一种载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法
一种载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药领域，尤其是一种透明质酸复合膜的制备方法。
【背景技术】
[0002]阿霉素的抗瘤谱较广，治疗指数较高。临床应用于急、慢性淋巴细胞白血病及实体性肿瘤白血病等的治疗，是肿瘤化疗方面最重要的药物之一。目前，临床上阿霉素的给药方式主要是通过静脉或动脉注射，而这会随之带来许多毒副作用如脱发、口腔溃疡、食欲减退、恶心呕吐、心脏毒性和骨髓抑制毒性等。其中早期心脏毒性表现为暂时性心电图改变，多数可自行缓解，但晚期(慢性)心脏毒性，是不可逆的严重的心肌病变，严重者可致死，因此开发新型的具有靶向作用的阿霉素给药方式具有重要的应用价值。
[0003]透明质酸因其独特的分子结构、理化性质和生物相容性已广泛应用于临床医学领域，如润滑关节、调节血管壁的通透性、调节蛋白质、水电解质扩散及运转、促进创伤愈合等。研宄表明，许多肿瘤和癌细胞表面上存在大量透明质酸受体CD44和RHAMM，因此透明质酸可作为抗肿瘤药物的靶向载体或形成药物前体，应用于生物医药领域，可以提高药物的利用率，降低药物的毒性。目前，交联透明质酸负载药物主要采用物理包裹和化学键合两种手段，但物理包裹形成的复合物由于交联透明质酸的局部降解便可造成内部药物分子的大量释放，因而往往药物释放速度太快；而化学键合反应需要用到一些有毒的有机溶剂或高温等苛刻的反应条件，且只能键合在交联透明质酸的表面，在体内酶的作用下药物释放也比较快，药效的持久性也不佳。
【发明内容】
[0004]本发明克服现有交联透明质酸负载药物技术中药物释放速度太快、使用有毒的有机溶剂和苛刻的反应条件的不足，提供一种简便、绿色、缓释性能持久的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下:一种载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，包括如下步骤:
[0006](I)制备交联透明质酸钠生物膜
[0007]将交联透明质酸钠凝胶在去离子水中充分溶胀，然后进行冷冻干燥，得到蓬松的海绵状固体，碾压后制得交联透明质酸钠生物膜；
[0008](2)盐酸阿霉素水溶液的配制
[0009]将盐酸阿霉素加入到水中，充分搅拌至完全溶解，即得到盐酸阿霉素水溶液；
[0010](3)制备载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜
[0011]将步骤(2)中制备的盐酸阿霉素水溶液加入至步骤(I)制备的交联透明质酸膜中，搅拌至交联透明质酸充分溶胀，冷冻干燥后得到蓬松的海绵状固体，碾压后即制得不同载药量的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜。
[0012]作为优选，步骤⑴所述交联透明质酸钠凝胶中的交联剂为BDDE。
[0013]进一步地，所述的步骤⑴所述的溶胀时间为4?8h;所述的冷冻干燥条件为-40 °C冷冻干燥12?24h。
[0014]作为优选，步骤(2)中所述盐酸阿霉素水溶液浓度为0.04?0.8mg/mL。
[0015]进一步地，步骤(3)所述的溶胀时间为4?8h ;所述的冷冻干燥条件为_40°C冷冻干燥12?24ho
[0016]作为优选，步骤(3)中将盐酸阿霉素水溶液分三次加入交联透明质酸膜中，每次至盐酸阿霉素水溶液被交联透明质酸完全吸附后，再加入等量的盐酸阿霉素水溶液。
[0017]进一步地，所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜中盐酸阿霉素含量为I?8wt % ο
[0018]本发明的显著优点是:
[0019](I)本发明的制备方法简单易行，反应条件温和。采用水为溶剂，基于交联透明质酸良好的溶胀性能，在其吸收水分子膨胀过程中，水分子带着水溶性药物由膜表面的孔洞进入到膜内部的网状结构中，得到结构更加稳定的载药复合膜，须经过由外到内的交联透明质酸的层层降解才能逐步释放药物，相比传统的药物负载方法制备的复合物具有更加持久的药物缓释性能。
[0020](2)本发明所制备的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜在体内的存留时间较长、细胞毒性低，具有良好的生物相容性和缓释性能。可用于中晚期癌症患者手术后直接贴附于病灶，起到防粘连、降低毒副作用和高效治疗的作用。
【附图说明】
[0021]图1为交联透明质酸膜载药前后的形貌对比(a)交联透明质酸膜截面的SEM图；(b)载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜截面的SEM图；
