一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法
一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法
【专利摘要】一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法，用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株制备菌悬液接种到活体蚕蛹上经人工培育而成蚕蛹虫草。包括以下步骤：(1)虫草菌菌株的筛选；(2)蚕蛹的准备；(3)菌悬液的制作；(4)接种前蚕蛹准备；(5)接种；(6)子座的培育；(7)蚕蛹虫草的收集保存。本发明以家养柞蚕蚕蛹为宿主，人工接种冬虫夏草菌株菌悬液，培育而成。接种成功率、接种后的僵化率达96％以上，子实体的长出率达92％以上。从接种到子实体的成熟约36-44天。在化学成份上与冬虫夏草无根本的差异，活性成份虫草素和虫草酸是冬虫夏草的3.2-3.9倍。
【专利说明】一种以奋蛹为载体培养人工虫草的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药用菌栽培【技术领域】，涉及一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法，尤其涉及一种用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株制备菌悬液接种到活体蚕蛹上经人工培育而成人工虫草的培育方法。
【背景技术】
[0002]随着人们生活水平的提高和对健康的重视，冬虫夏草及其附属产品成为一个发展迅速的产业。冬虫夏草列为国家二级保护物种，各地政府也出台政策禁挖、限挖，但对冬虫夏草的采挖并未得到遏制。冬虫夏草是我国的一种名贵中药，由丁它需要特殊的生长条件，生长期较长，因而在自然界中数量十分稀少，随着环境条件的改变，产量呈逐渐下降趋势，而社会需求越来越大，故十分名贵，价格也不菲，目前市场上达到每千克4万元左右。
[0003]蚕蛹虫草(Cordyceps militaris)与冬虫夏草(Cordyceps)比较:虫草是名贵的中约材，具有很高的滋补保健价值和药用价值。在我国虫草的种类有200多种，其中应用价值最高的是产于西藏的冬虫夏草和产于长自山的蛹虫草。二者在生物分类上同属于子囊菌纲肉座菌目麦角菌科虫草属。冬虫夏草产自天然，是冬虫夏草菌寄生于蝙蝠蛾幼虫而形成。蚕蛹虫草是将蛹虫草菌接种于蚕蛹体，经人工培育而成。目前蚕蛹虫草的栽培已经形成规模化。蚕蛹虫草和冬虫夏草药化成分及药理功能都非常相近。研究表明，蚕蛹虫草和冬虫夏草中无机元素种类基本一致，二者硒的含量均较高，分别比富硒抗癌中药黄茂高3.3倍和5.8倍。蚕蛹虫草和冬虫夏草含有相同的核普类成分，只有虫草素含量蚕蛹虫草比冬虫夏草高出很多，虫草酸含量蚕蛹虫草略低，虫草多糖含量二者相当。蚕蛹虫草和冬虫夏草约效功能基本一致，都具有抗肿瘤、抗病毒、抗疲劳、雄性激素样、调节脂类代谢等作用，对免疫系统有促进或双向调节作用，能够保肝、护肝、抗乙型肝炎及镇咳、祛痰、平喘、解痉，可以治疗心率失常、慢性肾炎及肾功能衰竭。
[0004]蚕蛹虫草和冬虫夏草都是昆虫和真菌的结合体，虫和草的协同作用使它们具有阴阳双补的神奇功效。现在冬虫夏草野生资源奇缺，价格不断攀升，蚕蛹虫草完全可以作为一个新的医疗保健珍品被广泛应用。目前，冬虫夏草这一珍贵的野生资源萎缩、资源家底不清、发生发展规律不明、国外加快研究，而蚕蛹虫草以家蚕蛹为宿主，人工接种蛹虫草菌，模拟蛹虫草自然生态环境，人工有机培育的成功，既是对冬虫夏草的有力保护和开发，也是对蚕业发展的促进，更是对平面茧产业的拓展。
[0005]目前，国内已有将蚕蛹通过接种虫草菌，在一定的温度、湿度、光照等条件下，经过40余天的精心培育，成功培育出了蚕蛹虫草。
[0006]2005年，青 岛海洋大学食品工程系江晓路教授也分离得到同种纯种。经过对人工栽培的蛹虫草与野生冬虫夏草的化学成份分析比较，结果是人工栽培的蛹虫草和野生冬虫夏草的各种化学成份和含量基本相同，有些有效成份含量高于野生冬虫夏草。
[0007]申请号为93102809.4，发明名称为“一种烘干蚕蛹人工培育虫草的方法”的专利，其方法是将菌株接种在斜面培养基上，进行菌丝阶段的培养；将烘传一儿蚕蛹用清水冲洗干净并晾干；在烘干蚕蛹上进行凿孔处理；将洗净凿孔的烘干蚕蛹装瓶，加适量水，进行高压消毒；在接种箱内挑取少许菌丝块放入瓶中的蛹体上，封瓶培养，温度为15°C -30°C,自然光照，约二个月即可长出虫草子实体。烘干蚕蛹有利于大量收购和长期存放，凿孔后的烘干蚕蛹经高压消毒，可提高人工培育虫草的成功率。而此时用的蚕蛹多是收购来得传统茧缥丝后生产的蚕蛹，含有强碱等化学药品，不是有机蚕蛹，以此作宿主无法生产出有机的蚕蛹虫草来。
[0008]申请号为200810013831.7，发明名称为“一种蚕蛹虫草的培育方法”的专利，其方
法是:筛选蛹虫草菌菌株的；制作蚕蛹有机培养基；制作孢子悬浊液；准备宿主；感染蛹虫草菌；管理感染蛹体；培育子座；收集保存蚕蛹虫草。本发明以家蚕蛹为宿主,人工接种蛹虫草菌，模拟蛹虫草自然生态环境，人工培育而成。而此发明的菌种是孢子悬浊液，后期的培养是在自然环境下培养，烘干处理采用高温处理，这对蛹虫草的质量和有效成分的影响很大。
