一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成分物质的提取纯化方法
一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成分物质的提取纯化方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物有效成分提取纯化工艺，尤其涉及一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤 活性成分物质的提取纯化方法，属于植物加工提取领域。
【背景技术】
[0002] 亚麻籽（Linum ustitatissimum L)又称胡麻，属亚麻科、亚麻属，是世界十大油料 作物之一，主要出于加拿大、阿根廷、印度、美国、中国等国家。亚麻籽中主要含有脂肪、蛋 白、糖类等功能性成分，更为重要的是亚麻籽富含α -亚麻酸含量的亚麻籽油，亚麻籽油是 目前η-3脂肪酸含量最高的已知植物油脂之一。近年来研宄发现，亚麻籽油具有预防高脂 血症、动脉粥样硬化、降低血压、增强胰岛素降低血糖的作用。
[0003] 癌症是威胁人类健康的一大凶手，是仅次于心脑血管疾病的第二大致死性疾病 (如果将心血管疾病和脑血管疾病分开统计，癌症则位于第一位），严重地威胁人类健康和 生命。现在临床上应用的抗癌药物虽然种类不少，但价格昂贵，毒副作用严重，且尚没有治 疗某些癌症的特效药。植物在漫长的进化过程中合成了许许多多结构各异的次生代谢产 物，这些次生代谢产物不仅具有不同的生物活性，还常常被发现有新的作用机制，从植物在 内的自然界中寻找发现高效低毒的抗癌活性成分或先导化合物一直是国内外药物学家十 分关注的课题和研宄的热点。
[0004] 目前，专利号CN101945888A公开了一种从油回收疏水性肽的方法，采用从植物材 料中提取油类物质，并将提取的油分离成非极性和极性馏分，从不同馏分中分离回收疏水 性肽类物质。该方法在实施过程中大量采用了多种有机溶剂如烃、酮、酯、醚、芳香物质等， 这些有机溶剂的使用，造成了产品中溶剂残留，通过此方法得到的成分无法应用于国内日 常的保健食品中，且实验过程条件要求比较苛刻，对工作人员身体造成了一定的伤害，该方 法的工艺比较繁琐，未来实现大规模生产的可能性较低。
【发明内容】
[0005] 本发明针对上述现有技术存在的不足，提供一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成 分物质的提取纯化方法。
[0006] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成 分物质的提取纯化方法，包括以下步骤：
[0007] (1)萃取：将乙醇溶液与亚麻籽油置于混合仪中混合，调节pH，搅拌，静置待分层 界面形成后，旋转浓缩，形成浸膏；
[0008] (2)亚临界水提取：将步骤（1)的浸膏放置于提取罐中，加入亚临界水，将得到的 提取液旋转浓缩，真空冷冻干燥得到粗提物；
[0009] (3)高速逆流色谱纯化：称取步骤（2)得到的粗提物，利用高速逆流色谱纯化溶剂 系统，将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置lh，分相 平衡后分出上相和下相；以溶剂系统的下相为固定相，上相为流动相，调整转速，泵入流动 相，减压回收试剂，得到纯化提取物。
[0010] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0011] 进一步，步骤（1)中所述的乙醇溶液和亚麻籽油的体积比为（1~5) :1，所述乙醇 溶液的体积浓度为90~100 %。
[0012] 进一步，步骤（1)中调节pH为4. 5~6,搅拌0· 5~lh。
[0013] 进一步，步骤（2)中所述浸膏和亚临界水的重量比为1: (10~50)
[0014] 进一步，步骤（2)中所述冷冻温度为-20~-40°C。
[0015] 进一步，步骤（2)中所述的旋转浓缩是指在52~68°C条件下旋出提取液3/5~ 4/5的液体。
[0016] 进一步，步骤（2)中所述的提取罐中提取温度为50~120°C，提取压力为3~ 5MPa，提取时间为10~40min，加压1~3次。
[0017] 进一步，步骤（3)中所述正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为（1~3) : (2~ 4) : (3 ~5) : (1 ~3) 〇
[0018] 进一步，步骤⑶中所述的转速为600~800rpm，泵入流动相的流速为2~4ml/ min〇
[0019] 本发明的有益效果是：本发明采用乙醇溶液萃取和超高压偶联亚临界水提取技术 获得可用于保健食品行业的亚麻籽油粗提物，并通过高速逆流色谱技术对粗提物纯化。在 提取纯化过程中，采用了可用于食品生产的溶剂，符合国家相关的法规规定，避免大量的有 机溶剂使用造成的残留风险。将上述方法得到的粗提物和纯化物通过质谱进行物质方面的 鉴定，确定该提取物含有文献中提到的环肽类成分，且含量较高。将粗提物和纯化物通过肿 瘤细胞增殖实验验证，均具有抑制肿瘤细胞生长的细胞学功效，可用于辅助抑制肿瘤保健 食品方面的应用。
【附图说明】
