一种油包水单相乳化佐剂及其制造方法
专利名称：一种油包水单相乳化佐剂及其制造方法
技术领域：
本发明涉及一种在免疫制剂中使用的单相油乳佐剂及其制造方法，特别为一种具有优异的稳定性及高安全性的W/0佐剂。
背景技术：
佐剂能增强抗原的免疫原性，提高抗原的特异性免疫效果，早在1925年，在免疫制剂中已开始使用。油乳佐剂是使用最为广泛的佐剂之一，它能在注射部位形成抗原库，延缓抗原的释放，增加抗原的释放时间。另根据郭慧坤等在“佐剂及其在基因免疫研究中的应用”一文介绍，油乳佐剂可刺激动物局部产生肉芽肿和炎症反应，吸引巨噬细胞聚集，这些细胞产生大量活性介质，活性介质进一步增强细胞免疫反应及体液免疫反应，说明佐剂能提高抗原的免疫力。根据剂型的不同，油乳佐剂可分为油包水(W/0)型和水包油(0/W)型，另还有W/0/ W型。然而油包水(W/0)型佐剂活性最强。一种油包水型佐剂弗氏佐剂即具有非常有效的免疫强化作用，尤其是和灭活疫苗协同使用时。因此，试验中已经将弗氏佐剂作为经典的油性佐剂使用。然而弗氏佐剂副作用大，这妨碍了它的大量推广使用。有必要提高疫苗的效力和持续时间，以确保防止疾病的发生，发挥出疫苗的作用。 不过，考虑到疫苗是用于人类或兽医用途的实际情况，疫苗的安全性比效力和持续时间更重要。目前在国内油乳佐剂仍然使用传统的吐温-80及硬脂酸铝等传统有毒辅料，存在动物安全隐患；国外的油乳佐剂有了一定的发展，日本特许公报hei 6-81731号公开了一种W/0型佐剂，其中无水甘露醇/油酸酯做表面活性剂，液体石蜡油做油性成分；WO 91/00107公开了一种低粘度的W/0型佐剂，所用的油性成分含有一种可代谢的油如植物油，和一种不可代谢的油如矿物油的混合物。然而，上述油乳佐剂都存在不足之处，不仅表现在注射后的局部反应，还表现在疫苗制剂的稳定性上。疫苗应当尽可能的有效、安全，因为疫苗是用于人体或兽医用途的；考虑到疫苗又是一种药物，它也应当尽可能的稳定。然而疫苗的稳定性在相当大程度上受到乳剂类型，所用油性成分以及所结合的表面活性剂等的影响。尤其就灭活疫苗来说，要制备一种在较长时间内诱导免疫保护作用，能够长时间储存的疫苗来，是非常困难的。
发明内容
本发明涉及一种油包水单相乳化佐剂，目的就是为了解决现有技术上的难题，而提供一种稳定性好、安全性高的新型W/0佐剂。本发明的目的是通过以下技术解决方案来实现一种油包水单相乳化佐剂，原料组份包括有注射级白油、乳化剂，其特征在于乳化剂是亲油性乳化剂span-80、Arlacel P135和I^risorine 3700和亲水性乳化剂HS-15的组合，各组份的重量百分比为
兽用注射级白油75%-95%span-803%-15%
HS-150. 5%-6%
Arlacel pl350. 1%-5%
Prisorine 37000. 1%_5%。这种油包水单相乳化佐剂的制造方法是室温条件下，按配比在乳化罐中加入兽用注射级白油，再加入亲油性乳化剂span-80，搅拌至气泡消失呈澄清透明状；在搅拌状态下依次加入Arlacel pl35、Prisorine 3700、HS_15，每加入一种乳化剂，均搅拌均勻至气泡消失呈澄清透明状后再加入下一种乳化剂，最后一种乳化剂加完后，静置二十分钟以上。本发明为单相W/0佐剂，在单相产品的制备中加入了 Arlacel pl35，它是一种 A-C00-B-C00-A型封闭共聚物，化学成分为聚氧乙烯(30) 二聚羟基硬脂酸脂。