一种沉水樟组织培养方法
一种沉水樟组织培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种沉水樟组织培养方法，属木本植物无性繁殖【技术领域】，本发明以沉水樟当年新抽半木质化，带有腋芽的茎段为材料，经初步处理后，接种到含6-BA0.2～3.0mg/L，NAA0.01～0.5mg/L的诱导培养基中，获得无菌外植体；培养40～50d后，形成愈伤组织和不定芽；在继代增殖扩繁培养阶段，提出了增殖培养基的合理PH值、不同无机盐浓度、细胞分裂素6-BA的合适浓度，尤其是硫代硫酸钠对增殖不定芽生长的影响，使继代增殖系数MR值达到2.5的同时，不定芽长势充满活力。在诱导生根培养上，筛选出合适的生长素配比，使有效生根率达到96％，组培苗移栽成活率达到90％以上。
【专利说明】一种沉水樟组织培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种木本植物无性繁殖【技术领域】，尤其涉及一种木本植物无性繁殖方法。
【背景技术】
[0002]沉水樟(Cinnamomum micranthum)为樟科,樟属常绿阔叶大乔木,树形高大,树高可达40m、胸径1.5m,干形通直,枝繁叶茂,天然分布于我国中亚热带的中南部至南亚热带的大部分地区，包括我国的浙江、江西、湖南的中南部，台湾北部，福建、广东、广西等7省，在越南北部也有少量分布，地理位置约在北纬22° 2(V至27° 3(V，东径106°至120°之间，垂直分布一般在海拔100~800m之间。沉水樟除提供木材外，根、干、叶可提取黄油素，是合成洋茉莉醛的重要原料，可作医药及芳香油原料，经济价值高。沉水樟的繁育通常有种子繁殖和扦插繁殖，由于沉水樟属自花授粉，雌雄花发育成熟期不一致，结果量少，果实又常受瘦蜂寄生，种子空壳率高，发芽率低；而扦插繁殖又受穗条来源少，生根率不高的影响。因此，若能采用组织培养的方法进行沉水樟繁殖，将可以较好地解决沉水樟种子发芽率低，扦插繁育困难，移栽成活率低等难题。
【发明内容】
[0003]本发明的目的就在于提供一种解决上述问题，使沉水樟组培苗移栽成活率达到90%以上的无性繁殖方法。
[0004]为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是:一种沉水樟组织培养方法，方法步骤如下:
[0005]a.取沉水樟当年新抽半木质化枝条，剪取带有2-3个腋芽的茎段，去除叶片后，置于无菌水中振荡洗涤3~5min，取出后再用70%的酒精处理I~2min，然后置于0.1%HgCl27~15min，最后用无菌水清洗3次。
[0006]b.将处理好的材料接种到诱导培养基:MS+6-BA0.2~3.0mg/L+NAA0.01~
0.5mg/L,获得无菌外植体，在培养温度26~28°C、光强1500~20001x、光照12h/d条件下，经40~50d后，获得无菌的愈伤组织和不定芽。
[0007]c.放入继代增殖培养基:1/2MS(MS基本培养基成分减半)+6-BA0.3~3.0mg/L+NAA0.03 ~0.5mg/L+Na2S20350 ~300mg/L, pH=5.5。
[0008]d.放入诱导生根培养基:1/2MS+IBA0.3 ~1.5mg/L+NAA0.01 ~0.3mg/L，pH=5.5。
[0009]e.将经以上培养的生根苗移栽；
[0010]作为优选，步骤b中诱导培养基:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L ；
[0011]作为优选，步骤c中继代增殖培养基为1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L+Na2S203150mg/L, PH=5.5 ；
[0012]作为优选，步骤d中，诱导生根培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.05mg/L ；
[0013]作为优选，步骤e中，将已生根的组培苗拿去炼苗，炼苗20~30d至茎干成深绿色，再洗去培养基，移栽到椰糠和泥炭土混合的基质中，其中椰糠占1/3、泥炭土占2/3，在温度26~30°C，湿度80~100%的条件下培育25d ；