[0022]图2为不同载药量的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的药物释放曲线；
[0023]图3为加入透明质酸酶时载药量为4%的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的药物释放曲线；
【具体实施方式】
[0024]实施例1
[0025](I)参考专利CN 102731801 B方法制备交联透明质酸钠凝胶。
[0026]向交联透明质酸钠凝胶中加入3倍凝胶体积的去离子水，充分溶胀6个小时后，_40°C冷冻干燥12个小时后得到蓬松的海绵状固体，碾压后制得到交联透明质酸膜，其截面的扫面电镜图如图1中(a)所示；
[0027](2)将2.5、5、10、20mg的盐酸阿霉素分别溶于解25mL水中，充分搅拌至完全溶解，得到质量分数为0.K0.2,0.4,0.8mg/mL盐酸阿霉素水溶液；
[0028](3)分别取3mL实施例2制备得到的不同浓度(0.1,0.2,0.4,0.8mg/mL)盐酸阿霉素水溶液，分三次每次ImL加入至交联透明质酸膜中，待交联透明质酸膜充分吸附盐酸阿霉素水溶液后，再加入ImL盐酸阿霉素水溶液。磁力搅拌至交联透明质酸充分溶胀6个小时，_40°C冷冻干燥12个小时后得到蓬松的海绵状固体，碾压后即制得载药量为lwt%，2wt%，4wt5^P 8wt%的载盐酸阿霉素交联透明质酸膜，其截面的扫面电镜图如图1中(b)所示。
[0029]实施例2
[0030]将30mg实施例1制备得到的不同载药量的载药交联透明质酸复合膜置于透析袋中，用5mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液稀释，密闭透析袋后将其置于50mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中。将该药物释放系统置于37°C恒温水浴中，磁力搅拌，间隔不同时间取样3mL，同时补加等量的新鲜pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液。将所取样液3mL用1mL容量瓶定容后用紫外分光光度计测定吸光度，推算出药物累计释放量(如图2)。
[0031]结果表明，24小时后复合膜的药物累积释放量仅为15?40%，与传统物理包裹方法制备的载药交联透明质酸的缓释性能相比具有更好的持久性。
[0032]实施例3
[0033]将30mg实施例1制备得到的载药量为4%的载药交联透明质酸复合膜置于透析袋中，用浓度为10U/mL的透明质酸酶溶液3.75mL和1.25mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液稀释，密闭透析袋后将其置于50mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液稀释中。将该药物释放系统置于37°C恒温水浴中，磁力搅拌，间隔不同时间取样3mL，同时补加等量的新鲜释放介质。将所取样液3mL用1mL容量瓶定容后用紫外分光光度计测定吸光度，推算出药物累计释放量(如图3) ο
[0034]结果表明，在加入透明质酸酶时，虽然随着透明质酸的不断降解复合膜的药物累积释放速率加快，但24小时后药物累积释放量仅为60%，即本发明所制备的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜在生物体内的存留时间较长，与传统物理包裹或化学键合方法制备的载药交联透明质酸的缓释性能相比具有更好的持久性。
【主权项】
1.一种载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:包括如下步骤:(I)制备交联透明质酸钠生物膜 将交联透明质酸钠凝胶在去离子水中充分溶胀，然后进行冷冻干燥，得到蓬松的海绵状固体，碾压后制得交联透明质酸钠生物膜； (2)盐酸阿霉素水溶液的配制 将盐酸阿霉素加入到水中，充分搅拌至完全溶解，即得到盐酸阿霉素水溶液； (3)制备载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜 将步骤(2)中制备的盐酸阿霉素水溶液加入至步骤(I)制备的交联透明质酸膜中，搅拌至交联透明质酸充分溶胀，冷冻干燥后得到蓬松的海绵状固体，碾压后即制得不同载药量的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜。
2.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:步骤(I)所述交联透明质酸钠凝胶中的交联剂为BDDE。
3.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:所述的步骤(I)所述的溶胀时间为4?8h ;所述的冷冻干燥条件为_40°C冷冻干燥12 ?24h0