它含有两个亲油基，亲油能力可达到普通乳化剂的10倍以上，帮助形成稳定的油包水乳剂；Prisorine 3700是双异硬脂酸三聚甘油酯，和Arlacel pl35有协同作用，能进一步帮助形成稳定的油乳佐剂；另外还有HS-15，它也是羟基硬脂酸酯的衍生物，安全性非常高，能用于人的注射， 根据分子相似原理，HS-15、ArlaCel pl35及I^risorine 3700能相互协同，形成稳定的油包水界面膜，从而能形成稳定的油包水乳剂。本油包水产品稳定性好，保存期长，品质不变；使用了新型乳化剂，安全性高；颗粒整体较小，大小均勻，利于吸收；呈白色或乳白带粉红色突破了国内产品稳定性差、副作用大这一重大课题。本发明的目的、优点和特点，将通过下面优先实施例的非限制说明进行解释，这些实施例仅作为例子给出的。
具体实施例方式实施例1，一种油包水单相乳化佐剂，原料组份中包括有注射级白油、乳化剂，乳化剂由亲油性乳化剂span-80、Prisorine 3700、Arlacel pl35以及亲水性乳化剂HS-15组合，各组份的重量百分比为
兽用注射级白油75%
span-8015%
HS-156%Arlacel pl352%
Prisorine 37002%。这种单相WO乳化佐剂的制造工艺，室温条件下，按配比在乳化罐中加入兽用注射级白油，再加入亲油性乳化剂span-80，搅拌至气泡消失呈澄清透明状；在搅拌状态下依次加入Arlacel pl35、Prisorine 3700、HS_15，每加入一种乳化剂，均搅拌均勻至气泡消失呈澄清透明状后再加入下一种乳化剂，最后一种乳化剂加完后，静置二十分钟以上，最佳为 25-35分钟。实施例2，参考实施例1，原料组份的重量百分比为
兽用注射级白油80%
span-8010%
HS-150. 5%
Arlacel pl354. 5%
4Prisorine 37005%。制造方法参考实施例1。实施例3，参考实施例1，原料组份的重量百分比为 兽用注射级白油90% span-80 6%
HS-153%
Arlacel pl350. 1%
Prisorine 37000.9%。制造方法参考实施例1。实施例4，参考实施例1，原料组份的重量百分比为 兽用注射级白油95% span-80 3%
HS-150. 5%
Arlacel pl351. 4%
Prisorine 37000. 1%。制造方法参考实施例1。实施例5，参考实施例1，原料组份的重量百分比为 兽用注射级白油78% span-80 12%
HS-154%
Arlacel pl355%
Prisorine 37001%。制造方法参考实施例1。HS-15,Arlacel pl35,Prisorine 3700三中乳化剂由于结构的相似性及不同的分子大小，使得他们能相互协同作用，形成稳定的油包水界面膜。乳化时，一般推荐单相W/0乳化佐剂与含抗原的水溶液以1 :1的比例进行。乳化时，活性成分包含在W/0微球上，在注射部位形成贮存，能延长药物释放到血液循环中；同时HS-15、Arlacel pl35等乳化剂还有非特异性免疫效应，进而增强免疫和延长动物的免疫期。实施例1-5所得的产品，进行反复多次实验的结果是
1、稳定性
常温中单相W/0佐剂保存一个月以上无油水分层(出油出水均小于1/20) 370C 单相W/0佐剂保存一个月以上无油水分层(出油出水均小于1/20)
2、动物安全性
①、LD50、热源、异常毒性、小鼠体重等
②、效力试验4月龄仔猪5头，单相W/0佐剂制备的疫苗免疫aiil/头，免疫后观天攻口蹄疫强毒草1000LD50，连同对照5头观察14天，仔猪全部存活，100%保护，而未免疫而攻毒的2头对照仔猪100%死亡(5/5)。
