新型结晶化合物的制作方法
专利名称：新型结晶化合物的制作方法
背景技术：
本发明涉及一种3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的新型结晶形式及其制备方法。
3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈具有化学式C16H20N6O并具有以下结构式 其合成描述在待审美国专利申请序列号09/732,669(2000年12月8日申请)和美国临时专利申请序列号60/294,775(2001年5月31日申请)中，这两个专利申请都转让给本发明的让受人，并将它们全文加入本文作为参考。3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈及其相应的柠檬酸盐可用作蛋白激酶如Janus激酶3(本文后面还称之为JAK3)的抑制剂，并且本身可以作为免疫抑制剂用于器官移植、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及需要免疫抑制的其它适应症。
测定结晶形式的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐具有适合支持片剂开发的固态性能。
本发明还涉及结晶3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的制备方法。
发明概述本发明涉及一种新型结晶形式3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐新型结晶形式，它可用于(a)治疗或预防选自如下的紊乱或病症器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及其它自身免疫疾病或(b)抑制哺乳动物(包括人)的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)。该新型结晶形式在约203℃-约210℃的温度下熔融，并且显示以度计2-theta(2θ)在5.7、16.1、20.2和20.5的特征峰的X-射线衍射图样，如
图1所述。有关X-射线粉末衍射图样的理论的讨论可以在Stout&Jensen，X-Ray Structure DeterminationA Practical Guide，MacMillan Co.，New York，N.Y.(1968)中找到，将其全文加入本文作为参考。
本发明还涉及结晶形式的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐，它具有如图2所述的差示扫描量热曲线，该曲线在约203℃-约210℃的温度具有以特征峰，并且在约199℃-约206℃的范围内以5℃/分钟的扫描速度开始。
本发明还涉及一种无定形的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐。
本发明还涉及一种药用组合物，它用于(a)治疗或预防选自如下的紊乱或病症器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病、以及其它自身免疫疾病或(b)抑制哺乳动物(包括人)的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)，该药用组合物包括对这些紊乱或病症有效量的式I化合物和一种药用可接受的载体。
本发明还涉及一种抑制哺乳动物、包括人的蛋白酪氨酸激酶或Janus激酶3(JAK3)的方法，包括向所述哺乳动物给予有效量的式I化合物。
本发明还涉及一种治疗或预防哺乳动物、包括人在内的选自如下的紊乱或病症的方法器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病、以及其它自身免疫疾病，该方法包括向所述哺乳动物给予有效地治疗这种病症量的式I化合物。
本发明还涉及一种制备3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的方法，包括使3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈与柠檬酸反应。
附图简述图1是3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的特征X-射线粉末衍射图样。(垂直轴强度(计数)；水平轴2θ(度))。
图2是3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的特征差示扫描量热曲线。(扫描速度5℃/分钟；垂直轴热流(w/g)；水平轴温度(℃))。
发明详述如下所述制备结晶形式的本发明化合物3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐。
方案1
方案2 在方案1的反应1中，在有碱例如三乙胺存在的情况下通过式III的(3R，4R)-甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)胺化合物与氰乙酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯反应，将式III转化成相应的式II的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈化合物。在室温下将该反应混合物搅拌大约15分钟至大约2小时，优选大约30分钟。
