldrich)处理。逐滴加入偶氮二羧酸二异丙酯(2.5当量，11.3mL，d 1.027)，并在0℃下搅拌所得的溶液。在10分钟后，该混合物变成淤浆，并继续搅拌过夜(0至25℃)。在减低的压力下浓缩该混合物，并将残余物溶解于80mL乙醚中。加入己烷(100mL)，并滤掉沉淀的固体。浓缩滤液至其一半体积，并再度加入己烷(100mL)。滤掉固体。在减低的压力下浓缩滤液。在硅胶上层析残余物(乙酸乙酯/己烷；2∶8)，得到白色固体状的产物11c(4.0g；51％)。
步骤B 将N-Boc保护的胺11c(3g)溶解于50mL在二氧六环中的4M HCl的溶液中。搅拌该反应混合物大约1小时，直到通过TLC分析(乙酸乙酯/己烷；2∶8)确定起始原料已经耗尽为止。在减低的压力下除去所有的挥发物，得到白色固体状的产物11d(2.4g，98％)。
步骤C 以40mL饱和的碳酸氢钠水溶液处理在40mL二氯甲烷中的胺盐酸盐11d(1.0g)的溶液，并在0℃下剧烈地搅拌10分钟。停止搅拌，并容许分离各层。通过针头一次性在有机层(下层)中加入光气(10mL在甲苯中的20％溶液)。在加入后立刻在0℃下剧烈地搅拌该混合物10分钟，并在室温下进一步搅拌2.5小时。以100mL二氯甲烷稀释该混合物，并分离各层。以30mL冷的饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机层，并经硫酸镁干燥。过滤有机层，并以50mL甲苯稀释滤液。浓缩所得的溶液，并将产物11e保持为0.241M溶液。
步骤D 将在40mL无水DHF中的酸1(2.19g)的溶液冷却至0℃，并以碳酸铯(1.2当量，1.22g)处理，接着加入苄基溴(1.2当量，0.85mL，d1.438)。搅拌该反应混合物24小时(温度0至25℃)。以乙酸乙酯(350mL)稀释该混合物，并以水(3×50mL)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度己烷对乙酸乙酯/己烷 25∶75)，得到澄清油状的产物11f(2.1g；77％)。
步骤E 将N-Boc保护的胺11f(2.1g)溶解于50mL在二氧六环中的4MHCl溶液中。在室温下搅拌所得的溶液，直到通过TLC分析(乙酸乙酯/己烷；25∶75)确定所有的起始原料均已耗尽为止。在1小时后，在减低的压力下除去所有的挥发物，得到白色固体状的产物11g(1.8g；98％)。
步骤F
在0℃下，以N-甲基吗啉(2.5当量，0.7mL，d 0.920)处理在10mL无水二氯甲烷中的胺盐酸盐11g的溶液。搅拌所得的溶液5分钟，接着加入异氰酸酯11e(1.3当量，13.6mL在甲苯中的0.241M溶液)。搅拌该反应混合物5分钟，并移除冷却浴。进一步搅拌该混合物2小时。使该混合物在二氯甲烷(200mL)和1M HCl水溶液(50mL)之间分配。分离各层，并以饱和的碳酸氢钠水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；5∶95至35∶65)，得到白色固体状的产物11h(1.33g；84％)。
步骤G 将苄基酯11h(1.3g)溶解于30mL乙酸乙酯中，并以载于碳上的20％二氢氧化钯(0.1mol％；145mg)处理。在50磅/平方英寸下氢化该不均匀的混合物2小时。以200mL二氯甲烷稀释该混合物，并通过短硅藻土柱过滤。在减低的压力下浓缩滤液，得到白色固体状的产物11(1.1g；98％)。
合成
步骤A 按顺序，以N，O-二甲基羟胺盐酸盐(1.1当量，986mg)、BOP试剂(1.1当量，4.47g)和N-甲基吗啉(3.3当量，3.3mL，d 0.920)处理在100mL无水二氯甲烷和5mLDMF中的酸12a(2g)的溶液。将该混合物加热至50℃过夜。将该反应混合物浓缩至其体积的一半，并以400mL乙酸乙酯稀释。以水(80mL)、1M HCl水溶液(80mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(80mL)和盐水(80mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；5∶95至3∶7)，得到澄清油状的产物12b。
步骤B 将在100mL无水THF中的酰胺12b(2.2g)的溶液冷却至0℃。逐滴加入氢化铝锂溶液(1.3当量)。在5分钟后移除冷却浴，并使该混合物达到室温。TLC分析(乙酸乙酯/己烷；2∶8)显示所有的起始原料均已耗尽。通过加入数滴饱和的硫酸氢钠水溶液，小心地使过量的LAH猝灭。以200mL乙醚稀释该混合物，并分成小部分加入饱和的硫酸氢钠水溶液，直到沉淀出白色固体为止。通过硅藻土过滤该混合物，并以50mL盐水洗涤滤液。有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度乙酸乙酯/己烷；5∶95至4∶6)，得到无色油状的醛产物12c。
