一种生产蕲山药试管微块茎的方法
一种生产蕲山药试管微块茎的方法
【专利摘要】本发明公开了一种生产蕲山药试管微块茎的方法，其步骤:a、蕲山药试管苗的准备：取蕲山药顶端的幼嫩茎段，剪成带节茎段，在超净工作台上消毒后将茎段切成小段，将切好的材料放置培养基中；在光照条件下培养，获得初始无菌试管苗；b、蕲山药试管苗的扩繁：将无菌试管苗茎段切成小段，置于培养基中；在光照条件下培养，获得试管苗；c、蕲山药试管微块茎的培养：将试管苗置于培养基中；在光照条件下培养，获得试管微块茎；d、蕲山药试管微块茎的收获。本发明的微块茎形成率高，达到了97.50%；方法易行，操作方便，缩短了生产周期，提高了生产效率，降低了生产成本，能快速培育出大量蕲山药试管微块茎，满足了规模化种植的需求。
【专利说明】一种生产蕲山药试管微块茎的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物组织培养【技术领域】，更具体涉及一种高效生产蕲山药试管微块茎的方法，适用于快速繁育蕲山药脱毒种药。
【背景技术】
[0002]山药是百合目(Liliales)薯菌科(Dioscoreaceae)薯菌属{DioscoreaL.、薯菌Wioscorea opposita Thunb.)及其近缘种植物地下块莖的总称,为I年生或多年生、具双子叶植物特征特性的单子叶缠绕性藤本植物。山药富含淀粉、多糖、黏液蛋白、矿物质及其他营养物质，是一种食、药兼用的经济作物。中国、美国、英国和日本等国家均将山药列入药典。山药气味平和，温补而不骤，微香而不燥，是中医常用的一味健脾补气良药，其药理作用主要集中在抗氧化、抗衰老、降血糖、肝损伤保护、免疫调节等方面。
[0003]‘蕲山药’是以蕲春县为主的鄂东山区大面积种植的优良地方山药，其食用品质和药用品质均较佳。康薇等总结了 ‘蕲山药’的优质丰产栽培技术。但多年来生产上单一的营养繁殖，导致‘蕲山药’主产区病害积累、产量下降、品质退化，挫伤了农民种植山药的积极性，给‘蕲山药’种植业带来了严重的挑战。通过组织培养获得脱毒种药是解决这一问题的有效途径。
[0004]关于山药的组织培养与脱毒快繁等方面，国内外均有相关学者进行了一些研究。在国内，李明军等研究了基因型、外植体、植物激素和光暗等因子对山药愈伤组织诱导的影响，认为叶片、茎段、零余子的最佳激素配比均为6-BA 2 mg/L+ NAA 2 mg/L，暗培养有利于零余子的诱导、光培养有利于叶片的诱导；王红娟等以怀山药茎蔓、余零子、块茎为外植体，研究不同激素配比对怀山药不同外植体诱导不定芽的影响。国际上，Hamadina等研究认为，ABA和GA等植物生长调节剂对山药试管微块茎的形成与休眠具有重要影响；Nagasawa研究认为，采用附加2，4-D的MS液体培养基悬浮培养，可以获得基于胚性细胞的山药植株再生体系。已有专利“一种山药茎段直接诱导微型块茎的方法”(专利申请号:CN201310041625.8)主要采用液体悬浮培养的方法获得微型块茎。已有专利“蕲山药脱毒微型种豆的繁育方法”(专利申请号:CN201310105623.0)主要采用扦插获得微型种豆。但关于‘蕲山药’通过固体培养基高效形成试管微块茎的方法尚未见报道，本发明的目的是建立‘蕲山药’离体高效形成试管微块茎的方法，通过试管微块茎的快速繁殖来解决生产上‘蕲山药’脱毒种药生产周期长、供不应求的问题，并保持品种的基因稳定性。本发明的微块茎形成率高，达到了 97.50%;其60天微块茎质量达到了 0.18 g，且耐储存。本发明形成的试管微块茎在种质离体保存方面具有突出优势，试管微块茎对移栽的温度、湿度、土壤环境等条件要求不高，可以在短时间内快速获取大量的‘蕲山药’试管微块茎，对生产上‘蕲山药’优质种源的繁殖具有重要意义。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是在 于提供了一种高效生产蕲山药试管微块茎的方法，此方法简便易行，操作方便，缩短生产周期，提高生产效率，降低生产成本。采用此种方法能快速培育出大量蕲山药试管微块茎，满足了规模化种植的需求。