在方案1的反应2中，通过将II化合物与含水柠檬酸反应，将式II的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈化合物转化为相应的式I的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐化合物。
在方案2的反应1中，通过在有20％氢氧化钯/炭(50％重量的水)和一种极性质子溶剂如乙醇存在的情况下用氢处理式IV的((3R，4R)-1-苄基-4-甲基-哌啶-3-基)-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺化合物，将式IV转化为相应的式III的(3R，4R)-甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)胺化合物。在约45℃至约75℃、优选约60℃的温度，约60psi、优选约50psi的压力下，将该反应混合物搅拌约2天至约4天、优选约3天。
在方案2的反应2中，通过在有一种极性质子溶剂如乙醇存在的情况下将式III的(3R，4R)-甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)胺化合物与氰乙酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯反应，将式III转化为相应的式II的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈化合物。在室温下将该反应混合物搅拌约30分钟至约3小时、优选约1小时。
在方案2的反应3中，通过在有一种极性溶剂如丙酮存在的情况下将式II的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-(甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈化合物与柠檬酸反应，将式II转化为相应的式I的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基)-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐化合物。在约30℃至约50℃、优选约40℃的温度下将该反应混合物搅拌约1小时至约3小时、优选约2小时。所得反应混合物还可以任选在约20℃至约40℃、优选约30℃的温度下搅拌约3小时至约5小时、优选约4小时，接着在室温下再搅拌约16小时至约20小时、优选约18小时。
可以用一种或多种药用可接受的载体以常规方式配制本发明的组合物。
为了口服，这些药用组合物可以是通过常规方式用如下药用可接受的赋形剂制得的片剂形式粘合剂(例如，预明胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或淀粉乙醇酸钠)；或湿润剂(例如，十二烷基硫酸钠)。这些片剂可以通过本领域公知的方法包衣。
本发明的活性化合物用于口服、肠道外给药或颊给药到一般成人以治疗上述病症(例如，类风湿性关节炎)的推荐剂量是0.1-1000mg活性成分/可以给药的单位剂量，例如1-4次/天。
式I化合物可以药用可接受的形式单独给药，或者可以与一种或多种调整哺乳动物免疫系统的试剂或消炎剂组合给药，这些涉及包括但不限于环孢菌素A(例如，Sandimmune_或Neoral_、雷怕霉素、FK-506(他克莫司)、来氟米特、脱氧精胍菌素、麦考酚酯(例如，Cellcept_、硫唑嘌呤(例如Imuran_)、达克珠单抗(daclizumab)(例如Zenapax_)、OKT3(例如Orthocolone_)、AtGam、阿司匹林、acctaminophen、布洛芬、萘普生、吡罗昔康和抗炎类固醇类(例如泼尼松龙或地塞米松)；并且可以将这些药物通过相同或不同的给药途径，并根据标准药学实践的相同或不同的给药方案以相同或单独的剂量形式给药。
FK506(他克莫司)以0.10-0.15mg/kg体重在手术后的头48小时内每隔12小时口服。通过血清他克莫司谷底(trough)水平监控剂量。
环孢菌素A(山地明口服或静脉制剂，或者Neoral_，口服液或胶囊)以5mg/kg体重在手术后的头48小时内每隔12小时口服。通过血液环孢菌素A谷底水平监控剂量。
可以根据本领域普通技术人员公知的方法将这些活性剂配制用于持续给药。这些制剂的实例可以在美国专利3,538,214、4,060,598、4,173,626、3,119,742和3,492,397中找到。
通过以下体外试验测定显示了式I化合物抑制Janus激酶3的能力，并由此证实了其能够有效地治疗以Janus激酶3为特征的紊乱或病症。
生物学试验
JAK3(JH1:GST)酶促试验该JAK3激酶试验利用一种在杆状病毒感染的SF9细胞(GST和人JAK3的催化区的融合蛋白)内表达并在谷胱甘肽-Sepaharose上通过亲和色谱提纯的蛋白质。反应底物是聚-谷氨酸-酪氨酸(PGT(4∶1)，Sigma catalog#P0275)，以100μg/ml涂布在Nunc Maxi Sorp平皿上，在37℃下过夜。在涂布之后的早上，将这些平皿洗涤3次，并将JAK3加入到含有100μl的激酶缓冲液(50mM HEPES，pH7.3，125mM NaCl，24mM MgCl2)+0.2μM ATP+1mM原钒酸钠)的孔中。在室温下将反应进行30分钟，并将这些平皿洗涤3次以上。利用抗磷酸酪氨酸抗体(ICN PY20，目录号69-151-1)通过标准ELISA分析对给定孔内的磷酸化酪氨酸的水平定量。
人IL-2依赖性T-细胞胚细胞增殖的抑制该筛选测定化合物在体外对IL-2依赖性T-细胞胚细胞增殖的抑制效果。由于通过IL-2受体发信号需要JAK-3，因此JAK-3的细胞活性抑制剂应抑制IL-2依赖性T-细胞胚细胞增殖。