步骤C 以异腈(1.1当量，680mg)和乙酸(2当量，1.02mL，d 1.0149)处理在100mL无水二氯甲烷中的醛12c(1.8g)的溶液。搅拌该混合物过夜。在真空下除去所有的挥发物，并在硅胶上层析残余物(梯度乙酸乙酯/己烷；2∶8至6∶4)，得到白色固体状的产物12d。
步骤D 以氢氧化锂一水合物处理在60mL THF/MeOH/水的1∶1∶1混合物中的乙酸酯12d(1.6g)的溶液，并搅拌大约1小时，直到通过TLC分析(乙酸乙酯/己烷；1∶1)确定所有的起始原料均已耗尽为止。在旋转蒸发器中除去挥发物，并以二氯甲烷(150mL)稀释残余物。分离各层，以30mL饱和的碳酸氢钠水溶液稀释含水层，并以二氯甲烷(3×80mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到白色固体状的产物12e。
步骤E 将N-Boc保护的胺12e(1.5g)溶解于20mL在二氧六环中的4MHCl中。搅拌该反应混合物大约1小时，直到所有的起始原料均已耗尽为止。在真空下除去所有的挥发物，得到白色固体状的产物12。
合成 依据对制备胺盐酸盐12描述的合成路径，制备胺盐酸盐13。使用市售的N-Boc-D，L-正缬氨酸作为起始原料，并使用烯丙基异氰化物代替环丙基异氰化物，形成相应的烯丙基酰胺。
合成 依据对制备胺盐酸盐12描述的合成路径，制备胺盐酸盐14。使用N-Boc-D，L-正亮氨酸作为起始原料，并使用烯丙基异氰化物代替环丙基异氰化物，形成相应的烯丙基酰胺。
合成 依据对制备胺盐酸盐12描述的合成路径，制备胺盐酸盐15。使用市售的N-Boc-β-环丙基-D，L-丙氨酸作为起始原料，并使用烯丙基异氰化物代替环丙基异氰化物，形成相应的烯丙基酰胺。
抑制剂的合成制备实施例A 步骤1 在0℃下，搅拌在5mL无水二氯甲烷和5mL无水DMF中的酸1(255mg)的溶液，并以HATU(368mg)处理。加入胺盐酸盐2(201mg)，接着加入N-甲基吗啉(0.42mL)。将该反应物逐渐加温至室温，并搅拌过夜。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于100mL乙酸乙酯中。以1N HCl水溶液(15mL)、饱和NaHCO3水溶液(15mL)、水(15mL)、盐水(15mL)洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤并在减低的压力下浓缩，得到所需的产物A1。不需对产物进行进一步的纯化。
步骤2
以EDCl(1.3g)和二氯乙酸(0.42mL，d 1.563)处理在20mL甲苯/DMSO的1∶1混合物中的A1(360mg)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物大约3小时。以二氯甲烷(100mL)稀释该反应混合物，并以饱和的NaHCO3水溶液(15mL)、1N HCl水溶液(15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；2∶8至5∶5)，得到产率84％的产物A2。
步骤3 以10mL甲酸处理N-Boc保护的胺A2。搅拌所得的溶液2小时。在减低的压力下除去所有的挥发物。不需对产物A3进行更进一步的纯化。
步骤4 将N-甲基吗啉(0.037mL，d 0.920)加入到1mL无水二氯甲烷中的胺盐A3的溶液中。在冰水浴中冷却所得的溶液，并慢慢地加入在甲苯中的异氰酸酯的溶液(2.5mL的0.135M溶液)。搅拌该混合物2小时(温度0至25℃)。以60mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1NHCl水溶液洗涤。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物A(15mg)，产率20％。HRMS(FAB)C37H53N6O7[M+H]的计算值693.3976；实验值693.3987。
制备实施例B 步骤1 将N-甲基吗啉(0.037mL，d 0.920)加入到1mL无水二氯甲烷中的胺盐A3的溶液中。在冰水浴中冷却所得的溶液，并慢慢地加入在甲苯中的异氰酸酯4的溶液(0.64mL的0.538M溶液)。搅拌该混合物2小时(温度0至25℃)。以60mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1NHCl水溶液洗涤。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物B(14.6mg)，产率22％。HRMS(FAB)C31H50N5O6[M+H]的计算值588.3761；实验值588.3757。