【发明内容】
[0009]本发明的目的是提供一种用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株孢子接种到有机活体蚕蛹上人工培育而成蚕蛹虫草的培育方法。
[0010]为实现上述目的，本发明一种蚕蛹虫草的培育方法，其特征在于，包括以下步骤:
[0011]I)虫草菌菌株的筛选
[0012]将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为氮源平板生长，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫夏草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株；
[0013]2)宿主准备`
[0014]将家养柞蚕的茧去茧壳得活体蛹作为本发明的宿主，注意在去除茧时不破坏柞蚕的蛹；
[0015]3)菌悬液的制作
[0016]将筛选的虫草菌株接种于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为主要氮源制成的培养基平板上，置20°C下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分接种于上述液体培养基内培养，培养4-5天,用高速离散器，以10000r/min,匀衆Imin既得菌悬液；
[0017]4)接种前蚕蛹准备
[0018]在无菌操作台内，将活体蛹用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗5-6次，晾干作宿主；
[0019]5)接种
[0020]在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述蚕蛹尾部或口器，按0.1-0.15毫升/只注入菌悬液；
[0021]6)子座的培育
[0022]将处理后的蚕蛹放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，20°C下保护至蛹体僵硬；然后将培养僵硬的蛹体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中培养；
[0023]7)蚕蛹虫草的收集保存[0024]子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温贮存。
[0025]本发明蚕蛹虫草以柞蚕蚕蛹为宿主，人工接种菌悬液。接种成功率、接种后的僵化率达96%以上，子实体的长出率达95%以上，从接种到子实体的成熟约35-45天。药性分析表明人工培育的蚕蛹虫草在化学成份上与冬虫夏草无根本性质的差异，活性成份虫草素和虫草酸是冬虫夏草的3.2-3.9倍。
【具体实施方式】
[0026]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明:
[0027]本发明中的活体蚕蛹为本公司实验室自主提供。
[0028]本发明蚕蛹虫草培育技术方案:人工培育蚕蛹虫草时，将筛选的虫草菌株接种于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为主要氮源有机培养基上，置20°C下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分放在液体培养基内制成培养，培养4-5天，用高速离散器打碎菌丝球既得菌悬液，将菌悬液接种于上述蚕蛹尾部或口器，至蛹体直至僵硬。然后将僵硬的蚕蛹体放在适合蛹虫草培养的条件下培养。技术具体方案如下:
[0029]I)虫草菌菌株的筛选
[0030]将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为氮源平板生长，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫夏草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株；
[0031]2)宿主准备
[0032]将家养柞蚕的茧去茧壳得活体蛹作为本发明的宿主，注意在去除茧时不破坏柞蚕的蛹；
[0033]3)菌悬液的制作
[0034]将筛选的虫草菌株接种于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为主要氮源制成的培养基平板上，置20°C下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分接种于上述液体培养基内培养，培养4-5天,用高速离散器，以10000r/min,匀衆Imin既得菌悬液；
[0035]4)接种前蚕蛹准备
[0036]在无菌操作台内，将活体蛹用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗5_6次，晾干作宿主；
[0037]5)接种
[0038]在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述蚕蛹尾部或口器，按