[0020] 图1为本发明实施例1制得特征物质的质谱图；
[0021] 图2为本发明实施例1制得特征物质的总离子色谱图。
【具体实施方式】
[0022] 以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并 非用于限定本发明的范围。
[0023] 实施例1
[0024] 将1000 ml亚麻籽油注入混合搅拌容器中，并按照1:1比例加入90% (v/v)乙醇 溶液，调节PH值至4. 5,搅拌时间0. 5h，静置，待分层界面形成后，分离醇相液体，旋转浓缩 成浸膏；将所得浸膏放置于亚临界提取罐中，注入亚临界水，浸提比例为1:20,提取温度为 50°C，提取压力为3MPa，提取时间为lOmin，加压1次，得到提取液旋转浓缩，真空冷冻-20°C 干燥得到富含环肽类成分的粗提物15g ;称取粗提物200mg，高速逆流色谱溶剂系统是正己 烷一乙酸乙酯一甲醇一水为溶剂系统，溶剂比例为1:3:3:1，上相为流动相，下相为固定相， 调整转速600rpm，以3. Oml/min流速泵入流动相纯化粗提物，通过高校液相色谱法，得到环 肽类成分二次富集物约62mg。
[0025] 将得到的环肽二次富集物进行UPLC-MS分析，如图1、图2所示。
[0026] 质谱技术是一种鉴定技术，它 能够快速而极为准确地测定生物大分子的分子量， 从而能够快速的鉴定分析物质。图1谱中存在m/z 977. 69[M+H]+，m/z 999. 99[M+Na]+，上 述两峰作为物质分子量的判定标准，证明其分子量为996. 69,与有关资料中描述的相一致。 说明，此二次富集物含有环E这种物质。此外，通过总离子流（图2)中出现的其他的谱峰， 根据其MS图谱，推测总离子中的其他谱峰是亚麻籽油中环肽类系列物质或是一些多肽的 碎片。
[0027] 将本实施例得到的粗提物及纯化物通过肿瘤细胞增殖实验验证。
[0028] 1、细胞株及培养条件
[0029] 本次针对亚麻籽油中提取物的体外癌症细胞系为肝癌细胞IfepG2、体外卵巢癌细 胞H08910pm、S180肿瘤细胞、Lewis肺肉瘤细胞等四种常规癌细胞种类。用含有10%胎牛 血清、lOOU/m青霉素和链霉素的RPMI 1640培养液，于37°C、5% CO2饱和湿度的培养箱中 传代培养，取对数生长期细胞进行实验。
[0030] 2、体外癌细胞增殖实验
[0031] MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞 线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan) 并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免 疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内， MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规 模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经 济性强。
[0032] 取对数期生长的细胞，以每孔5 X IO3接种于96孔培养板，培养板分组，每组设3个 复孔。
[0033] 第1组仅加入细胞培养液，作为空白对照组；
[0034] 第2组加入细胞培养液和细胞悬液，放置于37°C、5% CO2条件下培养24小时，作 为不加样品药物的细胞对照组；
[0035] 第3组加入细胞培养液和细胞悬液，放置于37°C、5 % CO2条件下培养24小时后，加 入不同浓度的样品作用液，作为药物组；药物组终浓度分别为25 μ g/mL、50 μ g/mL、75 μ g/ mL、100 μ g/mL〇
[0036] 各组继续培养48h后，每孔加入5mg/mL的MTT 20 μ L，作用4h后，1500rpm离心 8min，去上清，每孔加入DMSO 150 μ L，震荡10分钟，使甲瓒彻底溶解，492nm测光吸收，计算 不同浓度和作用时间的样品对肿瘤细胞增殖的抑制率。
[0037]
【主权项】
1. 一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成分物质的提取纯化方法，包括以下步骤： (1) 萃取：将乙醇溶液与亚麻籽油置于混合仪中混合，调节pH，搅拌，静置待分层界面 形成后，旋转浓缩，形成浸膏； (2) 亚临界水提取：将步骤（1)的浸膏放置于提取罐中，加入亚临界水，将得到的提取 液旋转浓缩，真空冷冻干燥得到粗提物； (3) 高速逆流色谱纯化：称取步骤（2)得到的粗提物，利用高速逆流色谱纯化溶剂系 统，将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置lh，分相平 衡后分出上相和下相；以溶剂系统的下相为固定相，上相为流动相，调整转速，泵入流动相， 减压回收试剂，得到纯化提取物。
2. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（1)中所述的乙醇溶液和亚 麻籽油的体积比为（1~5) : 1，所述乙醇溶液的体积浓度为90~100%。
3. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（1)中调节pH为4. 5~6， 揽拌0? 5~lh。
4. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（2)中所述浸膏和亚临界水 的重量比为1:(10~50)。
5. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（2)中所述冷冻温度 为-20 ~-40。。。
6. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（2)中所述的旋转浓缩是指 在52~68°C条件下旋出提取液3/5~4/5的液体。
7. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（2)中所述的提取罐中提取 温度为50~120°C，提取压力为3~5MPa，提取时间为10~40min，加压1~3次。
8. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（3)中所述正己烷、乙酸乙 酯、甲醇和水的体积比为（1~3) : (2~4) : (3~5) : (1~3)。
9. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（3)中所述的转速为600~ 800rpm，泵入流动相的流速为2~4ml/min。
10. 权利要求1-9任一权利要求所述提取纯化方法在亚麻籽油加工领域的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成分物质的提取纯化方法，步骤如下：(1)将乙醇溶液与亚麻籽油置于混合仪中混合，调节pH，搅拌，静置待分层界面形成后，旋转浓缩，形成浸膏；(2)将步骤(1)的浸膏放置于提取罐中，加入亚临界水，将得到的提取液旋转浓缩，真空冷冻干燥得到粗提物；(3)称取步骤(2)得到的粗提物，利用高速逆流色谱纯化溶剂系统，得到纯化提取物。本发明在提取纯化过程中，采用了可用于食品生产的溶剂，符合国家相关的法规规定，避免大量的有机溶剂使用造成的残留风险。将上述方法得到的提取物通过肿瘤细胞增殖实验验证，均具有抑制肿瘤细胞生长的细胞学功效，可用于辅助抑制肿瘤保健食品方面的应用。
【IPC分类】A61P35-00, A61K36-55, A61K131-00
【公开号】CN104815001
【申请号】CN201510178126
【发明人】杨长军, 于建伟, 王桐, 石丽花, 衣洁菡
【申请人】烟台新时代健康产业有限公司
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年4月15日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物有效成分提取纯化工艺，尤其涉及一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤 活性成分物质的提取纯化方法，属于植物加工提取领域。
【背景技术】
[0002] 亚麻籽（Linum ustitatissimum L)又称胡麻，属亚麻科、亚麻属，是世界十大油料 作物之一，主要出于加拿大、阿根廷、印度、美国、中国等国家。亚麻籽中主要含有脂肪、蛋 白、糖类等功能性成分，更为重要的是亚麻籽富含α -亚麻酸含量的亚麻籽油，亚麻籽油是 目前η-3脂肪酸含量最高的已知植物油脂之一。近年来研宄发现，亚麻籽油具有预防高脂 血症、动脉粥样硬化、降低血压、增强胰岛素降低血糖的作用。
[0003] 癌症是威胁人类健康的一大凶手，是仅次于心脑血管疾病的第二大致死性疾病 (如果将心血管疾病和脑血管疾病分开统计，癌症则位于第一位），严重地威胁人类健康和 生命。现在临床上应用的抗癌药物虽然种类不少，但价格昂贵，毒副作用严重，且尚没有治 疗某些癌症的特效药。植物在漫长的进化过程中合成了许许多多结构各异的次生代谢产 物，这些次生代谢产物不仅具有不同的生物活性，还常常被发现有新的作用机制，从植物在 内的自然界中寻找发现高效低毒的抗癌活性成分或先导化合物一直是国内外药物学家十 分关注的课题和研宄的热点。
[0004] 目前，专利号CN101945888A公开了一种从油回收疏水性肽的方法，采用从植物材 料中提取油类物质，并将提取的油分离成非极性和极性馏分，从不同馏分中分离回收疏水 性肽类物质。该方法在实施过程中大量采用了多种有机溶剂如烃、酮、酯、醚、芳香物质等， 这些有机溶剂的使用，造成了产品中溶剂残留，通过此方法得到的成分无法应用于国内日 常的保健食品中，且实验过程条件要求比较苛刻，对工作人员身体造成了一定的伤害，该方 法的工艺比较繁琐，未来实现大规模生产的可能性较低。
【发明内容】
[0005] 本发明针对上述现有技术存在的不足，提供一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成 分物质的提取纯化方法。
[0006] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成 分物质的提取纯化方法，包括以下步骤：
[0007] (1)萃取：将乙醇溶液与亚麻籽油置于混合仪中混合，调节pH，搅拌，静置待分层 界面形成后，旋转浓缩，形成浸膏；
