一种姜提取物、其制备方法及其用途的制作方法
专利名称：一种姜提取物、其制备方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种姜提取物，选自生姜、干姜、炮姜和/或姜皮提取物。本发明还涉及所述姜提取物的制备方法。本发明也涉及所述姜提取物用于制备治疗和/或预防与体内一氧化氮水平改变而导致的相关疾病的药物的用途，和所述姜提取物用于制备刺激哺乳动物体内一氧化氮产生的药物的用途。
背景技术：
作为临床上常用的一味中药，生姜是指姜科植物姜(Zingiberofficinale)的新鲜根茎，被用于帮助消化和治疗胃部不适、腹泻和恶心等已有超过2000年的历史，同时生姜被用于协助治疗关节炎、疝气、腹泻和心脏病等。生姜的现代药理研究认为，生姜具有抗氧化作用，抗微生物作用，抗炎作用，降低胆固醇作用，抗动脉粥样硬化作用，增强免疫功能，辐射防护作用，护肝作用，止吐作用，抗过敏作用(王颖等，生姜的研究进展，中国药业，2006，15(9) :62)，以及抗运动病作用，降血糖作用，抗肿瘤作用等(孙永金，生姜药理作用研究进展，现代中西医结合杂志，2007， 16(4) :561)，并且生姜醇提物可抗凝血和抗血栓形成(张红霞等，生姜醇提物药理学研究进展，中医研究，2008，21 (3) :60)。生姜的临床使用包括治疗风湿痛、腰腿痛，治疗风寒湿痹、肩周炎，治疗疟疾及急性菌痢，治疗风湿及类风湿关节炎，治疗腰麻和硬膜外麻醉术后尿潴留，治疗蛔虫性肠梗阻及胆道蛔虫症，治疗水火烫伤，治疗斑秃，治疗牙疼、面瘫，治疗神经性呕吐、呃逆，预防晕车，治疗急性睾丸炎，治疗眉棱骨痛等(闫学红等，生姜的临床应用研究，光明中医，2009， 24(11) 2198)。已知姜具有加快人体新陈代谢、抗炎镇痛、同时兴奋人体多个系统的功能，它还能调节男性前列腺的机能，治疗男性前列腺疾病以及性功能障。因此，姜常被用于男性保健。姜在生殖系统的药理研究包括生姜的水提物对环磷酰胺诱发小鼠精子畸形有显著的抑制作用(沈雪等，不同生姜提取物对小鼠精子畸形的影响，毒理学杂志，2008， 22(5) 381)；生姜与姜黄配伍的方剂乙醇提取物能有效降低大鼠前列腺的质量(杨家庆等，姜黄、生姜组方抑制幼龄大鼠前列腺生长的作用研究，现代中西医结合杂志，2009， (16) 79)；适当剂量的生姜提取物对X射线照射导致的小鼠睾丸酶活性的变化具有一定的稳定作用(赵淑华等，生姜提取物对X射线损伤小鼠睾丸酶的影响，吉林大学学报医学版， 2005，31(1) :68)。目前该方向的临床研究包括隔姜灸对良性前列腺增生症具有良好的治疗作用， 且无明显不良反应，为临床治疗该病提供了新思路与方法(周勇等，隔姜灸治疗良性前列腺增生的临床研究，山东中医药大学学报，2007，(1) :132)。对于生姜中已知的挥发油、多糖类、酚类、黄酮类等有效成分，它的提取工艺及相关成分的药理研究目前报道的也较多，针对生姜不同提取物的急性毒性、抗氧化作用等，及对生姜中所含多糖、总黄酮、6-姜酚和姜辣素采用不同溶剂和不同方法的提取与研究有许多报道。目前，生姜提取物的提取工艺包括水蒸气蒸馏法、溶剂浸提法、冷轧法、超临界萃取法、分子蒸馏法等(熊华，不同提取方法生姜提取物中成分的比较研究，成都西华大学硕士毕业论文，2006 ；孙亚青，姜精油的提取、分析及纯化研究，北京中国农业大学硕士论文， 2004;葛毅强等，生姜精油的研究新进展，中国调味品，2004，(9) :3 ；陈怀铸，生姜油提取方法，保鲜研究，2007，7 (4) :18)。目前经过许多专家的研究，姜的提取工艺研究已进行的较多也较为成熟，但对其不同提取方法提取挥发油和姜辣素组份分析，生姜中有效成份的认指工作，以及关于姜辣素组份的合成和其天然姜辣素的化学结构研究开展得较少，有待于进一步探讨。特别是针对生姜及其炮制品，包括干姜、炮姜及姜皮提取物的研究，特别是上述提取物及已知的化合物成分如药典中提及的6-姜辣素、研究较多的6-姜酚等，它们对于体内小分子化合物一氧化氮水平的影响作用，尚未见报道。已知小分子化合物一氧化氮在人体中的主要作用包括1.对维持血管舒张，血流量及血压调节起重要作用；2.抑制血小板聚集和粘附，抑制白细胞的粘附，并调节平滑肌细胞增生；3.中枢神经元合成的一氧化氮可作为生理功能的神经递质，参与包括记忆构成，神经元活性，血流量的调节和痛觉调制；4.在外周神经系统一氧化氮被认为是在神经网络中普遍存在的一种介质，介导了以前被认为是非肾上腺素能非乙酰胆碱能(NANC)作用的神经性血管舒张和胃肠道、呼吸道、泌尿生殖的某些功能(关永源等，一氧化氮的药理学作用，新医学，1999，30(1) :55)。现代药理及临床研究发现，一氧化氮可以保持冠状动脉的畅通，防止过多的血凝块阻塞血管造成心脏病和中风；放松动脉(维持正常血压所需)，帮助脑部血液流通，以增进长期记忆力；提高血液流量至男性生殖器，使之勃起；缩小和消灭癌症肿瘤；降低胆固醇，防止坏胆固醇氧化；预防痔疮及帮助其愈合；预防一般的肺部疾病；帮助调节胰岛素分泌(防止糖尿病)；参与消灭外侵的细菌和病毒等。随着对一氧化氮水平与上述疾病之间相关性研究的深入，人们不断试图在天然来源和化合物库中寻找具有一氧化氮水平调节功能的物质，以期得到针对上述疾病或异常的新药物。本发明人通过对生姜及其选自干姜、炮姜及姜皮的炮制品提取物进行药理学研究，以小鼠巨噬细胞7为实验对象，采用Griess法(参见Green LC等人，Analysis of nitrate,nitrite,and[15-N]nitrate in biological fluids[J]. Anal Biochem 1982, 126(1) 131)测定一氧化氮的终产物亚硝酸盐的含量变化，观察获自生姜、干姜、炮姜及姜皮的不同提取物对一氧化氮生成的影响，发现所述生姜、干姜、炮姜和姜皮的不同提取物均具有刺激小鼠巨噬细胞一氧化氮生成的功效。