制备实施例C 步骤1 将N-甲基吗啉(0.037mL，d 0.920)加入到1mL无水二氯甲烷中的胺盐A3的溶液中。在冰水浴中冷却所得的溶液，并慢慢地加入在甲苯中的异氰酸酯5的溶液(1.4mL的0.250M溶液)。搅拌该混合物2小时(温度0至25℃)。以60mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1NHCl水溶液洗涤。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物C(9.7mg)，产率13％。HRMS(FAB)C34H58N5O7S[M+H]的计算值680.4057；实验值680.4066。
制备实施例D 步骤1 将N-甲基吗啉(0.037mL，d 0.920)加入到1mL无水二氯甲烷中的胺A3的溶液中。在冰水浴中冷却所得的溶液，并慢慢地加入在甲苯中的异氰酸酯6的溶液(1.0mL的0.340M溶液)。搅拌该混合物2小时(温度0至25℃)。以60mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1N HCl水溶液洗涤。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物D(23mg)，产率32％。HRMS(FAB)C31H55N6O7S[M+H]的计算值655.3853；实验值655.3870。
制备实施例E 步骤1 将N-甲基吗啉(0.037mL，d 0.920)加入到1mL无水二氯甲烷中的胺A3的溶液中。在冰水浴中冷却所得的溶液，并慢慢地加入在甲苯中的异氰酸酯7的溶液(1.4mL的0.250M溶液)。搅拌该混合物2小时(温度0至25℃)。以60mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1N HCl水溶液洗涤。以二氯甲烷(2×20mL)反萃取含水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物D(11.5mg)，产率14％。HRMS(FAB)C34H55N6O7S2[M+H]的计算值723.3574；实验值723.3568。
制备实施例F 步骤1 在0℃下搅拌在10mL无水二氯甲烷和10mL无水DMF中的酸1(280mg)的溶液，并以HATU(1.4当量，405mg)处理。加入在二氯甲烷中的胺盐8(1.3当量，569mg)。然后加入N-甲基吗啉(4当量，0.33mL，d 0.920)。在-20℃下搅拌该反应混合物48小时。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于200mL乙酸乙酯中。以水(30mL)、1N HCl水溶液(30mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。产物F1可直接使用，不需进一步纯化。
步骤2 以Dess-Martin全碘烷(periodinane)(3当量，966mg)处理在20mL无水二氯甲烷中的羟基酰胺F1(415mg)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物45分钟。以1M硫代硫酸钠水溶液(15mL)和饱和的碳酸氢钠水溶液(15mL)处理该混合物，并搅拌15分钟。以二氯甲烷(3×50mL)萃取该混合物。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至4∶6)，得到无色油状的产物F2。
步骤3 在室温下，将N-Boc保护的胺F2(155mg)溶解于5mL在二氧六环中的4M HCl中。搅拌该混合物，直到通过TLC分析(丙酮/己烷；3∶7)确定所有的起始原料均已耗尽为止。在45分钟后，在真空下除去所有的挥发物，得到白色固体状的产物F3，可直接使用不需进一步纯化。
步骤4 以N-甲基吗啉(3.7当量，0.06mL，d 0.920)处理在2mL无水二氯甲烷中的胺盐酸盐F3(67mg)的溶液，并冷却至0℃。逐滴加入异氰酸酯(0.75mL在甲苯中的0.2M溶液)，并搅拌该混合物过夜(温度0至25℃)。以50mL二氯甲烷稀释该反应混合物，并以15mL 1M HCl水溶液和15mL饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至6∶4)，得到白色固体状的产物F。HRMS(FAB)C36H58N5O7S[M+H]的计算值704.4057；