将用于该试验的细胞与新鲜的人血分离。使用AccuspinSystem-Histopaque-1077(Sigma#A7054)分离这些单核细胞之后，使用Lympho-Kwik T(One Lambda，Inc.，目录号LK-50T)通过负选择分离初级人T-细胞。将T-细胞以1-2×106/ml在培养基(RPMI+10％热失活的胎牛血清(Hyclone目录号A-1111-L)+1％青霉素/链霉素(Gibco))中培养并通过加入10μg/ml PHA(Murex Diagnostics，目录号HA16)诱导增殖。在37℃、5％CO2下3天之后，将细胞于培养基中洗涤3次，并在培养基+100U/ml人重组IL-2(R&D Systems，目录号202-IL)中再次悬浮至密度1-2×106个细胞/ml。1周之后这些细胞是IL-2依赖性的，并且通过每周两次补充等体积的培养基+100U/ml IL-2可以保持高达3周。
为了测定试验化合物抑制IL-2依赖性T-细胞增殖的能力，将IL-2依赖性细胞洗涤3次，将它们再次悬浮于培养基中，然后平铺(plate)(50,000个细胞/孔/0.1ml)到平底96-孔微量滴定平皿(Falcon#353075)中。由10mM的处于DMSO内的受验化合物的贮备液，将化合物的系列2-倍稀释以10μM一式三份地加入到孔中。1小时之后，将10U/ml的IL-2加入到每一个测定孔中。将平皿在37℃、5％CO2下培养72小时。然后向平皿中加入3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(0.5μCi/孔)(NEN目录号NET-027A)，并且再培养18小时。然后用96-孔平皿采集器收获培养皿，并通过在Packard Top Count闪烁计数器上计数来确定加入到增殖细胞内的3H-胸腺嘧啶脱氧核苷的量。通过将％增殖抑制相对试验化合物的浓度绘图分析数据。由该图确定IC50值(μM)。
以下实施例描述了本发明化合物的制备，但是它并不限于其细节。熔点没有校正。NMR数据以百万分之一份(δ)报道，并以样品溶剂(氘代氯仿，除非另有说明)的氘锁信号作为参照。
实施例13-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐将乙醇(13L)、(3R，4R)-甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺(1.3kg)、氰乙酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯(1.5kg)和三乙胺(1.5L)混合并在室温下搅拌。反应结束之后(通过高压液相色谱(HPLC)分析确定，约30分钟)，将溶液过滤，浓缩并与15L的二氯甲烷共沸。依次用12L的0.5N氢氧化钠溶液、12L的生理盐水和12L水洗涤该反应混合物。将有机层浓缩并与3L丙酮共沸(最终罐温是42℃)。将所得溶液冷却至20℃-25℃，接着加入10L丙酮。将该溶液过滤，然后经在线过滤器加入含水柠檬酸(0.8kg于4L水中)。使该反应混合物成粒。将浆液冷却，之后过滤收集固体。将固体干燥，得到1.9kg(71％)(3R，4R)-3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐。然后将该物料与15L的1∶1比的乙醇/水混合，并将该浆液搅拌过夜。将固体过滤并干燥，得到1.7kg(63％的(3R，4R)-甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺)标题化合物，其为白色结晶固体。1H NMR(400MHZ)(D2O)δHOD0.92(2H，d，J＝7.2Hz)，0.96(1H，d，J＝7.6Hz)，1.66(1H，m)，1.80(1H，m)，2.37(1H，m)，2.58(2H，1/2 ABq，J＝15.4Hz)，2.70(2H，1/2ABq，J＝154Hz)，3.23(2H，s)，3.25(1H，s)，3.33(1H，m)，3.46(1H，m)，3.81(4H，m)，4.55(1H，m)，6.65(1H，d，J＝3.2Hz)，7.20(1H，t，J＝3.2Hz)，8.09(1H，m)。
实施例23-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐向79g((3R，4R)-1-苄基-4-甲基-哌啶-3-基)-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺溶解于2升乙醇的溶液中加入79g的20％氢氧化钯/炭(50％重量的水)，并在50psi氢的大气压下将混合物搅拌3天(在高温[50℃-70℃]下进行氢化明显缩短反应时间)。经Celite_过滤除去催化剂之后，向该乙醇溶液中加入51g氰乙酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯，并在室温下将所得混合物搅拌1小时，与此同时在减压下除去乙醇。将残余物再次溶解在1.0L二氯甲烷中，该溶液依次用0.6L饱和碳酸氢钠水溶液和0.4L饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将该混合的含水层用0.4L二氯甲烷反洗，将二氯甲烷层合并，在硫酸镁上干燥，过滤并真空浓缩，得到61g琥珀色油。然后将该物料溶解在2.1L丙酮内并将溶液加热至40℃。向该溶液中慢慢加入细碎的柠檬酸(37g)(固体)。该混合物在40℃下连续搅拌2小时(成粒结束)。冷却至室温之后，过滤收集固体，用丙酮洗涤并在真空下干燥，得到78.5g(以((3R，4R)-1-苄基-4-甲基-哌啶-3-基)-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺计，产率为66％)标题化合物，其为略微灰白色结晶固体。