[0006]为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施:
一种高效生产蕲山药试管微块茎的方法，其步骤是:
a、蕲山药试管苗的准备:取‘蕲山药’顶端约IOcm长的幼嫩茎段，剪成2.5-3.5 cm的带节茎段，在超净工作台上常规消毒后将茎段切成0.8-1.2 cm仅带I个节的小段，将切好的材料放置于 MS+ BA 0.5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+ 蔗糖 30 g/L+ 琼脂 7.5 g/L, pH 5.6 -
6.0的培养基中；在24-32°C、100(Tl500 1x、16 h/d的光照条件下培养2周，获得初始无菌
试管苗。
[0007]b、蕲山药试管苗的扩繁:将无菌试管苗茎段切成0.8-1.2cm仅带I个节的小段，置于 MS+ BA 0.1-0.2 mg/L+ NAA 0.01-0.02 mg/L+ 蔗糖 30 g/L+ 琼脂 1.5 g/L, pH 5.6 —
6.0的培养基中；在24-321:、1000~1500 lx、16 h/d的光照条件下培养2周，快速获得大量
试管苗。
[0008]C、蕲山药试管微块茎的培养:将试管苗置于MS+ BA0.1- 0.5 mg/L+NAA0.01-0.05 mg/L+ 蔗糖 30-90 g/L+7.5 g/L 琼脂，pH5.6 — 6.0 的培养基中；在 24-32。。、100(Tl500 1x、16 h/d的光照条件下培养2-8周，可获得高频率的试管微块茎。
[0009]d、蕲山药试管微块茎的收获:形成的试管微块茎，可立即移栽，也可在瓶中保存0-12个月，均保持良好的活力。
[0010]本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果:
本发明的微块茎形成率高，达到了 97.50% ;其60天微块茎质量达到了 0.18 g，且耐储存。本发明形成的试管微块茎在种质离体保存方面具有突出优势，试管微块茎对移栽的温度、湿度、土壤环境等条件要求不高，可以在短时间内快速获取大量的‘蕲山药’试管微块茎，对生产上‘蕲山药’优质种源的繁殖具有重要意义。
[0011]表1本发明与现有技术的比较表
【权利要求】
1.一种生产蕲山药试管微块茎的方法，其步骤是: a、蕲山药试管苗的准备:取蕲山药顶端IOcm长的幼嫩茎段，剪成2.5-3.5 cm的带节茎段，在超净工作台上常规消毒后将茎段切成0.8-1.2 cm仅带I个节的小段，将切好的材料放置于 MS+ BA 0.5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+ 蔗糖 30 g/L+ 琼脂 1.5 g/L，pH 5.6 - 6.0 的培养基中；在24-32°C、100(Tl500 1x、16 h/d的光照条件下培养2周，获得初始无菌试管苗； b、蕲山药试管苗的扩繁:将无菌试管苗茎段切成0.8-1.2cm仅带I个节的小段，置于MS+ BA 0.1-0.2 mg/L+ NAA 0.01-0.02 mg/L+ 蔗糖 30 g/L+ 琼脂 1.5 g/L, pH 5.6 - 6.0的培养基中；在24-32°C、100(Tl500 1x、16 h/d的光照条件下培养2周，获得试管苗； C、蕲山药试管微块茎的培养:将试管苗置于MS+ BA0.1- 0.5 mg/L+NAA 0.01-0.05mg/L+蔗糖 30-90 g/L+7.5 g/L 琼脂，pH5.6 — 6.0 的培养基中；在 24_32°C、1000~1500 lx、16 h/d的光照条件下培养2-8周，获得试管微块茎； d、蕲山药试管微块茎的收 获:形成的试管微 块茎，移栽。
【文档编号】A01H4/00GK103651146SQ201310728863
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月26日 优先权日:2013年12月26日
【发明者】向发云, 顾玉成, 曾祥国, 韩永超 申请人:湖北省农业科学院经济作物研究所