实验值704.4071。
制备实施例G 步骤1 在0℃下搅拌在2mL无水二氯甲烷和1mL无水DMF中的酸11(60mg)的溶液，并以HATU(1.4当量，60mg)处理。加入胺盐12(1.2当量，30mg)，接着加入N-甲基吗啉(4当量，0.05mL，d 0.920)。搅拌该反应混合物过夜(温度0至25℃)。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于50mL乙酸乙酯中。以水(20mL)、1M HCl水溶液(10mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。产物G1可直接使用，不需进一步纯化。
步骤2 以Dess-Martin全碘烷(periodinane)(2.0当量，95mg)处理在10mL无水二氯甲烷中的羟基酰胺G1(0.112mmol)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物30分钟。以1M硫代硫酸钠水溶液(10mL)处理该混合物，并搅拌5分钟。也加入饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)，并继续搅拌另外10分钟。以二氯甲烷(3×30mL)萃取该混合物。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至4∶6)，得到白色固体状的产物G(63mg；80％)。HRMS(FAB)C37H61N6O7[M+H]的计算值701.4601；实验值701.4614。
制备实施例H 步骤1 在0℃下搅拌在2mL无水二氯甲烷和1mL无水DMF中的酸11(60mg)的溶液，并以HATU(1.4当量，60mg)处理。加入胺盐13(1.2当量，30mg)，接着加入N-甲基吗啉(4当量，0.05mL，d 0.920)。搅拌该反应混合物过夜(温度0至25℃)。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于50mL乙酸乙酯中。以水(20mL)、1M HCl水溶液(10mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。产物H1可直接使用，不需进一步纯化。
步骤2 以Dess-Martin全碘烷(periodinane)(2.0当量，95mg)处理在10mL无水二氯甲烷中的羟基酰胺H1(0.112mmol)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物30分钟。以1M硫代硫酸钠水溶液(10mL)处理该混合物，并搅拌5分钟。也加入饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)，并继续搅拌另外10分钟。以二氯甲烷(3×30mL)萃取该混合物。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至45∶55)，得到白色固体状的产物H(64mg；82％)。HRMS(FAB)C37H61N6O7[M+H]的计算值701.4601；实验值701.4607。
制备实施例I 步骤1 在0℃下搅拌在2mL无水二氯甲烷和1mL无水DMF中的酸11(60mg)的溶液，并以HATU(1.4当量，60mg)处理。加入胺盐14(1.2当量，32mg)，接着加入N-甲基吗啉(4当量，0.05mL，d 0.920)。搅拌该反应混合物过夜(温度0至25℃)。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于50mL乙酸乙酯中。以水(20mL)、1M HCl水溶液(10mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。产物I1可直接使用，不需进一步纯化。
步骤2 以Dess-Martin全碘烷(periodinane)(2.0当量，95mg)处理在10mL无水二氯甲烷中的羟基酰胺I1(0.112mmol)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物30分钟。以1M硫代硫酸钠水溶液(10mL)处理该混合物，并搅拌5分钟。也加入饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)，并继续搅拌另外10分钟。以二氯甲烷(3×30mL)萃取该混合物。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至45∶55)，得到白色固体状的产物I(64mg；80％)。