[0014]作为优选，所述步骤b、C、d中，MS基本培养基内含蔗糖3%，卡拉胶0.8%。[0015]为了实现上述目的，本发明采用的技术方案与现有技术相比，优点在于:本发明沉水樟组织培养不定芽诱导培养基采用MS+6-BA0.2~3.0mg/L+NAA0.01~0.5mg/L，pH=6.0 ；继代增殖扩繁培养基采用 1/2MS+6-BA0.3 ~3.0mg/L+NAA0.03 ~0.5mg/L+Na2S20350 ~300mg/L, pH=5.5 ;诱导生根培养基采用 1/2MS+IBA0.3 ~1.5mg/L+NAA0.01 ~0.3mg/L,pH=5.5。将经以上培养的沉水樟生根苗移栽，成活率90%以上。
【具体实施方式】
[0016]下面将对本发明作进一步说明。本试验材料取自于吉安林科所内林龄30年、树高19m、胸径60cm的沉水樟当年生新抽半木质化枝条。
[0017]一、试验方法
[0018](一)培养条件
[0019]基本培养基均含蔗糖3%，卡拉胶0.8%,pH5.5，置于温度26~28°C、光强1500~20001x、光照12h/d下培养。
[0020]( 二)增殖培养
[0021]以下研究试验中，除试验4每个处理200个重复外，其它试验每个处理100个重复，每个重复I个增殖单位(I个2~3个节的茎段)，每个增殖周期35d。
[0022]1、培养基pH值
[0023]两种处理的培养基，均使用1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L培养基。但配制培养基时，分别将PH值调配到6.5，5.5，5.2，5.0,以pH=6.0为对照。培养一个增殖周期后调查统计新抽不定芽数量及长势情况。
[0024]2、培养基中6-BA
[0025]将每个增殖单位置1/2MS+NAA0.05mg/L,并配合6-BA浓度分别为0，0.5,0.8，1.0，
2.0,3.0mg/L中，以6-BA0mg/L为对照，培养一个增殖周期后调查统计新抽侧芽数量。
[0026]3、培养基中基本盐类
[0027]主要采用1^、1/21^、1/41^和改良1^(3/5的硝酸胺和硝酸钾，2倍的碘化钾、氯化钴和氯化钙，6/5的硫酸镁、硫酸锰、硫酸锌和硫酸铜，其它成分不变)，配合6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L, pH值5.5，以MS基本培养基为对照，培养一个增殖周期后调查统计新抽不定芽数量及长势情况。
[0028](三)继代培养基中硫代硫酸钠
[0029]继代增殖培养过程中发现，培养增殖的茎段新抽芽顶梢或叶有不同程度枯顶或掉叶现象，长势较差。采用培养基1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L,配合添加Na2S203150mg/L、300mg/L，MgS04800mg/L、1600mg/L 四个处理，以不添加 Na2S2O3 或 MgSO4 为对照，培养一个增殖周期后分别调查统计枯顶或掉叶比率。
[0030](四)生根培养
[0031]基本培养基为1/2MS，配合以IBA、NNA、IAA不同浓度及其配比，调查统计15d、30d
生根率。[0032]二、结果与分析
[0033](一)不同pH值培养基对增殖速率的影响
[0034]从表1可以看出，增殖培养基pH值以5.5为宜。在培养基1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L(pH=5.5)中，芽团长势好活力足，不定芽数量增多，增殖系数最高，达2.5，同时高度大于2.0cm不定芽和生根苗数量均最多，收获率达1.72。pH值升高或降低，芽团长势一般，增殖系数及收获率均在一般水平；PH值降低到5.0，还会出现新抽叶焉软现象。
[0035]表1:不同PH值培养基对增殖速率的影响
[0036]
【权利要求】