0.1-0.15毫升/只注入菌悬液；
[0039]6)子座的培育
[0040]将处理后的蚕蛹放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，20°C下保护至蛹体僵硬；然后将培养僵硬的蛹体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中培养；
[0041]7)蚕蛹虫草的收集保存
[0042]子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温贮存。[0043]实施例一:
[0044]以活体蚕蛹为培养基的人工虫草培育方法。
[0045]具体技术方案如下:
[0046](一 )虫草菌菌株的筛选
[0047]1、菌种制作
[0048]选取高产、优质、早熟、原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草子实体，用75%的酒精进行表面消毒，用无菌水清洗数次(一般5-6次)，将冬虫夏草中的虫体去掉，剩余部分放置于培养基中培养。待菌丝布满平板后再纯化。经反复纯化后获得数株母种。
[0049]将母种扩大培养后，置于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为氮源有机培养基上，于180C _25°C下培养20-30d，观察生长情况，若见有杂菌污染，应对母种进一步纯化；若无杂菌污染，可继续培养，一个月后即有橙红色子实体产生，说明母种可靠。
[0050]将液体培养基分装于500ml三角瓶中，121 °C，灭菌20分钟，将母种在无菌条件下用接种环接到三角瓶中。接种后置于18_22°C条件下，摇种培养6d左右，待形成均匀小球后用高速分散器高速10000r/min，处理Imin既得菌悬液。
[0051]2、宿主准备
[0052]将家养柞蚕的茧去茧壳得活体蛹作为本发明宿主，注意在去除茧时不破坏柞蚕的蛹。在无菌操作台内，将活 体蛹用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗I分钟，晾干作宿主；
[0053]3、接种
[0054]在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述蚕蛹尾部或口器，按
0.1-0.15毫升/只注入菌悬液；
[0055]4、子座的培育
[0056]将处理后的蚕蛹放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，20°C下保护至蛹体僵硬；然后将培养僵硬的蛹体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中培养；
[0057]5、蚕蛹虫草的收集保存
[0058]子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或者为了防止高温破坏虫草中的部分营养物，可采用真空冷冻干燥后，低温贮存。
【权利要求】
1.一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)虫草菌菌株的筛选 将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为氮源平板生长，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫夏草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株； 2)宿主准备 将家养柞蚕的茧去茧壳得活体蛹作为本发明的宿主，注意在去除茧时不破坏柞蚕的蛹； 3)菌悬液的制作 将筛选的虫草菌株接种于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为主要氮源制成的培养基平板上，置20°C下培养,待出现大量菌丝后,挑取一部分接种于上述液体培养基内培养,培养4-5天,用高速离散器，以10000r/min,匀衆Imin既得菌悬液； 4)接种前蚕蛹准备 在无菌操作台内，将活体蛹用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗5-6次，晾干作宿主； 5)接种 在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述蚕蛹尾部或口器，按0.1-0.15毫升/只注入菌液； 6)子座的培育` 将处理后的蚕蛹放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，20°C下保护至蛹体僵硬；然后将培养僵硬的蛹体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中培养; 7)蚕蛹虫草的收集保存 子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温贮存。
【文档编号】A01G1/04GK103688759SQ201310728837
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月20日 优先权日:2013年12月20日