制备实施例J
步骤1 在0℃下搅拌在2mL无水二氯甲烷和1mL无水DMF中的酸11(60mg)的溶液，并以HATU(1.4当量，60mg)处理。加入胺盐15(1.2当量，31mg)，接着加入N-甲基吗啉(4当量，0.05mL，d 0.920)。搅拌该反应混合物过夜(温度0至25℃)。在真空下除去所有的挥发物，并将残余物溶解于50mL乙酸乙酯中。以水(20mL)、1M HCl水溶液(10mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机层。有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减低的压力下浓缩。产物J1可直接使用，不需进一步纯化。
步骤2 以Dess-Martin全碘烷(periodinane)(2.0当量，95mg)处理在10mL无水二氯甲烷中的羟基酰胺J1(0.112mmol)的溶液。在室温下搅拌该反应混合物30分钟。以1M硫代硫酸钠水溶液(10mL)处理该混合物，并搅拌5分钟。也加入饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)，并继续搅拌另外10分钟。以二氯甲烷(3×30mL)萃取该混合物。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在硅胶上层析残余物(梯度丙酮/己烷；1∶9至45∶55)，得到白色固体状的产物J(57mg；71％)。HRMS(FAB)C38H61N6O7[M+H]的计算值713.4601；实验值713.4607。
本发明涉及新的HCV蛋白酶抑制剂。可在其抑制HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶的能力上，证明该用途。通过下列的体外测定，说明这类证明的一般程序。
HCV蛋白酶抑制活性的测定分光光度计测定可通过依据R.Zhang等，Analytical Biochemistry，270(1999)268-275描述的程序(其公开内容以引用的方式结合到本文中)，对本发明的化合物进行HCV丝氨酸蛋白酶的分光光度测定。该测定以适合连续监视HCV NS3蛋白酶活性的色原酯(chromogenic ester)酶解物的蛋白水解作用为基础。该酶解物衍生自NS5A-NS5B接合序列的P侧(Ac-DTEDVVX(Nva)，其中X＝A或P)，其C-终端羧基基团被用四个不同发色团的醇(3-或4-硝基酚、7-羟基-4-甲基-香豆素或4-苯基偶氮苯酚)之一酯化。下文解释了这些新的分光光度测定的酯酶解物的合成、鉴定和应用，以便进行HCV NS3蛋白酶抑制剂的高通过量筛选和详细的动力学评估。
材料和方法材料从Sigma Chemical Company(St.Louis，Missouri)获得与测定有关的缓冲液的化学试剂。肽合成的试剂则得自AldrichChemicals、Novabiochem(San Diego，California)、Applied Biosystems(Foster City，California)和Perseptive Biosystems (Framingham，Massachusetts)。以手工或在自动ABI 431A型合成器(得自AppliedBiosystems)上合成肽。UV/VIS分光计LAMBDA 12型得自PerkinElmer(Norwalk，Connecticut)，而96-孔UV培养板则获自Corning(Corning，New York)。预热块可得自USA Scientific(Ocala，Florida)，且96-孔培养板旋转器(vortexer)则得自Labline Instruments(MelrosePark，Illinois)。具有单色仪的Spectramax Plus微量滴定板读取器获自Molecular Devices(Sunnyvale，California)。