发明内容
本发明的一个方面涉及一种姜提取物，其选自生姜、干姜、炮姜和/或姜皮提取物。具体的，本发明中所述姜提取物可以通过如下方法制备1)将经处理的生姜、干姜、炮姜或姜皮粉碎；2)以1-500份粉碎的样品加1000份溶剂的比例加入水中，在密封条件下水浴中进
行超声提取；
3)收集提取液，经超速离心后取上清液，真空冷冻干燥，得到生姜提取物。在本发明的一个具体实施方案中，所述生姜经如下处理将姜的新鲜根茎除去须根和泥沙，洗净；所述干姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥；所述炮姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥成干姜，取干姜，照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色，内呈黄色，喷淋清水少量，取出，晒干；所述姜皮经如下处理取姜的新鲜根茎，洗净，用竹刀刮取外层栓皮，晒干。在本发明的一个具体实施方案中，所述样品与溶剂的比例为选自1-500之间的任一整数份样品加入1000份溶剂，例如每50，100，150，200，250，300，350，400，450，500份样品加入1000份溶剂。在本发明的一个具体实施方案中，所述溶剂可以选自蒸馏水、双蒸水、去离子水、 或者其它适于本发明所述提取方法的水性溶剂。在本发明的一个具体实施方案中，所述密封条件是指加入水后的样品在后续水浴提取和冷冻干燥过程全程处于与外界气体隔离的状态。在本发明的一个具体实施方案中，所述水浴是在温度40-100摄氏度之间任一整数度条件下进行的，例如温度在45-95摄氏度，50-90摄氏度，55-85摄氏度，60-80摄氏度， 65-75摄氏度，或者70摄氏度下进行。本发明的又一方面，涉及一种制备本发明所述姜提取物的方法，包括1)将经处理的生姜、干姜、炮姜或姜皮粉碎；2)以1-500份粉碎的样品加1000份溶剂的比例加入水中，在密封条件下水浴中进
行超声提取；3)收集提取液，经超速离心后取上清液，真空冷冻干燥，得到生姜提取物。在本发明所述方法的一个具体实施方案中，所述生姜经如下处理将姜的新鲜根茎除去须根和泥沙，洗净；所述干姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥；所述炮姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙， 晒干或低温干燥成干姜，取干姜，照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色，内呈黄色，喷淋清水少量，取出，晒干；所述姜皮经如下处理取姜的新鲜根茎，洗净，用竹刀刮取外层栓皮，晒干。在本发明所述方法的一个具体实施方案中，所述样品与溶剂的比例为选自1-500 之间的任一整数份样品加入1000份溶剂，例如每50，100，150，200，250，300，350，400，450， 500份样品加入1000份溶剂。在本发明所述方法的一个具体实施方案中，所述溶剂可以选自蒸馏水、双蒸水、去离子水、或者其它适于本发明所述提取方法的水性溶剂。在本发明所述方法的一个具体实施方案中，所述密封条件是指加入水后的样品在后续水浴提取和冷冻干燥过程全程处于与外界气体隔离的状态。在本发明所述方法的一个具体实施方案中，所述水浴是在温度40-100摄氏度之间任一整数度条件下进行的，例如温度在45-95摄氏度，50-90摄氏度，55-85摄氏度，60-80 摄氏度，65-75摄氏度，或者70摄氏度下进行。本发明的再一方面，涉及所述姜提取物用于制备治疗和/或预防与一氧化氮水平
6改变相关疾病的药物的用途。本发明中，与一氧化氮水平改变相关的疾病包括发生在消化系统、神经系统、呼吸系统、循环系统、运动系统、内分泌系统、泌尿系统，感官系统和生殖系统疾病。具体的，所述疾病选自消化系统，包括胃肠动力疾病，如贲门失迟缓症，便秘，功能性消化不良，肠易激综合征，假性肠梗阻，胃食管反流；呼吸系统，包括支气管哮喘，肺部感染，肺心病，肺动脉高压等；神经系统，包括精神分裂症，脑囊尾蚴病，急性脑梗死，脑损伤，脑膜炎，人巨细胞病毒先天性中枢神经系统感染，小儿惊厥，高氧吸入对脑部损伤，记忆缺失，脑缺血再灌注损伤，抑郁症，蛛网膜下腔出血，Alzheimer病，Parkinson病，癫痫，偏头痛，Huntington病， 肌萎缩侧索硬化症，多发性硬化，肌病，脑炎，脑脊髓损伤，脑肿瘤；循环系统，包括冠状动脉粥样硬化，血栓性中风，高血压，老年性痴呆，感染性疾病；运动系统，包括迟发性运动障碍，骨质增生、股骨头坏死、痛风、腰肌劳损，风湿、类风湿性关节炎，骨质疏松；内分泌系统，包括高脂血症，糖尿病，免疫功能低下，甲状腺功能亢进，甲状腺功能低下；泌尿系统，包括阳痿症，慢性肾功能衰竭，肾病综合征，早中期糖尿病肾病，慢性肾小球肾炎，肾小球硬化，高胆固醇血症肾损害，尿毒症；生殖系统，包括不孕，不育，妇女绝经期各种症状等。本发明的另一方面，涉及所述姜提取物用于制备刺激哺乳动物体内一氧化氮产生的药物的用途，其中所述哺乳动物选自人和熊猫。以下结合具体实施例，对本发明的技术方案进行描述。