1.一种沉水樟组织培养方法，其特征在于，方法步骤如下: a.取沉水樟当年新抽半木质化枝条，剪取带有2-3个腋芽的茎段，去除叶片后，置于无菌水中振荡洗涤3~5min，取出后再用70%的酒精处理I~2min，然后置于0.1 % HgCl27~15min，最后用无菌水清洗3次。 b.将处理好的材料接种到诱导培养基:MS+6-BA0.2~3.0mg/L+NAA0.01~0.5mg/L,获得无菌外植体，在培养温度26~28°C、光强1500~20001x、光照12h/d条件下，经40~50d后，获得无菌的愈伤组织和不定芽。 c.放入继代增殖培养基:1/2MS(MS基本培养基成分减半)+6-BA0.3~3.0mg/L+NAA0.03 ~0.5mg/L+Na2S20350 ~300mg/L, pH=5.5。 d.放入诱导生根培养基:1/2MS+IBA0.3 ~1.5mg/L+NAA0.01 ~0.3mg/L, pH=5.5。 e.将经以上培养的生根苗移栽。
2.根据权利要求1所述一种沉水樟组织培养方法，其特征在于:步骤b中诱导培养基:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L。
3.根据权利要求1所述一种沉水樟组织培养方法，其特征在于:步骤c中继代增殖培养基为 1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L+Na2S203150mg/L, PH=5.5。
4.根据权利要求1所述一种沉水樟组织培养方法，其特征在于:步骤d中，诱导生根培养基为 1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.05mg/L。
5.根据权利要求1所述`一种沉水樟组织培养方法，其特征在于:步骤e中，将已生根的组培苗拿去炼苗，炼苗20~30d至茎干成深绿色，再洗去培养基，移栽到椰糠和泥炭土混合的基质中，其中椰糠占1/3、泥炭土占2/3，在温度26~30°C，湿度80~100%的条件下培育 25d。
6.根据权利要求1所述一种沉水樟组织培养方法，其特征在于:所述步骤b、c、d中，MS基本培养基内含蔗糖3 %，卡拉胶0.8%。
【文档编号】A01H4/00GK103651145SQ201310728451
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月26日 优先权日:2013年12月26日
【发明者】罗坤水, 罗忠生, 胡庆, 林洪 申请人:江西省林业科学院
【专利摘要】本发明公开了一种沉水樟组织培养方法，属木本植物无性繁殖【技术领域】，本发明以沉水樟当年新抽半木质化，带有腋芽的茎段为材料，经初步处理后，接种到含6-BA0.2～3.0mg/L，NAA0.01～0.5mg/L的诱导培养基中，获得无菌外植体；培养40～50d后，形成愈伤组织和不定芽；在继代增殖扩繁培养阶段，提出了增殖培养基的合理PH值、不同无机盐浓度、细胞分裂素6-BA的合适浓度，尤其是硫代硫酸钠对增殖不定芽生长的影响，使继代增殖系数MR值达到2.5的同时，不定芽长势充满活力。在诱导生根培养上，筛选出合适的生长素配比，使有效生根率达到96％，组培苗移栽成活率达到90％以上。
【专利说明】一种沉水樟组织培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种木本植物无性繁殖【技术领域】，尤其涉及一种木本植物无性繁殖方法。
【背景技术】
[0002]沉水樟(Cinnamomum micranthum)为樟科,樟属常绿阔叶大乔木,树形高大,树高可达40m、胸径1.5m,干形通直,枝繁叶茂,天然分布于我国中亚热带的中南部至南亚热带的大部分地区，包括我国的浙江、江西、湖南的中南部，台湾北部，福建、广东、广西等7省，在越南北部也有少量分布，地理位置约在北纬22° 2(V至27° 3(V，东径106°至120°之间，垂直分布一般在海拔100~800m之间。沉水樟除提供木材外，根、干、叶可提取黄油素，是合成洋茉莉醛的重要原料，可作医药及芳香油原料，经济价值高。沉水樟的繁育通常有种子繁殖和扦插繁殖，由于沉水樟属自花授粉，雌雄花发育成熟期不一致，结果量少，果实又常受瘦蜂寄生，种子空壳率高，发芽率低；而扦插繁殖又受穗条来源少，生根率不高的影响。因此，若能采用组织培养的方法进行沉水樟繁殖，将可以较好地解决沉水樟种子发芽率低，扦插繁育困难，移栽成活率低等难题。
【发明内容】
[0003]本发明的目的就在于提供一种解决上述问题，使沉水樟组培苗移栽成活率达到90%以上的无性繁殖方法。
[0004]为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是:一种沉水樟组织培养方法，方法步骤如下:
[0005]a.取沉水樟当年新抽半木质化枝条，剪取带有2-3个腋芽的茎段，去除叶片后，置于无菌水中振荡洗涤3~5min，取出后再用70%的酒精处理I~2min，然后置于0.1%HgCl27~15min，最后用无菌水清洗3次。
[0006]b.将处理好的材料接种到诱导培养基:MS+6-BA0.2~3.0mg/L+NAA0.01~
0.5mg/L,获得无菌外植体，在培养温度26~28°C、光强1500~20001x、光照12h/d条件下，经40~50d后，获得无菌的愈伤组织和不定芽。
[0007]c.放入继代增殖培养基:1/2MS(MS基本培养基成分减半)+6-BA0.3~3.0mg/L+NAA0.03 ~0.5mg/L+Na2S20350 ~300mg/L, pH=5.5。
[0008]d.放入诱导生根培养基:1/2MS+IBA0.3 ~1.5mg/L+NAA0.01 ~0.3mg/L，pH=5.5。
[0009]e.将经以上培养的生根苗移栽；
[0010]作为优选，步骤b中诱导培养基:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L ；
[0011]作为优选，步骤c中继代增殖培养基为1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L+Na2S203150mg/L, PH=5.5 ；
[0012]作为优选，步骤d中，诱导生根培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.05mg/L ；
[0013]作为优选，步骤e中，将已生根的组培苗拿去炼苗，炼苗20~30d至茎干成深绿色，再洗去培养基，移栽到椰糠和泥炭土混合的基质中，其中椰糠占1/3、泥炭土占2/3，在温度26~30°C，湿度80~100%的条件下培育25d ；
[0014]作为优选，所述步骤b、C、d中，MS基本培养基内含蔗糖3%，卡拉胶0.8%。[0015]为了实现上述目的，本发明采用的技术方案与现有技术相比，优点在于:本发明沉水樟组织培养不定芽诱导培养基采用MS+6-BA0.2~3.0mg/L+NAA0.01~0.5mg/L，pH=6.0 ；继代增殖扩繁培养基采用 1/2MS+6-BA0.3 ~3.0mg/L+NAA0.03 ~0.5mg/L+Na2S20350 ~300mg/L, pH=5.5 ;诱导生根培养基采用 1/2MS+IBA0.3 ~1.5mg/L+NAA0.01 ~0.3mg/L,pH=5.5。将经以上培养的沉水樟生根苗移栽，成活率90%以上。
【具体实施方式】
[0016]下面将对本发明作进一步说明。本试验材料取自于吉安林科所内林龄30年、树高19m、胸径60cm的沉水樟当年生新抽半木质化枝条。
[0017]一、试验方法
[0018](一)培养条件
[0019]基本培养基均含蔗糖3%，卡拉胶0.8%,pH5.5，置于温度26~28°C、光强1500~20001x、光照12h/d下培养。
[0020]( 二)增殖培养
[0021]以下研究试验中，除试验4每个处理200个重复外，其它试验每个处理100个重复，每个重复I个增殖单位(I个2~3个节的茎段)，每个增殖周期35d。
[0022]1、培养基pH值
[0023]两种处理的培养基，均使用1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L培养基。但配制培养基时，分别将PH值调配到6.5，5.5，5.2，5.0,以pH=6.0为对照。培养一个增殖周期后调查统计新抽不定芽数量及长势情况。
[0024]2、培养基中6-BA
[0025]将每个增殖单位置1/2MS+NAA0.05mg/L,并配合6-BA浓度分别为0，0.5,0.8，1.0，
2.0,3.0mg/L中，以6-BA0mg/L为对照，培养一个增殖周期后调查统计新抽侧芽数量。
[0026]3、培养基中基本盐类
[0027]主要采用1^、1/21^、1/41^和改良1^(3/5的硝酸胺和硝酸钾，2倍的碘化钾、氯化钴和氯化钙，6/5的硫酸镁、硫酸锰、硫酸锌和硫酸铜，其它成分不变)，配合6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L, pH值5.5，以MS基本培养基为对照，培养一个增殖周期后调查统计新抽不定芽数量及长势情况。