【发明者】凌中鑫 申请人:凌中鑫
【专利摘要】一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法，用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株制备菌悬液接种到活体蚕蛹上经人工培育而成蚕蛹虫草。包括以下步骤：(1)虫草菌菌株的筛选；(2)蚕蛹的准备；(3)菌悬液的制作；(4)接种前蚕蛹准备；(5)接种；(6)子座的培育；(7)蚕蛹虫草的收集保存。本发明以家养柞蚕蚕蛹为宿主，人工接种冬虫夏草菌株菌悬液，培育而成。接种成功率、接种后的僵化率达96％以上，子实体的长出率达92％以上。从接种到子实体的成熟约36-44天。在化学成份上与冬虫夏草无根本的差异，活性成份虫草素和虫草酸是冬虫夏草的3.2-3.9倍。
【专利说明】一种以奋蛹为载体培养人工虫草的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药用菌栽培【技术领域】，涉及一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法，尤其涉及一种用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株制备菌悬液接种到活体蚕蛹上经人工培育而成人工虫草的培育方法。
【背景技术】
[0002]随着人们生活水平的提高和对健康的重视，冬虫夏草及其附属产品成为一个发展迅速的产业。冬虫夏草列为国家二级保护物种，各地政府也出台政策禁挖、限挖，但对冬虫夏草的采挖并未得到遏制。冬虫夏草是我国的一种名贵中药，由丁它需要特殊的生长条件，生长期较长，因而在自然界中数量十分稀少，随着环境条件的改变，产量呈逐渐下降趋势，而社会需求越来越大，故十分名贵，价格也不菲，目前市场上达到每千克4万元左右。
[0003]蚕蛹虫草(Cordyceps militaris)与冬虫夏草(Cordyceps)比较:虫草是名贵的中约材，具有很高的滋补保健价值和药用价值。在我国虫草的种类有200多种，其中应用价值最高的是产于西藏的冬虫夏草和产于长自山的蛹虫草。二者在生物分类上同属于子囊菌纲肉座菌目麦角菌科虫草属。冬虫夏草产自天然，是冬虫夏草菌寄生于蝙蝠蛾幼虫而形成。蚕蛹虫草是将蛹虫草菌接种于蚕蛹体，经人工培育而成。目前蚕蛹虫草的栽培已经形成规模化。蚕蛹虫草和冬虫夏草药化成分及药理功能都非常相近。研究表明，蚕蛹虫草和冬虫夏草中无机元素种类基本一致，二者硒的含量均较高，分别比富硒抗癌中药黄茂高3.3倍和5.8倍。蚕蛹虫草和冬虫夏草含有相同的核普类成分，只有虫草素含量蚕蛹虫草比冬虫夏草高出很多，虫草酸含量蚕蛹虫草略低，虫草多糖含量二者相当。蚕蛹虫草和冬虫夏草约效功能基本一致，都具有抗肿瘤、抗病毒、抗疲劳、雄性激素样、调节脂类代谢等作用，对免疫系统有促进或双向调节作用，能够保肝、护肝、抗乙型肝炎及镇咳、祛痰、平喘、解痉，可以治疗心率失常、慢性肾炎及肾功能衰竭。
[0004]蚕蛹虫草和冬虫夏草都是昆虫和真菌的结合体，虫和草的协同作用使它们具有阴阳双补的神奇功效。现在冬虫夏草野生资源奇缺，价格不断攀升，蚕蛹虫草完全可以作为一个新的医疗保健珍品被广泛应用。目前，冬虫夏草这一珍贵的野生资源萎缩、资源家底不清、发生发展规律不明、国外加快研究，而蚕蛹虫草以家蚕蛹为宿主，人工接种蛹虫草菌，模拟蛹虫草自然生态环境，人工有机培育的成功，既是对冬虫夏草的有力保护和开发，也是对蚕业发展的促进，更是对平面茧产业的拓展。
[0005]目前，国内已有将蚕蛹通过接种虫草菌，在一定的温度、湿度、光照等条件下，经过40余天的精心培育，成功培育出了蚕蛹虫草。
[0006]2005年，青 岛海洋大学食品工程系江晓路教授也分离得到同种纯种。经过对人工栽培的蛹虫草与野生冬虫夏草的化学成份分析比较，结果是人工栽培的蛹虫草和野生冬虫夏草的各种化学成份和含量基本相同，有些有效成份含量高于野生冬虫夏草。
[0007]申请号为93102809.4，发明名称为“一种烘干蚕蛹人工培育虫草的方法”的专利，其方法是将菌株接种在斜面培养基上，进行菌丝阶段的培养；将烘传一儿蚕蛹用清水冲洗干净并晾干；在烘干蚕蛹上进行凿孔处理；将洗净凿孔的烘干蚕蛹装瓶，加适量水，进行高压消毒；在接种箱内挑取少许菌丝块放入瓶中的蛹体上，封瓶培养，温度为15°C -30°C,自然光照，约二个月即可长出虫草子实体。烘干蚕蛹有利于大量收购和长期存放，凿孔后的烘干蚕蛹经高压消毒，可提高人工培育虫草的成功率。而此时用的蚕蛹多是收购来得传统茧缥丝后生产的蚕蛹，含有强碱等化学药品，不是有机蚕蛹，以此作宿主无法生产出有机的蚕蛹虫草来。
[0008]申请号为200810013831.7，发明名称为“一种蚕蛹虫草的培育方法”的专利，其方
法是:筛选蛹虫草菌菌株的；制作蚕蛹有机培养基；制作孢子悬浊液；准备宿主；感染蛹虫草菌；管理感染蛹体；培育子座；收集保存蚕蛹虫草。本发明以家蚕蛹为宿主,人工接种蛹虫草菌，模拟蛹虫草自然生态环境，人工培育而成。而此发明的菌种是孢子悬浊液，后期的培养是在自然环境下培养，烘干处理采用高温处理，这对蛹虫草的质量和有效成分的影响很大。
【发明内容】