实施例1、姜提取物的制备生姜提取物的制备取姜科植物姜(Zingiber officinale)的新鲜根茎，除去须根和泥沙，洗净粉碎，取3g置于密封试管中加入IOmLlOO摄氏度去离子水，室温振摇2h，然后60度水浴中超声提取(弘祥隆多用途恒温超声提取机，型号SY-1000E，控制温度60°C， 超声频率40kHZ)15min，提取3次。提取液以14，OOOg离心lOmin，取上清液，真空冷冻干燥上清液至恒重，得到生姜提取物。置于0-4°C备用。实验时以所需浓度将提取物重新溶于去离子水中。干姜提取物的制备取姜科植物姜(Zingiber officinale)的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥。取干品粉碎，取3g置于密封试管中加入IOmL 100 摄氏度去离子水，室温振摇池，然后60度水浴中超声提取(弘祥隆多用途恒温超声提取机， 型号SY-1000E，控制温度60°C，超声频率40kHZ)15min，提取3次。提取液以14，OOOg离心lOmin，取上清液，真空冷冻干燥上清液至恒重，得到干姜提取物。置于0-4°C备用。实验时以所需浓度将提取物重新溶于去离子水中。炮姜提取物的制备取姜科植物姜(Zingiber officinale)的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥成干姜。取干姜，照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色，内呈黄色，喷淋清水少量，取出，晒干。取干品粉碎，取3g置于密封试管中加入IOmL 100摄氏度去离子水，室温振摇池，然后60度水浴中超声提取(弘祥隆多用途恒温超声提取机，型号SY-1000E，控制温度60°C，超声频率40kHz) 15min,提取3次。提取液以14，OOOg离心lOmin，取上清液，真空冷冻干燥上清液至恒重，得到炮姜提取物。置于 0-4°C备用。实验时以所需浓度将提取物重新溶于去离子水中。姜皮提取物的制备取姜科植物姜(Zingiber officinale)的新鲜根茎，洗净，用竹刀刮取外层栓皮，晒干。粉碎后取3g置于密封试管中加入IOmL 100摄氏度去离子水，室温振摇池，然后60度水浴中超声提取(弘祥隆多用途恒温超声提取机，型号SY-1000E，控制温度60°C，超声频率40kHZ)15min，提取3次。提取液以14，OOOg离心lOmin，取上清液，真空冷冻干燥上清液至恒重，得到姜皮提取物。置于0-4°C备用。实验时以所需浓度将提取物重新溶于去离子水中。实施例2、姜提取物的一氧化氮水平调节活性测定1、脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞生成一氧化氮的模型建立体内一氧化氮生成的途径是由一氧化氮合酶(N0Q催化L-精氨酸合成。研究证实，LPS等刺激因子能诱导单核巨噬细胞高表达诱导型一氧化氮合酶(iNOQ，从而合成过
量一氧化氮。据研究，采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和WesternBlotting方法测定 LPS对小鼠巨噬细胞产生诱导型一氧化氮合酶的作用，结果表明经0. lmg/L LPS刺激后细胞iNOS mRNA及蛋白表达水平均明显升高，与空白对照组比较有显著性差异(P <0.05)，并且在一定浓度范围内(0.01，0. l，1.0，10mg/L)呈剂量-效应关系，认为LPS通过诱导小鼠巨噬细胞产生iNOS，从而使一氧化氮的含量升高。一氧化氮的半衰期很短，为6秒-60秒，生成后很快即被氧化成亚硝酸盐，以亚硝酸盐的形式存在于细胞内外液中。因此，实验中通常以测定一氧化氮的稳定产物亚硝酸盐的含量来反映一氧化氮的量。目前该模型已广泛用于对一氧化氮的实验研究中(胡意等， 脂多糖诱导巨噬细胞产生诱导型一氧化氮合酶的实验研究，江西医学检验，2007 (6) 96)。2、不同姜提取物的一氧化氮水平调节活性测定实验过程实验时分别取根据实施例1中所示方法制备的生姜、干姜、炮姜和姜皮提取物1 μ L，(浓度如表1中所示)，加入99 μ L浓度为2 X IO6个/mL的7细胞悬液中，置于37°C体积分数为5%二氧化碳孵箱内培养。2 后Griess法测定一氧化氮的终产物亚硝酸盐(N02_)的含量取细胞培养上清液，加入等体积Griess试剂，于550nm测吸光值，以NaNO2标准溶液制作标准曲线计算NO2-的浓度。同时，设lmg/L脂多糖为阳性对照组，去离子水为空白对照组。具体实验结果如表1所示。表1.生姜、干姜、炮姜及姜皮提取物对LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的影响实验浓度样品NO2^ ( μ M)(mg/L)生姜500196. 9 士 5. 4#5031.6士3.1#干姜50015.2士2.0#
5010.2士2.2#炮姜50011.8士2.0#501.2 士 0.6姜皮500579.8士沘.6#5088.5士3.9#去离子水对照组0.2 士 0.05脂多糖对照组13.0 士 2. 1## 与去离子水对照组比较，P < 0. 05结果表明与去离子水空白对照组相比，脂多糖阳性对照组可以升高亚硝酸盐的浓度，显示实验条件下，脂多糖可以正常刺激小鼠巨噬细胞7产生一氧化氮。本发明所述生姜、干姜和姜皮提取物在500mg/L及50mg/L的浓度时，均可以刺激小鼠巨噬细胞7产生一氧化氮，且与浓度呈正相关作用；炮姜提取物在500mg/L浓度时也具有同样的作用，但在50mg/L浓度时未显示该作用。上述实验表明，本发明所述姜提取物，包括生姜、干姜、姜皮和炮姜提取物在所示浓度条件下均具有刺激一氧化氮产生的作用。