4.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:步骤(2)中所述盐酸阿霉素水溶液浓度为0.1?0.8mg/mL。
5.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:步骤(3)所述的溶胀时间为4?8h ;所述的冷冻干燥条件为_40°C冷冻干燥12?24h。
6.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:步骤(3)中将盐酸阿霉素水溶液分三次加入交联透明质酸膜中，每次至盐酸阿霉素水溶液被交联透明质酸完全吸附后，再加入等量的盐酸阿霉素水溶液。
7.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:所述步骤(3)中的盐酸阿霉素与交联透明质酸的质量分数比为I?8: 100
【专利摘要】本发明属于生物医药领域，一种载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，步骤如下：(1)将交联透明质酸钠凝胶在去离子水中充分溶胀，然后进行冷冻干燥，得到蓬松的海绵状固体，碾压后制得交联透明质酸钠生物膜；(2)将盐酸阿霉素加入到水中，充分搅拌至完全溶解，即得到盐酸阿霉素水溶液；(3)上述盐酸阿霉素水溶液加入至交联透明质酸膜中，搅拌至交联透明质酸充分溶胀，冷冻干燥后得到蓬松的海绵状固体，碾压后即制得不同载药量的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜。本发明的制备方法简单易行，反应条件温和；本发明所制备的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜在体内的存留时间较长、细胞毒性低，具有良好的生物相容性和缓释性能。
【IPC分类】A61P35-02, A61K9-70, A61K47-36, A61P35-00, A61K31-704
【公开号】CN104814943
【申请号】CN201510179727
【发明人】李正义, 刘扬, 孙小强, 何浩明
【申请人】常州大学
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年4月15日
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药领域，尤其是一种透明质酸复合膜的制备方法。
【背景技术】
[0002]阿霉素的抗瘤谱较广，治疗指数较高。临床应用于急、慢性淋巴细胞白血病及实体性肿瘤白血病等的治疗，是肿瘤化疗方面最重要的药物之一。目前，临床上阿霉素的给药方式主要是通过静脉或动脉注射，而这会随之带来许多毒副作用如脱发、口腔溃疡、食欲减退、恶心呕吐、心脏毒性和骨髓抑制毒性等。其中早期心脏毒性表现为暂时性心电图改变，多数可自行缓解，但晚期(慢性)心脏毒性，是不可逆的严重的心肌病变，严重者可致死，因此开发新型的具有靶向作用的阿霉素给药方式具有重要的应用价值。
[0003]透明质酸因其独特的分子结构、理化性质和生物相容性已广泛应用于临床医学领域，如润滑关节、调节血管壁的通透性、调节蛋白质、水电解质扩散及运转、促进创伤愈合等。研宄表明，许多肿瘤和癌细胞表面上存在大量透明质酸受体CD44和RHAMM，因此透明质酸可作为抗肿瘤药物的靶向载体或形成药物前体，应用于生物医药领域，可以提高药物的利用率，降低药物的毒性。目前，交联透明质酸负载药物主要采用物理包裹和化学键合两种手段，但物理包裹形成的复合物由于交联透明质酸的局部降解便可造成内部药物分子的大量释放，因而往往药物释放速度太快；而化学键合反应需要用到一些有毒的有机溶剂或高温等苛刻的反应条件，且只能键合在交联透明质酸的表面，在体内酶的作用下药物释放也比较快，药效的持久性也不佳。
【发明内容】
[0004]本发明克服现有交联透明质酸负载药物技术中药物释放速度太快、使用有毒的有机溶剂和苛刻的反应条件的不足，提供一种简便、绿色、缓释性能持久的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下:一种载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，包括如下步骤:
[0006](I)制备交联透明质酸钠生物膜
[0007]将交联透明质酸钠凝胶在去离子水中充分溶胀，然后进行冷冻干燥，得到蓬松的海绵状固体，碾压后制得交联透明质酸钠生物膜；
[0008](2)盐酸阿霉素水溶液的配制
[0009]将盐酸阿霉素加入到水中，充分搅拌至完全溶解，即得到盐酸阿霉素水溶液；