权利要求
1.一种油包水单相乳化佐剂，原料组份包括有注射级白油、乳化剂，其特征在于乳化剂是亲油性乳化剂span-80、Arlacel pl35和Prisorine 3700和亲水性乳化剂HS-15的组合，各组份的重量百分比为兽用注射级白油75%-95%span-803%-15%HS-150. 5%-6%Arlacel pl350. 1%-5%Prisorine 37000. 1%_5%。
2.一种油包水单相乳化佐剂的制造方法，其特征在于室温条件下，按权利要求1所述的配比在乳化罐中加入兽用注射级白油，再加入亲油性乳化剂span-80，搅拌至气泡消失呈澄清透明状；在搅拌状态下依次加入Arlacel pl35、Prisorine 3700、HS_15，每加入一种乳化剂，均搅拌均勻至气泡消失呈澄清透明状后再加入下一种乳化剂，最后一种乳化剂加完后，静置二十分钟以上。
3.根据权利要求2所述的制造方法，其特征在于静置时间为25-35分钟。
全文摘要
一种油包水单相乳化佐剂，涉及一种在免疫制剂中使用的单相油乳佐剂，原料组份包括有注射级白油、乳化剂，乳化剂是亲油性乳化剂span-80、Arlacelp135和Prisorine3700和亲水性乳化剂HS-15的组合，该油包水产品稳定性好，保存期长，品质不变；使用了新型乳化剂，安全性高，颗粒整体较小，大小均匀，利于吸收，呈白色或乳白带粉红色，突破了国内产品稳定性差、副作用大这一重大课题。
文档编号A61K39/39GK102247594SQ20101017822
公开日2011年11月23日 申请日期2010年5月20日 优先权日2010年5月20日
发明者刘卓灵, 尹晓东, 尹锡明, 扶星星, 谢国秀 申请人:宜兴市赛尔生物科技有限公司
技术领域：
本发明涉及一种在免疫制剂中使用的单相油乳佐剂及其制造方法，特别为一种具有优异的稳定性及高安全性的W/0佐剂。
背景技术：
佐剂能增强抗原的免疫原性，提高抗原的特异性免疫效果，早在1925年，在免疫制剂中已开始使用。油乳佐剂是使用最为广泛的佐剂之一，它能在注射部位形成抗原库，延缓抗原的释放，增加抗原的释放时间。另根据郭慧坤等在“佐剂及其在基因免疫研究中的应用”一文介绍，油乳佐剂可刺激动物局部产生肉芽肿和炎症反应，吸引巨噬细胞聚集，这些细胞产生大量活性介质，活性介质进一步增强细胞免疫反应及体液免疫反应，说明佐剂能提高抗原的免疫力。根据剂型的不同，油乳佐剂可分为油包水(W/0)型和水包油(0/W)型，另还有W/0/ W型。然而油包水(W/0)型佐剂活性最强。一种油包水型佐剂弗氏佐剂即具有非常有效的免疫强化作用，尤其是和灭活疫苗协同使用时。因此，试验中已经将弗氏佐剂作为经典的油性佐剂使用。然而弗氏佐剂副作用大，这妨碍了它的大量推广使用。有必要提高疫苗的效力和持续时间，以确保防止疾病的发生，发挥出疫苗的作用。 不过，考虑到疫苗是用于人类或兽医用途的实际情况，疫苗的安全性比效力和持续时间更重要。目前在国内油乳佐剂仍然使用传统的吐温-80及硬脂酸铝等传统有毒辅料，存在动物安全隐患；国外的油乳佐剂有了一定的发展，日本特许公报hei 6-81731号公开了一种W/0型佐剂，其中无水甘露醇/油酸酯做表面活性剂，液体石蜡油做油性成分；WO 91/00107公开了一种低粘度的W/0型佐剂，所用的油性成分含有一种可代谢的油如植物油，和一种不可代谢的油如矿物油的混合物。然而，上述油乳佐剂都存在不足之处，不仅表现在注射后的局部反应，还表现在疫苗制剂的稳定性上。疫苗应当尽可能的有效、安全，因为疫苗是用于人体或兽医用途的；考虑到疫苗又是一种药物，它也应当尽可能的稳定。然而疫苗的稳定性在相当大程度上受到乳剂类型，所用油性成分以及所结合的表面活性剂等的影响。尤其就灭活疫苗来说，要制备一种在较长时间内诱导免疫保护作用，能够长时间储存的疫苗来，是非常困难的。