权利要求
1.一种姜提取物，其选自生姜、干姜、炮姜和/或姜皮提取物。
2.权利要求1所述的姜提取物，其通过如下方法制备1)将经处理的生姜、干姜、炮姜或姜皮粉碎；2)以1-500份粉碎的样品品加1000份溶剂的比例加入水中，在密封条件下水浴中进行超声提取；3)收集提取液，经超速离心后取上清液，真空冷冻干燥，得到生姜提取物。
3.权利要求2所述的姜提取物，其中所述粉碎的样品与溶剂的比例为选自1-500之间的任一整数份样品加入1000份溶剂， 例如每 50，100，150，200，250，300，350，400，450，500 份样品加入 1000 份溶剂；所述溶剂可以选自蒸馏水、双蒸水、去离子水、或者其它适于本发明所述提取方法的水性溶剂；所述密封条件是指加入水后的样品在后续水浴提取和冷冻干燥过程全程处于与外界气体隔离的状态；所述水浴是在温度40-100摄氏度之间任一整数度条件下进行的，例如温度在45-95摄氏度，50-90摄氏度，55-85摄氏度，60-80摄氏度，65-75摄氏度，或者70摄氏度下进行；
4.权利要求2所述的姜提取物，其中所述生姜经如下处理将姜的新鲜根茎，除去须根和泥沙；所述干姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥； 所述炮姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥成干姜。取干姜，按照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色，内呈黄色，喷淋清水少量，取出，晒干；所述姜皮经如下处理取姜的新鲜根茎，洗净，用竹刀刮取外层栓皮，晒干。
5.一种制备权利要求1所述的姜提取物的方法，包括1)将经处理的生姜、干姜、炮姜或姜皮粉碎；2)以1-500份粉碎的样品品加1000份溶剂的比例加入水中，在密封条件下水浴中进行超声提取；3)收集提取液，经超速离心后取上清液，真空冷冻干燥，得到生姜提取物。
6.权利要求5所述的方法，其中所述粉碎的样品与溶剂的比例为选自1-500之间的任一整数份样品加入1000份溶剂， 例如每 50，100，150，200，250，300，350，400，450，500 份样品加入 1000 份溶剂；所述溶剂可以选自蒸馏水、双蒸水、去离子水、或者其它适于本发明所述提取方法的水性溶剂；所述密封条件是指加入水后的样品在后续水浴提取和冷冻干燥过程全程处于与外界气体隔离的状态；所述水浴是在温度40-100摄氏度之间任一整数度条件下进行的，例如温度在45-95摄氏度，50-90摄氏度，55-85摄氏度，60-80摄氏度，65-75摄氏度，或者70摄氏度下进行；
7.权利要求5所述的方法，其中所述生姜经如下处理将姜的新鲜根茎，除去须根和泥沙；所述干姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥成干姜。取干姜，按照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色；所述炮姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥成干姜。取干姜，按照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色，内呈黄色，喷淋清水少量，取出，晒干；所述姜皮经如下处理取姜的新鲜根茎，洗净，用竹刀刮取外层栓皮，晒干。
8.权利要求1所述姜提取物用于制备治疗和/或预防与一氧化氮水平改变相关疾病的药物的用途，其中所述疾病包括发生在消化系统、神经系统、呼吸系统、循环系统、运动系统、内分泌系统、泌尿系统、感官系统和生殖系统疾病。
9.权利要求8所述的用途，其中所述疾病选自消化系统，包括胃肠动力疾病，如贲门失迟缓症，便秘，功能性消化不良，肠易激综合征，假性肠梗阻，胃食管反流等；呼吸系统，包括支气管哮喘，肺部感染，肺心病，肺动脉高压等； 神经系统，包括精神分裂症，脑囊尾蚴病，急性脑梗死，脑损伤，脑膜炎，人巨细胞病毒先天性中枢神经系统感染，小儿惊厥，高氧吸入对脑部损伤，记忆缺失，脑缺血再灌注损伤， 抑郁症，蛛网膜下腔出血，Alzheimer病，Parkinson病，癫痫，偏头痛，Huntington病，肌萎缩侧索硬化症，多发性硬化，肌病，脑炎，脑脊髓损伤，脑肿瘤等；循环系统，包括冠状动脉粥样硬化，血栓性中风，高血压，老年性痴呆，感染性疾病等； 运动系统，包括迟发性运动障碍，骨质增生，股骨头坏死，痛风，腰肌劳损，风湿、类风湿性关节炎，骨质疏松等；内分泌系统，包括高脂血症，糖尿病，免疫功能低下，甲状腺功能亢进，甲状腺功能低下等；泌尿系统，包括阳痿症，慢性肾功能衰竭，肾病综合征，早中期糖尿病肾病，慢性肾小球肾炎，肾小球硬化，高胆固醇血症肾损害，尿毒症等； 生殖系统，包括不孕，不育，妇女绝经期各种症状等。
10.权利要求1所述姜提取物用于制备刺激哺乳动物体内一氧化氮产生的药物的用途，其中所述哺乳动物选自人和熊猫。
全文摘要
本发明涉及一种姜提取物，选自生姜、干姜、炮姜和/或姜皮提取物。本发明还涉及所述姜提取物的制备方法。本发明也涉及所述姜提取物用于制备治疗和/或预防与体内一氧化氮水平改变而导致的相关疾病的药物的用途，和所述姜提取物用于制备刺激哺乳动物体内一氧化氮产生的药物的用途。
文档编号A61P27/00GK102240388SQ20101018294
公开日2011年11月16日 申请日期2010年5月11日 优先权日2010年5月11日