酶制备通过使用先前发表的程序(D.L.Sali等，Biochemistry，37(1998)3392-3401)，制备重组的异种二聚体的HCV NS3/NS4a蛋白酶(strain la)。通过Biorad染色法，使用先前通过氨基酸分析定量的重组HCV蛋白酶标准物，确定蛋白浓度。在开始测定的前，使用BioradBio-Spin P-6预先包装的管柱，以测定缓冲液(25mM MOPS pH6.5、300mM NaCl、10％甘油、0.05％月桂基麦芽糖苷、5μM EDTA和5μM DTT)交换酶储备缓冲液(50mM磷酸钠pH8.0、300mM NaCl、10％甘油、0.05％月桂基麦芽糖苷和10mM DTT)。
酶解物合成和纯化按照R.Zhang等(出处同上)的报告，进行酶解物的合成，并通过使用标准方案(K.Barlos等，Int.J.Pept.Protein Res.，37(1991)，513-520)，使Fmoc-Nva-OH锚定在2-氯三苯甲基氯树脂上来启动。接着使用Fmoc化学，以手工或在自动ABI 431型肽合成器上组装肽。通过在二氯甲烷(DCM)中的10％乙酸(HOAc)和10％三氟乙醇(TFE)处理30分钟，或通过在DCM中的2％三氟乙酸(TFA)处理10分钟，从树脂上裂解N-乙酰化且完全保护的肽片段。以共沸方式蒸发合并的滤液和DCM洗涤液(或以Na2CO3水溶液重复萃取)，除去在裂解时使用的酸。将DCM相经Na2SO4干燥，并蒸发。
使用标准酸-醇偶联程序(K.Holmber等，Acta Chem.Scand.，B33(1979)410-412)，组装酯酶解物。将肽片段溶解于无水吡啶(30-60mg/mL)中，在其中加入10摩尔当量的发色团和催化量(0.1当量)的对-甲苯磺酸(pTSA)。加入二环己基碳化二亚胺(DCC，3当量)，以启动偶联反应。通过HPLC监测产物形成，并可发现在室温下12-72小时后完成反应。在真空下蒸发吡啶溶剂，并通过与甲苯共沸蒸发进一步除去。用在DCM中的95％TFA处理2小时，将肽酯脱保护，并以无水的二乙醚萃取3次，除去过量的发色团。在C3或C8管柱上，使用30％至60％乙腈梯度(使用6倍的柱体积)，通过逆相HPLC纯化脱保护的酶解物。在HPLC纯化后的整体产率可能是大约20-30％。可通过电喷雾电离质谱分析，证实分子质量。以干粉形式将酶解物在干燥条件下储存。
酶解物和产物的光谱在pH6.5测定缓冲液中，获得酶解物和相应的发色团产物的光谱。在最佳非高峰波长处(对3-Np和HMC为340nm，对PAP为370nm，而对4-Np为400nm)，在1-cm比色杯中，使用多倍稀释测定消光系数。将最佳非高峰波长定义为在酶解物与产物之间，产生吸光度的最大分数差异(产物OD-酶解物OD/酶解物OD)的波长。
蛋白酶测定在30℃下，在96-孔微量滴定板中，使用200μl反应混合物进行HCV蛋白酶测定。测定缓冲液条件(25mM MOPS pH6.5，300mM NaCl，10％甘油，0.05％月桂基麦芽糖苷，5μM EDTA和5uM DTT)是最适合NS3/NS4a异二聚体(heterodimer)的(D.L.Sali等，出处同上)。通常，将缓冲液、酶解物和抑制剂的150μl混合物放在孔中(DMSO的终浓度≤4％体积/体积)，并容许在30℃下预先温育大约3分钟。然后使用50μl在测定缓冲液中的预热的蛋白酶(12nM，30℃)启动反应(终体积200μl)。在整个测定长度(60分钟)内，使用装有单色仪的Spectromax Plus微量滴定板读取器，在合适的波长下(对3-Np和HMC为340nm，对PAP为370nm，而对4-Np为400nm)，监测培养板的吸光度变化(可利用使用截止滤纸的培养板读取器获得可接受的结果)。在合适的波长下，对作为无-酶水解作用的对照组的无酶空白组，监视在Nva和发色团之间的酯键的氮白水解裂解作用。在30-倍酶解物浓度范围(～6-200μM)内，进行酶解物动力学参数的评估。使用线性回归确定初速，并通过使用非线性回归分析，使数据拟合Michaelis-Menten方程式，获得动力学常数(Mac Curve Fit 1.1，K.Raner)。在假定酶完全是有活性的情况下计算转换数(Turnovernumbers)(kcat)。
评估抑制剂和失活剂在固定浓度的酶和酶解物下，根据为了竞争性抑制动力学而重新整理的Michaelis-Menten方程式vo/vi＝1+[I]o/(Ki(1+[S]o/Km))，通过vo/vi对抑制剂浓度([I]o)作图，以实验方式确定竞争抑制剂Ac-D-(D-Gla)-L-I-(Cha)-C-OH(27)、Ac-DTEDVVA(Nva)-OH和Ac-DTEDVVP(Nva)-OH的抑制常数(Ki)，其中vo为未被抑制的初速，vi为在抑制剂存在下，在任何给定的抑制剂浓度([I]o)下的初速，及[S]o是所使用的酶解物浓度。使用线性回归拟合所得数据，并使用所得的斜率1/(Ki(1+[S]o/Km)来计算Ki值。在下文表2中示出一些本发明化合物所得的Ki*值(按毫微摩尔计)。