实施例33-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐将(3R，4R)-3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈(230mg/0.74mmol)溶解在23mL丙酮内的搅拌溶液加热至40℃。向该溶液中加入155mg(0.81mmol)的细研磨的柠檬酸。所得混合物在40℃下搅拌2小时，然后在30℃下搅拌4小时，接着在室温下再搅拌18小时。此时，过滤收集固体，用丙酮洗涤并在真空下干燥，得到280mg(75％)标题化合物白色结晶固体。
实施例4采集3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的粉末X-射线衍射的方法使用配备有铜辐射、固定狭缝(1.0、1.0、0.6mm)和Kevex固态检测器的Bruker D5000衍射计(Madison，Wisconsin)采集3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的粉末x-射线衍射图。如下收集数据Cu阳极；波长11.54056；波长21.54439(相对强度0.500)；2θ为3.0-40.0度，并使用0.04度的步长和1.0秒的步时。结果汇总于表1。
表1粉末X-射线衍射峰的列表(±0.2度)
*峰强度可以随结晶大小和形态而改变。
权利要求
1.3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的一种结晶形式。
2.如权利要求1的3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的结晶形式，包括以度计2θ在大约5.7、16.1、20.2和20.5的特征峰的X-射线衍射图样。
3.如权利要求2的结晶形式，包括以度计2θ有大致如下的特征峰的粉末衍射图样
4.如权利要求1的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的结晶形式，具有约199℃-约206℃的开始熔融温度。
5.无定形形式的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐。
6.药用组合物，它用于(a)治疗或预防选自如下的紊乱或病症器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及其它自身免疫疾病或者用于(b)抑制哺乳动物、包括人的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)，所述药用组合物包含在这些紊乱或病症中有效量的权利要求1的化合物和一种药用可接受的载体。
7.药用组合物，它用于(a)治疗或预防选自如下的紊乱或病症器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及其它自身免疫疾病或者用于(b)抑制哺乳动物、包括人的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)，所述药用组合物包含在这些紊乱或病症中有效量的权利要求1的化合物本身或者其与一种或多种调节哺乳动物免疫系统的其它试剂或抗炎剂的组合，以及一种药用可接受的载体。
8.抑制哺乳动物、包括人的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)的方法，包括给予所述哺乳动物有效量的权利要求1的化合物。
9.治疗或预防哺乳动物、包括人的选自如下的紊乱或病症的方法器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及其它自身免疫疾病，包括给予所述哺乳动物有效治疗这种病症的量的权利要求1的化合物。
10.抑制哺乳动物、包括人的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)的方法，包括给予所述哺乳动物有效量的权利要求1的化合物本身，或者其与一种或多种调节哺乳动物免疫系统的其它试剂或抗炎剂的组合。
11.治疗或预防哺乳动物、包括人的选自如下的紊乱或病症的方法器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及其它自身免疫疾病，包括给予所述哺乳动物有效治疗这种病症的量的权利要求1的化合物本身，或者其与一种或多种调节哺乳动物免疫系统的其它试剂或抗炎剂的组合。
12.制备3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的方法，包括使3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈与柠檬酸进行反应。
全文摘要
本发明涉及一种新型无定形和结晶形式的3－{(3R，4R)－4－甲基－3－[甲基－(7H－吡咯并[2，3－d]嘧啶－4－基)－氨基]－哌啶－1－基}－3－氧代－丙腈一柠檬酸盐，它可用作蛋白激酶的抑制剂，本发明还涉及它们的制备方法。
文档编号A61P17/06GK1596257SQ02823587
公开日2005年3月16日 申请日期2002年11月25日 优先权日2001年12月6日
发明者M·E·弗拉纳甘, Z·J·李 申请人:辉瑞产品公司
背景技术：