发明者廖晖 申请人:廖晖
技术领域：
本发明涉及一种姜提取物，选自生姜、干姜、炮姜和/或姜皮提取物。本发明还涉及所述姜提取物的制备方法。本发明也涉及所述姜提取物用于制备治疗和/或预防与体内一氧化氮水平改变而导致的相关疾病的药物的用途，和所述姜提取物用于制备刺激哺乳动物体内一氧化氮产生的药物的用途。
背景技术：
作为临床上常用的一味中药，生姜是指姜科植物姜(Zingiberofficinale)的新鲜根茎，被用于帮助消化和治疗胃部不适、腹泻和恶心等已有超过2000年的历史，同时生姜被用于协助治疗关节炎、疝气、腹泻和心脏病等。生姜的现代药理研究认为，生姜具有抗氧化作用，抗微生物作用，抗炎作用，降低胆固醇作用，抗动脉粥样硬化作用，增强免疫功能，辐射防护作用，护肝作用，止吐作用，抗过敏作用(王颖等，生姜的研究进展，中国药业，2006，15(9) :62)，以及抗运动病作用，降血糖作用，抗肿瘤作用等(孙永金，生姜药理作用研究进展，现代中西医结合杂志，2007， 16(4) :561)，并且生姜醇提物可抗凝血和抗血栓形成(张红霞等，生姜醇提物药理学研究进展，中医研究，2008，21 (3) :60)。生姜的临床使用包括治疗风湿痛、腰腿痛，治疗风寒湿痹、肩周炎，治疗疟疾及急性菌痢，治疗风湿及类风湿关节炎，治疗腰麻和硬膜外麻醉术后尿潴留，治疗蛔虫性肠梗阻及胆道蛔虫症，治疗水火烫伤，治疗斑秃，治疗牙疼、面瘫，治疗神经性呕吐、呃逆，预防晕车，治疗急性睾丸炎，治疗眉棱骨痛等(闫学红等，生姜的临床应用研究，光明中医，2009， 24(11) 2198)。已知姜具有加快人体新陈代谢、抗炎镇痛、同时兴奋人体多个系统的功能，它还能调节男性前列腺的机能，治疗男性前列腺疾病以及性功能障。因此，姜常被用于男性保健。姜在生殖系统的药理研究包括生姜的水提物对环磷酰胺诱发小鼠精子畸形有显著的抑制作用(沈雪等，不同生姜提取物对小鼠精子畸形的影响，毒理学杂志，2008， 22(5) 381)；生姜与姜黄配伍的方剂乙醇提取物能有效降低大鼠前列腺的质量(杨家庆等，姜黄、生姜组方抑制幼龄大鼠前列腺生长的作用研究，现代中西医结合杂志，2009， (16) 79)；适当剂量的生姜提取物对X射线照射导致的小鼠睾丸酶活性的变化具有一定的稳定作用(赵淑华等，生姜提取物对X射线损伤小鼠睾丸酶的影响，吉林大学学报医学版， 2005，31(1) :68)。目前该方向的临床研究包括隔姜灸对良性前列腺增生症具有良好的治疗作用， 且无明显不良反应，为临床治疗该病提供了新思路与方法(周勇等，隔姜灸治疗良性前列腺增生的临床研究，山东中医药大学学报，2007，(1) :132)。对于生姜中已知的挥发油、多糖类、酚类、黄酮类等有效成分，它的提取工艺及相关成分的药理研究目前报道的也较多，针对生姜不同提取物的急性毒性、抗氧化作用等，及对生姜中所含多糖、总黄酮、6-姜酚和姜辣素采用不同溶剂和不同方法的提取与研究有许多报道。目前，生姜提取物的提取工艺包括水蒸气蒸馏法、溶剂浸提法、冷轧法、超临界萃取法、分子蒸馏法等(熊华，不同提取方法生姜提取物中成分的比较研究，成都西华大学硕士毕业论文，2006 ；孙亚青，姜精油的提取、分析及纯化研究，北京中国农业大学硕士论文， 2004;葛毅强等，生姜精油的研究新进展，中国调味品，2004，(9) :3 ；陈怀铸，生姜油提取方法，保鲜研究，2007，7 (4) :18)。目前经过许多专家的研究，姜的提取工艺研究已进行的较多也较为成熟，但对其不同提取方法提取挥发油和姜辣素组份分析，生姜中有效成份的认指工作，以及关于姜辣素组份的合成和其天然姜辣素的化学结构研究开展得较少，有待于进一步探讨。特别是针对生姜及其炮制品，包括干姜、炮姜及姜皮提取物的研究，特别是上述提取物及已知的化合物成分如药典中提及的6-姜辣素、研究较多的6-姜酚等，它们对于体内小分子化合物一氧化氮水平的影响作用，尚未见报道。已知小分子化合物一氧化氮在人体中的主要作用包括1.对维持血管舒张，血流量及血压调节起重要作用；2.抑制血小板聚集和粘附，抑制白细胞的粘附，并调节平滑肌细胞增生；3.中枢神经元合成的一氧化氮可作为生理功能的神经递质，参与包括记忆构成，神经元活性，血流量的调节和痛觉调制；4.在外周神经系统一氧化氮被认为是在神经网络中普遍存在的一种介质，介导了以前被认为是非肾上腺素能非乙酰胆碱能(NANC)作用的神经性血管舒张和胃肠道、呼吸道、泌尿生殖的某些功能(关永源等，一氧化氮的药理学作用，新医学，1999，30(1) :55)。现代药理及临床研究发现，一氧化氮可以保持冠状动脉的畅通，防止过多的血凝块阻塞血管造成心脏病和中风；放松动脉(维持正常血压所需)，帮助脑部血液流通，以增进长期记忆力；提高血液流量至男性生殖器，使之勃起；缩小和消灭癌症肿瘤；降低胆固醇，防止坏胆固醇氧化；预防痔疮及帮助其愈合；预防一般的肺部疾病；帮助调节胰岛素分泌(防止糖尿病)；参与消灭外侵的细菌和病毒等。随着对一氧化氮水平与上述疾病之间相关性研究的深入，人们不断试图在天然来源和化合物库中寻找具有一氧化氮水平调节功能的物质，以期得到针对上述疾病或异常的新药物。本发明人通过对生姜及其选自干姜、炮姜及姜皮的炮制品提取物进行药理学研究，以小鼠巨噬细胞7为实验对象，采用Griess法(参见Green LC等人，Analysis of nitrate,nitrite,and[15-N]nitrate in biological fluids[J]. Anal Biochem 1982, 126(1) 131)测定一氧化氮的终产物亚硝酸盐的含量变化，观察获自生姜、干姜、炮姜及姜皮的不同提取物对一氧化氮生成的影响，发现所述生姜、干姜、炮姜和姜皮的不同提取物均具有刺激小鼠巨噬细胞一氧化氮生成的功效。