发明内容
本发明涉及一种油包水单相乳化佐剂，目的就是为了解决现有技术上的难题，而提供一种稳定性好、安全性高的新型W/0佐剂。本发明的目的是通过以下技术解决方案来实现一种油包水单相乳化佐剂，原料组份包括有注射级白油、乳化剂，其特征在于乳化剂是亲油性乳化剂span-80、Arlacel P135和I^risorine 3700和亲水性乳化剂HS-15的组合，各组份的重量百分比为
兽用注射级白油75%-95%span-803%-15%
HS-150. 5%-6%
Arlacel pl350. 1%-5%
Prisorine 37000. 1%_5%。这种油包水单相乳化佐剂的制造方法是室温条件下，按配比在乳化罐中加入兽用注射级白油，再加入亲油性乳化剂span-80，搅拌至气泡消失呈澄清透明状；在搅拌状态下依次加入Arlacel pl35、Prisorine 3700、HS_15，每加入一种乳化剂，均搅拌均勻至气泡消失呈澄清透明状后再加入下一种乳化剂，最后一种乳化剂加完后，静置二十分钟以上。本发明为单相W/0佐剂，在单相产品的制备中加入了 Arlacel pl35，它是一种 A-C00-B-C00-A型封闭共聚物，化学成分为聚氧乙烯(30) 二聚羟基硬脂酸脂。它含有两个亲油基，亲油能力可达到普通乳化剂的10倍以上，帮助形成稳定的油包水乳剂；Prisorine 3700是双异硬脂酸三聚甘油酯，和Arlacel pl35有协同作用，能进一步帮助形成稳定的油乳佐剂；另外还有HS-15，它也是羟基硬脂酸酯的衍生物，安全性非常高，能用于人的注射， 根据分子相似原理，HS-15、ArlaCel pl35及I^risorine 3700能相互协同，形成稳定的油包水界面膜，从而能形成稳定的油包水乳剂。本油包水产品稳定性好，保存期长，品质不变；使用了新型乳化剂，安全性高；颗粒整体较小，大小均勻，利于吸收；呈白色或乳白带粉红色突破了国内产品稳定性差、副作用大这一重大课题。本发明的目的、优点和特点，将通过下面优先实施例的非限制说明进行解释，这些实施例仅作为例子给出的。
具体实施例方式实施例1，一种油包水单相乳化佐剂，原料组份中包括有注射级白油、乳化剂，乳化剂由亲油性乳化剂span-80、Prisorine 3700、Arlacel pl35以及亲水性乳化剂HS-15组合，各组份的重量百分比为
兽用注射级白油75%
span-8015%
HS-156%Arlacel pl352%
Prisorine 37002%。这种单相WO乳化佐剂的制造工艺，室温条件下，按配比在乳化罐中加入兽用注射级白油，再加入亲油性乳化剂span-80，搅拌至气泡消失呈澄清透明状；在搅拌状态下依次加入Arlacel pl35、Prisorine 3700、HS_15，每加入一种乳化剂，均搅拌均勻至气泡消失呈澄清透明状后再加入下一种乳化剂，最后一种乳化剂加完后，静置二十分钟以上，最佳为 25-35分钟。实施例2，参考实施例1，原料组份的重量百分比为
兽用注射级白油80%
span-8010%
HS-150. 5%
Arlacel pl354. 5%
4Prisorine 37005%。制造方法参考实施例1。实施例3，参考实施例1，原料组份的重量百分比为 兽用注射级白油90% span-80 6%