本发明涉及一种3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的新型结晶形式及其制备方法。
3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈具有化学式C16H20N6O并具有以下结构式 其合成描述在待审美国专利申请序列号09/732,669(2000年12月8日申请)和美国临时专利申请序列号60/294,775(2001年5月31日申请)中，这两个专利申请都转让给本发明的让受人，并将它们全文加入本文作为参考。3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈及其相应的柠檬酸盐可用作蛋白激酶如Janus激酶3(本文后面还称之为JAK3)的抑制剂，并且本身可以作为免疫抑制剂用于器官移植、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及需要免疫抑制的其它适应症。
测定结晶形式的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐具有适合支持片剂开发的固态性能。
本发明还涉及结晶3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的制备方法。
发明概述本发明涉及一种新型结晶形式3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐新型结晶形式，它可用于(a)治疗或预防选自如下的紊乱或病症器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及其它自身免疫疾病或(b)抑制哺乳动物(包括人)的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)。该新型结晶形式在约203℃-约210℃的温度下熔融，并且显示以度计2-theta(2θ)在5.7、16.1、20.2和20.5的特征峰的X-射线衍射图样，如
图1所述。有关X-射线粉末衍射图样的理论的讨论可以在Stout&Jensen，X-Ray Structure DeterminationA Practical Guide，MacMillan Co.，New York，N.Y.(1968)中找到，将其全文加入本文作为参考。
本发明还涉及结晶形式的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐，它具有如图2所述的差示扫描量热曲线，该曲线在约203℃-约210℃的温度具有以特征峰，并且在约199℃-约206℃的范围内以5℃/分钟的扫描速度开始。
本发明还涉及一种无定形的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐。
本发明还涉及一种药用组合物，它用于(a)治疗或预防选自如下的紊乱或病症器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病、以及其它自身免疫疾病或(b)抑制哺乳动物(包括人)的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)，该药用组合物包括对这些紊乱或病症有效量的式I化合物和一种药用可接受的载体。
本发明还涉及一种抑制哺乳动物、包括人的蛋白酪氨酸激酶或Janus激酶3(JAK3)的方法，包括向所述哺乳动物给予有效量的式I化合物。
本发明还涉及一种治疗或预防哺乳动物、包括人在内的选自如下的紊乱或病症的方法器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病、以及其它自身免疫疾病，该方法包括向所述哺乳动物给予有效地治疗这种病症量的式I化合物。
本发明还涉及一种制备3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的方法，包括使3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈与柠檬酸反应。
附图简述图1是3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的特征X-射线粉末衍射图样。(垂直轴强度(计数)；水平轴2θ(度))。
图2是3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的特征差示扫描量热曲线。(扫描速度5℃/分钟；垂直轴热流(w/g)；水平轴温度(℃))。
发明详述如下所述制备结晶形式的本发明化合物3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐。
方案1
方案2 在方案1的反应1中，在有碱例如三乙胺存在的情况下通过式III的(3R，4R)-甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)胺化合物与氰乙酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯反应，将式III转化成相应的式II的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈化合物。在室温下将该反应混合物搅拌大约15分钟至大约2小时，优选大约30分钟。
在方案1的反应2中，通过将II化合物与含水柠檬酸反应，将式II的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈化合物转化为相应的式I的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐化合物。