发明内容
本发明的一个方面涉及一种姜提取物，其选自生姜、干姜、炮姜和/或姜皮提取物。具体的，本发明中所述姜提取物可以通过如下方法制备1)将经处理的生姜、干姜、炮姜或姜皮粉碎；2)以1-500份粉碎的样品加1000份溶剂的比例加入水中，在密封条件下水浴中进
行超声提取；
3)收集提取液，经超速离心后取上清液，真空冷冻干燥，得到生姜提取物。在本发明的一个具体实施方案中，所述生姜经如下处理将姜的新鲜根茎除去须根和泥沙，洗净；所述干姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥；所述炮姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥成干姜，取干姜，照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色，内呈黄色，喷淋清水少量，取出，晒干；所述姜皮经如下处理取姜的新鲜根茎，洗净，用竹刀刮取外层栓皮，晒干。在本发明的一个具体实施方案中，所述样品与溶剂的比例为选自1-500之间的任一整数份样品加入1000份溶剂，例如每50，100，150，200，250，300，350，400，450，500份样品加入1000份溶剂。在本发明的一个具体实施方案中，所述溶剂可以选自蒸馏水、双蒸水、去离子水、 或者其它适于本发明所述提取方法的水性溶剂。在本发明的一个具体实施方案中，所述密封条件是指加入水后的样品在后续水浴提取和冷冻干燥过程全程处于与外界气体隔离的状态。在本发明的一个具体实施方案中，所述水浴是在温度40-100摄氏度之间任一整数度条件下进行的，例如温度在45-95摄氏度，50-90摄氏度，55-85摄氏度，60-80摄氏度， 65-75摄氏度，或者70摄氏度下进行。本发明的又一方面，涉及一种制备本发明所述姜提取物的方法，包括1)将经处理的生姜、干姜、炮姜或姜皮粉碎；2)以1-500份粉碎的样品加1000份溶剂的比例加入水中，在密封条件下水浴中进
行超声提取；3)收集提取液，经超速离心后取上清液，真空冷冻干燥，得到生姜提取物。在本发明所述方法的一个具体实施方案中，所述生姜经如下处理将姜的新鲜根茎除去须根和泥沙，洗净；所述干姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥；所述炮姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙， 晒干或低温干燥成干姜，取干姜，照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色，内呈黄色，喷淋清水少量，取出，晒干；所述姜皮经如下处理取姜的新鲜根茎，洗净，用竹刀刮取外层栓皮，晒干。在本发明所述方法的一个具体实施方案中，所述样品与溶剂的比例为选自1-500 之间的任一整数份样品加入1000份溶剂，例如每50，100，150，200，250，300，350，400，450， 500份样品加入1000份溶剂。在本发明所述方法的一个具体实施方案中，所述溶剂可以选自蒸馏水、双蒸水、去离子水、或者其它适于本发明所述提取方法的水性溶剂。在本发明所述方法的一个具体实施方案中，所述密封条件是指加入水后的样品在后续水浴提取和冷冻干燥过程全程处于与外界气体隔离的状态。在本发明所述方法的一个具体实施方案中，所述水浴是在温度40-100摄氏度之间任一整数度条件下进行的，例如温度在45-95摄氏度，50-90摄氏度，55-85摄氏度，60-80 摄氏度，65-75摄氏度，或者70摄氏度下进行。本发明的再一方面，涉及所述姜提取物用于制备治疗和/或预防与一氧化氮水平
6改变相关疾病的药物的用途。本发明中，与一氧化氮水平改变相关的疾病包括发生在消化系统、神经系统、呼吸系统、循环系统、运动系统、内分泌系统、泌尿系统，感官系统和生殖系统疾病。具体的，所述疾病选自消化系统，包括胃肠动力疾病，如贲门失迟缓症，便秘，功能性消化不良，肠易激综合征，假性肠梗阻，胃食管反流；呼吸系统，包括支气管哮喘，肺部感染，肺心病，肺动脉高压等；神经系统，包括精神分裂症，脑囊尾蚴病，急性脑梗死，脑损伤，脑膜炎，人巨细胞病毒先天性中枢神经系统感染，小儿惊厥，高氧吸入对脑部损伤，记忆缺失，脑缺血再灌注损伤，抑郁症，蛛网膜下腔出血，Alzheimer病，Parkinson病，癫痫，偏头痛，Huntington病， 肌萎缩侧索硬化症，多发性硬化，肌病，脑炎，脑脊髓损伤，脑肿瘤；循环系统，包括冠状动脉粥样硬化，血栓性中风，高血压，老年性痴呆，感染性疾病；运动系统，包括迟发性运动障碍，骨质增生、股骨头坏死、痛风、腰肌劳损，风湿、类风湿性关节炎，骨质疏松；内分泌系统，包括高脂血症，糖尿病，免疫功能低下，甲状腺功能亢进，甲状腺功能低下；泌尿系统，包括阳痿症，慢性肾功能衰竭，肾病综合征，早中期糖尿病肾病，慢性肾小球肾炎，肾小球硬化，高胆固醇血症肾损害，尿毒症；生殖系统，包括不孕，不育，妇女绝经期各种症状等。本发明的另一方面，涉及所述姜提取物用于制备刺激哺乳动物体内一氧化氮产生的药物的用途，其中所述哺乳动物选自人和熊猫。以下结合具体实施例，对本发明的技术方案进行描述。实施例1、姜提取物的制备生姜提取物的制备取姜科植物姜(Zingiber officinale)的新鲜根茎，除去须根和泥沙，洗净粉碎，取3g置于密封试管中加入IOmLlOO摄氏度去离子水，室温振摇2h，然后60度水浴中超声提取(弘祥隆多用途恒温超声提取机，型号SY-1000E，控制温度60°C， 超声频率40kHZ)15min，提取3次。