[0008] (2)亚临界水提取：将步骤（1)的浸膏放置于提取罐中，加入亚临界水，将得到的 提取液旋转浓缩，真空冷冻干燥得到粗提物；
[0009] (3)高速逆流色谱纯化：称取步骤（2)得到的粗提物，利用高速逆流色谱纯化溶剂 系统，将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置lh，分相 平衡后分出上相和下相；以溶剂系统的下相为固定相，上相为流动相，调整转速，泵入流动 相，减压回收试剂，得到纯化提取物。
[0010] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0011] 进一步，步骤（1)中所述的乙醇溶液和亚麻籽油的体积比为（1~5) :1，所述乙醇 溶液的体积浓度为90~100 %。
[0012] 进一步，步骤（1)中调节pH为4. 5~6,搅拌0· 5~lh。
[0013] 进一步，步骤（2)中所述浸膏和亚临界水的重量比为1: (10~50)
[0014] 进一步，步骤（2)中所述冷冻温度为-20~-40°C。
[0015] 进一步，步骤（2)中所述的旋转浓缩是指在52~68°C条件下旋出提取液3/5~ 4/5的液体。
[0016] 进一步，步骤（2)中所述的提取罐中提取温度为50~120°C，提取压力为3~ 5MPa，提取时间为10~40min，加压1~3次。
[0017] 进一步，步骤（3)中所述正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为（1~3) : (2~ 4) : (3 ~5) : (1 ~3) 〇
[0018] 进一步，步骤⑶中所述的转速为600~800rpm，泵入流动相的流速为2~4ml/ min〇
[0019] 本发明的有益效果是：本发明采用乙醇溶液萃取和超高压偶联亚临界水提取技术 获得可用于保健食品行业的亚麻籽油粗提物，并通过高速逆流色谱技术对粗提物纯化。在 提取纯化过程中，采用了可用于食品生产的溶剂，符合国家相关的法规规定，避免大量的有 机溶剂使用造成的残留风险。将上述方法得到的粗提物和纯化物通过质谱进行物质方面的 鉴定，确定该提取物含有文献中提到的环肽类成分，且含量较高。将粗提物和纯化物通过肿 瘤细胞增殖实验验证，均具有抑制肿瘤细胞生长的细胞学功效，可用于辅助抑制肿瘤保健 食品方面的应用。
【附图说明】
[0020] 图1为本发明实施例1制得特征物质的质谱图；
[0021] 图2为本发明实施例1制得特征物质的总离子色谱图。
【具体实施方式】
[0022] 以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并 非用于限定本发明的范围。
[0023] 实施例1
[0024] 将1000 ml亚麻籽油注入混合搅拌容器中，并按照1:1比例加入90% (v/v)乙醇 溶液，调节PH值至4. 5,搅拌时间0. 5h，静置，待分层界面形成后，分离醇相液体，旋转浓缩 成浸膏；将所得浸膏放置于亚临界提取罐中，注入亚临界水，浸提比例为1:20,提取温度为 50°C，提取压力为3MPa，提取时间为lOmin，加压1次，得到提取液旋转浓缩，真空冷冻-20°C 干燥得到富含环肽类成分的粗提物15g ;称取粗提物200mg，高速逆流色谱溶剂系统是正己 烷一乙酸乙酯一甲醇一水为溶剂系统，溶剂比例为1:3:3:1，上相为流动相，下相为固定相， 调整转速600rpm，以3. Oml/min流速泵入流动相纯化粗提物，通过高校液相色谱法，得到环 肽类成分二次富集物约62mg。
[0025] 将得到的环肽二次富集物进行UPLC-MS分析，如图1、图2所示。
[0026] 质谱技术是一种鉴定技术，它 能够快速而极为准确地测定生物大分子的分子量， 从而能够快速的鉴定分析物质。图1谱中存在m/z 977. 69[M+H]+，m/z 999. 99[M+Na]+，上 述两峰作为物质分子量的判定标准，证明其分子量为996. 69,与有关资料中描述的相一致。 说明，此二次富集物含有环E这种物质。此外，通过总离子流（图2)中出现的其他的谱峰， 根据其MS图谱，推测总离子中的其他谱峰是亚麻籽油中环肽类系列物质或是一些多肽的 碎片。
[0027] 将本实施例得到的粗提物及纯化物通过肿瘤细胞增殖实验验证。
[0028] 1、细胞株及培养条件
[0029] 本次针对亚麻籽油中提取物的体外癌症细胞系为肝癌细胞IfepG2、体外卵巢癌细 胞H08910pm、S180肿瘤细胞、Lewis肺肉瘤细胞等四种常规癌细胞种类。用含有10%胎牛 血清、lOOU/m青霉素和链霉素的RPMI 1640培养液，于37°C、5% CO2饱和湿度的培养箱中 传代培养，取对数生长期细胞进行实验。
[0030] 2、体外癌细胞增殖实验
[0031] MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞 线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan) 并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免 疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内， MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规 模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经 济性强。