[0010](3)制备载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜
[0011]将步骤(2)中制备的盐酸阿霉素水溶液加入至步骤(I)制备的交联透明质酸膜中，搅拌至交联透明质酸充分溶胀，冷冻干燥后得到蓬松的海绵状固体，碾压后即制得不同载药量的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜。
[0012]作为优选，步骤⑴所述交联透明质酸钠凝胶中的交联剂为BDDE。
[0013]进一步地，所述的步骤⑴所述的溶胀时间为4?8h;所述的冷冻干燥条件为-40 °C冷冻干燥12?24h。
[0014]作为优选，步骤(2)中所述盐酸阿霉素水溶液浓度为0.04?0.8mg/mL。
[0015]进一步地，步骤(3)所述的溶胀时间为4?8h ;所述的冷冻干燥条件为_40°C冷冻干燥12?24ho
[0016]作为优选，步骤(3)中将盐酸阿霉素水溶液分三次加入交联透明质酸膜中，每次至盐酸阿霉素水溶液被交联透明质酸完全吸附后，再加入等量的盐酸阿霉素水溶液。
[0017]进一步地，所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜中盐酸阿霉素含量为I?8wt % ο
[0018]本发明的显著优点是:
[0019](I)本发明的制备方法简单易行，反应条件温和。采用水为溶剂，基于交联透明质酸良好的溶胀性能，在其吸收水分子膨胀过程中，水分子带着水溶性药物由膜表面的孔洞进入到膜内部的网状结构中，得到结构更加稳定的载药复合膜，须经过由外到内的交联透明质酸的层层降解才能逐步释放药物，相比传统的药物负载方法制备的复合物具有更加持久的药物缓释性能。
[0020](2)本发明所制备的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜在体内的存留时间较长、细胞毒性低，具有良好的生物相容性和缓释性能。可用于中晚期癌症患者手术后直接贴附于病灶，起到防粘连、降低毒副作用和高效治疗的作用。
【附图说明】
[0021]图1为交联透明质酸膜载药前后的形貌对比(a)交联透明质酸膜截面的SEM图；(b)载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜截面的SEM图；
[0022]图2为不同载药量的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的药物释放曲线；
[0023]图3为加入透明质酸酶时载药量为4%的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的药物释放曲线；
【具体实施方式】
[0024]实施例1
[0025](I)参考专利CN 102731801 B方法制备交联透明质酸钠凝胶。
[0026]向交联透明质酸钠凝胶中加入3倍凝胶体积的去离子水，充分溶胀6个小时后，_40°C冷冻干燥12个小时后得到蓬松的海绵状固体，碾压后制得到交联透明质酸膜，其截面的扫面电镜图如图1中(a)所示；
[0027](2)将2.5、5、10、20mg的盐酸阿霉素分别溶于解25mL水中，充分搅拌至完全溶解，得到质量分数为0.K0.2,0.4,0.8mg/mL盐酸阿霉素水溶液；
[0028](3)分别取3mL实施例2制备得到的不同浓度(0.1,0.2,0.4,0.8mg/mL)盐酸阿霉素水溶液，分三次每次ImL加入至交联透明质酸膜中，待交联透明质酸膜充分吸附盐酸阿霉素水溶液后，再加入ImL盐酸阿霉素水溶液。磁力搅拌至交联透明质酸充分溶胀6个小时，_40°C冷冻干燥12个小时后得到蓬松的海绵状固体，碾压后即制得载药量为lwt%，2wt%，4wt5^P 8wt%的载盐酸阿霉素交联透明质酸膜，其截面的扫面电镜图如图1中(b)所示。
[0029]实施例2
[0030]将30mg实施例1制备得到的不同载药量的载药交联透明质酸复合膜置于透析袋中，用5mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液稀释，密闭透析袋后将其置于50mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中。将该药物释放系统置于37°C恒温水浴中，磁力搅拌，间隔不同时间取样3mL，同时补加等量的新鲜pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液。将所取样液3mL用1mL容量瓶定容后用紫外分光光度计测定吸光度，推算出药物累计释放量(如图2)。
[0031]结果表明，24小时后复合膜的药物累积释放量仅为15?40%，与传统物理包裹方法制备的载药交联透明质酸的缓释性能相比具有更好的持久性。
[0032]实施例3