提取液以14，OOOg离心lOmin，取上清液，真空冷冻干燥上清液至恒重，得到生姜提取物。置于0-4°C备用。实验时以所需浓度将提取物重新溶于去离子水中。干姜提取物的制备取姜科植物姜(Zingiber officinale)的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥。取干品粉碎，取3g置于密封试管中加入IOmL 100 摄氏度去离子水，室温振摇池，然后60度水浴中超声提取(弘祥隆多用途恒温超声提取机， 型号SY-1000E，控制温度60°C，超声频率40kHZ)15min，提取3次。提取液以14，OOOg离心lOmin，取上清液，真空冷冻干燥上清液至恒重，得到干姜提取物。置于0-4°C备用。实验时以所需浓度将提取物重新溶于去离子水中。炮姜提取物的制备取姜科植物姜(Zingiber officinale)的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥成干姜。取干姜，照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色，内呈黄色，喷淋清水少量，取出，晒干。取干品粉碎，取3g置于密封试管中加入IOmL 100摄氏度去离子水，室温振摇池，然后60度水浴中超声提取(弘祥隆多用途恒温超声提取机，型号SY-1000E，控制温度60°C，超声频率40kHz) 15min,提取3次。提取液以14，OOOg离心lOmin，取上清液，真空冷冻干燥上清液至恒重，得到炮姜提取物。置于 0-4°C备用。实验时以所需浓度将提取物重新溶于去离子水中。姜皮提取物的制备取姜科植物姜(Zingiber officinale)的新鲜根茎，洗净，用竹刀刮取外层栓皮，晒干。粉碎后取3g置于密封试管中加入IOmL 100摄氏度去离子水，室温振摇池，然后60度水浴中超声提取(弘祥隆多用途恒温超声提取机，型号SY-1000E，控制温度60°C，超声频率40kHZ)15min，提取3次。提取液以14，OOOg离心lOmin，取上清液，真空冷冻干燥上清液至恒重，得到姜皮提取物。置于0-4°C备用。实验时以所需浓度将提取物重新溶于去离子水中。实施例2、姜提取物的一氧化氮水平调节活性测定1、脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞生成一氧化氮的模型建立体内一氧化氮生成的途径是由一氧化氮合酶(N0Q催化L-精氨酸合成。研究证实，LPS等刺激因子能诱导单核巨噬细胞高表达诱导型一氧化氮合酶(iNOQ，从而合成过
量一氧化氮。据研究，采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和WesternBlotting方法测定 LPS对小鼠巨噬细胞产生诱导型一氧化氮合酶的作用，结果表明经0. lmg/L LPS刺激后细胞iNOS mRNA及蛋白表达水平均明显升高，与空白对照组比较有显著性差异(P <0.05)，并且在一定浓度范围内(0.01，0. l，1.0，10mg/L)呈剂量-效应关系，认为LPS通过诱导小鼠巨噬细胞产生iNOS，从而使一氧化氮的含量升高。一氧化氮的半衰期很短，为6秒-60秒，生成后很快即被氧化成亚硝酸盐，以亚硝酸盐的形式存在于细胞内外液中。因此，实验中通常以测定一氧化氮的稳定产物亚硝酸盐的含量来反映一氧化氮的量。目前该模型已广泛用于对一氧化氮的实验研究中(胡意等， 脂多糖诱导巨噬细胞产生诱导型一氧化氮合酶的实验研究，江西医学检验，2007 (6) 96)。2、不同姜提取物的一氧化氮水平调节活性测定实验过程实验时分别取根据实施例1中所示方法制备的生姜、干姜、炮姜和姜皮提取物1 μ L，(浓度如表1中所示)，加入99 μ L浓度为2 X IO6个/mL的7细胞悬液中，置于37°C体积分数为5%二氧化碳孵箱内培养。2 后Griess法测定一氧化氮的终产物亚硝酸盐(N02_)的含量取细胞培养上清液，加入等体积Griess试剂，于550nm测吸光值，以NaNO2标准溶液制作标准曲线计算NO2-的浓度。同时，设lmg/L脂多糖为阳性对照组，去离子水为空白对照组。具体实验结果如表1所示。表1.生姜、干姜、炮姜及姜皮提取物对LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的影响实验浓度样品NO2^ ( μ M)(mg/L)生姜500196. 9 士 5. 4#5031.6士3.1#干姜50015.2士2.0#
5010.2士2.2#炮姜50011.8士2.0#501.2 士 0.6姜皮500579.8士沘.6#5088.5士3.9#去离子水对照组0.2 士 0.05脂多糖对照组13.0 士 2. 1## 与去离子水对照组比较，P < 0. 05结果表明与去离子水空白对照组相比，脂多糖阳性对照组可以升高亚硝酸盐的浓度，显示实验条件下，脂多糖可以正常刺激小鼠巨噬细胞7产生一氧化氮。本发明所述生姜、干姜和姜皮提取物在500mg/L及50mg/L的浓度时，均可以刺激小鼠巨噬细胞7产生一氧化氮，且与浓度呈正相关作用；炮姜提取物在500mg/L浓度时也具有同样的作用，但在50mg/L浓度时未显示该作用。上述实验表明，本发明所述姜提取物，包括生姜、干姜、姜皮和炮姜提取物在所示浓度条件下均具有刺激一氧化氮产生的作用。
权利要求
1.一种姜提取物，其选自生姜、干姜、炮姜和/或姜皮提取物。