表2
表2A列举另外的本发明化合物及其活性表2A
Ki*的范围表示A≤75nM；75＜B≤250nM；C＞250nM。
虽然已经结合上文所述的具体实施方案一起说明本发明，但其许多改变、修饰和其它变化对本领域普通技术人员而言将是显而易见的。打算使所有的这类改变、修饰和变化落入本发明的精神及范围内。
权利要求
1.一种化合物，或所述化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物，或所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物或酯，所述化合物具有如式1所示的一般结构 式1其中R1为H、OR8、NR9R10或CHR9R10，其中R8、R9和R10可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基-、烯基-、炔基-、芳基-、杂烷基-、杂芳基-、环烷基-、杂环基-、芳烷基-和杂芳烷基，或在NR9R10中的R9和R10彼此连接，使NR9R10形成四至八元的杂环基，而或者同样独立地，在CHR9R10中的R9和R10彼此连接，使CHR9R10形成四至八元的环烷基；R2和R3可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；Y选自下列部分 其中G为NH或O；且R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25可以是相同或不同的，各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基，或者(i)R17和R18彼此独立地连接，形成三至八元的环烷基或杂环基；(ii)同样独立地，R15和R19彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iii)同样独立地，R15和R16彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iv)同样独立地，R15和R20彼此连接，形成四至八元的杂环基；(v)同样独立地，R22和R23彼此连接，形成三至八元的环烷基或四至八元的杂环基；且(vi)同样独立地，R24和R25彼此连接，形成三至八元的环烷基或四至八元的杂环基；其中每个所述烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基可以是未取代的，或任选由一个或多个选自以下的部分独立地取代羟基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、烷氨基、芳氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、亚磺酰氨基、烷基、芳基、杂芳基、烷基亚磺酰氨基、芳基亚磺酰氨基、酮基、羧基、烷氧羰基、羧酰氨基、烷氧基羰氨基、烷氧基羰氧基、烷基脲基、芳基脲基、卤代、氰基和硝基。
2.权利要求1的化合物，其中R1为NR9R10，且R9为H，R10为H或R14，其中R14为H、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、芳基-烷基、烯基、炔基或杂芳基-烷基。
3.权利要求2的化合物，其中R14为选自下列的基团
4.权利要求1的化合物，其中R2为选自下列的部分
5.权利要求1的化合物，其中R3为选自下列的基团 其中R31为OH或O-烷基；和R32为H、C(O)CH3、C(O)OtBu或C(O)N(H)tBu。
6.权利要求5的化合物，其中R3为选自下列的部分
7.权利要求1的化合物，其中G为NH。
8.权利要求7的化合物，其中Y选自下列的部分 其中R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25各自独立选自H、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基，或者(i)R17和R18彼此独立地连接，形成三至八元的环烷基或杂环基；(ii)同样独立地，R15和R19彼此连接，形成四至八元的杂环基；(iii)同样独立地，R15和R16彼此连接，形成四至八元的杂环基；且(iv)同样独立地，R15和R20彼此连接，形成四至八元的杂环基；或其中每个所述烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基可以是未取代的，或任选由一个或多个选自以下的部分独立地取代羟基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、烷氨基、芳氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、亚磺酰氨基、烷基、芳基、杂芳基、烷基亚磺酰氨基、芳基亚磺酰氨基、酮基、羧基、烷氧羰基、羧酰氨基、烷氧基羰氨基、烷氧基羰氧基、烷基脲基、芳基脲基、卤代、氰基和硝基。