在方案2的反应1中，通过在有20％氢氧化钯/炭(50％重量的水)和一种极性质子溶剂如乙醇存在的情况下用氢处理式IV的((3R，4R)-1-苄基-4-甲基-哌啶-3-基)-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺化合物，将式IV转化为相应的式III的(3R，4R)-甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)胺化合物。在约45℃至约75℃、优选约60℃的温度，约60psi、优选约50psi的压力下，将该反应混合物搅拌约2天至约4天、优选约3天。
在方案2的反应2中，通过在有一种极性质子溶剂如乙醇存在的情况下将式III的(3R，4R)-甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)胺化合物与氰乙酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯反应，将式III转化为相应的式II的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈化合物。在室温下将该反应混合物搅拌约30分钟至约3小时、优选约1小时。
在方案2的反应3中，通过在有一种极性溶剂如丙酮存在的情况下将式II的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-(甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈化合物与柠檬酸反应，将式II转化为相应的式I的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基)-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐化合物。在约30℃至约50℃、优选约40℃的温度下将该反应混合物搅拌约1小时至约3小时、优选约2小时。所得反应混合物还可以任选在约20℃至约40℃、优选约30℃的温度下搅拌约3小时至约5小时、优选约4小时，接着在室温下再搅拌约16小时至约20小时、优选约18小时。
可以用一种或多种药用可接受的载体以常规方式配制本发明的组合物。
为了口服，这些药用组合物可以是通过常规方式用如下药用可接受的赋形剂制得的片剂形式粘合剂(例如，预明胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或淀粉乙醇酸钠)；或湿润剂(例如，十二烷基硫酸钠)。这些片剂可以通过本领域公知的方法包衣。
本发明的活性化合物用于口服、肠道外给药或颊给药到一般成人以治疗上述病症(例如，类风湿性关节炎)的推荐剂量是0.1-1000mg活性成分/可以给药的单位剂量，例如1-4次/天。
式I化合物可以药用可接受的形式单独给药，或者可以与一种或多种调整哺乳动物免疫系统的试剂或消炎剂组合给药，这些涉及包括但不限于环孢菌素A(例如，Sandimmune_或Neoral_、雷怕霉素、FK-506(他克莫司)、来氟米特、脱氧精胍菌素、麦考酚酯(例如，Cellcept_、硫唑嘌呤(例如Imuran_)、达克珠单抗(daclizumab)(例如Zenapax_)、OKT3(例如Orthocolone_)、AtGam、阿司匹林、acctaminophen、布洛芬、萘普生、吡罗昔康和抗炎类固醇类(例如泼尼松龙或地塞米松)；并且可以将这些药物通过相同或不同的给药途径，并根据标准药学实践的相同或不同的给药方案以相同或单独的剂量形式给药。
FK506(他克莫司)以0.10-0.15mg/kg体重在手术后的头48小时内每隔12小时口服。通过血清他克莫司谷底(trough)水平监控剂量。
环孢菌素A(山地明口服或静脉制剂，或者Neoral_，口服液或胶囊)以5mg/kg体重在手术后的头48小时内每隔12小时口服。通过血液环孢菌素A谷底水平监控剂量。
可以根据本领域普通技术人员公知的方法将这些活性剂配制用于持续给药。这些制剂的实例可以在美国专利3,538,214、4,060,598、4,173,626、3,119,742和3,492,397中找到。
通过以下体外试验测定显示了式I化合物抑制Janus激酶3的能力，并由此证实了其能够有效地治疗以Janus激酶3为特征的紊乱或病症。
生物学试验
JAK3(JH1:GST)酶促试验该JAK3激酶试验利用一种在杆状病毒感染的SF9细胞(GST和人JAK3的催化区的融合蛋白)内表达并在谷胱甘肽-Sepaharose上通过亲和色谱提纯的蛋白质。反应底物是聚-谷氨酸-酪氨酸(PGT(4∶1)，Sigma catalog#P0275)，以100μg/ml涂布在Nunc Maxi Sorp平皿上，在37℃下过夜。在涂布之后的早上，将这些平皿洗涤3次，并将JAK3加入到含有100μl的激酶缓冲液(50mM HEPES，pH7.3，125mM NaCl，24mM MgCl2)+0.2μM ATP+1mM原钒酸钠)的孔中。在室温下将反应进行30分钟，并将这些平皿洗涤3次以上。利用抗磷酸酪氨酸抗体(ICN PY20，目录号69-151-1)通过标准ELISA分析对给定孔内的磷酸化酪氨酸的水平定量。
人IL-2依赖性T-细胞胚细胞增殖的抑制该筛选测定化合物在体外对IL-2依赖性T-细胞胚细胞增殖的抑制效果。由于通过IL-2受体发信号需要JAK-3，因此JAK-3的细胞活性抑制剂应抑制IL-2依赖性T-细胞胚细胞增殖。
