蒽醌zsu-h85在制备抗耻垢分枝杆菌药物中的应用的制作方法

专利名称：：蒽醌zsu-h85在制备抗耻垢分枝杆菌药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，尤其涉及抗结核病药物
技术领域：
，具体涉及一种蒽醌ZSU-H85在制备抗耻垢分枝杆菌药物中的应用。
背景技术：
：据世界卫生组织(WHO)估计，目前全球受结核菌感染的人口占世界人口的三分之一，其中5%10%的感染者成为结核病患者。我国有近半人口(5.5亿)感染了结核菌，明显高于全球l/3人口的感染水平。近几年我国卫生部发布的"全国法定传染病月度报告"中显示结核病与肝炎(各种类型合计)的月发病数均在11万15万左右，这些数据表明我国的结核病疫情十分严峻、是现阶段我国面临的严重公共卫生问题之一。免疫功能低下(包括艾滋病)人群常发生非结核分枝杆菌(如鸟-胞内分枝杆菌复合菌组)的条件性感染或与结核菌的混合感染，出现与典型结核病相类似的症状，是艾滋病患者主要的死亡原因；而更为严重的是，这些非结核分枝杆菌对现有抗结核药物常天然耐药，表现为天然的多重耐药性。多药耐药结核分枝杆菌的不断增加迫使人们研制即对耐药结核分枝杆菌有效，又可縮短疗程的新药。耻垢分枝杆菌在通常的情况下被认为是非致病性分枝杆菌，但是因其具有和结核杆菌相同的抗酸细胞壁，而细胞内转录、翻译的过程也与结核杆菌相似，且生长速度快，在结核病的研究中得到越来越多的学者重视。耻垢分枝杆菌对现有的抗结核药物存在外排机制，对异烟肼、利福平、氨基糖苷类等常用的抗结核药物天然耐药，故能抑制耻垢分枝杆菌生长的化合物，在抗结核药物研制中有特殊应用。强生公司Andres等领导的研究人员在体外用快速生长的耻垢分枝杆菌进行药物筛选，得到一个对分枝杆菌作用活性最强的化合物R207910，它能在体内存留更长的时间，对已确定感染结核菌小鼠模型治疗中，R207910对结核分枝杆菌的活性高于异烟肼和利福平，表现出极佳的早期和晚期杀菌活性、并使疗程縮短，R207910已作为近40年来进入临床研究的第一个新类型的抗结核药物。文献"动植物来源内生菌次级代谢产物成分及抗菌活性研究"(汪夕芳，动植物来源内生菌次级代谢产物成分及抗菌活性研究，中山大学硕士论文)中给出一种来源于海洋红树林内生真菌的蒽醌化合物蒽醌ZSU-H85，该蒽醌化合物的结构式如式(I)所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>蒽醌ZSU-H85的外观为黄色固体，m.p.24rC(分解)；[a]D2Q=-144(MeOH);分子式为C16H1206，HREIMSm/z:300.0628(分子离子)；紫外光谱UV;ax/nm(s)(MeOH):237(110696)，296(104035)，468(151359);红外光谱IRv/cm-1(KBr):3553，3413，3235,1638,1617,617;核磁共振氢谱&NMR(500MHzCD3ODTMS)5:7.13(d,J=2,5Hz)，6.53(d,J=2.5Hz)，8.31(s)，7.48(s)，5.20(q，J=6.5Hz)，1.47(3H,d,J=6.5Hz);核磁共振碳谱13CNMR(125MHzCD3ODTMS)S:磨.l(CH)，166.3(C),108.8(CH)，賜.O(C)，126.3(CH)，141.0(C),160.8(C)，113.3(CH)，183.7(C),187.4(C),136.6(C),110.9(C),135.4(C),127.0(C),65.8(CH)，23.7(CH3)。但有关该化合物的性质尤其是对抗结核药物的性质，并未有相关报道。
发明内容本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供蒽醌ZSU-H85在制备抗耻垢分枝杆菌药物中的应用。本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的本发明人从红树林内源真菌Fw"n'wwsp.ZSU-H85的培养液的乙酸乙酯萃取部位、菌体的甲醇提取经硅胶柱层析，在石油醚/乙酸乙酯体积比为70/30的洗脱液中得到蒽醌ZSU-H85，其具体步骤如下(1)菌种培养挑取红树林内生真菌i^"n'画^ZSU-H85(L.K)的菌丝接种在固体培养基斜板上，3035°C培养57天，在4'C下保存；所述固体培养基的配方为含马铃薯20质量％、葡萄糖2质量％、琼脂2质量％和20质量％天然海水；(2)发酵培养挑取上述培养复活的红树林内生真菌Fw^"wm^ZSU-H85(L.K)的菌丝接种在液体培养基中，25"C静置培养30天，过滤，收集菌体和发酵液；所述液体培养基含有马铃薯20质量％，葡萄糖2质量％，20质量％天然海水，pH7.0;(3)提取和分离将上述发酵液用乙酸乙酯等体积萃取三次，浓縮萃取液；将上述菌体干燥后，加入甲醇，超声提取三次，在5(TC下减压浓縮至干，合并菌体提取物和上述浓縮萃取液，并加入三倍重量的硅胶，经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，在石油醚/乙酸乙酯体积比为70/30的洗脱液中得到含蒽醌ZSU-H85初产品，经第二次硅胶柱层析，得到纯的蒽醌ZSU-H85。本发明通过固体培养基稀释法证明上述蒽醌ZSU-H85具有抗耻垢分枝杆菌活性，可作为治疗结核菌感染疾病的先导化合物，可用于制备治疗结核病药物。