[0032] 取对数期生长的细胞，以每孔5 X IO3接种于96孔培养板，培养板分组，每组设3个 复孔。
[0033] 第1组仅加入细胞培养液，作为空白对照组；
[0034] 第2组加入细胞培养液和细胞悬液，放置于37°C、5% CO2条件下培养24小时，作 为不加样品药物的细胞对照组；
[0035] 第3组加入细胞培养液和细胞悬液，放置于37°C、5 % CO2条件下培养24小时后，加 入不同浓度的样品作用液，作为药物组；药物组终浓度分别为25 μ g/mL、50 μ g/mL、75 μ g/ mL、100 μ g/mL〇
[0036] 各组继续培养48h后，每孔加入5mg/mL的MTT 20 μ L，作用4h后，1500rpm离心 8min，去上清，每孔加入DMSO 150 μ L，震荡10分钟，使甲瓒彻底溶解，492nm测光吸收，计算 不同浓度和作用时间的样品对肿瘤细胞增殖的抑制率。
[0037]
【主权项】
1. 一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成分物质的提取纯化方法，包括以下步骤： (1) 萃取：将乙醇溶液与亚麻籽油置于混合仪中混合，调节pH，搅拌，静置待分层界面 形成后，旋转浓缩，形成浸膏； (2) 亚临界水提取：将步骤（1)的浸膏放置于提取罐中，加入亚临界水，将得到的提取 液旋转浓缩，真空冷冻干燥得到粗提物； (3) 高速逆流色谱纯化：称取步骤（2)得到的粗提物，利用高速逆流色谱纯化溶剂系 统，将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置lh，分相平 衡后分出上相和下相；以溶剂系统的下相为固定相，上相为流动相，调整转速，泵入流动相， 减压回收试剂，得到纯化提取物。
2. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（1)中所述的乙醇溶液和亚 麻籽油的体积比为（1~5) : 1，所述乙醇溶液的体积浓度为90~100%。
3. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（1)中调节pH为4. 5~6， 揽拌0? 5~lh。
4. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（2)中所述浸膏和亚临界水 的重量比为1:(10~50)。
5. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（2)中所述冷冻温度 为-20 ~-40。。。
6. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（2)中所述的旋转浓缩是指 在52~68°C条件下旋出提取液3/5~4/5的液体。
7. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（2)中所述的提取罐中提取 温度为50~120°C，提取压力为3~5MPa，提取时间为10~40min，加压1~3次。
8. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（3)中所述正己烷、乙酸乙 酯、甲醇和水的体积比为（1~3) : (2~4) : (3~5) : (1~3)。
9. 根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，步骤（3)中所述的转速为600~ 800rpm，泵入流动相的流速为2~4ml/min。
10. 权利要求1-9任一权利要求所述提取纯化方法在亚麻籽油加工领域的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成分物质的提取纯化方法，步骤如下：(1)将乙醇溶液与亚麻籽油置于混合仪中混合，调节pH，搅拌，静置待分层界面形成后，旋转浓缩，形成浸膏；(2)将步骤(1)的浸膏放置于提取罐中，加入亚临界水，将得到的提取液旋转浓缩，真空冷冻干燥得到粗提物；(3)称取步骤(2)得到的粗提物，利用高速逆流色谱纯化溶剂系统，得到纯化提取物。本发明在提取纯化过程中，采用了可用于食品生产的溶剂，符合国家相关的法规规定，避免大量的有机溶剂使用造成的残留风险。将上述方法得到的提取物通过肿瘤细胞增殖实验验证，均具有抑制肿瘤细胞生长的细胞学功效，可用于辅助抑制肿瘤保健食品方面的应用。
【IPC分类】A61P35-00, A61K36-55, A61K131-00
【公开号】CN104815001
【申请号】CN201510178126
【发明人】杨长军, 于建伟, 王桐, 石丽花, 衣洁菡
【申请人】烟台新时代健康产业有限公司
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年4月15日
最新回复(0)