将用于该试验的细胞与新鲜的人血分离。使用AccuspinSystem-Histopaque-1077(Sigma#A7054)分离这些单核细胞之后，使用Lympho-Kwik T(One Lambda，Inc.，目录号LK-50T)通过负选择分离初级人T-细胞。将T-细胞以1-2×106/ml在培养基(RPMI+10％热失活的胎牛血清(Hyclone目录号A-1111-L)+1％青霉素/链霉素(Gibco))中培养并通过加入10μg/ml PHA(Murex Diagnostics，目录号HA16)诱导增殖。在37℃、5％CO2下3天之后，将细胞于培养基中洗涤3次，并在培养基+100U/ml人重组IL-2(R&D Systems，目录号202-IL)中再次悬浮至密度1-2×106个细胞/ml。1周之后这些细胞是IL-2依赖性的，并且通过每周两次补充等体积的培养基+100U/ml IL-2可以保持高达3周。
为了测定试验化合物抑制IL-2依赖性T-细胞增殖的能力，将IL-2依赖性细胞洗涤3次，将它们再次悬浮于培养基中，然后平铺(plate)(50,000个细胞/孔/0.1ml)到平底96-孔微量滴定平皿(Falcon#353075)中。由10mM的处于DMSO内的受验化合物的贮备液，将化合物的系列2-倍稀释以10μM一式三份地加入到孔中。1小时之后，将10U/ml的IL-2加入到每一个测定孔中。将平皿在37℃、5％CO2下培养72小时。然后向平皿中加入3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(0.5μCi/孔)(NEN目录号NET-027A)，并且再培养18小时。然后用96-孔平皿采集器收获培养皿，并通过在Packard Top Count闪烁计数器上计数来确定加入到增殖细胞内的3H-胸腺嘧啶脱氧核苷的量。通过将％增殖抑制相对试验化合物的浓度绘图分析数据。由该图确定IC50值(μM)。
以下实施例描述了本发明化合物的制备，但是它并不限于其细节。熔点没有校正。NMR数据以百万分之一份(δ)报道，并以样品溶剂(氘代氯仿，除非另有说明)的氘锁信号作为参照。
实施例13-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐将乙醇(13L)、(3R，4R)-甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺(1.3kg)、氰乙酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯(1.5kg)和三乙胺(1.5L)混合并在室温下搅拌。反应结束之后(通过高压液相色谱(HPLC)分析确定，约30分钟)，将溶液过滤，浓缩并与15L的二氯甲烷共沸。依次用12L的0.5N氢氧化钠溶液、12L的生理盐水和12L水洗涤该反应混合物。将有机层浓缩并与3L丙酮共沸(最终罐温是42℃)。将所得溶液冷却至20℃-25℃，接着加入10L丙酮。将该溶液过滤，然后经在线过滤器加入含水柠檬酸(0.8kg于4L水中)。使该反应混合物成粒。将浆液冷却，之后过滤收集固体。将固体干燥，得到1.9kg(71％)(3R，4R)-3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐。然后将该物料与15L的1∶1比的乙醇/水混合，并将该浆液搅拌过夜。将固体过滤并干燥，得到1.7kg(63％的(3R，4R)-甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺)标题化合物，其为白色结晶固体。1H NMR(400MHZ)(D2O)δHOD0.92(2H，d，J＝7.2Hz)，0.96(1H，d，J＝7.6Hz)，1.66(1H，m)，1.80(1H，m)，2.37(1H，m)，2.58(2H，1/2 ABq，J＝15.4Hz)，2.70(2H，1/2ABq，J＝154Hz)，3.23(2H，s)，3.25(1H，s)，3.33(1H，m)，3.46(1H，m)，3.81(4H，m)，4.55(1H，m)，6.65(1H，d，J＝3.2Hz)，7.20(1H，t，J＝3.2Hz)，8.09(1H，m)。
实施例23-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐向79g((3R，4R)-1-苄基-4-甲基-哌啶-3-基)-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺溶解于2升乙醇的溶液中加入79g的20％氢氧化钯/炭(50％重量的水)，并在50psi氢的大气压下将混合物搅拌3天(在高温[50℃-70℃]下进行氢化明显缩短反应时间)。经Celite_过滤除去催化剂之后，向该乙醇溶液中加入51g氰乙酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯，并在室温下将所得混合物搅拌1小时，与此同时在减压下除去乙醇。将残余物再次溶解在1.0L二氯甲烷中，该溶液依次用0.6L饱和碳酸氢钠水溶液和0.4L饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将该混合的含水层用0.4L二氯甲烷反洗，将二氯甲烷层合并，在硫酸镁上干燥，过滤并真空浓缩，得到61g琥珀色油。然后将该物料溶解在2.1L丙酮内并将溶液加热至40℃。向该溶液中慢慢加入细碎的柠檬酸(37g)(固体)。该混合物在40℃下连续搅拌2小时(成粒结束)。冷却至室温之后，过滤收集固体，用丙酮洗涤并在真空下干燥，得到78.5g(以((3R，4R)-1-苄基-4-甲基-哌啶-3-基)-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺计，产率为66％)标题化合物，其为略微灰白色结晶固体。