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果本发明的蒽醌ZSU-H85来源于海洋真菌，海洋真菌种类繁多、数量庞大，从真菌提取的方法简单，使得化合物蒽醌ZSU-H85来源丰富、成本低廉；化合物蒽醌ZSU-H85具有抗耻坭分枝杆菌活性，作为治疗结核菌感染疾病的先导化合物应用前景广阔。具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明做进一步地描述，但具体实施例并不对本发明做任何限定。实施例1化合物蒽醌ZSU-H85的制备方法本实施例化合物蒽醌ZSU-H85的制备方法，其具体包括如下步骤(1)菌种培养挑取红树林内生真菌/^『/騰^ZSU-H85(L.K)的菌丝接种在固体培养基斜板上，3035°C培养57天，在4'C下保存；所述固体培养基的配方为含马铃薯20质量％、葡萄糖2质量％、琼脂2质量％和20质量％天然海水；(2)发酵培养挑取上述培养复活的红树林内生真菌FwrahwwwZSU-H85(L.K)的菌丝接种在液体培养基中，25。C静置培养30天，过滤，收集菌体和发酵液；所述液体培养基含有马铃薯20质量％，葡萄糖2质量％，20质量％天然海水，pH7.0;(3)提取和分离将上述发酵液用乙酸乙酯等体积萃取三次，浓縮萃取液；将上述菌体干燥后，加入甲醇，超声提取三次，在5(TC下减压浓縮至干，合并菌体提取物和上述浓縮萃取液，并加入三倍重量的硅胶，经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，在石油醚/乙酸乙酯体积比为70/30的洗脱液中得到含蒽醌ZSU-H85初产品，经第二次硅胶柱层析，得到纯的蒽醌ZSU-H85。本实施例的蒽醌ZSU-H85的结构式如式(I)所示，外观为黄色固体，易溶于甲醇，m.p.241。C(分解)；[a]D2°=-144(MeOH);分子式为C16H1206，HREIMSm/z:300.0628(分子离子)；紫外光谱UVWx/nm(s)(MeOH):237(110696)，296(104035)，468(151359);红外光谱IRv/cm-1(KBr):3553,3413,3235,1638,1617,617;核磁共振氢谱&NMR(500MHzCD3ODTMS)S:7.13(d,J=2.5Hz)，6.53(d,J=2.5Hz)，8.31(s)，7.48(s)，5.20(q，J=6.5Hz)，1.47(3H,d,J=6.5Hz);核磁共振碳谱13CNMR(125MHzCD3ODTMS)S:跳l(CH)，166.3(C),108.8(CH)，166.0(C),126.3(CH)，141.0(C),160.8(C),U3.3(CH)，183.7(C),187.4(C),136.6(C),110.9(C),135.4(C),127.0(C),65.8(CH)，23.7(CH3)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>实施例2蒽醌ZSU-H85抗耻垢分枝杆菌绝对浓度测定从斜面上刮取耻垢分枝杆菌养物，加入到3mlMiddlebrook7H9肉汤培养基中，加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于涡旋振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管(MacFarlandNo.l)比浊，即配成lmg/ml的耻垢分枝杆菌菌悬液。将蒽醌ZSU-H85用DMSO配成高浓度的原液，用含5%的吐温-80无菌超纯水稀释原液至lmg/ml，将稀释好的蒽醌ZSU-H85按等比稀释法加入到4mlMiddlebrook7H11琼脂培养基中(该培养基已经121。C高压蒸气灭菌15分钟，并冷却至5055°C)，混匀，制成lmg/ml、500ug/ml和250ug/ml的含蒽醌ZSU-H85斜面培养基。将浓度为lmg/ml的卡介苗菌悬液用接种环蘸取数环，分别接种于含系列浓度的蒽醌ZSU-H85的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37。C培养24天，观察实验结果，结果如表l所示。表1固体培养基稀释法测定蒽醌ZSU-H85抗耻垢分枝杆菌MIC(|ig/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>从表l可以看出，蒽醌ZSU-H85对耻垢分枝杆菌具有抑菌活性，且最小抑菌浓度MIC为500(ig/ml。本实施例中所用Middlebrook7H9肉汤培养基和Middlebrook7Hl1琼脂培养基为本领域技术人员进行结核菌培养时的常用培养基，其配方采用常规配方即可。权利要求1、蒽醌ZSU-H85在制备抗耻垢分枝杆菌药物中的应用，其特征在于所述蒽醌ZSU-H85的结构式如式(I)所示。2、根据权利要求1所述应用，蒽醌ZSU-H85对耻垢分枝杆菌的最小抑菌浓度MIC为500(ig/ml。全文摘要本发明公开蒽醌ZSU-H85在制备抗耻垢分枝杆菌药物中的应用，所述蒽醌ZSU-H85的结构式如式(I)所示。本发明发现蒽醌ZSU-H85具有抗耻垢分枝杆菌活性，对耻垢分枝杆菌的最小抑菌浓度MIC为500μg/ml，可用于制备抗耻垢分枝杆菌药物。蒽醌ZSU-H85来源于海洋真菌，海洋真菌种类繁多、数量庞大，从真菌提取的方法简单，使得化合物蒽醌ZSU-H85来源丰富、成本低廉。文档编号A61K31/122GK101669927SQ200910192550公开日2010年3月17日申请日期2009年9月22日优先权日2009年9月22日发明者佘志刚,林永成,梁碧怡,军王,赖小敏申请人:中山大学