[0028](三)继代培养基中硫代硫酸钠
[0029]继代增殖培养过程中发现，培养增殖的茎段新抽芽顶梢或叶有不同程度枯顶或掉叶现象，长势较差。采用培养基1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L,配合添加Na2S203150mg/L、300mg/L，MgS04800mg/L、1600mg/L 四个处理，以不添加 Na2S2O3 或 MgSO4 为对照，培养一个增殖周期后分别调查统计枯顶或掉叶比率。
[0030](四)生根培养
[0031]基本培养基为1/2MS，配合以IBA、NNA、IAA不同浓度及其配比，调查统计15d、30d
生根率。[0032]二、结果与分析
[0033](一)不同pH值培养基对增殖速率的影响
[0034]从表1可以看出，增殖培养基pH值以5.5为宜。在培养基1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L(pH=5.5)中，芽团长势好活力足，不定芽数量增多，增殖系数最高，达2.5，同时高度大于2.0cm不定芽和生根苗数量均最多，收获率达1.72。pH值升高或降低，芽团长势一般，增殖系数及收获率均在一般水平；PH值降低到5.0，还会出现新抽叶焉软现象。
[0035]表1:不同PH值培养基对增殖速率的影响
[0036]
【权利要求】
1.一种沉水樟组织培养方法，其特征在于，方法步骤如下: a.取沉水樟当年新抽半木质化枝条，剪取带有2-3个腋芽的茎段，去除叶片后，置于无菌水中振荡洗涤3~5min，取出后再用70%的酒精处理I~2min，然后置于0.1 % HgCl27~15min，最后用无菌水清洗3次。 b.将处理好的材料接种到诱导培养基:MS+6-BA0.2~3.0mg/L+NAA0.01~0.5mg/L,获得无菌外植体，在培养温度26~28°C、光强1500~20001x、光照12h/d条件下，经40~50d后，获得无菌的愈伤组织和不定芽。 c.放入继代增殖培养基:1/2MS(MS基本培养基成分减半)+6-BA0.3~3.0mg/L+NAA0.03 ~0.5mg/L+Na2S20350 ~300mg/L, pH=5.5。 d.放入诱导生根培养基:1/2MS+IBA0.3 ~1.5mg/L+NAA0.01 ~0.3mg/L, pH=5.5。 e.将经以上培养的生根苗移栽。
2.根据权利要求1所述一种沉水樟组织培养方法，其特征在于:步骤b中诱导培养基:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L。
3.根据权利要求1所述一种沉水樟组织培养方法，其特征在于:步骤c中继代增殖培养基为 1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L+Na2S203150mg/L, PH=5.5。
4.根据权利要求1所述一种沉水樟组织培养方法，其特征在于:步骤d中，诱导生根培养基为 1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.05mg/L。
5.根据权利要求1所述`一种沉水樟组织培养方法，其特征在于:步骤e中，将已生根的组培苗拿去炼苗，炼苗20~30d至茎干成深绿色，再洗去培养基，移栽到椰糠和泥炭土混合的基质中，其中椰糠占1/3、泥炭土占2/3，在温度26~30°C，湿度80~100%的条件下培育 25d。
6.根据权利要求1所述一种沉水樟组织培养方法，其特征在于:所述步骤b、c、d中，MS基本培养基内含蔗糖3 %，卡拉胶0.8%。
【文档编号】A01H4/00GK103651145SQ201310728451
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月26日 优先权日:2013年12月26日
【发明者】罗坤水, 罗忠生, 胡庆, 林洪 申请人:江西省林业科学院
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