2.权利要求1所述的姜提取物，其通过如下方法制备1)将经处理的生姜、干姜、炮姜或姜皮粉碎；2)以1-500份粉碎的样品品加1000份溶剂的比例加入水中，在密封条件下水浴中进行超声提取；3)收集提取液，经超速离心后取上清液，真空冷冻干燥，得到生姜提取物。
3.权利要求2所述的姜提取物，其中所述粉碎的样品与溶剂的比例为选自1-500之间的任一整数份样品加入1000份溶剂， 例如每 50，100，150，200，250，300，350，400，450，500 份样品加入 1000 份溶剂；所述溶剂可以选自蒸馏水、双蒸水、去离子水、或者其它适于本发明所述提取方法的水性溶剂；所述密封条件是指加入水后的样品在后续水浴提取和冷冻干燥过程全程处于与外界气体隔离的状态；所述水浴是在温度40-100摄氏度之间任一整数度条件下进行的，例如温度在45-95摄氏度，50-90摄氏度，55-85摄氏度，60-80摄氏度，65-75摄氏度，或者70摄氏度下进行；
4.权利要求2所述的姜提取物，其中所述生姜经如下处理将姜的新鲜根茎，除去须根和泥沙；所述干姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥； 所述炮姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥成干姜。取干姜，按照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色，内呈黄色，喷淋清水少量，取出，晒干；所述姜皮经如下处理取姜的新鲜根茎，洗净，用竹刀刮取外层栓皮，晒干。
5.一种制备权利要求1所述的姜提取物的方法，包括1)将经处理的生姜、干姜、炮姜或姜皮粉碎；2)以1-500份粉碎的样品品加1000份溶剂的比例加入水中，在密封条件下水浴中进行超声提取；3)收集提取液，经超速离心后取上清液，真空冷冻干燥，得到生姜提取物。
6.权利要求5所述的方法，其中所述粉碎的样品与溶剂的比例为选自1-500之间的任一整数份样品加入1000份溶剂， 例如每 50，100，150，200，250，300，350，400，450，500 份样品加入 1000 份溶剂；所述溶剂可以选自蒸馏水、双蒸水、去离子水、或者其它适于本发明所述提取方法的水性溶剂；所述密封条件是指加入水后的样品在后续水浴提取和冷冻干燥过程全程处于与外界气体隔离的状态；所述水浴是在温度40-100摄氏度之间任一整数度条件下进行的，例如温度在45-95摄氏度，50-90摄氏度，55-85摄氏度，60-80摄氏度，65-75摄氏度，或者70摄氏度下进行；
7.权利要求5所述的方法，其中所述生姜经如下处理将姜的新鲜根茎，除去须根和泥沙；所述干姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥成干姜。取干姜，按照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色；所述炮姜经如下处理取姜的新鲜根茎拣净杂质，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥成干姜。取干姜，按照2005年版药典中烫法用砂烫至鼓起，表面棕褐色，内呈黄色，喷淋清水少量，取出，晒干；所述姜皮经如下处理取姜的新鲜根茎，洗净，用竹刀刮取外层栓皮，晒干。
8.权利要求1所述姜提取物用于制备治疗和/或预防与一氧化氮水平改变相关疾病的药物的用途，其中所述疾病包括发生在消化系统、神经系统、呼吸系统、循环系统、运动系统、内分泌系统、泌尿系统、感官系统和生殖系统疾病。
9.权利要求8所述的用途，其中所述疾病选自消化系统，包括胃肠动力疾病，如贲门失迟缓症，便秘，功能性消化不良，肠易激综合征，假性肠梗阻，胃食管反流等；呼吸系统，包括支气管哮喘，肺部感染，肺心病，肺动脉高压等； 神经系统，包括精神分裂症，脑囊尾蚴病，急性脑梗死，脑损伤，脑膜炎，人巨细胞病毒先天性中枢神经系统感染，小儿惊厥，高氧吸入对脑部损伤，记忆缺失，脑缺血再灌注损伤， 抑郁症，蛛网膜下腔出血，Alzheimer病，Parkinson病，癫痫，偏头痛，Huntington病，肌萎缩侧索硬化症，多发性硬化，肌病，脑炎，脑脊髓损伤，脑肿瘤等；循环系统，包括冠状动脉粥样硬化，血栓性中风，高血压，老年性痴呆，感染性疾病等； 运动系统，包括迟发性运动障碍，骨质增生，股骨头坏死，痛风，腰肌劳损，风湿、类风湿性关节炎，骨质疏松等；内分泌系统，包括高脂血症，糖尿病，免疫功能低下，甲状腺功能亢进，甲状腺功能低下等；泌尿系统，包括阳痿症，慢性肾功能衰竭，肾病综合征，早中期糖尿病肾病，慢性肾小球肾炎，肾小球硬化，高胆固醇血症肾损害，尿毒症等； 生殖系统，包括不孕，不育，妇女绝经期各种症状等。
10.权利要求1所述姜提取物用于制备刺激哺乳动物体内一氧化氮产生的药物的用途，其中所述哺乳动物选自人和熊猫。
全文摘要
本发明涉及一种姜提取物，选自生姜、干姜、炮姜和/或姜皮提取物。本发明还涉及所述姜提取物的制备方法。本发明也涉及所述姜提取物用于制备治疗和/或预防与体内一氧化氮水平改变而导致的相关疾病的药物的用途，和所述姜提取物用于制备刺激哺乳动物体内一氧化氮产生的药物的用途。
文档编号A61P27/00GK102240388SQ20101018294
公开日2011年11月16日 申请日期2010年5月11日 优先权日2010年5月11日
发明者廖晖 申请人:廖晖
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