[0009]本发明的目的是提供一种用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株孢子接种到有机活体蚕蛹上人工培育而成蚕蛹虫草的培育方法。
[0010]为实现上述目的，本发明一种蚕蛹虫草的培育方法，其特征在于，包括以下步骤:
[0011]I)虫草菌菌株的筛选
[0012]将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为氮源平板生长，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫夏草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株；
[0013]2)宿主准备`
[0014]将家养柞蚕的茧去茧壳得活体蛹作为本发明的宿主，注意在去除茧时不破坏柞蚕的蛹；
[0015]3)菌悬液的制作
[0016]将筛选的虫草菌株接种于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为主要氮源制成的培养基平板上，置20°C下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分接种于上述液体培养基内培养，培养4-5天,用高速离散器，以10000r/min,匀衆Imin既得菌悬液；
[0017]4)接种前蚕蛹准备
[0018]在无菌操作台内，将活体蛹用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗5-6次，晾干作宿主；
[0019]5)接种
[0020]在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述蚕蛹尾部或口器，按0.1-0.15毫升/只注入菌悬液；
[0021]6)子座的培育
[0022]将处理后的蚕蛹放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，20°C下保护至蛹体僵硬；然后将培养僵硬的蛹体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中培养；
[0023]7)蚕蛹虫草的收集保存[0024]子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温贮存。
[0025]本发明蚕蛹虫草以柞蚕蚕蛹为宿主，人工接种菌悬液。接种成功率、接种后的僵化率达96%以上，子实体的长出率达95%以上，从接种到子实体的成熟约35-45天。药性分析表明人工培育的蚕蛹虫草在化学成份上与冬虫夏草无根本性质的差异，活性成份虫草素和虫草酸是冬虫夏草的3.2-3.9倍。
【具体实施方式】
[0026]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明:
[0027]本发明中的活体蚕蛹为本公司实验室自主提供。
[0028]本发明蚕蛹虫草培育技术方案:人工培育蚕蛹虫草时，将筛选的虫草菌株接种于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为主要氮源有机培养基上，置20°C下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分放在液体培养基内制成培养，培养4-5天，用高速离散器打碎菌丝球既得菌悬液，将菌悬液接种于上述蚕蛹尾部或口器，至蛹体直至僵硬。然后将僵硬的蚕蛹体放在适合蛹虫草培养的条件下培养。技术具体方案如下:
[0029]I)虫草菌菌株的筛选
[0030]将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为氮源平板生长，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫夏草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株；
[0031]2)宿主准备
[0032]将家养柞蚕的茧去茧壳得活体蛹作为本发明的宿主，注意在去除茧时不破坏柞蚕的蛹；
[0033]3)菌悬液的制作
[0034]将筛选的虫草菌株接种于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为主要氮源制成的培养基平板上，置20°C下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分接种于上述液体培养基内培养，培养4-5天,用高速离散器，以10000r/min,匀衆Imin既得菌悬液；
[0035]4)接种前蚕蛹准备
[0036]在无菌操作台内，将活体蛹用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗5_6次，晾干作宿主；
[0037]5)接种
[0038]在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述蚕蛹尾部或口器，按
0.1-0.15毫升/只注入菌悬液；
[0039]6)子座的培育