【专利摘要】本发明公开了一种生产蕲山药试管微块茎的方法，其步骤:a、蕲山药试管苗的准备：取蕲山药顶端的幼嫩茎段，剪成带节茎段，在超净工作台上消毒后将茎段切成小段，将切好的材料放置培养基中；在光照条件下培养，获得初始无菌试管苗；b、蕲山药试管苗的扩繁：将无菌试管苗茎段切成小段，置于培养基中；在光照条件下培养，获得试管苗；c、蕲山药试管微块茎的培养：将试管苗置于培养基中；在光照条件下培养，获得试管微块茎；d、蕲山药试管微块茎的收获。本发明的微块茎形成率高，达到了97.50%；方法易行，操作方便，缩短了生产周期，提高了生产效率，降低了生产成本，能快速培育出大量蕲山药试管微块茎，满足了规模化种植的需求。
【专利说明】一种生产蕲山药试管微块茎的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物组织培养【技术领域】，更具体涉及一种高效生产蕲山药试管微块茎的方法，适用于快速繁育蕲山药脱毒种药。
【背景技术】
[0002]山药是百合目(Liliales)薯菌科(Dioscoreaceae)薯菌属{DioscoreaL.、薯菌Wioscorea opposita Thunb.)及其近缘种植物地下块莖的总称,为I年生或多年生、具双子叶植物特征特性的单子叶缠绕性藤本植物。山药富含淀粉、多糖、黏液蛋白、矿物质及其他营养物质，是一种食、药兼用的经济作物。中国、美国、英国和日本等国家均将山药列入药典。山药气味平和，温补而不骤，微香而不燥，是中医常用的一味健脾补气良药，其药理作用主要集中在抗氧化、抗衰老、降血糖、肝损伤保护、免疫调节等方面。
[0003]‘蕲山药’是以蕲春县为主的鄂东山区大面积种植的优良地方山药，其食用品质和药用品质均较佳。康薇等总结了 ‘蕲山药’的优质丰产栽培技术。但多年来生产上单一的营养繁殖，导致‘蕲山药’主产区病害积累、产量下降、品质退化，挫伤了农民种植山药的积极性，给‘蕲山药’种植业带来了严重的挑战。通过组织培养获得脱毒种药是解决这一问题的有效途径。
[0004]关于山药的组织培养与脱毒快繁等方面，国内外均有相关学者进行了一些研究。在国内，李明军等研究了基因型、外植体、植物激素和光暗等因子对山药愈伤组织诱导的影响，认为叶片、茎段、零余子的最佳激素配比均为6-BA 2 mg/L+ NAA 2 mg/L，暗培养有利于零余子的诱导、光培养有利于叶片的诱导；王红娟等以怀山药茎蔓、余零子、块茎为外植体，研究不同激素配比对怀山药不同外植体诱导不定芽的影响。国际上，Hamadina等研究认为，ABA和GA等植物生长调节剂对山药试管微块茎的形成与休眠具有重要影响；Nagasawa研究认为，采用附加2，4-D的MS液体培养基悬浮培养，可以获得基于胚性细胞的山药植株再生体系。已有专利“一种山药茎段直接诱导微型块茎的方法”(专利申请号:CN201310041625.8)主要采用液体悬浮培养的方法获得微型块茎。已有专利“蕲山药脱毒微型种豆的繁育方法”(专利申请号:CN201310105623.0)主要采用扦插获得微型种豆。但关于‘蕲山药’通过固体培养基高效形成试管微块茎的方法尚未见报道，本发明的目的是建立‘蕲山药’离体高效形成试管微块茎的方法，通过试管微块茎的快速繁殖来解决生产上‘蕲山药’脱毒种药生产周期长、供不应求的问题，并保持品种的基因稳定性。本发明的微块茎形成率高，达到了 97.50%;其60天微块茎质量达到了 0.18 g，且耐储存。本发明形成的试管微块茎在种质离体保存方面具有突出优势，试管微块茎对移栽的温度、湿度、土壤环境等条件要求不高，可以在短时间内快速获取大量的‘蕲山药’试管微块茎，对生产上‘蕲山药’优质种源的繁殖具有重要意义。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是在 于提供了一种高效生产蕲山药试管微块茎的方法，此方法简便易行，操作方便，缩短生产周期，提高生产效率，降低生产成本。采用此种方法能快速培育出大量蕲山药试管微块茎，满足了规模化种植的需求。
[0006]为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施:
一种高效生产蕲山药试管微块茎的方法，其步骤是:
a、蕲山药试管苗的准备:取‘蕲山药’顶端约IOcm长的幼嫩茎段，剪成2.5-3.5 cm的带节茎段，在超净工作台上常规消毒后将茎段切成0.8-1.2 cm仅带I个节的小段，将切好的材料放置于 MS+ BA 0.5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+ 蔗糖 30 g/L+ 琼脂 7.5 g/L, pH 5.6 -
6.0的培养基中；在24-32°C、100(Tl500 1x、16 h/d的光照条件下培养2周，获得初始无菌
试管苗。
[0007]b、蕲山药试管苗的扩繁:将无菌试管苗茎段切成0.8-1.2cm仅带I个节的小段，置于 MS+ BA 0.1-0.2 mg/L+ NAA 0.01-0.02 mg/L+ 蔗糖 30 g/L+ 琼脂 1.5 g/L, pH 5.6 —
6.0的培养基中；在24-321:、1000~1500 lx、16 h/d的光照条件下培养2周，快速获得大量
试管苗。
[0008]C、蕲山药试管微块茎的培养:将试管苗置于MS+ BA0.1- 0.5 mg/L+NAA0.01-0.05 mg/L+ 蔗糖 30-90 g/L+7.5 g/L 琼脂，pH5.6 — 6.0 的培养基中；在 24-32。。、100(Tl500 1x、16 h/d的光照条件下培养2-8周，可获得高频率的试管微块茎。
[0009]d、蕲山药试管微块茎的收获:形成的试管微块茎，可立即移栽，也可在瓶中保存0-12个月，均保持良好的活力。
[0010]本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果:
本发明的微块茎形成率高，达到了 97.50% ;其60天微块茎质量达到了 0.18 g，且耐储存。本发明形成的试管微块茎在种质离体保存方面具有突出优势，试管微块茎对移栽的温度、湿度、土壤环境等条件要求不高，可以在短时间内快速获取大量的‘蕲山药’试管微块茎，对生产上‘蕲山药’优质种源的繁殖具有重要意义。
[0011]表1本发明与现有技术的比较表
【权利要求】
1.一种生产蕲山药试管微块茎的方法，其步骤是: a、蕲山药试管苗的准备:取蕲山药顶端IOcm长的幼嫩茎段，剪成2.5-3.5 cm的带节茎段，在超净工作台上常规消毒后将茎段切成0.8-1.2 cm仅带I个节的小段，将切好的材料放置于 MS+ BA 0.5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+ 蔗糖 30 g/L+ 琼脂 1.5 g/L，pH 5.6 - 6.0 的培养基中；在24-32°C、100(Tl500 1x、16 h/d的光照条件下培养2周，获得初始无菌试管苗； b、蕲山药试管苗的扩繁:将无菌试管苗茎段切成0.8-1.2cm仅带I个节的小段，置于MS+ BA 0.1-0.2 mg/L+ NAA 0.01-0.02 mg/L+ 蔗糖 30 g/L+ 琼脂 1.5 g/L, pH 5.6 - 6.0的培养基中；在24-32°C、100(Tl500 1x、16 h/d的光照条件下培养2周，获得试管苗； C、蕲山药试管微块茎的培养:将试管苗置于MS+ BA0.1- 0.5 mg/L+NAA 0.01-0.05mg/L+蔗糖 30-90 g/L+7.5 g/L 琼脂，pH5.6 — 6.0 的培养基中；在 24_32°C、1000~1500 lx、16 h/d的光照条件下培养2-8周，获得试管微块茎； d、蕲山药试管微块茎的收 获:形成的试管微 块茎，移栽。
【文档编号】A01H4/00GK103651146SQ201310728863
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月26日 优先权日:2013年12月26日
【发明者】向发云, 顾玉成, 曾祥国, 韩永超 申请人:湖北省农业科学院经济作物研究所
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