实施例33-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐将(3R，4R)-3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈(230mg/0.74mmol)溶解在23mL丙酮内的搅拌溶液加热至40℃。向该溶液中加入155mg(0.81mmol)的细研磨的柠檬酸。所得混合物在40℃下搅拌2小时，然后在30℃下搅拌4小时，接着在室温下再搅拌18小时。此时，过滤收集固体，用丙酮洗涤并在真空下干燥，得到280mg(75％)标题化合物白色结晶固体。
实施例4采集3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的粉末X-射线衍射的方法使用配备有铜辐射、固定狭缝(1.0、1.0、0.6mm)和Kevex固态检测器的Bruker D5000衍射计(Madison，Wisconsin)采集3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的粉末x-射线衍射图。如下收集数据Cu阳极；波长11.54056；波长21.54439(相对强度0.500)；2θ为3.0-40.0度，并使用0.04度的步长和1.0秒的步时。结果汇总于表1。
表1粉末X-射线衍射峰的列表(±0.2度)
*峰强度可以随结晶大小和形态而改变。
权利要求
1.3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的一种结晶形式。
2.如权利要求1的3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的结晶形式，包括以度计2θ在大约5.7、16.1、20.2和20.5的特征峰的X-射线衍射图样。
3.如权利要求2的结晶形式，包括以度计2θ有大致如下的特征峰的粉末衍射图样
4.如权利要求1的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的结晶形式，具有约199℃-约206℃的开始熔融温度。
5.无定形形式的3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐。
6.药用组合物，它用于(a)治疗或预防选自如下的紊乱或病症器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及其它自身免疫疾病或者用于(b)抑制哺乳动物、包括人的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)，所述药用组合物包含在这些紊乱或病症中有效量的权利要求1的化合物和一种药用可接受的载体。
7.药用组合物，它用于(a)治疗或预防选自如下的紊乱或病症器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及其它自身免疫疾病或者用于(b)抑制哺乳动物、包括人的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)，所述药用组合物包含在这些紊乱或病症中有效量的权利要求1的化合物本身或者其与一种或多种调节哺乳动物免疫系统的其它试剂或抗炎剂的组合，以及一种药用可接受的载体。
8.抑制哺乳动物、包括人的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)的方法，包括给予所述哺乳动物有效量的权利要求1的化合物。
9.治疗或预防哺乳动物、包括人的选自如下的紊乱或病症的方法器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及其它自身免疫疾病，包括给予所述哺乳动物有效治疗这种病症的量的权利要求1的化合物。
10.抑制哺乳动物、包括人的蛋白激酶或Janus激酶3(JAK3)的方法，包括给予所述哺乳动物有效量的权利要求1的化合物本身，或者其与一种或多种调节哺乳动物免疫系统的其它试剂或抗炎剂的组合。
11.治疗或预防哺乳动物、包括人的选自如下的紊乱或病症的方法器官移植排斥、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病和如下病症的并发症糖尿病、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿耳茨海默氏病、白血病以及其它自身免疫疾病，包括给予所述哺乳动物有效治疗这种病症的量的权利要求1的化合物本身，或者其与一种或多种调节哺乳动物免疫系统的其它试剂或抗炎剂的组合。
12.制备3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈一柠檬酸盐的方法，包括使3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈与柠檬酸进行反应。
全文摘要
本发明涉及一种新型无定形和结晶形式的3－{(3R，4R)－4－甲基－3－[甲基－(7H－吡咯并[2，3－d]嘧啶－4－基)－氨基]－哌啶－1－基}－3－氧代－丙腈一柠檬酸盐，它可用作蛋白激酶的抑制剂，本发明还涉及它们的制备方法。
文档编号A61P17/06GK1596257SQ02823587
公开日2005年3月16日 申请日期2002年11月25日 优先权日2001年12月6日
发明者M·E·弗拉纳甘, Z·J·李 申请人:辉瑞产品公司
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