[0040]将处理后的蚕蛹放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，20°C下保护至蛹体僵硬；然后将培养僵硬的蛹体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中培养；
[0041]7)蚕蛹虫草的收集保存
[0042]子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温贮存。[0043]实施例一:
[0044]以活体蚕蛹为培养基的人工虫草培育方法。
[0045]具体技术方案如下:
[0046](一 )虫草菌菌株的筛选
[0047]1、菌种制作
[0048]选取高产、优质、早熟、原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草子实体，用75%的酒精进行表面消毒，用无菌水清洗数次(一般5-6次)，将冬虫夏草中的虫体去掉，剩余部分放置于培养基中培养。待菌丝布满平板后再纯化。经反复纯化后获得数株母种。
[0049]将母种扩大培养后，置于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为氮源有机培养基上，于180C _25°C下培养20-30d，观察生长情况，若见有杂菌污染，应对母种进一步纯化；若无杂菌污染，可继续培养，一个月后即有橙红色子实体产生，说明母种可靠。
[0050]将液体培养基分装于500ml三角瓶中，121 °C，灭菌20分钟，将母种在无菌条件下用接种环接到三角瓶中。接种后置于18_22°C条件下，摇种培养6d左右，待形成均匀小球后用高速分散器高速10000r/min，处理Imin既得菌悬液。
[0051]2、宿主准备
[0052]将家养柞蚕的茧去茧壳得活体蛹作为本发明宿主，注意在去除茧时不破坏柞蚕的蛹。在无菌操作台内，将活 体蛹用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗I分钟，晾干作宿主；
[0053]3、接种
[0054]在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述蚕蛹尾部或口器，按
0.1-0.15毫升/只注入菌悬液；
[0055]4、子座的培育
[0056]将处理后的蚕蛹放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，20°C下保护至蛹体僵硬；然后将培养僵硬的蛹体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中培养；
[0057]5、蚕蛹虫草的收集保存
[0058]子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或者为了防止高温破坏虫草中的部分营养物，可采用真空冷冻干燥后，低温贮存。
【权利要求】
1.一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)虫草菌菌株的筛选 将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为氮源平板生长，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫夏草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株； 2)宿主准备 将家养柞蚕的茧去茧壳得活体蛹作为本发明的宿主，注意在去除茧时不破坏柞蚕的蛹； 3)菌悬液的制作 将筛选的虫草菌株接种于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为主要氮源制成的培养基平板上，置20°C下培养,待出现大量菌丝后,挑取一部分接种于上述液体培养基内培养,培养4-5天,用高速离散器，以10000r/min,匀衆Imin既得菌悬液； 4)接种前蚕蛹准备 在无菌操作台内，将活体蛹用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗5-6次，晾干作宿主； 5)接种 在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述蚕蛹尾部或口器，按0.1-0.15毫升/只注入菌液； 6)子座的培育` 将处理后的蚕蛹放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，20°C下保护至蛹体僵硬；然后将培养僵硬的蛹体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中培养; 7)蚕蛹虫草的收集保存 子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温贮存。
【文档编号】A01G1/04GK103688759SQ201310728837
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月20日 优先权日:2013年12月20日
【发明者】凌中鑫 申请人:凌中鑫
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