9.权利要求8的化合物，其中所述部分 选自 其中Y32为选自下列的基团
10.权利要求8的化合物，其中Y选自
11.权利要求1的化合物，其中所述部分 选自下列的结构
12.权利要求1的化合物，其中R1为NHR14，其中R14为选自下列的基团 R2为选自下列的部分 R3为选自下列的部分 所述部分 选自 且Y选自
13.一种药用组合物，它包括作为活性成分的至少一种权利要求1的化合物。
14.权利要求13的药用组合物，它用于治疗与HCV有关的病症。
15.权利要求14的药用组合物，它还包含至少一种药学上可接受的载体。
16.权利要求15的药用组合物，它还包含至少一种抗病毒剂。
17.权利要求16的药用组合物，它还另外包含至少一种干扰素。
18.权利要求17的药用组合物，其中所述至少一种抗病毒剂是利巴韦林，及至少一种干扰素是α-干扰素或聚乙二醇化的干扰素。
19.一种治疗与HCV有关的病症的方法，所述方法包括给予需要这类治疗的患者药用组合物，所述药用组合物包含治疗有效量的至少一种权利要求1的化合物。
20.权利要求19的方法，其中所述给予为口服或皮下给予。
21.权利要求1的化合物在制备治疗与HCV有关的病症的药物中的用途。
22.一种制备用于治疗与HCV有关的病症的药用组合物的方法，所述方法包括使至少一种权利要求1的化合物与至少一种药学上可接受的载体产生紧密物理接触。
23.一种显示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物，或所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物或酯，所述化合物选自具有下列结构的化合物
24.一种治疗与HCV有关的病症的药用组合物，所述组合物包含治疗有效量的一或多种权利要求23的化合物，以及药学上可接受载体。
25.权利要求24的药用组合物，它还含有至少一种抗病毒剂。
26.权利要求25的药用组合物，它还另外含有至少一种干扰素或PEG-干扰素α缀合物。
27.权利要求26的药用组合物，其中所述至少一种抗病毒制剂是利巴韦林，及所述至少一种干扰素是α-干扰素或聚乙二醇化的干扰素。
28.一种治疗与丙型肝炎病毒有关病症的方法，该方法包括给予有效量的一种或多种权利要求23的化合物。
29.一种调节丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶活性的方法，该方法包括使HCV蛋白酶与一种或多种权利要求23的化合物接触。
30.一种治疗、预防或改善丙型肝炎的一或多种症状的方法，该方法包括给予有效量的一种或多种权利要求23的化合物。
31.权利要求30的方法，其中所述HCV蛋白酶是NS3/NS4a蛋白酶。
32.权利要求31的方法，其中所述化合物抑制HCV NS3/NS4a蛋白酶。
33.一种调节丙型肝炎病毒(HCV)多肽的加工的方法，该方法包括在其中所述多肽被加工的条件下，使含有HCV多肽的组合物与一种或多种权利要求23的化合物接触。
34.一种治疗与HCV有关病症的药剂的方法，该方法包括给予需要这类治疗的患者药用组合物，所述组合物包含治疗有效量的至少一种化合物，或所述化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物，或所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物或酯，所述选自下列的化合物
35.纯化形式的权利要求1的化合物。
全文摘要
本发明公开新的式I的化合物，其具有HCV蛋白酶抑制剂活性，以及制备这类化合物的方法。在另一个实施方案中，本发明公开包含这类化合物的药用组合物，以及使用它们来治疗与HCV蛋白酶有关的病症的方法。其中R
文档编号A61K38/04GK1946692SQ200580012857
公开日2007年4月11日 申请日期2005年2月24日 优先权日2004年2月27日
发明者F·G·恩裘洛吉, S·文卡特拉曼, A·阿拉萨潘, F·贝拉斯克斯, V·M·吉里加瓦拉布汉 申请人:先灵公司
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