[0033]将30mg实施例1制备得到的载药量为4%的载药交联透明质酸复合膜置于透析袋中，用浓度为10U/mL的透明质酸酶溶液3.75mL和1.25mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液稀释，密闭透析袋后将其置于50mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液稀释中。将该药物释放系统置于37°C恒温水浴中，磁力搅拌，间隔不同时间取样3mL，同时补加等量的新鲜释放介质。将所取样液3mL用1mL容量瓶定容后用紫外分光光度计测定吸光度，推算出药物累计释放量(如图3) ο
[0034]结果表明，在加入透明质酸酶时，虽然随着透明质酸的不断降解复合膜的药物累积释放速率加快，但24小时后药物累积释放量仅为60%，即本发明所制备的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜在生物体内的存留时间较长，与传统物理包裹或化学键合方法制备的载药交联透明质酸的缓释性能相比具有更好的持久性。
【主权项】
1.一种载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:包括如下步骤:(I)制备交联透明质酸钠生物膜 将交联透明质酸钠凝胶在去离子水中充分溶胀，然后进行冷冻干燥，得到蓬松的海绵状固体，碾压后制得交联透明质酸钠生物膜； (2)盐酸阿霉素水溶液的配制 将盐酸阿霉素加入到水中，充分搅拌至完全溶解，即得到盐酸阿霉素水溶液； (3)制备载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜 将步骤(2)中制备的盐酸阿霉素水溶液加入至步骤(I)制备的交联透明质酸膜中，搅拌至交联透明质酸充分溶胀，冷冻干燥后得到蓬松的海绵状固体，碾压后即制得不同载药量的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜。
2.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:步骤(I)所述交联透明质酸钠凝胶中的交联剂为BDDE。
3.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:所述的步骤(I)所述的溶胀时间为4?8h ;所述的冷冻干燥条件为_40°C冷冻干燥12 ?24h0
4.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:步骤(2)中所述盐酸阿霉素水溶液浓度为0.1?0.8mg/mL。
5.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:步骤(3)所述的溶胀时间为4?8h ;所述的冷冻干燥条件为_40°C冷冻干燥12?24h。
6.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:步骤(3)中将盐酸阿霉素水溶液分三次加入交联透明质酸膜中，每次至盐酸阿霉素水溶液被交联透明质酸完全吸附后，再加入等量的盐酸阿霉素水溶液。
7.根据权利要求1所述的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，其特征在于:所述步骤(3)中的盐酸阿霉素与交联透明质酸的质量分数比为I?8: 100
【专利摘要】本发明属于生物医药领域，一种载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜的制备方法，步骤如下：(1)将交联透明质酸钠凝胶在去离子水中充分溶胀，然后进行冷冻干燥，得到蓬松的海绵状固体，碾压后制得交联透明质酸钠生物膜；(2)将盐酸阿霉素加入到水中，充分搅拌至完全溶解，即得到盐酸阿霉素水溶液；(3)上述盐酸阿霉素水溶液加入至交联透明质酸膜中，搅拌至交联透明质酸充分溶胀，冷冻干燥后得到蓬松的海绵状固体，碾压后即制得不同载药量的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜。本发明的制备方法简单易行，反应条件温和；本发明所制备的载盐酸阿霉素交联透明质酸复合膜在体内的存留时间较长、细胞毒性低，具有良好的生物相容性和缓释性能。
【IPC分类】A61P35-02, A61K9-70, A61K47-36, A61P35-00, A61K31-704
【公开号】CN104814943
【申请号】CN201510179727
【发明人】李正义, 刘扬, 孙小强, 何浩明
【申请人】常州大学
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年4月15日
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