HS-153%
Arlacel pl350. 1%
Prisorine 37000.9%。制造方法参考实施例1。实施例4，参考实施例1，原料组份的重量百分比为 兽用注射级白油95% span-80 3%
HS-150. 5%
Arlacel pl351. 4%
Prisorine 37000. 1%。制造方法参考实施例1。实施例5，参考实施例1，原料组份的重量百分比为 兽用注射级白油78% span-80 12%
HS-154%
Arlacel pl355%
Prisorine 37001%。制造方法参考实施例1。HS-15,Arlacel pl35,Prisorine 3700三中乳化剂由于结构的相似性及不同的分子大小，使得他们能相互协同作用，形成稳定的油包水界面膜。乳化时，一般推荐单相W/0乳化佐剂与含抗原的水溶液以1 :1的比例进行。乳化时，活性成分包含在W/0微球上，在注射部位形成贮存，能延长药物释放到血液循环中；同时HS-15、Arlacel pl35等乳化剂还有非特异性免疫效应，进而增强免疫和延长动物的免疫期。实施例1-5所得的产品，进行反复多次实验的结果是
1、稳定性
常温中单相W/0佐剂保存一个月以上无油水分层(出油出水均小于1/20) 370C 单相W/0佐剂保存一个月以上无油水分层(出油出水均小于1/20)
2、动物安全性
①、LD50、热源、异常毒性、小鼠体重等
②、效力试验4月龄仔猪5头，单相W/0佐剂制备的疫苗免疫aiil/头，免疫后观天攻口蹄疫强毒草1000LD50，连同对照5头观察14天，仔猪全部存活，100%保护，而未免疫而攻毒的2头对照仔猪100%死亡(5/5)。
权利要求
1.一种油包水单相乳化佐剂，原料组份包括有注射级白油、乳化剂，其特征在于乳化剂是亲油性乳化剂span-80、Arlacel pl35和Prisorine 3700和亲水性乳化剂HS-15的组合，各组份的重量百分比为兽用注射级白油75%-95%span-803%-15%HS-150. 5%-6%Arlacel pl350. 1%-5%Prisorine 37000. 1%_5%。
2.一种油包水单相乳化佐剂的制造方法，其特征在于室温条件下，按权利要求1所述的配比在乳化罐中加入兽用注射级白油，再加入亲油性乳化剂span-80，搅拌至气泡消失呈澄清透明状；在搅拌状态下依次加入Arlacel pl35、Prisorine 3700、HS_15，每加入一种乳化剂，均搅拌均勻至气泡消失呈澄清透明状后再加入下一种乳化剂，最后一种乳化剂加完后，静置二十分钟以上。
3.根据权利要求2所述的制造方法，其特征在于静置时间为25-35分钟。
全文摘要
一种油包水单相乳化佐剂，涉及一种在免疫制剂中使用的单相油乳佐剂，原料组份包括有注射级白油、乳化剂，乳化剂是亲油性乳化剂span-80、Arlacelp135和Prisorine3700和亲水性乳化剂HS-15的组合，该油包水产品稳定性好，保存期长，品质不变；使用了新型乳化剂，安全性高，颗粒整体较小，大小均匀，利于吸收，呈白色或乳白带粉红色，突破了国内产品稳定性差、副作用大这一重大课题。
文档编号A61K39/39GK102247594SQ20101017822
公开日2011年11月23日 申请日期2010年5月20日 优先权日2010年5月20日
发明者刘卓灵, 尹晓东, 尹锡明, 扶星星, 谢国秀 申请人:宜兴市赛尔生物科技有限公司
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